Estágio de Verão - Ciência Viva CNC Catarina Fernandes Helga Afonso Mariana Santos Mónica...

Estágio de Verão - Ciência Viva CNC

Catarina FernandesHelga AfonsoMariana SantosMónica Ferreira

Estímulo de morte celular

Quantificação de proteínas

O hipocampo é uma estrutura localizada nos lobos temporais do cérebro humano, considerada a principal sede da memória e importante componente do sistema límbico.

Esta estrutura denomina-se “hipocampo” devido à sua forma curva, que se assemelha a um cavalo-marinho (Grego: hippos = cavalo, kampi = curva).

Esta estrutura é muito importante :◦ Para converter a memória a curto prazo em

memória a longo prazo.

◦ Pois permite ao mamífero comparar as condições de uma ameaça actual com experiências passadas semelhantes, permitindo-lhe, assim, escolher qual a melhor opção a ser tomada para garantir o seu bem-estar.

As lesões no hipocampo impedem a pessoa de construir novas memórias e a pessoa tem a sensação de viver num lugar estranho onde tudo o que experimenta simplesmente se desvanece, mesmo que as memórias mais antigas anteriores à lesão permaneçam intactas.

Sacrificou-se o rato fêmea;

Retiraram-se os embriões do seu interior;

Extraímos os seus cérebros e de seguida os 2 hipocampos de cada cérebro;

Colocámos os hipocampos em soluções, que permitiu extrair os neurónios para depois os pôr em cultura.

Cultura de neurónios com 8DIV

Conjuntos de técnicas que utilizam anticorpos para identificar macromoléculas, no nosso caso, para identificar as proteínas.

Fixação; Permeabilização; Bloqueio; Incubação com os anticorpos primários; Incubação com os anticorpos secundárias; Preparação das lâminas e lamelas; Visualização ao microscópio de

fluorescência.

Marcámos a PSD-95 e a Geferina com os anti-corpos de fluorescência. Assim foi possível visualizarmos ao microscópio de fluorescência.

A PSD é específica das sinapses glutamatérgicas (excitatórias) enquanto que a Geferina é específica de sinapses gabaérgicas (inibitórias).

Normalmente usado:

◦ Laboratórios de investigação médica e biológica;

◦ Detecções de doenças hereditárias;◦ Identificação de “impressões digitais”

genéticas;◦ Construção de relações entre espécies;◦ Clonagem de genes;◦ Testes de paternidade;◦ Genotipagem.

PCR consiste em três fases: Desnaturação, Annealing e Extensão

Gráfico obtido a partir do termociclador.

O produto do PCR pode ser visualizado após a electroforese em gel de agarose e o seu tamanho é estimado com padrões lineares de DNA.

Electroforese-gel de agarose

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