MONITORANDO A CONTAMINAÇÃO NOS LABORATÓRIOS … · monitorando a contaminaÇÃo nos...

MONITORANDO A CONTAMINAÇÃO NOS LABORATÓRIOS DE

HLA

ANA LUCIA VIEIRA MION

HC-UFPR

XII ENCONTRO DE HISTOCOMPATIBILIDADE E IMUNOGENÉTIC A

2009 1

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Contaminação por DNA:

genômico

fragmento de DNA amplificado (amplicon)

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Monitoração:

controle negativo (CN)

controle de tubo aberto (CTA)

teste do esfregaço (wipe test)

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Controle negativo:Objetivo: detectar contaminantes presente nos

reagentes.

Controle de tubo aberto:Objetivo: detectar contaminantes gerados por

aerosol.

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Capaz de detectar todos os amplicons

Teste de contaminação

primers para região não polimórfica dos genes HLA de classeI e/ou classe II

OU

primers para gene usado como controle interno

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OBJETIVOSDetectar a presença de DNA contaminante em superfícies de trabalho, pipetadores e equipamentos.Efetuar a descontaminação, com hipoclorito de sódio 0,5 % ou HCl 1N, das áreas que se apresentarem positivas (contaminadas).

8

9

FREQÜÊNCIA DE REALIZAÇÃO

PONTOS TESTADOS: mais críticosPuxadores de geladeira, freezer e armáriosMaçanetas de portasBancadas de trabalhoCentrífugas...

NÚMERO DE PONTOS

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Procedimento técnico:

1 – Selecionar os pontos; 2 – Identificar um microtubo para cada ponto;3 – Acrescentar água ultrapura em cada microtubo;4 – Colocar água ultrapura em um tubo cônico; 5 – Descontaminar a pinça;6 – Realizar os esfregaços;7 – Realizar a PCR e,8 – Interpretar.

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HCl 1 Nou

Hipoclorito de sódio 0,5 %

Papel filtro autoclavado

Autoclavação: 30 dias

Área ~ 10 cm2

Incubar: 1h –56 a 60ºC

Placa de amplificação:

Tubos PCR p/ teste de contaminação

Tubos PCR p/ teste de inibição

Tubo PCR p/ CTA (pelo menos um tubo)

Tubo PCR p/ controle negativo

Tubo PCR p/ controle positivo

Teste de contaminação

líquido do esfregaço

+

mistura de reação

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Teste de inibição

Objetivo: validar resultados negativos

líquido do esfregaço +

DNA genômico ou pd amplificado diluído+

mistura de reação

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Controle positivo

DNA genômico ou pd amplificado diluído+

mistura de reação

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Controle negativo

água ultrapura+

mistura de reação

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“A monitoração de contaminantes é imprescindível para garantirmos a qualidade nas tipificações HLA.”

Equipe do Laboratório de Imunogenética do Hospital de Clínicas da UFPR

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