Prof. Odir Dellagostin Disciplina de Biologia Molecular

Prof. Odir DellagostinDisciplina de Biologia Molecular

RNARNA – Ácido ribonucléico– Ácido ribonucléico

- mRNA- mRNA

- tRNA- tRNA

- rRNA- rRNA

- hnRNA- hnRNA

- snRNA- snRNA

Estrutura de um gene eucarioto

Sítio de PoliAPromotor Região Codificadora

hnRNAAAAAAAAAAA

mRNA

AAAAAAAAAA

Exon

Intron

DN

AR

NA

CAP

CAP

Transcrição em eucariotos

Requerem proteínas auxiliares: fatores de transcrição

RNA pol I Nucleólo rRNA28S, 18S, 5,8S

Várias subunidades

50-70%

RNA pol II Nucleoplasma hnRNA (transcrito primário)

snRNA

Várias subunidades 20-40 %

RNA pol III Nucleoplasma rRNA 5S

tRNAs

Várias subunidades

10%

RNA pol Mitocondrial

Mitocôndria 01 subunidade

RNA pol de Cloroplastos

Cloroplasto Similar as bacterianas

Estrutura de Promotores da RNA Pol II

Tata Binding Protein

Promotores de genes transcritos pela RNApol II

TFIIDTFIID = = TBP + 10 TAFs

Proteínas necessárias para transcrição a partir de promotores reconhecidos pela RNA Pol II

IntroduçãoTranscrito primárioTranscrito primário

Pré-RNAPré-RNA

Precursores de RNA Precursores de RNA (hnRNA)(hnRNA)

Processamento Processamento

RNAs funcionais (mRNA)RNAs funcionais (mRNA)

Algumas informações sobre íntrons3,7 íntrons por kb de região codificadoraNo homem o número médio é de 5 íntrons

por gene94% dos genes contém íntronsO tamanho médio dos íntrons é de 125 pbO tamanho médio dos éxons é de 90 a

120 pb (30 a 40 aa)

Splicing de íntrons de mRNA

Características de íntrons de mRNA

- Adenina localizada 20 a 50 nt da extremidade 3’ do íntron

- Região rica em pirimidinas na extremidade 3’ do íntron

- Regra GU-AG

Íntrons na região codificadoraÍntrons na região codificadora

SplicingSplicing- Spliceossomo: formado por proteínas e snRNPs

- Estrutura montada assim que o íntron é transcrito

- Reação em cascata direcionada pelo pareamento de bases

Cis-splicingCis-splicing

Trans-splicingTrans-splicing

- Ascaris lumbricoidesAscaris lumbricoides

- TripanossomasTripanossomas

Splicing alternativoSplicing alternativo

Splicing alternativoSplicing alternativo

Transporte ativo para o citoplasmaTransporte ativo para o citoplasma

Spliceossomo – 3000 kDaSpliceossomo – 3000 kDa

Erros no processo de splicingErros no processo de splicing

• Mecanismo de proteção contra RNAs incorretosMecanismo de proteção contra RNAs incorretos

Localização do códon de terminaçãoLocalização do códon de terminação

4- Splicing de íntrons de tRNA4- Splicing de íntrons de tRNA

A presença de íntrons nos genes eucarióticos, aparentemente,

representa um enorme desperdício celular

Então, por que a evolução nos presenteou com estas seqüências?

Mecanismo de proteção contra mutações? Diversidade: genomas e proteomas (splicing alternativo)? Regulação gênica?...

Adição do CAPAdição do CAP

Fosfo-hidrolaseGuanilil-transferase

Cauda poli ACauda poli A

Poli(A)-polimerase

Processamento dos rRNAsProcessamento dos rRNAs

Processamento de precursores de tRNA

tRNA maduro

Modificação das bases Processamento

Modificação de nucleotídeosModificação de nucleotídeos

- rRNA e tRNA

- Metilação de bases, da ribose (C2)

- Catalizadas por várias enzimas