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TIacuteTULO REGENERACcedilAtildeO OacuteSSEA IN VIVO UTILIZANDO MEMBRANA DE ELASTINA DERIVADA DACARTILAGEM AURICULAR E MINERALIZADA COM FOSFATO DE CAacuteLCIOTIacuteTULO
CATEGORIA CONCLUIacuteDOCATEGORIA
AacuteREA CIEcircNCIAS BIOLOacuteGICAS E SAUacuteDEAacuteREA
SUBAacuteREA FISIOTERAPIASUBAacuteREA
INSTITUICcedilAtildeO CENTRO UNIVERSITAacuteRIO PADRE ANCHIETAINSTITUICcedilAtildeO
AUTOR(ES) EWERTON ALEXANDRE GALDEANOAUTOR(ES)
ORIENTADOR(ES) MARCELO RODRIGUES DA CUNHAORIENTADOR(ES)
COLABORADOR(ES) ANA MARIA GUZZI PLEPIS DANIEL LUIS DO NASCIMENTO GEOVANERIBEIRO DOS SANTOS VIRGINIA DA CONCEICcedilAtildeO AMARO MARTINSCOLABORADOR(ES)
1- RESUMO A pesquisa analisou e quantificou a regeneraccedilatildeo oacutessea in vivo atraveacutes da
aplicabilidade de membrana de elastina derivada da cartilagem auricular bovina
tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio em ratos Wistar Com um procedimento
ciruacutergico foi criada uma falha oacutessea experimental na calota craniana dos animais de
laboratoacuterio e enxertadas com o biomaterial Apoacutes 3 e 8 semanas de recuperaccedilatildeo
poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados e as aacutereas receptoras foram removidas
enviadas para anaacutelise laboratorial composta por macroscopia radiologia histologia e
morfometria obtendo resultados satisfatoacuterios quanto agrave osteoinduccedilatildeo
osteoconduccedilatildeo sendo biocompatiacutevel e biodegradaacutevel mostrando-se um promissor
biomaterial em terapias de regeneraccedilatildeo oacutessea
Palavras-chave cartilagem auricular regeneraccedilatildeo oacutessea elastina
2- INTRODUCcedilAtildeO
A cliacutenica meacutedica em traumatologia tem conquistado grandes avanccedilos
tecnoloacutegicos na substituiccedilatildeo de tecidos lesados utilizando biomateriais para
enxertia que conferem um suporte para a proliferaccedilatildeo celular estimulando a
regeneraccedilatildeo tecidual e promovendo a estabilidade mecacircnica e funcional dos mais
variados tecidos humanos (Cunha et al 2011) Enxertos autoacutegenos satildeo
amplamente utilizados em casos de perda de massa oacutessea causadas por traumas
patologias e deformidades congecircnitas Apesar de possuir ceacutelulas osteoprogenitoras
capazes de estimular a formaccedilatildeo oacutessea este apresenta algumas desvantagens
como morbidade dor crocircnica do siacutetio doador reabsorccedilatildeo oacutessea necessidade de
dois procedimentos ciruacutergicos formaccedilatildeo irregular do contorno oacutesseo na aacuterea
receptora e limitaccedilotildees quanto agrave quantidade disponiacutevel do material (Nascimento et
al 2012 Konig Jr 2010 Cunha et al 2011)
Em virtude desta problemaacutetica foi desenvolvida e testada a matriz de elastina
derivada da cartilagem auricular bovina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio
com o objetivo de ser utilizado como um substituto do enxerto autoacutegeno podendo
ser uma alternativa promissora nas terapias de regeneraccedilatildeo oacutessea (Nascimento et
al 2012) A elastina eacute uma importante proteiacutena da matriz extracelular que promove
elasticidade a vaacuterios oacutergatildeos Suas fibras satildeo compostas por microfibrilas que agem
como uma armaccedilatildeo onde a elastina amorfa eacute depositada atraveacutes de ligaccedilotildees
cruzadas formando um arcabouccedilo tridimensional capaz de permitir a angiogecircnese
no local do implante e fornecer suporte para a infiltraccedilatildeo diferenciaccedilatildeo e
proliferaccedilatildeo de ceacutelulas osteoblaacutesticas que desempenham a importante funccedilatildeo de
deposiccedilatildeo iacuteons de Caacutelcio gerando a neoformaccedilatildeo oacutessea A elastina presente na
cartilagem auricular bovina possui fibras orientadas em forma de favo otimizando a
permeabilidade celular (Mithieux e Weiss 2005 Daamen et al 2007)
A elastina quando associada aos processos de tratamento alcalino e
mineralizaccedilatildeo pode excluir os efeitos deleteacuterios do processo de enxertia e acionar a
cascata correta de eventos bioloacutegicos necessaacuterios para a regeneraccedilatildeo tecidual
devido a facilidade de adesatildeo celular e inibiccedilatildeo da formaccedilatildeo de fibroses Estes
achados estatildeo fundamentados nas caracteriacutesticas moleculares da elastina que
possui a sequecircncia de reconhecimento celular composto pela sequecircncia arginina -
glicina - aacutecido aspaacutertico (Daamen et al 2007)
A regeneraccedilatildeo ainda pode ser acelerada na presenccedila de iacuteons de fosfato de
caacutelcio exercendo importante papel de siacutetios de nucleaccedilatildeo aumentando a
calcificaccedilatildeo (Daamen et al 2007 Tampieri et al 2011) Salienta-se que a
mineralizaccedilatildeo deste biomaterial agrave base de elastina atraveacutes da inclusatildeo de fosfato de
caacutelcio possa constituir uma interessante alternativa para a cicatrizaccedilatildeo do tecido
oacutesseo em funccedilatildeo da capacidade de estimular a expressatildeo de proteiacutenas marcadoras
da neoformaccedilatildeo oacutessea (Tampieri et al 2011)
3- OBJETIVOS
Analisar qualitativo e quantitativamente o processo de neoformaccedilatildeo oacutessea
durante o reparo de defeitos oacutesseos criados em ratos e enxertados com membrana
de elastina derivada da cartilagem auricular bovina e mineralizada com fosfato de
caacutelcio
4- METODOLOGIA A pesquisa aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CEUA) da Unianchieta (Processo 0022013) utilizou 30 ratos (Rattus norvegicus
Wistar) machos com 15 semanas de idade peso meacutedio de 330g e separados em
caixas com 5 (cinco) animais cada recebendo raccedilatildeo balanceada (Purinareg) e aacutegua
ad-libitum e temperatura do ambiente controlada (23 plusmn1ordmC)
A confecccedilatildeo das membranas de elastina foi realizada pelo Instituto de Quiacutemica
da Universidade de Satildeo Paulo (USP) Campus Satildeo Carlos atraveacutes de um processo
laboratorial cuja finalidade foi provocar alteraccedilotildees fiacutesicas e quiacutemicas para elevar as
caracteriacutesticas piezoeleacutetricas eliminar possiacuteveis antiacutegenos e incluir elementos
indutores de agregaccedilatildeo celular Para a obtenccedilatildeo da membrana de elastina natildeo
mineralizada procedeu-se com a lavagem do material em soluccedilatildeo de NaCl 09
aacutegua e acetona e tratada em NaOH agrave 80degC por 45 min seguida de lavagem em
aacutegua e liofilizaccedilatildeo Para a membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio
foi realizado o processo descrito anteriormente acrescido de imersatildeo em CaCl2 por
30min e lavagem em aacutegua desionizada seguida imersatildeo em soluccedilatildeo de Na2HPO4
por 30min em pH 90 sendo este ciclo repetido por 6 vezes Em seguida a
membrana de elastina foi lavada em aacutegua desionizada e liofilizada (Nascimento et
al 2012) As Eletro-Fotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
Aumento 1000X evidenciam a porosidade das membranas conforme Figura 1
Figura 1 A ndash Membrana de elastina tratada e natildeo mineralizada B ndash Membrana
de elastina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio
Os animais foram divididos em dois grupos sendo o primeiro contendo 15
animais sacrificados com 3 semanas de poacutes-operatoacuterio e o segundo contendo 15
animais sacrificados com 8 semanas de poacutes-operatoacuterio Cada grupo recebeu
subgrupos sendo G1 (Animais com defeito na calota craniana e sem
preenchimento da falha oacutessea - Grupo Controle) G2 (Animais com defeito na calota
craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem
mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz
derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)
Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de
Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo
analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de
0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)
Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida
em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das
coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da
tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e
afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca
ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de
5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o
implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados
suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010
Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2
Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo
sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash
Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura
dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local
Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de
peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via
intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na
dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et
al 2009)
Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados
com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram
removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a
finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi
utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o
tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho
Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que
possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida
a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos
resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50
(Potijanyakul et al 2010)
5- DESENVOLVIMENTO
Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina
implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo
imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade
do biomaterial (Ratner 2013)
Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar
funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo
oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para
a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-
implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas
afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das
membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2
observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo
oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a
osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al
2011 Konig Jr 2010)
A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu
um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o
implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea
constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a
infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de
aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada
em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do
implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a
capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente
que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse
maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu
uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a
neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo
permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para
o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de
caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a
permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)
O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo
I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi
surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias
sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas
osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea
6- RESULTADOS
Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e
absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente
Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas
Figuras 5 e 6 respectivamente
Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido
oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
0
10
20
30
40
50
60
70
80
G13 G23 G33 G18 G28 G38
PERC
ENTU
AL D
E O
SSO
NEO
FORM
ADO
()
GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA
8- FONTES CONSULTADAS
bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for
bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33
bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr
AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of
diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52
bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a
Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98
bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of
bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal
Care of the Injured 20114222-25
bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em
ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010
bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de
Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009
bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61
bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de
matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de
Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6
bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S
Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects
Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204
bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine
Third edition Canada Elsevier 2013
bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of
α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical
Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98
bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-
mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development
Trends in Biotechnology 201129(10)526-535
1- RESUMO A pesquisa analisou e quantificou a regeneraccedilatildeo oacutessea in vivo atraveacutes da
aplicabilidade de membrana de elastina derivada da cartilagem auricular bovina
tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio em ratos Wistar Com um procedimento
ciruacutergico foi criada uma falha oacutessea experimental na calota craniana dos animais de
laboratoacuterio e enxertadas com o biomaterial Apoacutes 3 e 8 semanas de recuperaccedilatildeo
poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados e as aacutereas receptoras foram removidas
enviadas para anaacutelise laboratorial composta por macroscopia radiologia histologia e
morfometria obtendo resultados satisfatoacuterios quanto agrave osteoinduccedilatildeo
osteoconduccedilatildeo sendo biocompatiacutevel e biodegradaacutevel mostrando-se um promissor
biomaterial em terapias de regeneraccedilatildeo oacutessea
Palavras-chave cartilagem auricular regeneraccedilatildeo oacutessea elastina
2- INTRODUCcedilAtildeO
A cliacutenica meacutedica em traumatologia tem conquistado grandes avanccedilos
tecnoloacutegicos na substituiccedilatildeo de tecidos lesados utilizando biomateriais para
enxertia que conferem um suporte para a proliferaccedilatildeo celular estimulando a
regeneraccedilatildeo tecidual e promovendo a estabilidade mecacircnica e funcional dos mais
variados tecidos humanos (Cunha et al 2011) Enxertos autoacutegenos satildeo
amplamente utilizados em casos de perda de massa oacutessea causadas por traumas
patologias e deformidades congecircnitas Apesar de possuir ceacutelulas osteoprogenitoras
capazes de estimular a formaccedilatildeo oacutessea este apresenta algumas desvantagens
como morbidade dor crocircnica do siacutetio doador reabsorccedilatildeo oacutessea necessidade de
dois procedimentos ciruacutergicos formaccedilatildeo irregular do contorno oacutesseo na aacuterea
receptora e limitaccedilotildees quanto agrave quantidade disponiacutevel do material (Nascimento et
al 2012 Konig Jr 2010 Cunha et al 2011)
Em virtude desta problemaacutetica foi desenvolvida e testada a matriz de elastina
derivada da cartilagem auricular bovina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio
com o objetivo de ser utilizado como um substituto do enxerto autoacutegeno podendo
ser uma alternativa promissora nas terapias de regeneraccedilatildeo oacutessea (Nascimento et
al 2012) A elastina eacute uma importante proteiacutena da matriz extracelular que promove
elasticidade a vaacuterios oacutergatildeos Suas fibras satildeo compostas por microfibrilas que agem
como uma armaccedilatildeo onde a elastina amorfa eacute depositada atraveacutes de ligaccedilotildees
cruzadas formando um arcabouccedilo tridimensional capaz de permitir a angiogecircnese
no local do implante e fornecer suporte para a infiltraccedilatildeo diferenciaccedilatildeo e
proliferaccedilatildeo de ceacutelulas osteoblaacutesticas que desempenham a importante funccedilatildeo de
deposiccedilatildeo iacuteons de Caacutelcio gerando a neoformaccedilatildeo oacutessea A elastina presente na
cartilagem auricular bovina possui fibras orientadas em forma de favo otimizando a
permeabilidade celular (Mithieux e Weiss 2005 Daamen et al 2007)
A elastina quando associada aos processos de tratamento alcalino e
mineralizaccedilatildeo pode excluir os efeitos deleteacuterios do processo de enxertia e acionar a
cascata correta de eventos bioloacutegicos necessaacuterios para a regeneraccedilatildeo tecidual
devido a facilidade de adesatildeo celular e inibiccedilatildeo da formaccedilatildeo de fibroses Estes
achados estatildeo fundamentados nas caracteriacutesticas moleculares da elastina que
possui a sequecircncia de reconhecimento celular composto pela sequecircncia arginina -
glicina - aacutecido aspaacutertico (Daamen et al 2007)
A regeneraccedilatildeo ainda pode ser acelerada na presenccedila de iacuteons de fosfato de
caacutelcio exercendo importante papel de siacutetios de nucleaccedilatildeo aumentando a
calcificaccedilatildeo (Daamen et al 2007 Tampieri et al 2011) Salienta-se que a
mineralizaccedilatildeo deste biomaterial agrave base de elastina atraveacutes da inclusatildeo de fosfato de
caacutelcio possa constituir uma interessante alternativa para a cicatrizaccedilatildeo do tecido
oacutesseo em funccedilatildeo da capacidade de estimular a expressatildeo de proteiacutenas marcadoras
da neoformaccedilatildeo oacutessea (Tampieri et al 2011)
3- OBJETIVOS
Analisar qualitativo e quantitativamente o processo de neoformaccedilatildeo oacutessea
durante o reparo de defeitos oacutesseos criados em ratos e enxertados com membrana
de elastina derivada da cartilagem auricular bovina e mineralizada com fosfato de
caacutelcio
4- METODOLOGIA A pesquisa aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CEUA) da Unianchieta (Processo 0022013) utilizou 30 ratos (Rattus norvegicus
Wistar) machos com 15 semanas de idade peso meacutedio de 330g e separados em
caixas com 5 (cinco) animais cada recebendo raccedilatildeo balanceada (Purinareg) e aacutegua
ad-libitum e temperatura do ambiente controlada (23 plusmn1ordmC)
A confecccedilatildeo das membranas de elastina foi realizada pelo Instituto de Quiacutemica
da Universidade de Satildeo Paulo (USP) Campus Satildeo Carlos atraveacutes de um processo
laboratorial cuja finalidade foi provocar alteraccedilotildees fiacutesicas e quiacutemicas para elevar as
caracteriacutesticas piezoeleacutetricas eliminar possiacuteveis antiacutegenos e incluir elementos
indutores de agregaccedilatildeo celular Para a obtenccedilatildeo da membrana de elastina natildeo
mineralizada procedeu-se com a lavagem do material em soluccedilatildeo de NaCl 09
aacutegua e acetona e tratada em NaOH agrave 80degC por 45 min seguida de lavagem em
aacutegua e liofilizaccedilatildeo Para a membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio
foi realizado o processo descrito anteriormente acrescido de imersatildeo em CaCl2 por
30min e lavagem em aacutegua desionizada seguida imersatildeo em soluccedilatildeo de Na2HPO4
por 30min em pH 90 sendo este ciclo repetido por 6 vezes Em seguida a
membrana de elastina foi lavada em aacutegua desionizada e liofilizada (Nascimento et
al 2012) As Eletro-Fotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
Aumento 1000X evidenciam a porosidade das membranas conforme Figura 1
Figura 1 A ndash Membrana de elastina tratada e natildeo mineralizada B ndash Membrana
de elastina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio
Os animais foram divididos em dois grupos sendo o primeiro contendo 15
animais sacrificados com 3 semanas de poacutes-operatoacuterio e o segundo contendo 15
animais sacrificados com 8 semanas de poacutes-operatoacuterio Cada grupo recebeu
subgrupos sendo G1 (Animais com defeito na calota craniana e sem
preenchimento da falha oacutessea - Grupo Controle) G2 (Animais com defeito na calota
craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem
mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz
derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)
Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de
Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo
analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de
0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)
Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida
em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das
coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da
tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e
afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca
ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de
5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o
implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados
suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010
Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2
Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo
sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash
Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura
dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local
Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de
peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via
intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na
dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et
al 2009)
Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados
com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram
removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a
finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi
utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o
tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho
Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que
possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida
a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos
resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50
(Potijanyakul et al 2010)
5- DESENVOLVIMENTO
Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina
implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo
imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade
do biomaterial (Ratner 2013)
Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar
funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo
oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para
a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-
implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas
afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das
membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2
observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo
oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a
osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al
2011 Konig Jr 2010)
A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu
um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o
implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea
constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a
infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de
aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada
em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do
implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a
capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente
que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse
maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu
uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a
neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo
permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para
o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de
caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a
permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)
O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo
I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi
surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias
sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas
osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea
6- RESULTADOS
Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e
absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente
Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas
Figuras 5 e 6 respectivamente
Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido
oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
0
10
20
30
40
50
60
70
80
G13 G23 G33 G18 G28 G38
PERC
ENTU
AL D
E O
SSO
NEO
FORM
ADO
()
GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA
8- FONTES CONSULTADAS
bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for
bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33
bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr
AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of
diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52
bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a
Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98
bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of
bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal
Care of the Injured 20114222-25
bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em
ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010
bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de
Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009
bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61
bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de
matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de
Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6
bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S
Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects
Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204
bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine
Third edition Canada Elsevier 2013
bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of
α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical
Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98
bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-
mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development
Trends in Biotechnology 201129(10)526-535
como uma armaccedilatildeo onde a elastina amorfa eacute depositada atraveacutes de ligaccedilotildees
cruzadas formando um arcabouccedilo tridimensional capaz de permitir a angiogecircnese
no local do implante e fornecer suporte para a infiltraccedilatildeo diferenciaccedilatildeo e
proliferaccedilatildeo de ceacutelulas osteoblaacutesticas que desempenham a importante funccedilatildeo de
deposiccedilatildeo iacuteons de Caacutelcio gerando a neoformaccedilatildeo oacutessea A elastina presente na
cartilagem auricular bovina possui fibras orientadas em forma de favo otimizando a
permeabilidade celular (Mithieux e Weiss 2005 Daamen et al 2007)
A elastina quando associada aos processos de tratamento alcalino e
mineralizaccedilatildeo pode excluir os efeitos deleteacuterios do processo de enxertia e acionar a
cascata correta de eventos bioloacutegicos necessaacuterios para a regeneraccedilatildeo tecidual
devido a facilidade de adesatildeo celular e inibiccedilatildeo da formaccedilatildeo de fibroses Estes
achados estatildeo fundamentados nas caracteriacutesticas moleculares da elastina que
possui a sequecircncia de reconhecimento celular composto pela sequecircncia arginina -
glicina - aacutecido aspaacutertico (Daamen et al 2007)
A regeneraccedilatildeo ainda pode ser acelerada na presenccedila de iacuteons de fosfato de
caacutelcio exercendo importante papel de siacutetios de nucleaccedilatildeo aumentando a
calcificaccedilatildeo (Daamen et al 2007 Tampieri et al 2011) Salienta-se que a
mineralizaccedilatildeo deste biomaterial agrave base de elastina atraveacutes da inclusatildeo de fosfato de
caacutelcio possa constituir uma interessante alternativa para a cicatrizaccedilatildeo do tecido
oacutesseo em funccedilatildeo da capacidade de estimular a expressatildeo de proteiacutenas marcadoras
da neoformaccedilatildeo oacutessea (Tampieri et al 2011)
3- OBJETIVOS
Analisar qualitativo e quantitativamente o processo de neoformaccedilatildeo oacutessea
durante o reparo de defeitos oacutesseos criados em ratos e enxertados com membrana
de elastina derivada da cartilagem auricular bovina e mineralizada com fosfato de
caacutelcio
4- METODOLOGIA A pesquisa aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Experimentaccedilatildeo Animal
(CEUA) da Unianchieta (Processo 0022013) utilizou 30 ratos (Rattus norvegicus
Wistar) machos com 15 semanas de idade peso meacutedio de 330g e separados em
caixas com 5 (cinco) animais cada recebendo raccedilatildeo balanceada (Purinareg) e aacutegua
ad-libitum e temperatura do ambiente controlada (23 plusmn1ordmC)
A confecccedilatildeo das membranas de elastina foi realizada pelo Instituto de Quiacutemica
da Universidade de Satildeo Paulo (USP) Campus Satildeo Carlos atraveacutes de um processo
laboratorial cuja finalidade foi provocar alteraccedilotildees fiacutesicas e quiacutemicas para elevar as
caracteriacutesticas piezoeleacutetricas eliminar possiacuteveis antiacutegenos e incluir elementos
indutores de agregaccedilatildeo celular Para a obtenccedilatildeo da membrana de elastina natildeo
mineralizada procedeu-se com a lavagem do material em soluccedilatildeo de NaCl 09
aacutegua e acetona e tratada em NaOH agrave 80degC por 45 min seguida de lavagem em
aacutegua e liofilizaccedilatildeo Para a membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio
foi realizado o processo descrito anteriormente acrescido de imersatildeo em CaCl2 por
30min e lavagem em aacutegua desionizada seguida imersatildeo em soluccedilatildeo de Na2HPO4
por 30min em pH 90 sendo este ciclo repetido por 6 vezes Em seguida a
membrana de elastina foi lavada em aacutegua desionizada e liofilizada (Nascimento et
al 2012) As Eletro-Fotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
Aumento 1000X evidenciam a porosidade das membranas conforme Figura 1
Figura 1 A ndash Membrana de elastina tratada e natildeo mineralizada B ndash Membrana
de elastina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio
Os animais foram divididos em dois grupos sendo o primeiro contendo 15
animais sacrificados com 3 semanas de poacutes-operatoacuterio e o segundo contendo 15
animais sacrificados com 8 semanas de poacutes-operatoacuterio Cada grupo recebeu
subgrupos sendo G1 (Animais com defeito na calota craniana e sem
preenchimento da falha oacutessea - Grupo Controle) G2 (Animais com defeito na calota
craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem
mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz
derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)
Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de
Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo
analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de
0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)
Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida
em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das
coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da
tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e
afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca
ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de
5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o
implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados
suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010
Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2
Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo
sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash
Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura
dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local
Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de
peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via
intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na
dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et
al 2009)
Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados
com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram
removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a
finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi
utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o
tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho
Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que
possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida
a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos
resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50
(Potijanyakul et al 2010)
5- DESENVOLVIMENTO
Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina
implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo
imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade
do biomaterial (Ratner 2013)
Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar
funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo
oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para
a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-
implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas
afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das
membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2
observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo
oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a
osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al
2011 Konig Jr 2010)
A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu
um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o
implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea
constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a
infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de
aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada
em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do
implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a
capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente
que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse
maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu
uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a
neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo
permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para
o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de
caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a
permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)
O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo
I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi
surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias
sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas
osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea
6- RESULTADOS
Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e
absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente
Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas
Figuras 5 e 6 respectivamente
Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido
oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
0
10
20
30
40
50
60
70
80
G13 G23 G33 G18 G28 G38
PERC
ENTU
AL D
E O
SSO
NEO
FORM
ADO
()
GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA
8- FONTES CONSULTADAS
bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for
bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33
bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr
AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of
diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52
bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a
Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98
bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of
bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal
Care of the Injured 20114222-25
bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em
ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010
bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de
Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009
bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61
bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de
matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de
Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6
bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S
Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects
Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204
bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine
Third edition Canada Elsevier 2013
bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of
α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical
Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98
bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-
mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development
Trends in Biotechnology 201129(10)526-535
caixas com 5 (cinco) animais cada recebendo raccedilatildeo balanceada (Purinareg) e aacutegua
ad-libitum e temperatura do ambiente controlada (23 plusmn1ordmC)
A confecccedilatildeo das membranas de elastina foi realizada pelo Instituto de Quiacutemica
da Universidade de Satildeo Paulo (USP) Campus Satildeo Carlos atraveacutes de um processo
laboratorial cuja finalidade foi provocar alteraccedilotildees fiacutesicas e quiacutemicas para elevar as
caracteriacutesticas piezoeleacutetricas eliminar possiacuteveis antiacutegenos e incluir elementos
indutores de agregaccedilatildeo celular Para a obtenccedilatildeo da membrana de elastina natildeo
mineralizada procedeu-se com a lavagem do material em soluccedilatildeo de NaCl 09
aacutegua e acetona e tratada em NaOH agrave 80degC por 45 min seguida de lavagem em
aacutegua e liofilizaccedilatildeo Para a membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio
foi realizado o processo descrito anteriormente acrescido de imersatildeo em CaCl2 por
30min e lavagem em aacutegua desionizada seguida imersatildeo em soluccedilatildeo de Na2HPO4
por 30min em pH 90 sendo este ciclo repetido por 6 vezes Em seguida a
membrana de elastina foi lavada em aacutegua desionizada e liofilizada (Nascimento et
al 2012) As Eletro-Fotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
Aumento 1000X evidenciam a porosidade das membranas conforme Figura 1
Figura 1 A ndash Membrana de elastina tratada e natildeo mineralizada B ndash Membrana
de elastina tratada e mineralizada com fosfato de caacutelcio
Os animais foram divididos em dois grupos sendo o primeiro contendo 15
animais sacrificados com 3 semanas de poacutes-operatoacuterio e o segundo contendo 15
animais sacrificados com 8 semanas de poacutes-operatoacuterio Cada grupo recebeu
subgrupos sendo G1 (Animais com defeito na calota craniana e sem
preenchimento da falha oacutessea - Grupo Controle) G2 (Animais com defeito na calota
craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem
mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz
derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)
Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de
Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo
analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de
0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)
Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida
em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das
coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da
tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e
afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca
ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de
5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o
implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados
suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010
Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2
Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo
sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash
Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura
dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local
Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de
peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via
intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na
dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et
al 2009)
Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados
com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram
removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a
finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi
utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o
tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho
Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que
possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida
a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos
resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50
(Potijanyakul et al 2010)
5- DESENVOLVIMENTO
Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina
implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo
imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade
do biomaterial (Ratner 2013)
Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar
funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo
oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para
a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-
implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas
afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das
membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2
observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo
oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a
osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al
2011 Konig Jr 2010)
A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu
um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o
implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea
constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a
infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de
aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada
em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do
implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a
capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente
que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse
maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu
uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a
neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo
permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para
o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de
caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a
permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)
O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo
I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi
surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias
sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas
osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea
6- RESULTADOS
Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e
absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente
Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas
Figuras 5 e 6 respectivamente
Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido
oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
0
10
20
30
40
50
60
70
80
G13 G23 G33 G18 G28 G38
PERC
ENTU
AL D
E O
SSO
NEO
FORM
ADO
()
GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA
8- FONTES CONSULTADAS
bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for
bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33
bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr
AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of
diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52
bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a
Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98
bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of
bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal
Care of the Injured 20114222-25
bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em
ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010
bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de
Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009
bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61
bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de
matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de
Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6
bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S
Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects
Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204
bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine
Third edition Canada Elsevier 2013
bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of
α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical
Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98
bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-
mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development
Trends in Biotechnology 201129(10)526-535
craniana e preenchido com matriz derivada de cartilagem auricular sem
mineralizaccedilatildeo) G3 (Animais com defeito na calota craniana e preenchido com matriz
derivada de cartilagem auricular e mineralizada com fosfato de caacutelcio)
Inicialmente os animais foram anestesiados com a soluccedilatildeo anesteacutesica de
Dopalenreg (Ketamina) - anesteacutesico geral Coopazinereg (Xylazina) - sedativo
analgeacutesico e relaxante muscular na proporccedilatildeo de 11 e na dose de
0010mg10gramas de massa corpoacuterea via intramuscular (Cunha et al 2011)
Durante o procedimento ciruacutergico houve a aplicaccedilatildeo de uma gaze esteacuteril embebida
em soro fisioloacutegico a 09 nos olhos dos animais para prevenir o ressecamento das
coacuterneas Em seguida foram posicionados em decuacutebito ventral para a realizaccedilatildeo da
tricotomia e assepsia da aacuterea ciruacutergica A pele foi seccionada sagitalmente e
afastada para expor os ossos parietais O perioacutesteo foi descolado e com uma broca
ciruacutergica Trefina acoplada a um mini-motor (ELTEC LB-100) criou-se uma falaha de
5mm de diacircmetro no osso parietal esquerdo da calota craniana dos ratos para o
implante do biomaterial Apoacutes o implante o perioacutesteo e a pele foram reposicionados
suturados e aplicado antibioacutetico local Rifamicina Sprayreg (Potijanyakul et al 2010
Rojbani et al 2011 Lapchik et al 2009) conforme Figura 2
Figura 2 Procedimento ciruacutergico A ndash Tricotomia da calota craniana B ndash Incisatildeo
sagital C ndash Descolamento do perioacutesteo D ndash Falha oacutessea de 5 mm de diacircmetro E ndash
Implante da membrana de elastina F ndash Reposicionamento do perioacutesteo G ndash Sutura
dos tecidos H ndash Aplicaccedilatildeo de antibioacutetico local
Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de
peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via
intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na
dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et
al 2009)
Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados
com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram
removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a
finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi
utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o
tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho
Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que
possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida
a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos
resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50
(Potijanyakul et al 2010)
5- DESENVOLVIMENTO
Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina
implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo
imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade
do biomaterial (Ratner 2013)
Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar
funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo
oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para
a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-
implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas
afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das
membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2
observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo
oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a
osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al
2011 Konig Jr 2010)
A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu
um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o
implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea
constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a
infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de
aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada
em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do
implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a
capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente
que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse
maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu
uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a
neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo
permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para
o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de
caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a
permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)
O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo
I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi
surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias
sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas
osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea
6- RESULTADOS
Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e
absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente
Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas
Figuras 5 e 6 respectivamente
Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido
oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
0
10
20
30
40
50
60
70
80
G13 G23 G33 G18 G28 G38
PERC
ENTU
AL D
E O
SSO
NEO
FORM
ADO
()
GRUPOS DE ANIMAIS SEMANAS DE RECUPERACcedilAtildeO POacuteS-CIRUacuteRGICA
8- FONTES CONSULTADAS
bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for
bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33
bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr
AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of
diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52
bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a
Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98
bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of
bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal
Care of the Injured 20114222-25
bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em
ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010
bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de
Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009
bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61
bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de
matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de
Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6
bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S
Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects
Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204
bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine
Third edition Canada Elsevier 2013
bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of
α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical
Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98
bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-
mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development
Trends in Biotechnology 201129(10)526-535
Na fase poacutes-operatoacuteria cada animal recebeu uma dose de 01mg100g de
peso do antibioacutetico Pentabiotic Veterinaacuterio Pequeno Porte (Fort Dodgereg) via
intramuscular Tambeacutem foi oferecida uma dosagem de analgeacutesico (paracetamol) na
dose de 200mgKg de peso do animal via oral duas a trecircs vezes por dia (Lapchik et
al 2009)
Apoacutes os prazos de recuperaccedilatildeo poacutes-ciruacutergica os animais foram sacrificados
com inalaccedilatildeo de gaacutes carbocircnico (CO2) e as calotas cranianas dos animais foram
removidas e enviadas para anaacutelise macroscoacutepica radioloacutegica e histoloacutegica com a
finalidade de qualificaccedilatildeo e quantificaccedilatildeo da neoformaccedilatildeo oacutessea Na histologia foi
utilizado Tricromico de Masson um marcador de regeneraccedilatildeo oacutessea que cora o
tecido oacutesseo imaturo (neoformado) em azul e o tecido maturoantigo em vermelho
Tambeacutem utilizou-se o Picrosirius Red um marcador de fibras colaacutegenas que
possibilita a diferenciaccedilatildeo das fibras de colaacutegeno Apoacutes histologia foi desenvolvida
a morfometria da neoformaccedilatildeo oacutessea utilizando quadrilaacutetero de 100 pontos cujos
resultados foram submetidos agrave anaacutelise estatiacutestica atraveacutes do software BioEstat 50
(Potijanyakul et al 2010)
5- DESENVOLVIMENTO
Nota-se nesta pesquisa a biocompatibilidade das membranas de elastina
implantadas no siacutetio receptor craniano visto a ausecircncia de sinais de rejeiccedilatildeo
imunoloacutegica tais como processos inflamatoacuterios confirmando a biocompatibilidade
do biomaterial (Ratner 2013)
Aleacutem de imunocompatiacutevel o biomaterial deve manter induzir e restaurar
funccedilotildees bioloacutegicas obter taxa de degradaccedilatildeo concomitante agrave taxa de neoformaccedilatildeo
oacutessea ser absorviacutevel promover adesatildeo e proliferaccedilatildeo celular oferecer suporte para
a osteoconduccedilatildeo e infiltraccedilatildeo de ceacutelulas osteogecircnicas e garantir estabilidade osso-
implante ateacute finalizar a consolidaccedilatildeo (Billstrom et al 2013) Corroborando com estas
afirmaccedilotildees nota-se atraveacutes das anaacutelises macroscoacutepicas a preservaccedilatildeo das
membranas de elastina apoacutes 8 semanas de poacutes-ciruacutergico entretanto em G2
observa-se que o processo de reabsorccedilatildeo da matriz foi proporcional agrave neoformaccedilatildeo
oacutessea viabilizando a osteointegraccedilatildeo do biomaterial e possibilitando a
osteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo durante a regeneraccedilatildeo da falha oacutessea (Cunha et al
2011 Konig Jr 2010)
A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu
um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o
implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea
constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a
infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de
aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada
em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do
implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a
capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente
que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse
maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu
uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a
neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo
permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para
o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de
caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a
permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)
O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo
I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi
surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias
sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas
osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea
6- RESULTADOS
Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e
absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente
Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas
Figuras 5 e 6 respectivamente
Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido
oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
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8- FONTES CONSULTADAS
bull Billstroumlm GH Blom AWB Larsson S Beswick AD Application of scaffolds for
bone regeneration strategies Injury Intern J Care of the Inj 20134428ndash33
bull Cunha MR Gushiken VO Mardegan Issa JP Iatecola A Pettian M Santos Jr
AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of
diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52
bull Daamen WF Hafmans T Veerkamp JH Van Kuppevelt TH Elastin as a
Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98
bull Hannink G Chris Arts JJ Bioresorbability porosity and mechanical strength of
bone substitutes What is optimal for bone regeneration Injury Int Journal
Care of the Injured 20114222-25
bull Konig Jr B Implantologia e osteointegraccedilatildeo quanto agrave pesquisa em
ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010
bull Lapchik VBV Mattaraia VGM Ko GM Cuidados e Manejo de Animais de
Laboratoacuterio Editora Atheneu Satildeo Paulo 2009
bull Mithieux SM Weiss AS Elastin Ad in Protein Chemistry 200570437ndash61
bull Nascimento DL Vulcani VAS Martins VCA Plepis AMG Mineralizaccedilatildeo de
matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de
Oacutergatildeos Artificiais e Biomateriais 20121(1)1-6
bull Potijanyakul P Sattayasansakul W Pongpanich S Leepong N Kintarak S
Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects
Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204
bull Ratner BD Biomaterials Science An introduction to Materials in Medicine
Third edition Canada Elsevier 2013
bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of
α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical
Materials Research Part A Applied Biomaterials 201198(4)488-98
bull Tampieri A Sprio S Sandri M Valentini F Mimicking natural bio-
mineralization processes A new tool for osteochondral scaffold development
Trends in Biotechnology 201129(10)526-535
A histologia com Tricrocircmico de Masson evidenciou que no grupo G1 ocorreu
um acentuado crescimento de tecido conectivo enquanto que no grupo G3 o
implante permaneceu praticamente intacto devido agrave menor formaccedilatildeo oacutessea
constatada Todavia G2 apresentou biodegradabilidade superior permitindo a
infiltraccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular obtendo uma importante neoformaccedilatildeo oacutessea de
aspecto imaturo (corada em azul) que partiu das bordas da aacuterea receptora (corada
em vermelho) e projetou-se sobre a matriz de elastina em direccedilatildeo ao centro do
implante Foi possiacutevel notar trabeacuteculas oacutesseas no interior do enxerto confirmando a
capacidade de permeabilidade e inductilidade da membrana e deixando evidente
que haveria o fechamento total da falha oacutessea se o tempo de recuperaccedilatildeo fosse
maior A membrana de elastina mineralizada com fosfato de caacutelcio (G3) permitiu
uma interaccedilatildeo osso-implante predominantemente atraveacutes de tecido conectivo e a
neofomaccedilatildeo oacutessea tambeacutem margeou a superfiacutecie do biomaterial poreacutem natildeo
permitiu que as ceacutelulas osteogecircnicas penetrassem em quantidades suficientes para
o interior da matriz Acredita-se que o processo de mineralizaccedilatildeo com fosfato de
caacutelcio tenha reduzido o diacircmetro dos poros da membrana dificultado a
permeabilidade celular (Hannink amp Cris Arts 2011)
O Picrosirius Red evidenciou as fibras colaacutegenas predominantemente do tipo
I (coradas em amarelo e vermelho) em todos os grupos Poreacutem foi
surpreendentemente positiva em G2 com formaccedilatildeo e birrefringecircncia satisfatoacuterias
sugerindo que estas fibras ofereceram suporte para a deposiccedilatildeo das ceacutelulas
osteogecircnicas ao longo da regeneraccedilatildeo sendo um aliado da neoformaccedilatildeo oacutessea
6- RESULTADOS
Macroscopia e Radiologia com ausecircncia de processos infecciosos e
absorccedilotildees oacutesseas ilustrados nas Figuras 3 e 4 respectivamente
Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas
Figuras 5 e 6 respectivamente
Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido
oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
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bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of
α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
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Figura 3 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 4 A B e C ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3 respectivamente com 3
semanas de poacutes-ciruacutergico D E e F ndash Amostras dos grupos G1 G2 e G3
respectivamente com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Histologia com Tricrocircmico de Masson e Picrosirius Red ilustradas nas
Figuras 5 e 6 respectivamente
Figura 5 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
Figura 6 Eletrofotomicrografias por Microscopia Eletrocircnica de Varredura em
aumento 10X G13 G23 e G33 - grupos sacrificados com 3 semanas de poacutes-
ciruacutergico G18 G28 e G38 - grupos sacrificados com 8 semanas de poacutes-ciruacutergico
As setas indicam o acuacutemulo de fibras colaacutegenas do tipo I predominantes em tecido
oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
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AR Osteoconductive capacity of hydroxyapatite implanted into the skull of
diabetics The Journal of Craniofacial Surgery 2011 22(6) 2048-52
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Biomaterial for tissue engineering Biomaterials 200728(30)4378-98
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ceracircmicas aplicaccedilotildees cliacutenicas e outros materiais Satildeo Paulo Ed Rocca 2010
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matriz derivada de cartilagem auricular Congresso Latino Americano de
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Effects of enamel matrix derivative on bioactive glass in rat calvarium defects
Journal of Oral Implantology 201036(3)195-204
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Third edition Canada Elsevier 2013
bull Rojbani H Nyan M Ohya K Kasugai S Evaluation of the osteoconductivity of
α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
with or without simvastatin in rat calvarial defect Journal of Biomedical
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oacutesseo neoformado
Nas anaacutelises morfomeacutetricas as meacutedias e desvios-padratildeo do volume
percentual relativo de osso neoformado no defeito craniano dos grupos sacrificados
com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
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com 3 (trecircs) semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 650plusmn17321
3075plusmn22174 1600plusmn16330 respectivamente Nos grupos sacrificados com 8 (oito)
semanas de poacutes-operatoacuterio (G1 a G3) foram 1925plusmn15000 6700plusmn88318
4175plusmn53151 respectivamente conforme o Graacutefico 1
Graacutefico 1 Anaacutelise morfomeacutetrica dos grupos G1 G2 e G3 com 3 e 8 semanas poacutes-
ciruacutergica demonstrando o percentual de osso neoformado
7- CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS Com resultados muito satisfatoacuterios quanto agrave biocompatibilidade
biodegradabilidade onteoconduccedilatildeo e osteoinduccedilatildeo a matriz de elastina derivada da
cartilagem auricular bovina pode ser considerada como um promissor biomaterial a
ser utilizado nas terapias regenerativas do tecido oacutesseo lesado
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α-tricalcium phosphate β-tricalcium phosphate and hydroxyapatite combined
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