A Parede Celular em Bactérias - CNCcnc.cj.uc.pt/disciplina/microbiologia/pdfs/Aula_color.pdf · r r r r r r Citoplasma r r r r ácido lipoteóico ... Grossa (multi-camada) Canada

AJCristóvão, Departamento Zoologia Universidade Coimbra 2003

A Parede Celular emBactérias

Tem como função:

-Manter as formas característicasdas células-Protecção contra alterações depressão osmótica-Fornecer uma plataforma rígidapara ligação dos apêndicessuperficiais


Composta por umamacromolécula chamadapeptidoglicano, tambémdesignada por mureína.

ComposiComposiçãção eo eestrutura da paredeestrutura da parede

celularcelular


1. Um esqueleto polissacar Um esqueleto polissacaríídeodeo

A. ácido N-acetile muramico(Mur)

B. N-acetile glucosamina (Gln)

2.2. CadeiasCadeias pept peptíídicasdicas laterais lateraiscontendo

A. aminoácidos D- e L-

B. ácido diaminopimelico (emalguns casos)

C. As cadeias laterais formampontes cruzadas,que podem variar entreespécies.

PeptidoglicanoPeptidoglicanoconsiste em:consiste em:



r r r rr r

CitoplasmaCitoplasmaCitoplasma

rrrr

ácido lipoteóico

Peptidoglicano- ácido teóico

Membrana Citoplasmática

Envelope celular Gram +Envelope celular Gram +

CitoplasmaCitoplasmaCitoplasmaMembrana (citoplasmática) interna

Mem

bra

na E

xte

rna

Lipopolissacarídeo

r

Porina

Lipoproteína castanhaPeptidoglicano

Envelope celular Gram-Envelope celular Gram-


Gram Gram positivaspositivas e GramGramnegativasnegativas

A coloração de Gram é baseadaem características quereflectem as diferençasestruturais entre os 2 grupos.

As diferentesAs diferentescaractercaracteríísticas dasticas da

parede celularparede celularpermite formar 2permite formar 2grandes Gruposgrandes Grupos


Alta (devido àpresença de umamembranaexterna)

BaixoConteúdo lipidicoe delipoproteínas

AltaVirtualmentenenhum

Lipopolissacarideo

PresenteAusenteMembranaexterna

PresenteAusenteEspaçoperiplásmico

AusentePresente emmuitas

Ácidos teóicos

fina (camadaúnica)

Grossa (multi-camada)

Canada depeptidoglicano

Pde serdescorada erecorada comsafranina

Retem cristaisvioleta e ficapúrpura-violeta

Reacção ao testeGram

Gram-NegativaGram-PositivaCaracteristicas

Características dasBactérias Gram-Positivas e

Gram-Negativas I


4 anéis no corpobasal

2 anéis no corpobasal

Estruturaflagelar

Endotoxinasprimárias

Toxinasproduzidas

BaixaAltaResistência físicaà ruptura

BaixaAltaInhibição porcorantes básicos

BaixaAltaSusceptibilidadea detergentesanionicos

BaixaAltaResistência àazida de sódio

BaixaAltaResistência àsecagem

Gram-NegativaGram-PositivaCaracteristicas

Características dasBactérias Gram-Positivas e

Gram-Negativas II

Exotoxinaspromárias


Tipos de Parede Celular(Gram)

COLORAÇÃO DE GRAM

(POSITIVO E NEGATIVO)


• Objectivo– Ver morfologia celular– De diagnóstico: Que tipo de

parede é que uma bactériapossui

– Classificação: O tipo de paredepermite separar as células em2 grandes grupos

Coloração de Gram


• Cristal Violeta (violeta)– Coloração primária; coloração positiva– A parede celular cora de violeta

• Iodo de Gram– Mordante– Combina-se com os CV para formar um

complexo insolúvel que fica aprisionado nascamadas de peptidoglicano mais grossas

• Etanol/cetona– Descolorante– Os complexos CV-I são lavados para for a

das células Gram-, porque as camadas depeptidoglicano não são suficientementeespessas para osreter; atravessam amembrana externa

• Safranina (pink)– Cora todas as célula mas somente as Gram-

são visualizadas, nas outras sobrepõem-se ovioleta.

Reagentes para Coloraçãode Gram


Colocar uma gota de água na laminae espalhar com ansa um pouco de células

Secar ao ar

Fixar à chama (NÃO QUEIMAR OS DEDOS)

Colocar uma gota de corante e após o tempo necessário

escorrer

Colocar uma gota de óleo deimersão

e observar ao microscópioampliação 100x

Óleo

100x

lamina

Adaptado de BROCK


PASSO 1

PASSO 2

Após secar e fixar comcalor, colocar noreagente cristal violeta 1min

TODAS as células ficamvioletas

Após lavar com umpouco de água, colocarcom iodo de Gram 1 min

TODAS as célulascontinuam violetas

PASSO 3

PASSO 4

Após lavar com um poucode água, colocar cometanol/acetona 30 s

Células Gram+ violetas,restantes incolores

Após lavar com umpouco de água, colocarem safranina, 1 minGRAM-

Após lavar com umpouco de água, e secarcom um papel de filtro,as células Gram+ ficamvioletas e as Gram-ficam vermelho a rosado

GRAM+

Adaptado de BROCK


Exemplos deColorações Gram

Gram+ Gram-


• Géneros que formam endósporos– Bacillus– Clostridium

• É um mecanismo desobrevivência, não é parareprodução (só se formamquando o ambiente se tornademasiado agressivo para viver)

• Estas estruturas estão dormentese podem sobreviver eternamente,porque são extremamente difíceisde destruir

Endósporos


Formação de umEndósporo


• Interesse:– Para diagnosticar algumas

doenças– Algumas doenças são causadas

por endósporos– Como são praticamente

indestrutíveis algumas doenças,as bactérias que os formampodem ser particularmentepatogénicas e por issoperigosas, por ex o Clostridiumbotulinum, que causa obotulismo.

Coloração deEndósporos


• Verde Malaquite (verde)– O aquecimento ajuda a passar a parede

do endósporo– Só se cora o esporo e não a parede

celular• Safranina (vermelho/rosa)

– Agente contrastante– Não cora o endósporo– Fornece contraste para o esporo.

Reagentes a usar

Procedimento1. Fazer um esfregaço2. Colocar num suporte com água a ferver por baixo3. Corar com malaquite 5% 5 min (sobre água a ferver)4. Lavar com água5. Corar com safranina 30s6. Lavar com água7. Observar ao microscópio (Objectiva de imersão)


Exemplo deendósporo corado

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