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Referncias Citando artigos Dave R. van Staveren e Nils Metzler-Nolte.* Institut fr Pharmazie und Molekulare Biotechnologie, Universitt Heidelberg, Im Neuenheimer Feld 364, D-69120 Heidelberg, Alemanha. Rev. Chem., 2004, 104 (12), pp 59315986 DOI: 10.1021/cr0101510 Data de publicao (Web): 8 de Dezembro de 2004 Copyright 2004 American Chemical Society Dave R. van Staveren nasceu em Rotterdam, Holanda, em 1976. Ele estudou qumica na Universidade de Leiden, de 1994 a 1999 e realizou sua pesquisa de diploma no grupo do Professor Jan Reedijk. Posteriormente, ele se mudou para o Max-Planck-Institut fr Strahlenchemie (hoje conhecido como o Max-Planck-Institute for Bioinorganic Chemistry) em Mlheim an der Ruhr, Alemanha, para realizar pesquisa de doutorado no grupo do Professor Karl Wieghardt, sob a superviso de Nils Metzler-Nolte. Ele foi premiado com um grau de pH.d. da Universidade de Bochum em 2001. Mudou-se para o Max-Planck-Institut de Kohlenforschung, outro-Instituto Max Planck-em Mlheim an der Ruhr, para trabalhar como um companheiro com Professor Alois Frstner no domnio da mettese de alquino a partir de 2001, durante a maior parte de 2002. Depois de passar um semestre na Universidade de Heidelberg, Alemanha, como assistente de ensino, no departamento de farmcia, mudou-se para a Sua para trabalhar em um projeto financiado industrialmente envolvendo radioativos de vitamina B12, com 99 mTc. A primeira parte deste projecto foi concluda na Universidade de Zurique, sob superviso pelo Professor Roger Alberto (20032004), Considerando que a segunda parte actualmente em curso no Paul Scherrer Institut de Villigen no grupo do Professor p. Agosto Schubiger. Nils Metzler-Nolte nasceu em Hamburgo, na Alemanha, em 1967. Depois de estudar qumica em universidades de Hamburgo e Freiburg, mudou-se para a Universidade Ludwig-Maximilians de Munique, em 1989, onde obteve seu diploma em qumica em 1991 e seu Ph.d. em 1994, ambos em qumica de organo-boro sob a superviso do Professor H. Nth. Ele fez seu psdoutorado com m. l. h. Green em Oxford e, em seguida, mudou-se para o Max-Planck-Institute fr Strahlenchemie (hoje em dia sabe como Max-Planck-Instituto de qumica Bioinorganic), onde comeou sua investigao independente em bioorganometallic qumica e trabalhou como chefe do grupo de servio NMR. Obteve sua habilitao, na Universidade de Bochum, em Maio de 2000. Logo depois, foi nomeado professor titular para Bioinorganic qumica na faculdade de farmcia da Universidade de Heidelberg. Ele atualmente est localizado a Instituto desta universidade para a farmcia e biotecnologia Molecular, que faz parte da faculdade de biocincias. Seu interesse de pesquisa em bioorganometallic qumica e bioconjugates geralmente funcional com metais de transio, tais como metalpeptide e metalPNA conjugados, incluindo aspectos da qumica inorgnica medicinal. Seu trabalho tem

sido reconhecido por vrios prmios, e ele foi cochairman do segundo Simpsio Internacional sobre qumica Bioorganometallic em julho de 2004 em Zurique, na Sua. Seo: Organometlicos e compostos de Organometalloidal

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos

5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 1. Introduo

Em 1951, um novo composto contendo ferro e dois ciclopentadieno ligantes foi relatado. 1,2 Embora mesmo os primeiros relatrios notou sua estabilidade elevada e inesperada, a estrutura correta foi apenas mais tarde sugeriu independentemente por Wilkinson3 e Fischer. 4 Devido semelhana de sua reatividade do benzeno, o nome ferroceno (1) foi cunhado para o novo composto por Woodward. 5 O termo "composto sanduche" para este composto hoje universalmente aceite para uma classe muito mais vasta de compostos. A descoberta de ferroceno e elucidao da sua estrutura notvel , sem dvida, o ponto de partida para a moderna qumica organometlica. Nos ltimos anos, bioorganometallic qumica desenvolveuse como um rpido crescimento e maturingarea que liga qumica organometlica clssica biologia, medicina e Biotecnologia molecular.6-8 A acessibilidade de uma grande variedade de derivados e suas propriedades eletroqumicas favorveis fizeram a estabilidade do grupo ferrocenyl em meios aquosos, aerbicos, ferroceno e seus derivados molculas muito populares para aplicaes biolgicas e conjugao com biomolculas. Esta avaliao abrange bioconjugates do ferroceno com aminocidos e peptdeos (seo 2), protenas (ponto 3), DNA, RNA e PNA (seo 4), carboidratos (seo 5) e hormnios e outros (seo 6). Principalmente, ns limitamos nossa discusso para conjugados em que ferroceno covalentemente ligado biomolecule e a respectiva aplicao. Aplicativos nos qual ferroceno livre serve um biolgicas purpose, por exemplo, como um mediador de eltrons entre enzimas e um eletrodo, no so considerados. Alm disso, no discutimos as propriedades fisiolgicas de ferroceno ou seus derivados. Aplicaes medicinais de derivados do ferroceno tambm no so abrangidas exaustivamente nesta reviso. Ferroceno si apresenta propriedades interessantes como anti-aenemic ou agente citotxico.Neuse 9,10 e colegas de trabalho encontraram atividade muito reforada de citotxicos compostos metlicos incluindo ferroceno quando estes eram obrigados a polmeros como prodrugs. 11,12 Conjugados do ferroceno com drogas conhecidas foram registrados, por exemplo, com antibiticos como a penicilina e cefalosporinas. 13-23 Alm disso, variaes estruturais de drogas estabelecidas com o grupo de ferrocenyl foram registradas, tais como ferrocenyl

aspirina,24-26 a cloroquina antimalricos drogas (chamado ferroquine), quinina, mefloquina e artemisinina,27-39 e o tamixofen de droga anti-cncer dar ferrocifen.40-42 Esta avaliao abrange a literatura de 1957, quando Schlgl relatou os aminocidos ferrocenyl primeiros,43 atravs o incio de 2004. No h nenhuma avaliao anterior que estamos conscientes de que cobre o tpico deste artigo de forma concisa. Um livro escrito por Togni em ferroceno qumica no toque aspectos biolgicos. 44 Cabeza, Severin e Beck publicaram um artigo bastante completo sobre bioorganometallic derivados de aminocidos e peptdeos. 45 Ryabov reviu a interao de compostos organometlicos com enzimas e protenas. 46 Muito recentemente, Salmain e Jaouen publicou uma reviso no rtulo covalente de protenas com complexos organometlicos. 47 Em uma srie de inquritos anuais em ferroceno no Jornal de qumica organometlica,48-65 um captulo foi geralmente dedicado para aplicaes biolgicas deste particular compostos organometlicos. Apareceram duas avaliaes mais velhas em qumica biolgica da metalocenos. 66,67 Avaliaes mais especializadas cobrem aspectos da qumica de ferroceno, como, por exemplo, aplicativos do composto em glicose biosensores68 e bioelectrnica.Foi publicada 69,70 muito recentemente, uma excelente reviso russa em ferroceno-contendo cidos nucleicos.71

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou

3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos

2.1. Antinatural aminocidos que contm uma cadeia lateral de Ferrocenyl2.1.1. Ferrocenylalanine e conjuga o seu Os dois primeiros anlogos de aminocidos de ferroceno foram relatados por Schlgl como incio de 1957, apenas seis anos aps os relatrios iniciais sobre a sntese de ferroceno.1,2 Estes anlogos constituem (1) dl- ferrocenylalanine (dl- Fer, 2)43,72,73 e (2) dlferrocenylphenylalanine (3)43 (esquema 1). Este ltimo nunca foi utilizado aps seu relatrio inicial, Considerando que tem ferrocenylalanine foi objecto de uma extensa pesquisa. Algumas dcadas mais tarde, vrios outros relatrios apareceram sobre a sntese (Filadlfia) deste aminocido. 74-77 Duas estratgias foram adaptadas para obter ferrocenylalanine na sua forma pura enantiomerically: atravs da resoluo da mistura racmica ou atravs de sntese de stereospecific. Resolvendo a mistura racmica possvel por cristalizao (1) fracionada do diastereomricos brucina sal76 ou (2) cintica resoluo por Filadlfia deacylation de acylated racmica usando a enzima Acilase.77 Ferrocenylalanine podem ser sintetizado com at 94% de stereospecifically ee atravs da hidrogenao assimtrica do correspondente Z-configurado dehydro acil derivados 4 esquema 2, dar N-acetil-protegido l-2 (5) seguido de desproteo.75 Outro mtodo elegante para a obteno de enantiomerically puro protegido pelo COB

ferrocenylalanine 6 consiste em um Pd (0)-catalisada acoplamento entre 1-iodoferrocene (7) e o reagente serina-derivado organozinc 8 (regime de 2).74

Esquema 1. Estrutura molecular do Ferrocenylalanine (2) e (Ferrocenylphenylalanine3)

Esquema 2. Dois mtodos para obter (puro Enantiomerically Ferrocenylalanine2) Uma variedade de peptdeos que contm ferrocenylalanine como um aminocido natural foram sintetizados. Este grupo de compostos pode ser dividido em duas classes, dependendo do seu grau de relevncia para peptdeos biologicamente que ocorre. Peptdeos biologicamente irrelevantes que tenham sido preparados constituem cyclo (dferrocenylalanyl-l- prolil), cyclo (l- ferrocenylalanyl-l- prolil),76 e polipeptdeos contendo repetio l-Fer-[Glu(OBzl)]4 ou l- Fer2-[Glu(OBzl)]4 unidades.77 A outra classe compreende pela peptdeos biognicos em que ferrocenylalanine tem sido substitudo especificamente para um resduo de fenilalanina. Em comparao com Phe, Fer explosivo em forma muito mais volumosos e lipoflicos. Devido a estas diferenas, resultados de ensaios para o peptdeo modificado em comparao com aqueles para o peptdeo natural de vinculao poderiam revelar informaes importantes sobre interaes substratereceptor. O peptdeo biognica primeiro que foi modificado com Fer o pentapeptide [Leu5]-encefalina, que tem estrutura primria H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH (9, esquema de 3). [Leu5]-encefalina foi primeiramente isolada em mistura com seu anlogo de metionina posio 5 ([conheceu5]encefalina) por Hughes et al. de crebro de porco em 1975. 78 As enkephalins so neuropeptides com uma ao semelhante da morfina, exibindo alta afinidade para os receptores opiides. Estes pentapeptides foram detectados em vrios tecidos humanos, tais como o crebro humano, na espinal humana fluida e no plasma sanguneo. 79 Trs relatrios sobre a sntese de [Fer4, Leu5]-encefalina, em que o resduo de fenilalanina na posio 4 foi substitudo pelo ferrocenylalanine (10de esquema 3), apareceu mais ou menos simultaneamente na literatura. 80-82 Os compostos foram sintetizados em um suporte slido, empregando tcnicas de sntese de peptdeo de fase slida clssicas Merrifield. Diastereomerically pura [d- Fer4] - e [l- Fer4] - enkephalins foram obtidas pela purificao de HPLC do racmica [dl- Fer4, Leu5]-encefalina mistura82 ou realizando a sntese de peptdeo de fase slida com pura enantiomerically l- Fer e d- Fer.81 Ou Diastereoismero exibe uma afinidade muito reduzida para o receptor encefalina em comparao com [Leu5]encefalina,80,82 embora ambos sejam significativamente mais potentes do que muitos outros anlogos posititon 4. 83 Curiosamente, o [d- Fer4] - Diastereoismero foi significativamente mais potente que o l- analgico.80,82

Esquema de 3. Sequncia de aminocidos de [Leu5] - encefalina (9) e [Fer4, Leu5] - encefalina (10) Substncia P (SP, 11) um undecapeptide, pertencente classe dos tachykinins, com dois consecutivos Phe resduos em posies 7 e 8 (regime 4). O peptdeo foi descoberto pela primeira vez por von Euler e Gaddum em 1931,84 mas ele tomou outro quatro dcadas antes de sua seqncia de aminocidos foi determinada por Chang et al.85,86 SP est envolvido em vrios processos fisiolgicos importantes, tais como contrao da musculatura lisa, transmisso de dor e ativao do sistema imunolgico. 87 Trtaro e colegas de trabalho sintetizaram as seguintes trs Fer-modificado SP-derivados: [dl- Fer7]-SP (12), [dl- Fer8] - SP (13) e [dl- Fer7, Ile8] - SP (14). 88 Conforme discutido acima para encefalina, um ou ambos os resduos Phe foram substitudos por Fer. Fer racmica foi usado para as snteses, resultando em misturas de diastereomricos, que no podem ser resolvidas por HPLC preparao. Resultados vinculem ensaios mostram uma diminuio da atividade dos peptdeos ferrocenylalanine substitudo em comparao a native SP em oder seguinte: [dl- Fer8]-SP (2 10-2 de SP) > [dl- Fer7]-SP (3 10-3 relativo para SP) > [dl- Fer7, Ile8]-SP (6 10-4 comparado a SP).88

Regime de 4. Estrutura primria para a substncia P (SP, 11) e Ferrocenylalanine derivados 1214 . O mesmo grupo tambm preparou ferrocenylalanine anlogos da bradicinina (regime 5).88 Nonapeptide bradicinina (BK, 15) um hormnio de tecido envolvido no processo de coagulao do sangue. Quando o hormnio liberado da cininognio de precursor, efetua uma reduo da presso arterial atravs de dilatao dos vasos sanguneos. 89,90 Quer dos resduos Phe posio 5 ou 8 foi substituda pelo dl- Fer, resultando em que conjuga o 16 e 17 , mostrado no esquema 5. Embora a separao entre o diastereomers foi realizada por HPLC, no foi possvel atribuir sua configurao absoluta. Vinculao estudos revelou uma diminuio significativa da atividade aps a substituio de Phe por Fer. Os dois diastereomers de [Fer5] - BK (16) e [Fer8] - BK (17) mostrou actividades relativo a BK nativo de 7 10-2 e 3,5 10-2e 1.8 10-2 e 1,7 10-2, respectivamente. Esses resultados mostram a mesma tendncia, como os obtidos por Couture e colegas de trabalho, o que acharam que a introduo de carboranylalanine de aminocidos volumosos na posio 8 tinham um impacto maior sobre a atividade de substituio de carboranylalanine do resduo Phe posio 5. 91,92 Considerando as atividades de baixas de diastereomricos [Fer]-anlogos BK, parece que a fraco ferrocenyl mal interage com o receptor.

Regime de 5. Seqncia de aminocidos da bradicinina (BK, 15) e anlogos Ferrocenylalanine 16 e 17 A famlia de angiotensina II (AT II) relacionados com compostos tem atrado a ateno de trtaro e colegas de trabalho tambm. Angiotensina II, um peptdeo tendo uma fenilalanina na

posio 8, aumenta a presso arterial em mamferos (18, regime de 6). 93 Vrios derivados II angiotensina encontraram aplicaes medicinais, tais como agonista [Asn1, Val5]-AT II (Hypertensin), que tem sido usado para normalizar a presso arterial to rapidamente quanto possvel aps um choque ou recolher. O antagonista [Sar1, Val8]-AT II (Saralasina), por outro lado, foi usado para o diagnstico de formas AT II-dependente de hipertonia. Ferrocenylalanina-modified [Sar1]-angiotensina II {[Sar1, Fer8]-AT II, (20)} foi elaborado, como mostrado no esquema de 6. 94,95 a sntese de 20 foi executada com dl- Fer e o diastereomers foram separadas por HPLC fisiolgicas somente para teste. Qualquer Diastereoismero mostrou aproximadamente 1% da atividade relativos a [Sar1]-AT II (19) em um ensaio com tiras de aorta Coelho.94 A mistura de diastereomricos de 20 mostrou uma atividade de 6,1% relativos a [Sar1]-AT II (19) em um ensaio de ligao purificado bovina Hiperfuno membranas.95

Regime de 6. Estrutura primria da angiotensina II (AT II, 18) e derivados 19 e 20 . O (Sar = NMethylglycine) Investigaes de hidrlise quimiotripsina foram realizadas em peptdeos H-Lys-Gly-Phe-GlnGly-OH (21) e H-Lys-Gly-Fer-Gln-Gly-OH (22).88 Quimiotripsina pertence classe de proteases de serina, juntamente com tripsina e elastase e est presente no pncreas humano. Alta seletividade da quimiotripsina enzima para a ciso das ligaes peptdicas Avanar para os aminocidos aromticos Phe, Trp e Tyr pode ser racionalizada pela estrutura de cristal de raioX do quimiotripsina bovina. 96,97 Aps a aco da quimiotripsina, o Phe-contendo pentapeptide 21 foi hidrolisado (Km = 3,85 mM), enquanto o Fer-congnere 22 no foi hidrolisado em tudo. Curiosamente, o anlogo 23 contendo o aminocido natural cymantrenylalanine (cymantrene = Mn(Cp)(CO)3) foi hidrolisado, embora com menor afinidade do que a derivada de Phe (Km = 37 mM, mas inalterada vmax).88 O ferrocenylalanine de aminocidos sozinho (Fer, 2) tambm foi submetido a testes biolgicos. Em um ensaio de crescimento bacteriano com a fenilalanina exigindo bactria Leuconostoc mesenteroides, dl- Fer foi testado por sua capacidade de (1) apoiar o crescimento de bactrias na ausncia de Phe e (2) inibem o desenvolvimento de bactrias crescimento na presena de Phe. DL- Fer no suportava a crescimento de l. mesenteroides , na ausncia de Phe, nem era capaz de inibir o crescimento desta bactria na presena de Phe.Alm disso 98,99 , dl- Fer foi testado para a toxicidade contra clulas de (CHO) ovrios de hamster chins.99 Apenas em concentraes relativamente elevadas de 0,45 mM ou mais, foi dl- Fer txico contra clulas CHO. DL- Fer tambm foi testado para sua funo servir como um substrato ou inibidor da fenilalanina hidroxilase e aromticas l-aminocidos descarboxilase. Para fenilalanina hidroxilase, dl- Fer foi um inibidor amistosa (Keu = 0,89 mM) de l- Phe e um inibidor misto com respeito a cofator (DMPH4).98,99 dl- Fer foi encontrado para ser um inibidor competitivo (Keu = 7,2 mM) de aromticos l-aminocidos descarboxilase de fenilalanina.

Regime de 7. Estrutura molecular do 1, 1'-Ferrocenylbisalanine (24)

Regime de 8. Sntese de um 1 opticamente puro, 1'-derivado de Ferrocenylbisalanine 27 contendo uma enciclopdia Amino e um livre parte activa do cido carboxlico

Regime de 9. Lactamization de 27 para rendimento Macrocycles 2830

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano

3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados

Alm de ferrocenylalanine, tambm a derivada de difunctionalized 1, 1'-ferrocenylbisalanine (24de regime 7) tem sido relatado.74.100-105. Os mtodos para obteno de 24 no formulrio opticamente puro so idnticos s de ferrocenylalanine: (1) o Pd (0) - catalisado acoplamento de 1, 1'-diiodoferrocene (25) com o reagente de serina-derivado organozinc 8 mostrado no esquema 274 e (2) hidrogenao assimtrica de derivados de aminocidos adequado bisdidehydro.101-104 Com o ltimo mtodo, um excesso de enantiomeric superior a 99% poderia ser atingido.103.104 Atravs de uma sofisticado via sinttica, Frejd e colegas de trabalho sintetizaram uma enantiomerically pura 1, 1'-ferrocenylbisalanine derivados 26 que contm grupos protetores ortogonais (regime de 8).102-104,106 Opticamente puro 26 convenientemente foi transformado por hidrogenao em S, S-27, tendo um grupo amino livre e um grupo cido carboxlico livre (regime de 8). Quando 27 foi reagiu com o reagente de acoplamento de peptdeo PyAOP, uma mistura de 1, 1'-ferrocenophane lactmicos 28 e dois macrociclos pptidos (dmero 29 e trmero 30) foi obtido (regime de 9).106 A relao exata entre estes compostos depende fortemente as condies de reao. Frejd e colegas de trabalho usado lactmicos 28 como um estrutural H-Phe-Phe-OH mimtico e incorporadas a um peptdeo.103 Isto resultou em um conjugado 31, que era esperado para funcionar como um Mmico estrutural da substncia P (regime de 10). No entanto, estudos

espectroscpicos CD indicaram que as restries impostas por 1, 1'-ferrocenophane proibido o peptdeo aprovar a estrutura secundria -hlice caracterstica encontrada para SP nativo em um ambiente de micellar do SDS (sulfato de sdio n- dodeclico) biomimtico. De acordo com os autores, os resultados dos testes de actividade biolgica desta SP Mmico sero publicados em breve.103 O resultado desses testes ser interessante, especialmente em comparao s actividades determinado para os anlogos de Fer-SP descrito acima.88

Regime de 10. Mimic estrutural da substncia P, com 1, 1'-Ferrocenophane que serve como um substituto para o dipeptdeo Phe-Phe Em outro livro interessante, Frejd e colegas de trabalho prepararam um [Leu5] - 1, 1' em loop encefalina mimtica, no qual a subunidade de H-Tyr-Gly-Gly-Phe foi substituda por um Gly-Gly - ferrocenylbisalanine resduo (32, regime de 11).104 Os anis de ferroceno deste composto restrito constituem um substituto para o fenol aromtico (Tyr) e fenil anis (Phe). Estudos espectroscpicos NMR revelaram esta conjugado de possuir uma ligao de hidrognio entre o grupo de Fer CO e o do outro anel Fer, parte activa de NH. Esta conformao representa um modelo para nativo [Leu5]-encefalina na conformao de single-bend, que estabilizada por uma -volta. 107.108 Infelizmente, estudos de ligao deste composto para os receptores opiides ainda no tenham sido declarados.

Regime de 11. Mimic estrutural de [Leu5] - encefalina (9) com 1, 1'-Ferrocenophane

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena

2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl

Nesta fase, deve notar-se que foram relatados vrios outros anlogos ferrocenylalanine. Estes incluem 1,2-ferrocenylbisalanine 33,100 , que foi facilmente obtido como os bis (N-formil) mas derivadas decomposta mediante desproteo (regime de 12). -amino cidos ferrocenyl-alanina (34) e 1, 1'--ferrocenylbis -alanina (35) poderia ser sintetizada em sua forma pura enantiomerically (regime de 12). 109 Nenhum tentativas foram feitas para hidrolizam os steres metlicos e obter os aminocidos livres. Alm disso, alguns derivados foram sintetizados que formalmente tm uma estrutura do tipo de aminocidos: 1, 1'ferrocenylbisglycine, ferrocenylenebisvaline110 ,111 e 1, 1'-acrescida funcional ferroceno com N,N- dibenzylalanine-like moieties.112

Regime de 12. Aminocidos baseado em ferroceno A sntese do mais simples que contm ferroceno aminocido 1'-aminoferrocene - 1-cido carboxlico (36a, Fca, R = R' = H, regime 12) tem sido relatado. Uma primeira preparao por lithiation de 1'--amino 1-bromoferrocene, seguido de tmpera com dixido de carbono slido, no ceder puro 36a. 113 Na sobre ao mesmo tempo, uma sntese que acertos 36a bastante baixo rendimento foi publicado,114 juntamente com uma comparao cuidadosa estrutural de derivados do 36 no estado slido e em soluo. A sntese recentemente foi melhorada por Heinze e Schlenker. 115 Rapid e colegas de trabalho foram capazes de obter este composto muito interessante a partir do ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico juntamente com vrios protegido derivados. 116 Vrios derivados protegidos de 36 foram tambm preparados (regime 12). As estruturas de single-crystal de raio-X do N-acetil metil ster 36. oB (R = Me, R' = Ac, Ac-Fca-OMe)117 e N- Boc-protegido 36 c (R = H, R' = Boc, Boc-Fca-OH) foram publicados. 118 Inicial de 36. oB, um nmero de aminocidos e peptdeos derivados foram preparados em que 36 serve como um aminocido. Esses peptdeos mostram ligaes de hidrognio intramoleculares interessantes. Em colaborao com grupo do Rapid, temos publicado a primeira derivada oligopeptdeos 36. 119 Figura 1 mostra um grfico ORTEP da Boc-Ala-FcaAla-Ala-OMe composto (37), que formalmente uma tetrapeptide. Peptdeo 37 foi preparado em soluo por peptdeo pela reaes de acoplamento e purificado por cromatografia em camada fina. A configurao das vertentes peptdeo estabilizada por duas ligaes de hidrognio intramoleculares, que impor uma conformao P-hlice no metaloceno. Conforme mostrado por espectroscopia de CD, esta conformao muito estvel e conservados em soluo. Em contraste com os compostos discutidos na seco 2.2.2 abaixo, peptdeos como 37 estendendo a partir do C - e N-termini de 36 formam antiparalelo folhas. Como tal, 36a no apenas um aminocido organometlico, mas tambm o primeiro turno "real" organometlico mimtico.

Figura 1 estrutura de Estado slida da tetrapeptide Boc-Ala-Fca-Ala-Ala-OMe 37 , contendo o antinatural 1'-aminoferrocene - 1-cido carboxlico (Fca).119 Outros aminocidos organometlicos como 38a e 39a (R = R' = H em ambos os casos) foram relatados pelo mesmo grupo. 120 Ambos compostos foram preparados em vrias etapas e poderiam ser exaustivamente caracterizados. As estruturas de single-crystal de raios-X de 38b (R = Me, R' = Ac) e 39 d (R = Me, R' = Boc) foram registrados, juntamente com a preparao de vrios outros derivados com diversos grupos protetores. Estes compostos devem revelar-se flexvel blocos de construo de pptidos com uma unidade de ferrocenyl incorporada na cadeia peptdica. 2.2. Formao de amida com derivados do cido Ferrocenecarboxylic

A maneira mais extensivamente explorada para acoplar a fraco de ferroceno de aminocidos e peptdeos atravs da formao de amida entre cido ferrocenecarboxylic (40) e o grupo amino terminal. O primeiro aminocido e dipeptdeo derivados deste tipo, Fc-CO-Gly-OMe, FcCO-Gly-OH, e Fc-CO-Gly-Leu-OEt, foram relatados por Schlgl desde 1957.43 Possibilitar acoplamento de um cido carboxlico com um grupo amino sob condies leves temperatura ambiente, o cido precisa ser ativado. H trs estratgias para ativar este cido carboxlico (regime 13): (1) a transformao no cloreto cido 41 com cloreto de oxaloyl ou cloreto de tionilo,43.121 (2) transformao do cido 40 em succinimid 42 ou benzotriazole ster 43, com o uso de DCC ou CED em conjunto com N- hydroxysuccinimid (HOSu) ou 1hydroxybenzotriazole (HOBt),122 ou (3) a ativao do cido in situ por HBTU ou TBTU. 123 Do ponto de vista prtico, o terceiro mtodo preferido por causa das seguintes razes: (1) um procedimento de um pote, com a ativao que ocorrem no local aps a mistura os componentes de Amina e cido carboxlico com TBTU ou HBTU na presena de uma base como a NEt3; (2) o engate requer curtos tempos de reao de < 45 min; (3) no necessrio utilizar solventes secas; solventes de tipo comercial, preferencialmente DMF ou MeCN, podem ser utilizados; e (4) os lado-produtos originrios do engate reagentes podem ser facilmente removidos por um apropriado adsorvido extractivo, produzindo produtos de pureza bom sem mais purificao. 123.124 Beck e colegas de trabalho relataram um outro mtodo interessante para transformar ferrocenoylamino cidos em derivativos dipeptdeo correspondente atravs da formao de oxazolone com o uso de uma carbodiimida.125

Regime de 13. Sintticas possibilidades de obter ferroceno carboxlico amida derivados dos aminocidos e peptdeos

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal

2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic

At ao momento, uma grande quantidade de metilcicloexano ferrocenoylamino cido e peptdeo conjugados da estrutura molecular definida so conhecidos; uma viso geral indicada no quadro 1. Vrios desses derivados estruturalmente caracterizados por cristalografia de raios X (ver quadro 1). No estado slido, interaes de ligao de hidrognio so uma caracterstica dominante e em ziguezague,126.127 sheetlike,128 e arranjos de embalagem helicoidais128.123 foram observados. Na soluo, a maioria desses derivados no parecem ter uma estrutura ordenada. Excees, no entanto, so Fc-CO-Pro-Pro-Phe-OH e Fc-

CO-(Pro)x- OBn com x = 24, compostos relatada por Kraatz e colaboradores. 129 A antiga, um enredo ORTEP do que descrito na Figura 2, revela uma caracterstica estrutural motivo para uma -volta em protenas. Os dois resduos Pro esto conectados em um cis-moda e uma forte ligao de hidrognio est presente entre os prtons no tomo de nitrognio de amida Phe N3 e ferrocenyl o tomo (NO contato = 2.853). Investigaes espectroscpicas NMR comprovar que a conformao observada de Estado slida mantida em MeCN -d3 soluo.129

Figura 2 lote ORTEP de Fc-COPro-Pro-Phe-OH. Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 129. Copyright 1999 Elsevier. Tabela 1. Viso geral do relatado cido Ferrocenoylamino e peptdeo derivados compostos Ref compostos Ref

Derivados do cido Ferrocenoylamino

FC-CO-Gly-OMe

144um

FC-CO-Ala-OMe

125

FC-CO-Gly-OEt

43, 122, 125

FC-CO-Ala-OEt

125

FC-CO-Gly-OBn

145um

FC-CO-Ala-OBn

122um

FC-CO-Gly-OH.

43, 125

FC-CO-Ala-OH.

125

FC-CO-Gly-OSu

146 b , c

FC-CO-Asp-OH.

136um

FC-CO-Cys (SBn)-OMe

122c

FC-CO-Asp (OBn)-OBn

136

FC-CO-conheceu-OEt

147

FC-CO-Pro-OH.

148, 129um

FC-CO-Pro-OBn

122

FC-CO-Pro-OMe

121

FC-CO-Phe-OMe

125, 121, 123, 149c FC-CO-Phe-OH.

125, 148

FC-CO-Phe-OtBu

146

FC-CO-Phe-OBn

122

FC-CO-Tyr-OBn

122

FC-CO-Val-OMe

121, 150um

FC-CO -dl-Leu-OHd

148

FC-CO -dl-Val-OH

148

FC-CO-Lys(N-CO-Fc) OHd 148

FC-CO-Glu (OBn)-OBn

122um

FC-CO-seu-OMe

151

FC-CO-His(N-CO-Fc)-OMe 151um

[Fc-CO-Gly-NHC2H4S]2

133

[Fc-CO-Pro-NHC2H4S]2

132

[Fc-CO-Ala-NHC2H4S]2

152c

Derivados de dipeptdeo de Ferrocenoyl

FC-CO-Gly-Gly-OEt

125, 134, 128um

FC-CO-Gly-Gly-OMe

149c

FC-CO-Gly-Ala-OMe

125

FC-CO-Gly-Pro-OEt

153

FC-CO-Ala-Ala-OBn

134, 128

FC-CO-Ala-Ala-OMe

125

FC-CO-Ala-Pro-OEt

126, um 127, 154

FC-CO-Ala-Phe-OEt

149c

FC-CO-Ala-Phe-OMe

123um

FC-CO-Asp (OBn) - Asp (OBn) - 136 OBn

FC-CO-Asp (OBn) - Glu (OEt) - 136 OEt

FC-CO-Asp (OBn) - Cys (SBn) OMe

136

FC-CO-Leu-Phe-OMe

134, 128um

FC-CO-Pro-Gly-OEt

153

FC-CO-Pro-Pro-OBn

129um

FC-CO-Gly-Leu-OEt

43

FC-CO-Ala-Pro-NHPya, e, f

155

FC-CO-Phe-Phe-OMe

128, 149c

FC-CO-Phe-Leu-OBn

149c

FC-CO-Phe-Ser-OEt

149c

FC-CO-Val-Phe-OMe

128

FC-CO-Val-Val-OMe

128

FC-CO-Leu-Leu-OEt

149c

FC-CO-Leu-Leu-OMe

128

[Fc-CO-Pro-Pro-NHC2H4S]2

132

Ferrocenoyl Tri - Tetra- e oligopeptdeos derivados

Fc-CO-Pro-Pro-Pro-OBn

129um Fc-CO-Pro-Pro-Phe-OH

129um

Fc-CO-Gly-Phe-Leu-OHc

148

Fc-CO-Pro-Pro-Pro-OBn

129um

FC-CO-Gly-Gly-Tyr (OBn) - Arg (no2) - 156 OMe

FC-CO-Gly-Gly-Tyr (OBn) - Arg (no2) - OH

156

Fc-CO-Gly-Gly-Tyr-Arg-OH

156

FC - CO-(substncia P)

140g

Fc-CO-Pro-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met- 148h [Fc-CO-(Pro)x- NHC2H4S]2 NH2c

132Eu

Fc-CO-(Gly)4- NHC2H4SH

157

[Fc-CO-(Pro-Pro-Gly)y- NHC2H4S]2

152j c,

um Estrutura cristalina apresentada nesta referncia do raio X. b OSu = grufo. c No bem caracterizadas. d Mistura racmica usada. e NHPy = amida de 2-aminopyridin. f Tambm a complexao de PdCl2 para os tomos de nitrognio piridina tem sido relatada neste documento. g Substncia P um undecapeptide (ver esquemas 4 e 15). h Este o fragmento de aminocidos 411 de substncia p.eu x = 36. j y = 13. A estrutura de cristal de raios-X de Fc-CO-(Pro)4- OBn mostrado na Figura 3.129 As ligaes amida entre os resduos Pro so trans-configurado, e o composto tem uma conformao helicoidal canhota caracterstica de polyproline II. 130.131 Estruturas cristalinas de raios-X das disposies compostos Fc-CO-(Pro)3- OBn e Fc-CO-(Pro)2- OBn tambm mostram uma orientao helicoidal canhota, com trans-configurado vnculos de prolina.129 Investigaes espectroscpicas NMR revelaram que a conformao de Estado slida destes compostos de prolina mantida em CDCl3 e MeCN -d3; nenhum indicativo de Cruz-picos do cis-ligaes de prolina foram observadas no espectro RMN de NOESY.

Figura 3 enredo ORTEP do Fc-CO(-Pro)4- OBn. Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 129. Copyright 1999 Elsevier.

Galka e Kraatz tambm relataram uma srie de dissulfureto-bridged prolil cystamine ferrocenoyl compostos do geral frmula Fe (C5H4-CO-(Pro)n- NHC2H4S)2, com n = 06. 132 Monocamadas caseiro em um eletrodo de ouro foram preparadas a partir destes compostos, e as propriedades de transferncia de eltrons entre o grupo de ferrocenoyl e a superfcie do microelctrodo ouro foram investigadas. Sugere-se um mecanismo por meio de bnus do processo de transferncia de eltrons de um desvio significativo do comportamento de Marcus-tipo, embora kET mostra uma dependncia de distncia. Kraatz et al. tambm preparou a derivada de cystamine de glycyl Fe (C5H4-CO-Gly-NHC2H4S)2. 133 Este composto cristaliza-se em um assembly helicoidal supramoleculares consistindo de dois hlices diferentes. Em dois jornais, o mesmo grupo estudou a interao de vrios ferrocenoyldipeptides (Fc-CO-Gly2- OEt, Fc-CO-Ala2- OBn, Fc-CO-Phe2- OMe, Fc-CO-Leu2OMe, Fc-CO-Val2- OMe, Fc-CO-Leu-Phe-OMe e Fc-CO-Val-Phe-OMe) com 3-aminopyrazole (Apzl), 3-amino-5-methylpyrazole (3-AMP) e 3-trifluoroacetylamido-5-methylpyrazole (3-TFAcAMP). 134.128 Em soluo, estes compostos foram encontrados ao formulrio 1:1 associates estabilizadas por trs pontes de hidrognio, como mostra esquematicamente para 45 em regime de 14. Dos resultados da titulao do 1H NMR experimentos, as constantes de ligao entre esses derivados de pirazol e os dipeptides em CDCl3 estavam determinados a gama de 8 a 27 M-1. Esses valores correspondem a energias de ligao moderadas de 57 kJ mol-1. Em solventes de polaridade superior tais como MeCN -d3 e acetona -d6, foram consideradas as constantes de vinculao < 5 M-1.

Regime de 14. Ligao de hidrognio interao entre Fc-CO-Ala2- OBn e 3-Amino-5methylpyrazole (3-AMP) em soluo Recentemente, a Kraatz apresentou uma viso geral do seu extenso trabalho em ferrocenoylpeptides. 135 As propriedades eletroqumicas de ferrocenoylpeptides tambm foram discutidas nessa conta. Potencial redox determinaes em cidos ferrocenoylamino e ferrocenoylpeptides realizado por diferentes grupos foram comparadas. No entanto, os resultados e concluses devem ser tomados com os cuidados adequados pois cada grupo faz referncia a seu redox potenciais de forma diferente. Kraatz define o PCH/PCH+ como +450 mV versus SCE,122 , Considerando que o grupo de Hirao mede redox potencial versus Ag/Ag+ e determinado o casal de PCH/PCH+ em uma medio externo para ser +0.51 v.127 isso sublinha a necessidade de um mtodo consistente resolver este problema geral, e sugerimos usar o casal de PCH/PCH+ como padro interno, ou seja, adicionando uma pequena quantidade de ferroceno no final de cada inqurito eletroqumico para determinar a exata redox potencial nas condies usadas.123 Isso d muito confiveis valores relativos a PCH/PCH+ , que so facilmente reproduzveis e independente de solvente, instalao experimental e condies. Este procedimento tambm recomendado pela IUPAC. Um resultado interessante que certamente confivel a mudana de potencial redox observada da transio Fc/Fc+ em direo a potenciais menos positivos quando o peptdeo

anexado torna-se mais helicoidal. Em ir de Fc-CO-Pro-OH Fc-CO-Pro4- OBn, uma diminuio do potencial redox de cerca de 30 mV ocorre.129.135 No outro livro interessante, Kraatz e colegas de trabalho medido o redox potencial de ferrocenoyl dipeptides em uma grande variedade de solventes, concluindo que o redox potencial poderia ser correlacionado com o hidrognio doador capacidade do formalismo de KamletTaft.136 Os derivados de peptdeo Fc-CO-Phe-OMe (46) e Fc-CO-Ala-Phe-OMe (47) foram submetidos a 57Fe Mssbauer espectroscpicas investigaes.Mudana de valores para o ismero 123 e quadrupolo diviso est na faixa relatada para vrios outros derivados de ferroceno retirada do eltron substituintes sobre o137.138 Cp anel e que lembram as do ferrocenepeptide derivados de cidos nucleicos (PNA). 139 O fragmento de peptdeo parece ter pouca influncia sobre o gradiente de campo eltrico do ncleo de ferro. Os derivados de peptdeo apresentados at aqui nesta seo foram sintetizados atravs de mtodos de sntese de peptdeo em soluo. No entanto, um ferrocenoyl-rotulado derivados 48 undecapeptide substncia p foi elaborado atravs de mtodos de sntese de slido-fase clssicos Merrifield (regime de 15). 140 Em contraste com os derivados de ferrocenylalanine apresentados na seco 2.1 (regime 4), nenhuma oxidao grave ou decomposio foi observada aps a clivagem de conjugado a ferrocenoyl 48 da resina com HF. A maior robustez de 48 foi atribuda ao aumento do potencial de oxidao da fraco de ferroceno, devido retirada do efeito de amida a densidade de eltrons. Curiosamente, a potncia de spasmogenic de 48 foi idntica dentro o erro experimental de SP nativo (0,93 0,10 relativo a SP nativo), determinado por um ensaio de leo cobaia.

Regime de 15. Estrutura da substncia Ferrocenyl P conjugada 48 obtidos atravs de sntese de slido-fase Merrifield Nesta fase, deve notar-se que um pptido helicoidal 21-mer contendo seis grupos de ferrocenoyl acompanhada de lisina-N-grupos amino foi preparado. 141.142 a ideia subjacente a sntese do conjugado era espectroscopicamente investigar se a conformao de peptdeo de pai preservada aps derivatizao. Os resultados espectroscpicos mostraram o conjugado para adaptar uma conformao helicoidal semelhante do peptdeo sem modificaes. Outro papel informou sobre a reao de um l-polmero de lisina de 126,2 MW kDa com 41. 143 Neste caso, o conjugado foi obtido com 6% dos resduos de lisina carregando uma marca de ferrocenoyl. No mesmo livro, um copolmero de lisina 52,1 kDa, tendo a relao molar do aminocido Lys/Ala/Glu/Tyr de 34:45:14:7, foi reagiu com 41. Isto resultou em derivatizao de 14% dos grupos de2 lisina NH. Estes dois polmeros hidrossolveis ferrocenoyl foram usados para a construo de um eletrodo de glicose-sensoriamento amperomtricos, por Imobilizadora-los juntamente com a enzima glicose oxidase (Deus) na superfcie de um elctrodo carbono vtreo.

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1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas

8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico

Alm de metilcicloexano derivados de aminocidos, um grande nmero de 1, 1'-disubstituido aminocidos derivados foram preparados. Uma viso geral destes dado na tabela 2. Em 1996, Herrick et al. encontrado que compostos de frmula geral Fe (C5H4-CO-Aaa-OMe)2, com Aaa diferente de Pro, tm uma estrutura ordenada no CH2Cl2 e3 de CHCl (49, regime de 16).121 Ordenou a estrutura composta por duas pontes de hidrognio simetricamente equivalentes entre a amida NH e o tomo de oxignio metil ster carbonila outra vertente. Desde a justificao para as propriedades de aceitador de m ligao de hidrognio de metil ster carbonila grupos, esta conformao apareceu em primeiro lugar um pouco duvidoso para ns. No entanto, fomos capazes de confirmar que a derivada de fenilalanina Fe (C5H4-COPhe-OMe)2 (50), na verdade, adapta-se tal uma conformao em CH2Cl2 e3de CHCl.123 Em contraste, o anlogo cobaltocenium (cobrado) composto foi encontrado a existir como uma mistura desta conformao de hidrognio-ligadas e uma forma no-hidrognio-ligadas temperatura ambiente no CH2Cl2 e3de CHCl. Concluiu-se com a presena de dois c o alongamento vibraes no espectro de soluo IR no CH2Cl2 no 3365 e 3404 cm-1 (cf. o anlogo de ferroceno exibe apenas uma vibrao alongamento no CH2Cl2 no cm 3380-1).

Regime de 16. Ordenou a conformao observada para Fe (C5H4-CO-Aaa-OMe)2 no CH2Cl2 e CHCl3 soluo Tabela 2. Viso geral do relatado 1, 1'--cido Bisamino e 1, 1' derivados de Bispeptide compostos Ref compostos Ref

1, 1'-Derivados de ferroceno de cido Bisamino

Fe (C5H4-CO-Gly-OEt)2

173a, f.

Fe (C5H4-CO-Gly-OH)2

173a, f.

Fe (C5H4-CO-Gly-NH2)2

158b

Fe (C5H4-CO-Pro-OMe)2

121, 168b

Fe (C5H4-CO-Pro-OBn)2

168

Fe (C5H4-CO-Phe-OMe)2

121, 123b

Fe (C5H4-CO-Val-OMe)2

148, 150b Fe (C5H4-CO-Cys(SEt)-OMe)2

164, 165

Fe (C5H4-CO-Gly-NHC2H4S)2

166b

Fe (C5H4-CO-Ala-NHC2H4S)2

166

Fe (C5H4-CO-Val-NHC2H4S)2

166

Fe (C5H4-CO-Leu-NHC2H4S)2

166

1, 1'-Derivados do ferroceno Bispeptide

Fe (C5H4-CO-Gly-Gly- 125 OMe)2

Fe (C5H4-CO-Gly-Ala-OMe)2

125

Fe (C5H4-CO-Gly-Leu- 126, b 154 Fe (C5H4-CO-Gly-Phe-OMe)2 OEt)2

125

Fe (C5H4-CO-Gly-Pro- 153 OEt)2

Fe (C5H4-CO-Gly-Phe-OEt)2

154

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 126, b 127, Fe (C5H4- CO-d- Ala-d-Pro-OEt)2 OEt)2 154

154

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 127b OMe)2

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-OPr)2

127b

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 127b OBn)2

Fe (C5H4-CO-Pro-Gly-OEt)2

153

Fe (C5H4-CO-Ala-Phe- 123b OMe)2

Fe (C5H4-CO-Pro-Pro-OBn)2

168c

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 160b, d NHPy)2

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-NHPy)2PdCl2

160b, d

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 161b, e NHPy)2CA

Fe (C5H4-CO-Pro3- OBn)2

168c

Fe (C5H4-4- OBn de CO-Pro)2

168c

COB-NHCH2CH2(C5H4) NHCO-Fe(C5H4)-COAla-(Leu-Aib)8- lipoamide

174e

um No bem caracterizadas. b Estrutura cristalina relatada nesta referncia do raio X. c Tambm o Fe derivado (C5H4-CO-Pro3- OBn) (C5H4-CO-OBt) isolado da mesma reao. d NHPy = amida de 2-aminopyridin. e CA = (1R, 3S)-cido camphoric; AIB = cido aminoisobutyric, tambm conhecido como dimethylglycine; lipoamide = amida do lipoamine. f Desses dois compostos foram recentemente exaustivamente caracterizados por Kraatz e colaboradores, incluindo estruturas de single-crystal de raios-X.175 Curiosamente, a conformao ordenada mostrada por 49 em regime de 16 observada para a derivada de valina Fe (C5H4-CO-Val-OMe)2 (51) no estado cristalino, embora as interaes de ligao de hidrognio so bastante fracas (N contatos de 3,25 ).150 Em contraste, o volumoso Phe-OMe derivados 50 tem uma conformao diferente no estado slido (consulte a Figura 4), embora ele se adapta a conformao mostrada no esquema de 16 na soluo. No estado slido, 50 faz uma ligao de hidrognio intramolecular e um intermolecular, montando uma hlice destro.123 Talvez a diferena entre 50 e 51 devido a T-empilhamento dos anis aromticos na antiga.

Figura 4 estrutura de Estado slida de Fe (C5H4-CO-Phe-OMe)2 (50). Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 123. Copyright 2003 A Royal Society of Chemistry. A diferena de pontos fortes aceitador de hidrognio bond entre moieties de carbonila amida e grupos de carbonila do ster muito bem ilustrada pelas estruturas de cristal de raios-X de 51 e Fe (C5H4-CO-Gly-NH2)2 (52).150.158 Ambos exibir a conformao ordenada com as duas pontes de hidrognio simtricos, mas o N contatos so consideravelmente menores para os compostos glycinamide 52 comparado a valina metil ster 51 (2.88 vs 3.25 ). De 1, 1'-disubstituido derivados de aminocidos, tambm compostos foram preparados em que cada anel de Cp substitudo por um ster de dipeptdeo; uma viso geral destes dado na tabela 2. Hirao e colegas de trabalho foram o primeiro relatrio e investigar compostos de composio geral Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- ou)2 (53), com (R = Me (um), Et (b), n-Pr (c), (d) Bn).126.127 Como um exemplo representativo, a estrutura de cristal de raio-X da oA representada na Figura 5.127 A estrutura revela uma conformao ordenada relacionada a 49 mostrado no esquema de 16, tendo ligaes de hidrognio intramoleculares entre a Ala-NH e o Ala-CO de outra vertente, com N contatos de 2,91 e 3.04 .

Figura 5 estrutura de Estado slida de Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-OMe)2 (oA). Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 127. Copyright 1999 Elsevier. Todos esses derivados com diversos grupos r exibem um tipo semelhante de estrutura ordenada no estado slido, bem como em soluo, mesmo em mdia polar, como MeCN e CDCl3/DMSO-d6 (9:1 v/v) misturas. Isto foi derivado, combinando os resultados de investigaes espectroscpicos NMR, IR e CD.127 Na Figura 6, so mostrados os espectros de CD de Fc-CO-Ala-Pro-OEt (54) e oAd em MeCN.127 O algodo efeitos devido aos cromforos ferroceno so de muito maior intensidade para 1, 1'-disubstituido compostos 53 do que para o metilcicloexano ferrocenoyl derivativos 54, que confirma que o primeiro grupo de compostos tem uma estrutura ordenada. Hirao e colaboradores preparados e estruturalmente caracterizada a d-Fe de compostos que contm cido amino (C5H4- CO-d- Ala-d-Pro-OEt)2.154 O fato de que este composto uma relao enantiomeric com Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-OEt)2 (53b) tem sido muito bem ilustrado por espectroscopia de CD: efeitos de algodo de intensidade idntica, mas oposto sinal, foram observados.

Figura 6 CD espectros de Fe (C5H4-CO-Ala-PrOR)2 (53) (com R = Et, 1; Me, 2; n-Pr, 3; e Bn, 4) e Fc-CO-Ala-Pro-OEt (5) em MeCN (0,1 mM). Reproduzido com permisso do ref 127. Copyright 1999 Elsevier.

Vale ressaltar que o composto Fe (C5H4-CO-Gly-Pro-OEt)2 (55) tem o mesmo tipo de acordo como o acima referido Ala-Pro derivados 53 no estado slido, bem como na soluo.153 Para complementar os compostos 53 e 55, que possuem um grupo de NH por vertente peptdeo, derivados de peptdeo com dois moieties de amida NH foram preparados. Estes incluem Fe (C5H4-CO-Gly-Leu-OEt)2 (56), Fe (C5H4-CO-Gly-Phe-OEt)2 (57),154 e Fe (C5H4-CO-Ala-PheOMe)2 (58).123 As moieties de NH amida do segundo aminocido no so orientados de forma a permitir a formao de ligaes de hidrognio intramoleculares. Em vez disso, esses grupos NH esto envolvidos em interaes intermoleculares ligao de hidrognio no estado slido, resultando em supramoleculares assemblies. X-ray cristalogrficas anlise revelou 56 para montar em um arranjo constitudo em toda a malha.Ambos 154 57 e 58, por outro lado, foram encontrados para formar anis de hidrognio-ligadas 14 Membros, conforme ilustrado na Figura 7 para este ltimo.123,154

Figura 7 estrutura de Estado slida de Fe (C5H4-CO-Ala-Phe-OMe)2 (58), representando o anel de hidrognio-ligadas 14 Membros. Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 123. Copyright 2003 A Royal Society of Chemistry. Em certa medida, as estruturas discutidas acima se assemelham a estruturas de turno em peptdeos. Uma estrutura de turno de peptdeo tpico retratada em regime de 17. As restries de anel por pontes de hidrognio definem -voltas (anel de 7 Membros) ou -voltas (anel de 10 Membros), Considerando que os anis 13 Membros esto presentes em -hlice. Antes e depois da virada, o peptdeo estende antiparalelas to vertentes, muitas vezes em folhas de . Em todos os derivados de peptdeo de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico uma orientao paralela das vertentes peptdeo aplicada. Embora estes compostos no podem ser considerados como verdadeiro -turn mimetics,121 topolgico semelhanas permanecem. Desta considerao, sugerimos uma nomenclatura para tal paralelo virar mimetics,123 e esta nomenclatura exemplificada por estruturas de Estado slidas de 50 e 58 (regime de 17). Para 50, um anel de 8 Membros formado atravs da ligao de hidrognio (H n cc o cCpipso Fe cCp-ipso cc o O). A ligao de hidrognio formada entre o eu (C O) e i + 2 (NH) aminocidos. Este tipo de turno que ns denotar pseudo-p (p para paralelo). Se um formalismo semelhante aplicado, 58 forma anis 11 Membros atravs da ligao de hidrognio intramolecular entre amino cidos i e i + 3 e isso ns denotar um pseudo-p turn. Por causa da aproximado C2 simetria desta molcula, as mesmas regras aplicam-se para anis de Cp e seus substituintes.

Regime de 17. Ligaes de hidrognio intramoleculares nos 50 e 58 em comparao com o de ocorrncia natural peptdeo turno estruturas (topo)

Regime de 18. Dois 1, 1'-derivados de ferroceno peptdeo que no formam ligaes de hidrognio intramoleculares em soluo

Regime de 19. Sntese de cistena-Bridged Pseudo-1, 1'-ferrocenyl Dipeptides A fora de pontes de hidrognio no CH2Cl2 e CHCl3 solues de 58 foi investigadas em relao dos seus derivados cobaltocenium positivamente carregada 59.123 Parece que as interaes de ligaes de hidrognio para os derivados cobaltocenium 59 so ligeiramente mais fortes do que aqueles para o composto ferroceno 58. No entanto, as diferenas so pequenas e sensveis s condies experimentais. Especialmente a presena de vestgios de gua tem uma influncia significativa sobre a propriedades de ligao de hidrognio. Os parmetros espectroscpicos de Fe Mssbauer 57de 50 e 58 foram comparados com os de ferroceno (1),159 46e 47.123 Os turnos de ismero para estes compostos so muito semelhantes, que os valores para o quadrupolo diviso (EQ) foram encontrados para variar na seguinte ordem: PCH (EQ = 2.42 mm s-1)138.159 > ferrocenoyl derivados 46 e 47 (EQ = mm 2,32 s-1) > 1, 1'-disubstituido derivados 50 e 58 (EQ = mm 2,27 s-1). Tem sido observado antes que que eq diminui quando um anel de Cp de ferroceno substitudo com um substituinte retirada do eltron, e ainda mais quando tal substituinte est presente em qualquer anel Cp.137 Hirao e colegas de trabalho prepararam a compostos Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-NHPy)2 (59) (NHPy a amida de 2-aminopyridin) e posteriormente transformou em trans- PdCl2 complexo 60com os tomos de nitrognio piridina coordenados ao tomo de Pd.160 Estruturas de cristal de raios-X para ambos compostos foram relatadas; Esse para 60 reproduzida na Figura 8. Compostos 59 e 60 adaptarem o "habitual" ordenou a conformao no estado slido, bem como em soluo, com o grupo de Ala-NH sendo envolvida em interaes de hidrognio intramoleculares com o agrupamento de Ala-CO outra vertente. Na verdade, coordenao dos anis piridina ao tomo de Pd estabiliza as ligaes de hidrognio intramoleculares significativamente, em soluo, bem como no estado slido. Em outro livro, Hirao e Moriuchi preparado em estruturalmente caracterizado o aduto de 59 (1R, 3S)-cido camphoric.161 , Hirao e Moriuchi apresentaram recentemente uma conta em alguns dos seus resultados em ferrocenoylpeptides na lngua japonesa.162

Estrutura de single-crystal Figura 8 raios-X para o complexo de2 de PdCl 60. Reproduzido com permisso do ref 160. Copyright 2001 American Chemical Society. Um ponto importante que uma estrutura ordenada s ocorrer se os grupos amino terminais de amidas de formulrio de aminocidos e/ou pptidos com um cido carboxlico que est diretamente ligada ao anel de Cp. Os grupos de Hirao e Beck preparados compostos 61 e 62 com um vinculador mais diferente (regime de 18), e descobriram que estas no apresentam uma conformao aderente de hidrognio intramolecular em soluo.154,163 Han et al. preparado macrociclos compostos de ferroceno-1, 1'-cloreto de cido dicarboxlico (63) e derivados, pseudo-cystine com vrios ligadores entre os tomos de enxofre.164 A sntese cedeu 1, 1'-ferrocenophane derivados 64 como cyclodimers 65 (regime de 19). Redox potencial para o Fe (C5H4- R)2/Fe (C5H4-R)2+ par de 1, 1'-ferrocenophane derivados 64 depende da natureza do nion. Em particular, a adio de flor resultou em uma mudana de potencial redox pronunciado de sobre mV 120150 a valores mais positivos. Desde a ocorrncia desta mudana de redox potencial, prev-se que os ons de haleto ocupam uma posio no bolso de ligao de 1, 1'-ferrocenophane. A vinculao estabilizada por pontes de hidrognio para os dois moieties de NH e, no caso do Estado de redox ferrocenium, por uma interao eletrosttica adicional entre o haleto e o tomo de ferro. Em um relatrio subsequente,165 cistina e cistina di - e tripeptides ((AA)n- Cys)2 (AA = Gly, Ala, Leu, Met Pro; n = 0, 1, 2) foram sintetizadas e reagiu com 63 a forma ferrocenophanes com uma cavidade de tamanho diferente. Nesta cavidade, alcalina e alcalino-terrosos ctions poderiam ligar. CD spectrosocpy e cclico voltammetry foram usados para determinar constantes de vinculao. Para uma derivada, afinidade de ligao alta para2++ Mg e Ca2++, juntamente com uma alta preferncia para Ca2++ sobre k+, foi observada, que foi ainda melhor do que os valores para a Valinomicina de ionforo natural. Recentemente, outros macrociclos aminocido cystamine derivados Fe (C5H4-CO-AA-NHC2H4S)2 foram relatados (AA = Ala, Val, Leu).166 Estes compostos mostram forte hidrognio intramolecular colagem e estruturas relacionadas com 49, como discutido acima. Suas propriedades eletroqumicas foram tambm investigadas em soluo como imobilizadas em eletrodos de Au.167 Recentemente, Kraatz e colegas de trabalho prepararam compostos da frmula geral Fe (C5H4-CO-Pron- OBn)2, com n = 14.168 Como observado para o metilcicloexano compostos Fc-CO-Pron- OBn,129 , as cadeias de prolina do 1, 1'-disubstituido compostos exibir a caracterstica de arranjo helicoidal canhoto para polyproline II. Para compostos Fe (C5H4-CO(Pro)2- OBn)2, a conformao ordenada adaptado pelo outro 1, 1'-derivados de disubstituido apresentados acima no for respeitado, porque as ligaes Proamide faltam moieties de NH. Redox potencial para o Fe (C5H4-R)2/Fe (C5H4-R)2+ par foi encontrada a mudar de forma pequena para valores menos positivos em passar de Fe (C5H4-CO-Pro-OBn)2 a Fe (C5H4-COPro4- OBn)2, uma tendncia observada da mesma forma para os derivados de metilcicloexano Fc-CO-(Pro)x- OBn.129 Curiosamente, foi noticiado que a sntese de Fe (C5H4-CO-Pron- OBn)2 com n = 2, 3 ou 4 rendido uma segunda classe de compostos, ou seja, os "incompletos" derivados substitudos Fe (C5H4-CO-Pron- OBn) (C5H4-CO-OBt).168 Em uma subseqentes papel, Kraatz e colaboradores reagiu a "incompleta" derivados com n = 3 e 4 com um anlogo de pepstatin

para obter o conjugados 66 mostrado no esquema de 20.169 Pepstatin um potente inibidor natural de proteases aspartato, incluindo pepsina e protease do HIV-1. 170-172 Trabalho atual para testar se estes derivados tm a capacidade de inibir proteases aspartato est em curso, de acordo com ref 169.

Esquema de 20. Estrutura do 1-Oligopropyl-1'-pep - estatina derivados de Fereocene 66 2.3. Imina e formao de Amina com Ferrocenecarbaldehyde2.3.1. Iminas de Ferrocenecarbaldehyde Iminas de ferrocenecarbaldehyde (67) e aminocidos ou steres de aminocidos podem ser preparadas em uma maneira fcil (68, regime de 21). Vrios solventes tm sido utilizados para esta transformao sinttica, tais como EtOH,176 MeOH,177 ou CHCl3.178 As reaes so executadas na temperatura ambiente177 ou ligeiramente elevadas temperaturas, variando entre 60 e 80 c.177.178 No entanto, um relatrio apareceu na literatura em que este tipo de iminas foi obtido em condies de solventes temperatura ambiente.179 Uma viso geral da Constituio da iminas relatadas entre 67 e aminocidos ou steres de aminocidos dado na tabela 3.

Regime de 21. Sntese geral de iminas 68 de aminocidos e Ferrocenecarbaldehyde 67 Tabela 3. Constituio do relatado iminas 68 de 67 e derivados de aminocidosum compostos Ref compostos Ref

FC-C

N(Gly-OH)

176, 177

FC-C

N(Gly-OEt)

176, 177

FC-C

N (dl-Ala-OH)

176

FC-C

N(Ala-OH)

177

FC-C

N(Ala-OMe)

179

FC-C

N (dl-Ala-OEt)

176

FC-C

N(Ala-OEt)

179

FC-C

N(-Ala-OH)

176

FC-C

N (dl-Val-OH)

176

FC-C

N(Val-OH)

177

FC-C

N (dl-Val-OEt)

176

FC-C

N (dl-Leu-OH)

176

FC-C

N(Leu-OH)

177

FC-C

N(Leu-OMe)

178

FC-C

N(Leu-OEt)

176

FC-C

N (dl- Ile-OH)

176

FC-C

N(Ile-OMe)

179

FC-C

N (dl-Asp-OH)

176

FC-C

N(Glu-OH)

176

FC-C

N(Phe-OMe)

178

FC-C

N (dl-Tyr-OH)

176

FC-C

N(Tyr-OH)

176

FC-C

N(Met-OH)

176, 178

FC-C

N(Arg-OH)

176

FC-C

N(His-OMe)

179

FC-C

N(Ser-OMe)

179

FC-C

N (Lys(N

C-Fc)-OMe)

179

[Fc-C

N(Cys(S-)-OH)]2

176

um Estas iminas so compostos bastante estveis na ausncia de cidos aquosos. Eles podem ser reduzidos com NaBH4 ou H2/Pd para produzir os derivados de aminas secundrias mais estveis, que sero descritos na seo 2.3.2. Aminocido ferrocenylimines tm sido usados como ligantes para ons de metais de transio. Beck e colegas de trabalho prepararam complexos de Pd(II) com iminas de 67 e os aminocidos Ala, Gly, Val e Leu como ligantes.177 Especialista dos complexos isolados depende o sal de Pd(II) e o tipo de aminocido derivado, conforme ilustrado no regime de 22. Com nd2PdCl4 e iminas de 67 e cido carboxlico livre do Ala, Leu e Val, mononucleares complexos com uma proporo de ligante/Pd de 2:1 foram obtidos (69). Por outro lado, a reao de PdCl2 com o correspondente ferroceno imina glicina derivados 70 rendeu o complexo de Pd(II) de clorobridged dinuclear 71. A reao de Pd(OAc)2 com as iminas entre 67 e H-Gly-OMA e HAla-OMe resultou no isolamento de espcies com ponte acetato 72, em que se verificou ortopalladation do anel ferrocenyl-Cp. Vrios destes complexos, incluindo um derivado de ortopalladated, foram estruturalmente caracterizados por cristalografia de raios X. Em resumo,

dois tipos de modos quelantes foram observados, N normal, modo de coordenao (69 e 71) e tambm o c incomum, modo bidentado N (72).

Regime de 22. PD complexos de ferroceno cidos Imino Em um estudo posterior, Beck e colegas de trabalho prepararam iminas de benzenos tri, tetra e hexasubstituted com p- ethynylphenylalanine metil ster.180 Como um exemplo representativo, a estrutura molecular dos derivados hexaferrocene 73 retratada em regime de 23.

Regime de 23. Estrutura da "Star-Shaped" Hexa-kis (ferroceno imino cido) benzeno derivada 73 O peptdeo de 21-mer mesmo, que foi derivatized com cido ferrocenecarboxylic (40) (ver seco 2.2.1), foi tambm reagiu com ferrocenecarbaldehyde (67). Tambm neste caso, os seis grupos lisina lado cadeia NH2 foram rotulados e o conjugado resultante foi encontrado para adaptar uma conformao helicoidal semelhante.141,142

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena

2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas

Ferrocenylmethylamine derivados 74 foram preparados por meio da reduo de iminas de ferrocenecarbaldehyde (67) e aminocidos com NaBH4 ou H2/Pd. Alternativamente, estes aminas podem ser synthe-se diretamente em um procedimento de um pote de 67, a derivada de aminocidos e o reagente redutor adequado (regime 24). At ao momento, foram relatado um nmero considervel de Fem derivados, como mostrado na tabela 4. Alguns destes compostos, em especial o derivado de glicina Fem-Gly-OH (75, Fem = ferrocenylmethyl), encontrado aplicativo na sntese de peptdeo como resduos de aminocidos lipoflicos, com moieties de amida mascarado. Isso tratado na seo 2.5.1. Em uma reao estequiomtrica,

pequenas quantidades do bimetlico compostos (Fem)2Gly-OMe (76) foram isoladas para complementar a derivada de mono-Fem esperado Fem-Gly-OMe (75b).181

Esquema de 24. Formao de aminocidos (Fem) Ferrocenylmethyl 74 Tabela 4. Viso geral sobre os derivados de aminocidos Fem relatado compostos Ref compostos Ref

Fem-Gly-OH (75)

182

Fem-Gly-OMe (75b)

182

Fem-Ala-OH (78)

177, 182

Fem-Ala-OMe

182

Fem-Pro-OH (77)

177

Fem-conheceu-OMe

178

Fem-Phe-OMe

178

Fem-Phe-OH (84)

178, 182

Fem-Phe-OtBu

182

Fem-Leu-OtBu

182

Fem-Leu-OMe

178

Fem-Val-OtBu

178

Fem2- Gly-(OMe76)

181

Beck e colegas de trabalho usado Fem-Pro-OH (77) e Fem-Ala-OH (78) como ligantes para Pd(II).177 A reao de nd2PdCl4 com 77 e 78 rendeu dois tipos diferentes de complexos (esquema de 25). Com 77, o tri-metlicos (1Pd e 2Fe) compostos 79 com um ligante em relao taxa de 2:1 Pd foi obtida. Em condies idnticas, a sntese com 78 resultou no isolamento do Pd(II) bis--cloro dimrica complexo 80.

Regime de 25. PD complexos de aminocidos Ferrocenylmethyl

Metzler-Nolte e colegas de trabalho exploraram a qumica de acoplamento de peptdeo de derivados do cido amino-Fem. Acoplamento de aminocidos e peptdeos para o C - terminal da Fem-amino cido steres prossegue prontamente aps hidrlise da funcionalidade de ster e subseqente ativao de HBTU.178,183,184 Por outro lado, HBTU ativado protegido por n aminocidos no mostrou nenhum reatividade na direo do grupo amino secundrio da FemPhe-OMe (regime de 26). Isto provavelmente pode ser atribudo para efeitos estricos, porque Fem-Benzilamina (81a) e Fem-methylbenzylamine (81b) reagem sem problemas com HBTUativado aminocidos para produzir derivados 82a e 82b, respectivamente.178,183,185 l- Leu, bem como l- e d-Ala, foi usado com sucesso para esta reao de acoplamento. Investigaes NMR em combinao com modelagem molecular foram usadas para elucidar a estrutura destes conjugados em soluo e explicar as diferenas de reactividade.178

Regime de 26. Diferena de reatividade do grupo Amino secundrio de steres de aminocidos Fem e aminas em direo de aminocidos

Regime de 27. Bimetlico derivados de aminocidos Ferrocenyl Esses derivados de ferrocenylbenzylamine podem ser aplicados como um grupo de ancoragem para C-terminal de aminocidos e peptdeos.185 Neste sentido, a rotulagem complementar 40, que pode servir como um marcador para o N-terminal de peptdeos e aminocidos. A partir de derivados de dipeptdeo 83do Fem, vrios derivados bimetlico interessantes como 85 e 86 foram preparados no grupo Metzler-Nolte tambm (regime 27).178,183 2.4. Outros mtodos de fixao2.4.1. Acoplamento Sonogashira A reao de Sonogashira um Pd-catalisada acoplamento de um terminal alquino com um anel aromtico halognio substitudo, de acordo com o esquema de 28. 186-188 Embora muitas variaes foram publicadas recentemente, incluindo exemplos de Cu-livre, o sistema de catalisador mais comum ainda a combinao de PdCl2(PPh3)2 e CuI. A reao requer condies anaerbias, mas solventes misturas contendo at uma pequena porcentagem de gua so toleradas, tornando assim possvel o uso de solventes undried comerciais. O grupo de Nolte Metzler desenvolveu um mtodo prtico e flexvel para rotular o c ou N-terminal de aminocidos e peptdeos, consistindo de um processo de duas etapas. 189-191 Duas rotas sintticas semelhantes para anexar um marcador para o C-terminal tem sido exploradas, conforme mostrado no esquema de 29.

Regime de 28. Acoplamento Sonogashira

Regime de 29. Dois mtodos para rotular o C-terminal de pptidos por acoplamento Sonogashira

Regime de 30. Esquema para rotular N-terminal de aminocidos e peptdeos por acoplamento Sonogashira

Regime de 31. Estruturas de dois derivados de ferroceno Alamethicin 94um um Note que o grupo de ferrocenoyl est ligado a C-terminal do peptdeo. O primeiro passo para a introduo de um rtulo no C-terminal consiste em functionalizing um aminocido Boc protegido ou protegidos pelo COB dipeptdeo no seu C-terminal pela formao de amida com propargylamines 87 (R = H (um), (b) Et) ou com p- iodoaniline (88). A sntese comea com a preparao de amidas 89 e 90 de cido ferrocenecarboxylic (40) e 88 ou 87, respectivamente. Estes amidas preparam-se atravs de mtodos de sntese de peptdeo de fase de soluo padro, empregando isobutylchloroformiate e N- metilmorfolina. 192 Na segunda etapa, o acoplamento Sonogashira executado, rendendo a acrescida funcional ferroceno aminocidos e peptdeos como 91 e 92. O ferroceno diethylpropargylamide derivativos ob provada ser superior do ferroceno propargylamide congnere 90 devido sua solubilidade significativamente aprimorada e purificao mais fceis de conjugados, como 92b. Este mtodo no est restrito a C-terminal rotular, mas atravs de uma ligeira modificao pode ser adaptado para a introduo de um marcador na N-terminal, como mostrado no esquema de 30. A amida de p- iodobenzoic cido e H-Leu-OMe foi reagiu com 90 sob Sonogashira idntica condies de engate, produzindo o N-terminal rotulado composto 93.190 Este procedimento de rotulagem de duas etapas muito atraente, por vrias razes. Em primeiro lugar, ambas as etapas, formao de amida e engate Sonogashira, proceder-se bom rendimento, variando de 70 a 95%. Solventes de segunda, comercial reagentes de qualidade podem ser empregadas para cada etapa. Somente para a Sonogashira etapa de acoplamento o uso de solventes venoso necessrios. Em terceiro lugar, o mtodo verstil e de grande alcance, como ele tolera uma variedade de grupos funcionais, tais como lcoois (Ser), tioteres (Met), steres e amidas.191

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl

2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal

Para complementar o processo de Sonogashira, foram desenvolvidos vrios outros mtodos para o cloreto de C-terminal. Um deles, formao de amida entre Fem-Benzilamina ou Femmethylbenzylamine e cido carboxlico C-terminal, j foi apresentado na seo 2.3.2. Outros mtodos incluem formao ster ou anidrido e exemplos sero dada abaixo. Eisenthal e colegas de trabalho prepararam dois ferrocenoyl derivados 94 de alamethicin de peptdeo formadoras de canal (ALM). 193 Um dos derivados (94a) foi preparado de 40, Considerando que os outros (94b) foi sintetizado a partir do ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico. Portanto, os compostos diferem no anel Cp unconjugated; 94a tem um anel de Cp, que 94b tem um grupo de - COOH4-C5H (regime 31). Em ambos os casos, os moieties de ferrocenoyl estavam ligadas atravs da formao de ster C-terminal do pptido de 20-mer na soluo. Alamethicin um canal formando peptdeo, produzido pelo fungo Trichoderma viridee pertence classe de peptaibols. Alamethicin self-associates na bilayers de lipdios, assim formando dependentes de voltagem canais inicos.194-197 A forma reduzida (neutra), ambos ferrocenoyl alamethicin derivados 94 so mostrados para formar canais dependentes de voltagem no bilayers de lipdios planar em potenciais positivos, com propriedades de condutncia semelhantes a alamethicin sem modificaes. Enquanto sob a forma de bicamada lipdica, oxidao de 94b resulta em um canal viveu mais curto enquanto a oxidao de 94a faz com que uma eliminao de dependente do tempo das aberturas de canal, que podem ser restaurados, aumentando o potencial de trans-lipdica. Pr-tratamento de peptdeos de ferrocenoyl com agentes oxidantes altera suas propriedades de canal nico de maneira qualitativamente similar. Embora o exemplo a seguir no estritamente um mtodo de marcao para o C-terminal, apresentada nesta fase porque anexo do marcador semelhante ao exemplo anterior. Toniolo, Maggini e colegas de trabalho prepararam um nonapeptide com um 310-conformao helicoidal, no qual tirosina dois anis de fenol foram esterificados com cido ferrocenecarboxylic. 198-200 Que estes pptidos sintticos helicoidais foram mostrados para ter um hidrofbico vinculao cavidade, que pode servir como um host eficiente para fulerenos [60].

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2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal

Um procedimento no convencional para rotular N-terminal de aminocidos foi desenvolvido por Jaouen e colaboradores. 201 O mtodo consiste na sntese de um sal de pyrilium de

lithioferrocene (95) e 2,6-dimetil--pirona (96) e acidificao subseqente (regime 32). Este sal pyrilium 97 reage com aminas, no presente processo -alanina, para produzir piridnio sal 98. Para o melhor do nosso conhecimento, este mtodo no foi adaptado para a introduo de uma marca de ferroceno para maiores biomolculas.

Regime de 32. Reao de um sal de Pyrilium de Ferrocenyl com -alanina Gallagher et al. preparados os derivados do cido benzico p-Fc-C6H4-CO2H e acoplado a ele a alanina atravs da formao de amida. 202 Este mtodo est relacionado com cloreto de cido carboxlico ferroceno, tratados na seo 2.2.1. Em dois livros e uma patente, Eckert e Koller descrevem uma variedade de compostos de ferroceno para derivatizao do N-terminal de aminocidos e as moieties de2 de lisina-NH da protena BSA.146,203,204 o objetivo era investigar qual dos reagentes foi mais adequado para rotular fins e deteco electroqumica subseqente de conjugados por HPLC-ECD (cromatografia lquida de alta performance com deteco electroqumica). Entre os aminocidos que ocorre naturalmente, nica metionina, tirosina e tryptophane mostram uma pequena atividade eletroqumica, mas seu redox potencial muito alto para boa seletividade (> + 0,5 v vs PCH/PCH+). 205-210 Introduo de um grupo de ferroceno diminuir redox potencial para deteco pelo menos algumas centenas milivolts, o valor exato dependendo da funcionalidade que est diretamente conectado ao ringue Cp. A reduo de redox potencial ir resultar em uma aumento substancial selectividade. Reagentes para derivatizao HPLC-ECD que foram investigados por Eckert e Koller incluem, por exemplo, Fc-SO2-Cl (99), Fc-CO-Cl (41), anidrido de cido ferrocenecarboxylic (100), anidrido de cido ferrocenepropionic (101) e ferrocenylmethyl isocianato (102). Desses derivados, 101 verificou-se ser mais adequado de rotular os resultados e a sensibilidade para deteco electroqumica de conjugados correspondentes.203 , No entanto, alguns resultados na literatura so contradictive, porque Koppang et al. encontrados 99 e 41 seja reagentes de derivatizao boa para HPLC-ECD,148 enquanto Eckert e Koller encontraram estes ser inadequado.203 Em um livro relacionado, Shimada et al. comparado a isotiocianato de ferrocenyl e ferrocenylethyl isotiocianato de glicina e etiquetagem de cido 4-aminobutrico. 211 Este exibido mais elevada reatividade e propriedades eletroqumicas mais favorveis e foi adaptado para determinao de cido 4-aminobutrico em amostras biolgicas por HPLC-ECD.

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2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena

Os mtodos de marcao tratados at agora nesta reviso so adequados para o cloreto de moieties de cido carboxlico e amino de peptdeos e aminocidos. No entanto, tambm foram relatados rtulos seletivos para o grupo de Sulfidrila de cistena. 212-214 Para a etiquetagem de glutationa 103, ferrocenylethyl maleimide (104) e ferrocenyl iodoacetamide (105) (regime de 33) acabou por ser muito eficaz para produzir 106 e 107, respectivamente.212.214 Um derivado maleimide relacionados tambm foi usado para rotular o hexapeptide Ac-Arg-ArgAla-Ser-Leu-Cys-OH.213 Esta rotulado hexapeptide foi aplicada para a deteco de fosforilao serina pela protena quinase a atravs de mtodos eletroqumicos. O uso de 104 para rotular de Cys resduos de protenas como a citocromo P450 descrito na seo 3.1.3. Ferrocenyl iodoacetamide (105) tambm tem sido usada para rotular de BSA (quiser seo 3.2.2) e um 5'thiolated oligonucleotide (ver tambm o ponto 4).214

Regime de 33. Dois reagentes de ferroceno para rotular glutationa 103 Note-se que os reagentes Fc-HgCl (108) e ferrocenoylchloro acetamida (109), (Fc-CO-NHCH2Cl) foram usados para a introduo de um marcador baseado em ferroceno em grupos Cys-SH em protenas. Exemplos relevantes sero apresentados na seo 3. Na seo 2.5.1, o uso do resto ferrocenylmethyl como um grupo de proteo para a fraco SH cistena durante a sntese de peptdeo apresentado.

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3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.4.5. Diversos

Microcistina uma classe de baixo peso molecular cclica peptdeo hepatoxins. Estes Microcistina produzida por cianobactrias (algas cianofceas) eutropic lagos e reservatrios de gua potvel, particularmente nas regies globais que so quentes e relativamente seco, como China, Austrlia e frica do Sul. 215 Porque essas substncias so perigosas para os seres humanos, gado e animais selvagens, importante desenvolver mtodos para deteco rpida destas toxinas. Lo, Lam e colegas de trabalho muito recentemente desenvolveram um mtodo elegante que possibilita a deteco de uma determinado Microcistina, Microcistina-LR, atravs de uma rpida mensurao eletroqumica. 216 Este mtodo baseia-se em derivatizao especfica de dupla exocclica de , grupo carbonilo -insaturados de Microcistina-LR (110) com ferrocenylhexanethiol (111) (regime 34) e a deteco electroqumica subseqente da fraco de Fc/Fc+ em conjugada ferroceno-tags 112. O limite de deteco foi encontrado para ser 18 ng, que no intervalo de outros mtodos de deteco comuns, tais como a

cromatografia em camada fina e HPLC com deteco de UV. Deve notar-se que nveis muito inferiores de Microcistina pode ser detectado com mtodos mais caros, como a espectroscopia de fluorescncia e HPLC-MS. O mtodo electroqumico, no entanto, rpido, especfico e barato.

Regime de 34. Cloreto de Microcistina 110 com 6-Ferrocenylhexanethiol 111 2.5. Aplicao de compostos de ferroceno na sntese de peptdeo2.5.1. O grupo Ferrocenylmethyl (Fem) como um grupo de proteo Eckert e colegas de trabalho apresentou o grupo ferrocenylmethyl (Fem) como um descanso lipoflico para mascarar a fraco de amida glicina altamente polar durante a sntese de peptdeo em soluo.181,182,217 Fem esta fraco (regime de 35) podem ser introduzidas em glicina atravs da formao de imina com ferrocenecarbaldehyde, seguido de reduo para produzir 75 (ver seco 2.3). Acoplamento de peptdeo este resduo de glicina modificados para outros aminocidos ou fragmentos de peptdeo prontamente continua empregando o mtodo carbodiimida padro usado para sntese de peptdeo em soluo. 218.219 As vantagens de empregar este derivado de glicina mascarado para sntese de peptdeo na soluo so as seguintes: (1) os intermedirios e os produtos mostram maior solubilidade em prticos solventes orgnicos como consequncia do resto lipoflico Fem. Isso resulta em reaes completas e melhores rendimentos. Alm disso, a purificao cromatogrfica sobre slica facilitada, uma vez que os produtos podem ser eludos com acetato de etilo/hexano, em vez de com mais polares MeOH/CHCl3 misturas. (2) Os cromforos ferroceno dos intermedirios e produtos facilita a identificao do produto e isolamento durante a purificao cromatogrfica. (3) O crescente peptdeo estvel contra racemization durante as etapas de engate, quando ele montado de forma gradual a partir de C-terminal. Clivagem do grupo Fem adiada at se obter a seqncia de aminocidos desejado. Remoo do grupo Fem realizada por tratamento com TFA/-thionaphthol CH2Cl2 temperatura de 24 h.181,182,217 sob estas condies, COB e terc-grupos protetores de butilo so clivados simultaneamente. A utilidade da Fem-Gly derivados para sntese de peptdeo em soluo ilustrada pela sntese bem-sucedida de [Leu5]-encefalina e H-(Gly)6-OH.181

Regime de 35. O grupo Ferrocenylmethyl (Fem) 75 O grupo de Fem tambm pode ser adaptado para a sntese de resduos asparagina mascarado de cido asprtico. A estratgia desse mtodo elegante descrita no esquema de 36. Protegido por TCBoc cido asprtico 113 reagiu com ferrocenylmethylamine (114) em DMF na presena de 2-morpholinoethyl Isocianeto (MEI).217 Isso rende 73% da -ismero desejado 115, juntamente com 23% do -ismero 116 como um subproduto, depois de purificao por cromatografia em coluna. O -ismero 115 pode ser usado como um bloco de construo de

Asn na sntese de peptdeo. Assim como a derivada de Fem-Gly, a reao de -ismero com TFA/-thionaphthol no CH2Cl2 liberta a asparagina. A utilidade deste resduo Asn-protegido em combinao com a derivada de Fem-Gly demonstrou-se para a sntese da seqncia de peptdeo 2431 de humanos--endorfina.217

Esquema de 36. Adaptao do grupo Fem para a preparao de resduos asparagina mascarado O resto Fem tambm tem sido usado como um grupo de proteo para a funcionalidade de tiol cistena. 220.221 o composto H-Cys(S-Fem)-OH pode ser convenientemente preparado por reagir cistena com ferrocenylmethanol em acetona aquosa na presena de uma quantidade cataltica de cido. Esta cistena protegido por cadeia lateral pode ser transformada em derivados de COB ou Fmoc protegido de N-terminal. Estas, por sua vez, so blocos de construo til para sntese de peptdeo, como demonstrado pela sntese de glutationa 103. Aps a montagem completa do peptdeo, a fraco de ferrocenylmethyl pode ser clivada por TFA ou por ons de soft heavy metal, como Ag+ ou Hg2+.220,221

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3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas

A condensao de componente de quatro (4-CC) da isocianetos (tambm chamados de isonitriles), descoberto por Ugi na dcada de 50,222 fornece uma alternativa para os mtodos clssicos para a sntese de peptdeos na soluo. 223-228 Que mtodos convencionais so caracteriz