Ativação Neuronal e c-Fos

Ciclo de seminários do LCM 2011

Priscila Cassolla

Identificação das áreas cerebrais ativadas após um estímulo

Localização da atividade neuronal

Análise do RNAm c-fos ou da proteína

Ativação Neuronal e c-FosAtivação neuronal Neurônios/Sinapses

Comunicação celular

Introdução

c-Fos

Comunicação celular• Neurônios

Atividade Neuronal – Comunicação celular

Hansen, J. T. & Koeppen, B. M. – Netter’s Atlas of human physiology

Comunicação celular• Sinapses

Atividade Neuronal – Comunicação celular

http://www.mind.ilstu.edu/curriculum/neurons_intro/neurons_intro.php

Sinapses e expressão gênicaAtividade Neuronal – Comunicação celular

Sinapses e expressão gênicaAtividade Neuronal – Comunicação celular

West, A. E. et al, 2002

c-Fos???• O que é c-Fos?

• Qual o papel fisiológico da c-Fos no neurôrio?

• Por que c-Fos é um marcador de atividade neuronal?

• Como c-Fos é detectada?

Proteína c-Fos

O que é c-Fos?• 1ª proteína caracterizada da família Fos: c-Fos, FRA-1, FRA-2 e FosB ( porção N-terminal)

Proteína c-Fos

• 380 aas 90% homologia com o oncogene v-Fos

Retrovírus do Sarcoma murino osteogênico Finkel-Biskis-Jinkins

Immediate-early gene (IEG)

c-fos, c-jun e c-myc

Fatores de transcrição

Qual o papel da c-Fos no neurônio?Proteína c-Fos

• Após dimerização com membros da família Jun (c-Jun, JunB e JunD), o dímero Fos/Jun liga-se à região AP-1 para promover ou inibir a transcrição de diversos genes (proliferação, diferenciação e apoptose)

Zíper leu

Aprendizado e memória? (FRAs e FosB)

Proteína c-Fos

Clayton, D. F., 2000

Proteína c-Fos

Chinenov, Y e Kerppola, T.K., 2001

Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal?

• Não é expressa (ou pouco expressa) em condições basais – sem geração de potencial de ação;

• É rapidamente expressa em resposta aos sinais de superfície celular (estímulos externos);

• Expressão transitória com meia-vida mais curta do que os outros membros da família Fos;

Proteína c-Fos

• O estresse da eutanásia não interfere;

Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal?

• A proteína c-Fos é nuclear, portanto permite estudos com dupla-marcação para identificação do fenótipo neuronal

Proteína c-Fos

Por que c-Fos é marcador de atividade neuronal?

Proteína c-Fos

Kovács, K. J., 2008

Como c-Fos é detectada?• RNAm da c-Fos Hibridização in situ

• Proteína c-Fos Imunohistoquímica

Proteína c-Fos

Clayton, D. F., 2000

Como c-Fos é detectada?• RNAm da c-Fos Hibridização in situ

Proteína c-Fos

http://www.colorado.edu/intphys/Class/IPHY3730/image/figure6-9.jpg

Como c-Fos é detectada?• Proteína c-Fos Imunohistoquímica

Proteína c-Fos

http://www.komabiotech.co.kr/www/techniques/immunodection/immTechniques.html; Thaler, J. P. et al., 2009

Obrigada!