BIOENSAIOS DE ATIVIDADE ALELOPÁTICA DOS ESTEROIDES ESPINASTEROL, ESPINASTERONA E GLICOPIRANOSIL ESPINASTEROL

Planta Daninha, Viosa-MG, v. 30, n. 4, p. 705-712, 2012

705Bioensaios de atividade aleloptica dos esteroides espinasterol, ...

1 Recebido para publicao em 19.11.2011 e aprovado em 21.3.2012.Parte da dissertao de mestrado do primeiro autor.

2 Doutorando em Qumica, Programa de Ps-Graduao em Qumica, Universidade Federal do Par UFPA, Rua Augusto Corra,S/N, 66075-900 Belm-PA; 3 Bolsista de Iniciao Cientfica - CNPq, UFPA; 4 Engo-Agro., Doutor, Embrapa Amaznia Oriental,Trav. Dr. Enas Pinheiro, S/N, 66095-100 Belm-PA; 5 Prof. Dr., Programa de Ps-Graduao em Qumica, UFPA.

BIOENSAIOS DE ATIVIDADE ALELOPTICA DOS ESTEROIDESESPINASTEROL, ESPINASTERONA E GLICOPIRANOSIL ESPINASTEROL1

Bioassays of Allelopathic Activity of the Steroids Spinasterol, Spinasterone, and SpinasterolGlicopyranosyl

RIPARDO FILHO, H.S.2, PACHECO, L.C.3, SOUZA FILHO, A.P.S.4, GUILHON, G.M.S.P.5,ARRUDA, M.S.P.5 e SANTOS, L.S.5

RESUMO - Trs esteroides (espinasterol, espinasterona e glicopiranosil espinasterol) foramisolados do caule de Moutabea guianensis, planta de origem amaznica. Suas estruturas foramdeterminadas a partir das anlises de RMN e por comparao com dados espectroscpicosda literatura. Foram avaliadas as atividades alelopticas das trs substncias em duas plantasinvasoras de pastagens comuns da regio amaznica: Mimosa pudica (malcia) e Senna obtusifolia(mata-pasto). A substncia glicopiranosil espinasterol foi mais ativa no ensaio dedesenvolvimento da radcula, inibindo a espcie Senna obtusifolia em 75%; o espinasterolinibiu em 22% o desenvolvimento do hipoctilo de Senna obtusifolia; e no bioensaio degerminao de sementes as substncias espinasterol e espinasterona proporcionaram 10%de inibio em Mimosa pudica. A partir desses resultados, observou-se que a diferena desubstituintes observada na posio-3 dos esteroides capaz de alterar a atividade aleloptica.O grupo glicosil na posio-3 elevou a atividade aleloptica de forma mais expressiva nobioensaio de desenvolvimento de radcula da espcie malcia, quando comparado aosesteroides hidroxilado e carbonilado. Este o primeiro estudo qumico e aleloptico do gneroMoutabea.

Palavras-chave: Moutabea guianensis, Polygalaceae, alelopatia, Senna obtusifolia, Mimosa pudica.

ABSTRACT - Three steroids (spinasterol, spinasterone, and spinasterol glucopyranosyl) were isolatedfrom the stem of the Amazonian plant Moutabea guianensis. Their structures were determined onthe basis of NMR analysis and by comparison with spectroscopic data found in the literature.The allelopathic activities of the three substances were evaluated against two common weeds of theAmazon region, Mimosa pudica (malicia) and Senna obtusifolia (mata-pasto). The substancespinasterol glucopyranosyl was the most active in the radicle growth bioassay, inhibiting Sennaobtusifolia in 75%; spinasterol inhibited the development of hypocotyl of Senna obtusifolia in22%, and spinasterone and spinasterol inhibited 10% of the seed germination of the species Mimosapudica. These results showed that the difference of substitutes at the C-3 position of the steroidscan influence allelopathic activity: the glicosyl group at the C-3 position enhanced the inhibition ofhypocotyl growth of the species Mimosa pudica, compared to the hydroxilated and carbonylatedsteroid. This is the first chemical and allelopathic study with Moutabea guianensis.

Keywords: Moutabea guianensis, Polygalaceae, allelopathy, Senna obtusifolia, Mimosa pudica.

RIPARDO FILHO, H.S. et al.


706

INTRODUO

As formas atuais de controle de plantas da-ninhas, como roagem (Chiovato et al., 2007;Tipping, 2008), queimadas (Durigan et al.,2007) e utilizao de herbicidas sintticos(Duke et al., 2007), no esto atendendo satuais necessidades da sociedade, devido sagresses aos recursos naturais (gua e solo), vida silvestre e aos alimentos dos animaise das pessoas, alm de favorecer o aumentosistemtico no nmero de espcies de plantasdaninhas resistentes aos atuais produtos nomundo (Owen et al., 2007; Powles & Yu, 2010;Gressel, 2011; Riar et al., 2011). Somada aesses fatores ainda existe a busca dos produ-tores por herbicidas que possam proporcionarmaior produtividade, lucratividade e reduonos gastos com estes produtos. Esses fatoresesto forando os agricultores a buscar novasfontes de herbicidas que atendam s novasexigncias.

Aliado a esses aspectos, a percepo de queplantas e microrganismos podem fornecernovas perspectivas de explorao agrcola vemse somar s inmeras possibilidades de usoda biodiversidade. Especificamente na regioamaznica, pela rica e diversificada biodiver-sidade, as espcies que compem a florestatropical podem representar fonte mpar para adescoberta de inovadoras e importantes fontesqumicas a fo, de para fazer frente ao desafiode se desenvolver a atividade agrcola compa-tvel com as atuais e futuras exigncias dasociedade e de mercado (Mouro Junior &Souza Filho, 2010).

Estudos envolvendo alelopatia, umasubrea da ecologia qumica, vm sendodesenvolvidos na tentativa de encontrarpossveis substncias que possam ser utiliza-das pela indstria agroqumica como potentesbioerbicidas.

Entende-se por alelopatia efeitos diretos ouindiretos de uma planta sobre outra, por meioda liberao de substncias. Esses efeitospodem estimular ou prejudicar o desenvolvi-mento de espcies sensveis a essas substn-cias tambm denominadas de aleloqumicos.Os aleloqumicos podem ser liberados para omeio ambiente de diferentes formas: lixiviaode tecidos vivos e mortos da planta, exsudao

radicular, decomposio de tecidos e vola-tilizao (Rice, 1984).

Um dos maiores esforos realizados emestudos envolvendo alelopatia encontrarmaneiras de potencializar os efeitos alelop-ticos apresentados por algumas substncias,a fim de produzir aleloqumicos mais potentes.Uma das formas inserir modificaesestruturais atravs de semissntese na mol-cula de interesse e, posteriormente, testar aatividade da molcula modificada. Dentrodessa perspectiva, este trabalho teve comoobjetivo comparar a atividade aleloptica detrs esteroides, que possuem o esqueletoestigmasta-7,22-dien, diferenciando-se um dooutro apenas por apresentarem diferentessubstituintes na posio-3. Assim, foramanalisados de que forma esses substituin-tes so capazes de interferir na atividadealeloptica dos esteroides. As trs substn-cias foram isoladas da espcie amaznicaMoutabea guianensis, que pertence fam-lia Polygalaceae uma famlia quase cos-mopolita que possui cerca de 22 gneros e1.000 espcies (Furness & Sttaford, 1995;Coelho et al., 2008). A espcie M. guianensis conhecida popularmente como cip-gog-de-guariba, e o seu fruto, como olho-de-abutre oufruto-de-macaco (Pastore, 2006). Este oprimeiro estudo dessa espcie sob o ponto devista qumico e aleloptico. Foram utilizadascomo plantas-alvo duas plantas invasoras depastagens tpicas da regio amaznica: Mimosapudica (malcia) e Senna obtusifolia (mata-pasto).

MATERIAL E MTODOS

Coleta e preparo do material botnico

O material botnico utilizado (caule deMoutabea guianensis) foi coletado porparataxnomos, e a identificao botnica,feita por botnico do Museu Paraense EmlioGoeldi, onde uma exsicata encontra-secatalogada sob o registro MG 195862.

Isolamento e identificao das substncias

O caule seco e modo de Moutabeaguianensis foi extrado sucessivamente comhexano, acetato de etila e metanol durantecinco dias, fornecendo os extratos hexnico



(EHC; 785,00 mg), acetato de etila (EAC; 4,89 g)e metanlico (EMC; 3,12 g). O extrato hexnicofoi fracionado em CC em gel de slica eludacom misturas de hexano e acetato de etila.Aps monitoramento em CCD, as fraes de7-10 eludas em Hex/AcOEt 10% foramreunidas e recristalizadas em metanol, deonde foi obtida a substncia S1 (espinasterol).O extrato acetato de etila foi fracionadotambm em CC, tendo como adsorvente gel deslica e, como eluentes, hexano, acetato deetila e metanol. Aps o fracionamento, asfraes foram monitoradas por CCD e aquelascom perfis cromatogrficos semelhantesforam reunidas. Da frao 3 eluda em Hex/AcOEt 10% foi identificada a substncia S2(espinasterona), e da frao 24 eluda emAcOEt/MeOH 50% foi identificada a substnciaS3 (glicopiranosil espinasterol). A elucidaoestrutural das substncias isoladas foi reali-zada pela anlise de seus espectros de resso-nncia magntica nuclear (RMN de 1H, RMNde 13C, DEPT) e comparao com dados daliteratura (Figura 1).

Anlise da atividade aleloptica

Bioensaio de germinao de sementes: Agerminao foi monitorada em um perodo decinco dias, com contagens dirias e elimina-o das sementes germinadas. Foram consi-deradas sementes germinadas aquelas queapresentavam extenso radicular maior ouigual a 2,00 mm (Juntila, 1976; Duram &Tortosa, 1985). Os bioensaios foram realizadosem cmara de germinao em temperaturaconstante de 25 oC e fotoperodo de 12 horas.No bioensaio de germinao de sementes,cada placa de Petri de 9,0 cm de dimetro,forrada com um disco de papel-filtro qualitativo,recebeu 15 sementes previamente tratadascom cido sulfrico, para a quebra de dormn-cia (Souza Filho et al., 1998).

Bioensaio de desenvolvimento de radculae hipoctilo: Os bioensaios de desenvolvi-mento da radcula e do hipoctilo foram reali-zados em um perodo de 10 dias. Ao final desseperodo, mediu-se o comprimento da radcula

Figura 1 - Fluxograma de obteno dos extratos do caule de Moutabea guianensis.



708

e do hipoctilo. Os bioensaios de desenvolvi-mento foram realizados em cmara de ger-minao em temperatura constante de 25 oCe fotoperodo de 24 horas. Nos bioensaios dedesenvolvimento da radcula e do hipoctilo,cada placa de Petri de 9 cm de dimetro,forrada com papel-filtro qualitativo, recebeuduas semente pr-germinadas.

Procedimentos comuns: Em todos osbioensaios, as substncias S1, S2 e S3 foramtestadas separadamente. Cada placa de Petride 9 cm de dimetro recebeu 3 mL de soluodas substncias-teste, na concentrao de20 mg L-1; as solues foram adicionadas ape-nas uma vez, no incio dos bioensaios, sendoento adicionada apenas gua destiladaquando necessrio, para manter a concen-trao inicial.

Delineamento experimental e anliseestatstica

O delineamento experimental foi intei-ramente casualizado, e as trs substnciasforam avaliadas em uma nica concentra-o de 20 mg L-1, com trs repeties. Para oexperimento, utilizou-se como tratamentotestemunha gua destilada. Os dados foramanalisados pelo teste F, e as mdias, compa-radas pelo teste de Tukey (p>0,05). Na anlisedos dados utilizou-se o programa SAS (1989).

RESULTADOS E DISCUSSO

Identificao das substncias

A substncia S1 (Figura 2) foi isolada dafrao 12 do extrato hexnico do caule deM. guianensis como um slido branco solvelem diclorometano e apresentou perfil tpico deesteroide no espectro de RMN de 1H, onde possvel observar, entre outros sinais, ummultipleto em H 3,60 caracterstico de hidro-gnio oximetnico da posio-3 do esqueletodos esteroides, dois sinais na regio de hidro-gnios olefnicos, H 5,02 (1H, dd, J=15,2 Hz,J=8,5 Hz) e uma sobreposio de sinais emH 5,15 (2H, m). Nos espectros de RMN de 13C eDEPT so observados 29 sinais de carbono, dosquais seis so referentes a carbonos metlicos,nove, a metilnicos, dez, a metnicos, e quatro,a quaternrios. Desses sinais, podem-sedestacar C 71,1 caracterstico de carbono

oximetnico em C3 de esteroides e emC 117,5, C 129,4, C 138,2 e C 139,5 os sinaisde carbonos olefnicos de duas insaturaes.Com base nos dados dos espectros de RMN de1H, de 13C e DEPT e comparao com dados daliteratura (Zhang et al., 2005), a substnciaS1 foi identificada como espinasterol umesteroide muito encontrado em espcies dafamlia Polygalaceae. Na Tabela 1 mostradaa comparao dos dados de RMN de 13C obtidoscom os dados encontrados na literatura para oespinasterol.

A substncia S2 (Figura 2) foi obtida dafrao ACC3 do extrato acetato de etila do caulede M. guianensis. A substncia apresentou-secomo um slido branco solvel em dicloro-metano. Em seu espectro de RMN de 1H foramobservadas algumas semelhanas com oespectro de RMN de 1H da substncia S1, coma diferena de que neste espectro no foipossvel observar o multipleto referente aohidrognio H-3. No espectro de RMN de 13Cforam observados 29 sinais majoritrios, dosquais podem-se destacar os sinais de carbonosmetnicos C 117,1, C 129,6 e C 138,1 e ode carbono totalmente substitudo C 139,6,que indicam tratar-se de carbonos olefnicos.Pode-se destacar tambm o sinal em C 212,1,indicativo de carbonila de cetona. A partir dasinformaes acumuladas pelas anlises dosespectros de RMN de 1H, de 13C e DEPT dasubstncia S1 analisada anteriormente ecomparao com dados da literatura (Souzaet al., 2001) (Tabela 1), a substncia S2 foiidentificada como a espinasterona.

A substncia S3 (Figura 2) foi isolada dafrao AC24 do extrato acetato de etila do caulede M. guianensis como um slido cristalinosolvel em piridina. O seu espectro de RMNde 1H apresentou-se muito semelhante aoespectro de RMN de 1H da substncia S1, coma diferena de que o multipleto em torno deH 3,60 encontra-se deslocado para H 4,00 epela presena de sinais de hidrognio naregio de acar, sugerindo a presena deuma unidade de acar na posio-3. Tambmpodem ser destacados, no espectro de RMN de1H, dois multipletos em H 5,02 e H 5,20 naregio de hidrognios olefnicos. No espectrode RMN de 13C e no espectro de DEPT, foi obser-vada a presena de 35 sinais. Dos 35 sinais,seis so referentes a carbonos metlicos e dez



a metilnicos, entre eles C 62,9, caracte-rstico da posio-6 de unidade de glicose,alm de 15 metnicos, dos quais podem-sedestacar os sinais de RMN de 13C indicativosde unidade glicosdica (C 71,8, C 75,4,C 78,6, C 78,7 e C 102,3), o sinal de carbonooximetnico (C 77,1) e os sinais presentes naregio de carbonos olefnicos (C 117,9, C 129,7e C 138,7); ainda esto presentes quatrosinais de carbonos quaternrios, entre elesaquele localizado na regio de carbonos olef-nicos: C 139,9. Com as informaes obtidasdos espectros de RMN de 1H, de 13C e DEPT ecomparao com dados da literatura (Zhanget al., 2005), a substncia S3 foi identificadacomo glicopiranosil espinasterol (Tabela 1).

Anlise da atividade aleloptica dassubstncias

No bioensaio de atividade aleloptica sobrea germinao de sementes, foi observado quea espcie Mimosa pudica (malcia) foi a maissensvel e apresentou maiores inibies

diante das substncias espinasterol (S1) eespinasterona (S2), ambas com 10% de inibi-o, enquanto o glicopiranosil espinasterol (S3)inibiu 7%. Esses resultados so indicativos deque a diferena existente na posio-3 dosesteroides testados (S1-hidroxila, S2-carbonilae S3-glicose) no provocou diferenas signifi-cativas nos potenciais de inibio de germi-nao dessas substncias na invasora Mimosapudica (malcia). A espcie Senna obtusifolia(mata-pasto) no se mostrou sensvel ao en-saio de germinao de sementes. Na Figura 3 apresentado o grfico com os resultados deinibio de germinao das substncias S1,S2 e S3.

A espcie que sofreu maiores inibies nobioensaio de desenvolvimento da radcula(Figura 4) foi Senna obtusifolia (mata-pasto), ea substncia que proporcionou maior atividadealeloptica para essa invasora foi aglicopiranosil espinasterol (S3), com potencialde inibio de 75%, seguida de espinasterona(S2), com 46%, e espinasterol (S1), com 37%

Figura 2 - Estrutura das substncias isoladas de Moutabea guianensis.



710

de inibio, mostrando que o esteroide substi-tudo na posio-3 pela unidade de acar omais ativo. A espcie daninha Mimosa pudica(malcia) sofreu maior reduo no desenvol-vimento da radcula (13%) diante da substn-cia espinasterol (S1).

No ensaio de desenvolvimento do hipoctilo(Figura 5), a espcie mata-pasto se mostroumais afetada diante das substncias espi-nasterol (S1) e glicopiranosil espinasterol(S3), com potenciais de inibio de 22 e 13%,respectivamente, mostrando que a presenada hidroxila na posio-3 tem maior influncia

nessa atividade. A espcie invasora Mimosapudica (malcia) mostrou-se mais sensvel aoefeito inibitrio da substncia espinasterol(S1), 9%.

Trabalhos envolvendo atividade alelopticade esteroides no so frequentes na litera-tura. Estudos recentes tm demonstrado quesubstncias naturais presentes no arroz(Oryza sativa) possuem atividades herbicidas,entre as quais esteroides livres e glicosilados(Chung & Ahmad, 2010). Os esteroidesestigmasterol e -sitosterol apresentaramefeitos alelopticos sobre o crescimento do

Tabela 1 - Dados de RMN de 13C de S1 e S2 (75 MHz, CDCl3) e S3 (75 MHz, piridina-d5) em comparao com dados daliteratura

1/ Zhang et al. (2005). 2/ Souza et al. (2001).

C S1 S1 Lit.

1/ S2 S2 Lit.

2/ S3 S3 Lit.

1/

1 37,1 37,1 38,9 38,8 37,3 37,3

2 31,4 31,5 38,2 38,1 30,0 30,0

3 71,1 71,1 212,1 212,0 77,1 77,1

4 37,9 38,0 44,3 44,2 34,5 34,6

5 40,2 40,2 43,0 42,9 40,2 40,2

6 29,6 29,7 30,1 30,0 30,0 30,0

7 117,5 117,5 117,1 117,0 117,9 117,9

8 139,5 139,6 139,6 139,5 139,6 139,6

9 49,4 49,4 49,0 48,9 49,6 49,6

10 34,2 34,2 34,5 34,4 34,7 34,8

11 21,5 21,5 21,8 21,7 21,7 21,8

12 39,5 39,4 39,4 39,3 39,7 39,6

13 43,3 43,3 43,3 43,2 43,5 43,5

14 55,1 55,1 55,1 55,0 55,3 55,3

15 23,0 23,0 23,1 22,9 23,4 23,4

16 28,5 28,5 28,6 28,6 28,9 29,0

17 55,8 55,9 56,0 56,0 56,0 56,1

18 12,0 12,0 12,2 12,2 12,2 12,3

19 13,0 13,0 12,5 12,5 13,1 13,1

20 40,8 40,8 40,9 40,9 41,1 41,2

21 21,4 21,4 21,2 21,2 21,6 21,7

22 138,2 138,2 138,1 138,1 138,7 138,7

23 129,4 129,4 129,6 129,6 129,7 129,7

24 51,2 51,2 51,3 51,3 51,4 51,5

25 31,9 31,9 32,0 32,0 32,2 32,2

26 19,0 19,0 21,5 21,5 19,2 19,2

27 21,1 21,1 19,1 19,1 21,3 21,3

28 25,4 25,4 25,5 25,5 25,7 25,7

29 12,2 12,2 12,3 12,3 12,5 12,6

1 102,3 102,3

2 75,4 75,4

3 78,7 78,7

4 71,8 71,8

5 78,5 78,6

6 62,9 62,9



Lactuca sativa (var. Nigra e var. Romana) eLycopersicon esculentum. Santos et al. (2008a)relataram a atividade aleloptica dos este-roides esgosterol e perxido de ergosterol iso-lados do fungo endoftico Pestalotiopsis guepinii,cujos resultados se assemelham aos potenciaisobservados no presente estudo. Em estudorecente (Santos et al., 2008b), foi demonstradoque substncias que guardam estreitas seme-lhanas com os esteroides, como os triter-penos, potencializam os efeitos alelopticos emdiferentes pH, e esse um caminho a serexplorado.

Nos bioensaios de atividade alelopticasobre a germinao de sementes, os este-roides testados no proporcionaram inibiessignificativas, tendo Mimosa pudica (malcia)e Senna obtusifolia (mata-pasto) como espciesreceptoras. Resultados expressivos foramobtidos nos bioensaios de desenvolvimento daradcula, em que a substncia glicosilada S3 foia mais ativa, evidenciando que a substituiona posio-3 dos esteroides pode influenciarno potencial aleloptico avaliado. De maneirageral, as atividades alelopticas foram doses-dependentes e variaram de acordo com a esp-cie testada e o parmetro analisado. O fato detriterpenos exibirem atividade alelopticapotencializada em diferentes pH e de a ativi-dade aleloptica dos esteroides avaliados no

Figura 3 - Efeitos das substncias (20 mg L-1) testadas sobre agerminao de sementes de Mimosa pudica (malcia) e Sennaobtusifolia (mata-pasto). S1: espinasterol; S2: espinasterona;S3: glicopiranosil espinasterol. Dados expressos empercentual de inibio em relao ao tratamento testemunha gua destilada. Mdias seguidas de letras iguais, maisculasparas as substncias S1, S2 e S3 e minsculas para efeitoinibitrio entre as espcies, no diferem estatisticamentepelo teste de Tukey (p>0,05).

12

10

8

6

4

2

0

Substncias

Inib

io

(%)

Malcia Mata-pasto

10 Aa

S1 S2 S3

2 Ab 2 Ab

7 Aa

1 Ab

10 Aa

Figura 4 - Efeitos das substncias (20 mg L-1) sobre odesenvolvimento da radcula de Mimosa pudica (malcia) eSenna obtusifolia (mata-pasto). S1: espinasterol; S2:espinasterona; S3: glicopiranosil espinasterol. Dadosexpressos em percentual de inibio em relao ao tratamentotestemunha gua destilada. Mdias seguidas de letras iguais,maisculas para as substncias S1, S2 e S3 e minsculaspara efeito inibitrio entre as espcies, no diferemestatisticamente pelo teste de Tukey (p>0,05).

Figura 5 - Efeitos das substncias (20 mg L-1) sobre odesenvolvimento de hipoctilo de Mimosa pudica (malcia)e Senna obtusifolia (mata-pasto). S1: espinasterol; S2:espinasterona; S3: glicopiranosil espinasterol. Dadosexpressos em percentual de inibio em relao ao tratamentotestemunha gua destilada. Mdias seguidas de letras iguais,maisculas para as substncias S1, S2 e S3 e minsculaspara efeito inibitrio entre as espcies, no diferemestatisticamente pelo teste de Tukey (p>0,05).

80

70

60

50

40

30

20

10

0

Substncias

Inib

io

(%)

Malcia Mata-pasto

13 Ab

S1 S2 S3

37 Ca

75 Aa

5 Bb

46 Ba

10 Ab

feijo-caupi (Vigna unguiculata), mostrandoefeito inibitrio sobre a taxa de germinao, ocomprimento da parte area e o peso fresco(Kpoviessi et al., 2006). Macias et al. (1997)demonstraram as atividades alelopticas dediversos esteroides isolados de Melilotusmessanensis sobre a germinao e o cresci-mento das monocotiledneas Hordeum vulgaree Allium cepa, bem como das dicotiledneas

25

20

15

10

5

0

Substncias

Inib

io

(%)

Malcia Mata-pasto

9 Ab

S1 S2 S3

22 Aa

13 Ba

6 ABb

11 Ba

5 Bb



712

presente estudo variar com a substituio naposio-3 abre expectativa para estudos decorrelao estrutura qumica versus atividadebiolgica, variando os substituintes dessaposio.

AGRADECIMENTOS

CAPES e ao CNPq, pelo apoio financeiro.

LITERATURA CITADA

COELHO, V. P. M.; AGRA, M. F.; BARACHO, G. S. Florada Paraba, Brasil: Polygala L. (Polygalaceae). Acta Bot.Bras., v. 22, n. 1, p. 225-239, 2008.

CHIOVATO, M. G. et al. Diferentes densidades de plantasdaninhas e mtodos de controle nos componentes deproduo do milho orgnico. Planta Daninha, v. 25, n. 2,p. 277-283, 2007.

CHUNG, I. M.; AHMAD, A. Herbicidal activities ofallelopathic and other compounds from Oryza sativa.Allelopathy J., v. 26, n. 2, p. 139-156, 2010.

DUKE, S. O. et al. Interactions of synthetic herbicides withplant disease and microbial herbicides. In: VURRO, M.;GRESSEL, J. (Eds.). Novel biotechnologies for biocontrolagent enhancement and management. Dordrecht:Springer, 2007. p. 277-296.

DURAM, R. D.; TORTOSA, M. E. The effect of mechanicaland chemical scarification on germination of charlock (Sinapisarvensis L.) seeds. Seed Sci. Technol., v. 13, n.1,p. 155-163, 1985.

DURIGAN, G. et al. Threats to the Cerrado remnants of thestate of So Paulo, Brazil. Sci. Agric., v. 64, n. 4, p. 355-363,2007.

FURNESS, S. H.; STAFFORD, P.J. Polygalaceae. Rev.Paleobot. Palynol., v. 88, n. 1, p. 61-82, 1995.

GRESSEL, J. Low pesticide rates may hasten the evolution ofresistance by increasing mutation frequencies. Pest Manag.Sci., v. 67, n. 3, p. 253-257, 2011.

JUNTILA, O. Seed and embryo germination in S. vulgarisand S. reflexa as affected by temperature during seeddevelopment. Physiol. Plant, v. 29, n. 2, p. 264-268, 1976.

KPOVIESSI, D. S. S. et al. Allelopathic effects on cowpea(Vigna unguiculata (L.) Walp) plant and cytotoxic activities ofsterols and triterpene isolated from Justicia anselliana(NEES) T. Anders. Electron. J. Nat. Subs., v. 1, n. 1,p. 12-19, 2006.

MACIAS, F. A.; SIMONET, A. M.; GALINDO, J. C. G.Bioactive steroids and triterpenes from Melilotus messanensisand their allelopathic potential. J. Chem. Ecol., v. 23, n. 7,p. 1781-1803, 1997.

MOURO JUNIOR, M.; SOUZA FILHO, A. P. S.Diferenas da atividade aleloptica em espcies da famliaLeguminosae. Planta Daninha, v. 28, p. 939-951, 2010.Edio Especial.

OWEN, M. J. Widespread occurrence of multiple herbicideresistance in Western Australian annual ryegrass (Loliumrigidum) populations. Austr. J. Agric. Res., v. 58, n. 7,p. 711-718, 2007.

PASTORE, J. F. B. Polygalaceae Hoffmannsegg e Link noDistrito Federal, Brasil. 2006. 216 f. Dissertao(Mestrado em Botnica) - Instituto de Cincias Biolgicas,Universidade de Braslia, Braslia, 2006.

POWLES, S. B.; YU, Q. Evolution in action: plants resistantto herbicides. Ann. Rev. Plant Biol., v. 61, n. 1, p. 317-347,2010.

RIAR, D. S. et al. Glyphosate resistance in a johnson grass(Sorghum halepense) biotype from Arkansas. Weed Sci.,v. 59, n. 3, p. 299-304, 2011.

RICE, E. L. Allelopathy. New York: Academic Press, 1984.422 p.

SANTOS, L. S. et al. Potencial herbicida da biomassa e desubstncias qumicas produzidas pelo fungo endofticoPestalotiopsis guepinii. Planta Daninha, v. 26, n. 3,p. 539-548, 2008a.

SANTOS, L. S. et al. Atividade aleloptica de substnciasqumicas isoladas do capim-marandu e suas variaes emfuno do pH. Planta Daninha, v. 26, n. 3, p. 531-538,2008b.

STATITISTICAL ANALYSIS SYSTEM SAS. Usersguide. Version 6.4. Cary: 1989. 846 p.

SOUZA, A. D. L. et al. Constituintes qumicos de Gustaviaaugusta L. (LECYTHIDACEAE). Qumica Nova, v. 24,n. 4, p. 439-442, 2001.

SOUZA FILHO, A. P. S.; DUTRA, S.; SILVA, M. A. M. M.Mtodos de superao de dormncia de sementes de plantasdaninhas de pastagens cultivadas da Amaznia.Planta Daninha, v. 16, n. 1, p. 3-11, 1998.

TIPPING, P. W. Mowing-induced changes in soil seed banksand populations of plumeless thistle (Carduus acanthoides)and musk thistle (Carduus nutans). Weed Technol., v. 22,n. 1, p. 49-55, 2008.

ZHANG, L. et al. A new sterol from Securidacainappendiculata. J. Asian Nat. Produc. Res., v. 7, n. 4,p. 649-653, 2005.

Documents

BIOENSAIOS DE ATIVIDADE ALELOPÁTICA DOS ESTEROIDES ESPINASTEROL, ESPINASTERONA E GLICOPIRANOSIL ESPINASTEROL