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O uso de biotecnologias da reprodução em

BÚFALOSNovas tecnologias

búfalo tem se tornado umafonte viável de proteína noBrasil. Esta espécie tem se

adaptado bem às condições brasileiras,mostrando bons resultados tanto naprodução de carne como na de leite.

Entre os fatores responsáveis por

estes resultados, os mais importantessão as biotecnologias da reprodução ea seleção dos animais de produção. Aadoção dos programas de melhora-mento genético, auxiliados pelas téc-nicas da inseminação artificial (IA) e datransferência de embriões (TE), é im-portante para conseguir aumento nastaxas de produção.

No Brasil, búfalas com bom Escorede Condição Corporal (ECC) no partoapresentaram melhor performancereprodutiva. O primeiro estro após oparto é influenciado pelo ECC, poisbúfalas com alto escore (³ 4,0) mos-

tram sintomas de estro mais cedo doque búfalas com menor ECC (£ 3,5). Aporcentagem de anestro é afetada peloECC; resultando em maior número debúfalas em anestro com baixo ECC.Búfalas com ECC entre 4,0 e 4,5 noparto apresentaram menor intervaloentre partos do que búfalas com ECCentre 2,0 e 2,5. O número de doses desêmen por concepção variou de acor-do com o ECC, onde animais muitomagros (ECC £ 2,5) ou muito gordos(ECC = 5) necessitaram de maior nú-mero de doses de sêmen por concep-ção do que animais com ECC entre 3,0e 4,5 (tabela 1). Desta forma, o ECC nopar to é indicador conf iável naperformance reprodutiva de fêmeasno pós-parto (tabela 2). O búfalo temcomportamento sexual sazonal, poisanimais que vivem distantes da regiãoequatorial têm este comportamentoinfluenciado positivamente pela dimi-nuição de horas-luz diárias.

De acordo com Baruselli o manejoeficiente consiste em concentrar adetecção de cio, a Inseminação Artifici-al (IA) e a Transferência de Embriões(TE) em poucos meses do ano, demarço a julho.

A detecção de cio é um fatormuito importante no processo de im-plantação da IA e da TE. A detecçãodeficiente diminui as taxas de fertilida-de e aumenta os custos da IA e TE.Portanto, o uso de rufiões para detecçãode cio é indispensável.

Baruselli reportou que 37,93% dosanimais apresentaram sinais de cio às6h da manhã, 17,24% ao meio-dia,20,68% às 6h da tarde e 24,13% àmeia-noite. Porém, as búfalas apresen-tam s intomas de c io maisfreqüentemente à noite, provavelmen-

Visintin, J.A.; Assumpção, M.E.O.A.;

Baruselli, P.S.; Mello, M.R.B.;

Rodrigues Alves, D.O.; Tavares, L.M.T.

Departamento de Reprodução Animal,

Faculdade de Medicina Veterinária e

Zootecnia, Universidade de São Paulo.

O

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te influenciados pelo meio ambiente.Durante o outono, tanto a temperaturacomo a umidade relativa do ar permi-tem pastoreio e locomoção dos ani-mais sem estresse térmico. Em locaiscom temperatura e umidade relativado ar altas durante o dia, há aumentodos sintomas de estro durante a noite.Baruselli sugere a observação de cio às6h da manhã e às 6h da tarde com60,26% e 39,74% de detecção de cio,respectivamente.

Para alcançar os melhores resulta-dos, a inseminação artificial deve serrealizada no final do estro, quando oanimal não está mais aceitando a co-bertura. Portanto, é recomendável queas fêmeas que apresentarem sintomasde estro às 6h da manhã sejaminseminadas às 6h da tarde ou vice-versa, uma vez que o estro destesanimais dura em média de 12 horas(63,23%).

A inseminação artificial realizadaentre 6 e 8h da manhã apresentou taxade concepção de 54,27%, entre 11 e13 horas de 50% e entre 17 e 19h de45,35%.

Baruselli et al. inseminaram 831fêmeas em final de estro, quando nãomais aceitavam cobertura, observandointervalo entre o início do estro e ainseminação artificial (duração do estro)de 12h (76,24%), 24h (20,44%) e 36h(3,32%).

O ciclo estral que tem duraçãomédia de 21 dias, variando de 18 a 26dias, pode ser sincronizado para facili-tar o manejo da IA e da TE, sendo queo intervalo entre a administração daprostaglandina e o estro varia de 24 a96 horas, predominando o tempo de48 a 84 horas em 90% dos animais.

Ainda, os fatores climáticos e sazo-nais têm forte efeito sobre as caracte-rísticas físicas e morfológicas do sê-men. Na Região Amazônica, um ambi-ente quente, úmido e tropical, o me-lhor período para congelar sêmen éentre janeiro e junho. Búfalos são sen-síveis ao estresse térmico, portanto, écomum a queda na qualidade do sê-men durante a estação quente.

Juntamente com a IA, a transfe-rência de embriões tem se tornadouma das mais poderosas ferramentaspara os criadores. Muitos países têmincorporado a superovulação e a trans-ferência de embriões em programasde testes de progênie para impulsionaro melhoramento genético dos reba-nhos produtores de carne. Com a sele-ção de machos e fêmeas, tanto adultoscomo jovens, foi esperada uma melho-

ra de 12% sob o aspecto genético.Posteriormente, um aumento de 22%nas taxas de melhoramento genéticoforam previstas com o uso de técnicasde fecundação in vitro (FIV) para pro-duzir embriões de bezerras de 1 a 5meses de idade.

O desenvolvimento do embriãobubalino é mais rápido do que o bovi-no, implicando a colheita e transferên-cia ao redor de 5 ou 6 dias após o estro.

A resposta à superovulação e àrecuperação embrionária em búfalos égeralmente baixa (tabela 3).

Avanços consideráveis têm sidoatingidos em termos de respostasuperovulatória e de produção de em-briões, mas estudos adicionais emfoliculogênese, produção de embriõesin vitro, imunologia da interação ma-terno-fetal e desenvolvimento do fetodevem ser realizados para que estas

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técnicas possam ser usadas nessa es-pécie.

A literatura é escassa quanto a FIVem búfalos, no entanto o primeirobúfalo nascido a partir de maturação,fecundação de oócito e cultivo até oestágio de blasto cisto in vitro prova apossibilidade desta técnica em búfalos.

Em búfalos, a taxa de in vitro(MIV) foi significativamente maior(81,7%) em meios suplementados comLH, FSH e estradiol do que em meiossem hormônios. A taxa de maturaçãode 41% e 52% foi reportada para ani-mais adultos e pré-púberes. Tavares etal., no Brasil, observaram taxa dematuração de 80,20% (tabela 4).

Em búfalos, as baixas taxas defecundação (19,6%) e de clivagem(8,9%) foram obtidas com sêmen con-gelado e capacitado com 10mg deheparina por ml em meio Hepes-Talp.A capacitação envolve mudanças fisio-lógicas no acrossomo doespermatozóide, necessárias para suapenetração na zona pelúcida do oócito.

No entanto, foram significativa-mente aumentadas quando o sêmencongelado foi capacitado com 5mMolde cafeína mais 10mg de heparina porml em meio de Bracket e Oliphant -BO (fecundação de 29,8% e clivagemde 27,6%) e posterior aumento quan-do espermatozóides frescos foram ca-pacitados da mesma maneira (fecun-dação de 50% e clivagem de 34%).

Estudos relacionados à maturaçãoe à fecundação in vitro em búfalos sãonecessários, incluindo tratamento comgonadotrofinas de búfalas em fasepuberal associado a aspiração foliculartransvaginal com ultra-som.

A porcentagem de embriões quese desenvolveram até os estágios demórula e de blastocisto foi baixa (4,04%e 0,52%, respectivamente), quandoestes foram co-cultivados com célulasdo cúmulus. No entanto, quando zigotosforam cultivados em monocamada decélulas do cúmulus juntamente comcélulas epiteliais do oviduto, a porcen-tagem de desenvolvimento até os es-

tágios de mórula e de blastocisto foimaior (17,83% e 8,10%, respectiva-mente).

As baixas taxas de recuperação deoócitos por ovário podem ser atribuí-das ao baixo número médio de folículosprimordiais no ovário.

Os benefícios da tecnologia deFIV para o melhoramento genéticopodem ser alcançados se os oócitosforem aspirados de animais vivos comalto potencial genético. Uma alternati-va para a produção de embriões podeser a fecundação in vitro a partir deoócitos imaturos aspirados por ultra-som transvaginal, tanto de animais adul-tos quanto em fase pré-púbere trata-dos com gonadotrofinas.

Kitiyanant et al. obtiveram oócitosde búfalas Swamp adultas pela aspira-ção folicular por ultra-som, os quaisforam desenvolvidos in vitro até osestágios de mórula ou blastocisto. NoBrasil, Tavares et al. recuperaram 1,35oócitos por animal pela aspiração porultra-som de 5 búfalas durante 8 sema-nas (tabela 4).

Agradecimentos

Os autores agradecem aos criado-res de Búfalos do Vale do Ribeira e àFAPESP (96/5845-1) e ao CNPq (52/1773-96.2) pelo fornecimento de infra-estrutura e de animais.

REFERÊNCIASBIBLIOGRÁFICAS

1. BARUSELLI, P.S. (1992). Ativi-dade ovariana e comportamento re-produtivo no período pós-parto embúfalos (Bubalus bubalis). (Ovarianactivity and reproductive behaviour inpospartum period in buffaloes). SãoPaulo, (Thesis), 99p. Faculdade deMedicina Veterinária e Zootecnia, Uni-versidade de São Paulo.

2. BARUSELLI, P.S. (1993). Manejoreprodutivo de bubalinos. (Reproduc-tive management in buffaloes) SECRE-TARIA DA AGRICULTURA E ABASTE-CIMENTO, INSTITUTO DE ZOOTEC-NIA. Registro, 46p.

3. BARUSELLI, P.S. (1994a). Basicrequirements for artificial inseminationand embryo transfer in buffaloes. Bu-ffalo J., (Suppl 2):53-60.

4. BARUSELLI, P.S. (1994b). Sexu-al behaviour in buffaloes. Proc. IV WorldBuffalo Congress, 1:158-173.

5. BARUSELLI, P.S. (1996). Repro-dução de bubalinos. I Simpósio Brasi-leiro de Bubalinocultura. Cruz das Al-mas- BA, 29p.