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ISOLAMENTO E. CARACTERIZAÇÃO DE MARCADORES. MICROSATÉLITE. EM. DE. Prochilodus scrofa. CARVALHO, Daniel Cardoso; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; GODINHO, Hugo (c); GODINHO, Alexandre (c). Departamento de Farmacologia e Departamento de Zoologia ICB-UFMG. Crescimento populacional. - PowerPoint PPT Presentation
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CARVALHO, Daniel Cardoso; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; GODINHO, Hugo (c);
GODINHO, Alexandre (c)
Departamento de Farmacologia e Departamento de ZoologiaICB-UFMG
Crescimento populacional
Maior demanda de energia elétrica
Construção de represas
Interrupção de vias migratórias
Figura I1: A figura mostra como ocorre o aumento (esquerda) ou diminuição (direita) nonúmero de repetições de microsatélites numa fita de DNA, durante a replicação atravésdo deslizamento da polimerase. (MOXON & WILLS, 1999)
Biblioteca Genômica
Isolamento dos clones
Hibridização
Sequenciamento
Sítio de corte da enzima utilizada deixando extremidades coesivas
Mapa do vetor utilizado
Escolha da enzima apropriada para a montagem da biblioteca
Corte do DNA total com Sau3A Divisão das frações da biblioteca
Técnica de transformação bacteriana utilizada (eletroporação)
Isolamento dos clones da biblioteca seguido de PCR ou mini-prep para a posterior aplicação na
membrana
Oligonucleotídeos utilizados como sonda: CA, TC, CTT,
ACGA, TA, GGA, AAAG,TATC
Hibridização com sondas radioativas
Equipamento de Sequenciamento automático utilizado:
ABI 310
Seqüência de um dos microsatélites encontrados Seqüência de outro dos microsatélites encontrados
PCR dos loci de microsatélite de cada indivíduo.
Gel de poliacrilamida dos produtos de PCR.
Montagem de tabela com nº e freqüência de MS.
Cálculo da heterozigosidade observada e esperada.
Definição da distância genética e fluxo gênico entre as populações.
Verificação da necessidade de construçãode mecanismos de transposição.
Árvore Genealógica