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Colheitas e diagnóstico em microbiologia Covilhã 8 de Outubro 2009

Colheitas e diagnóstico em microbiologia - cld.pt · Identificação dos microrganismos isolados ... Processamento: Exame citológico ... Pesquisa directa de antigénios no exsudado

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Colheitas e diagnóstico

em microbiologia

Covilhã 8 de Outubro 2009

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Quando um clínico suspeita que o doente tem uma infecção por um

microrganismo (bactéria, vírus, fungo ou um parasita) o que

pretende do laboratório de microbiologia?

Que identifique o microrganismo responsável pela infecção

Instituir uma terapêutica correcta

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Quais são as metodologias que

podem ser utilizadas no

diagnóstico microbiológico ?

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Metodologias utilizadas no diagnóstico

microbiológico

1º. Exame bacteriológico

Colheita do produto biológico (urina / pus / expectoração)

Exame microscópico:

Exame a fresco

Coloração de Gram / Coloração de Ziehl Neelsen

Cultura: em meios artificiais

Incubação: 35 a 37º.C durante 24horas

Identificação dos microrganismos isolados

Antibiograma

Emissão do resultado / contacto com o clínico

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Ziehl Neelsen

M. tuberculosis

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Microscopia – coloração de Gram

•Coco / bacilo

•Gram + ou Gram -

Cultura em meio sólido: E. coli

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Identificação bioquímica

Antibiograma

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Equipamentos de identificação e

antibiograma automatizados

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Metodologias utilizadas no diagnóstico

microbiológico

2.º pesquisa de antigénios no produto biológico

Pesquisa do Streptococcus piogenes numa zaragatoa da

orofaringe

Pesquisa de ag. de Legionella pneumophyla e de Pneumococcus

na urina

Pesquisa de adenovirus e rotavírus nas fezes

Imunocromatografia / Imunofluorescência / EIA

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3.º testes serológicos

Colheita de sangue periférico

Para um tubo seco sem anticoagulantes → Soro

Pesquisa de antigénios

Ag Hbs, Ag Hbe – Hepatite B

Pesquisa de anticorpos (IgG / IgM)

Diagnóstico da Rubéola, da Toxoplasmose, da Mononucleoseinfeciosa (EBV) da Hepatite A, etc

Utilizado em microrganismos que não crescem nos meios habituais de cultura

Metodologias utilizadas no

diagnóstico microbiológico

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4.º. Estudos de Biologia Molecular

Pesquisam directamente o DNA ou RNA do microorganismo

Testes rápidos

Testes caros

Testes em desenvolvimento

Pesquisa de Mycobacterium tuberculosis na expectoração

• Microscopia: Ziehl Neelsen de baixa sensibilidade

• Cultura em meio líquido : 10 dias

• Cultura em meio de Lowenstein: 42 dias

Metodologias utilizadas no

diagnóstico microbiológico

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Requisição

Pedido da análise

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Pedido do exame

Requisição correctamente preenchida

Identificação do doente: nome, idade, sexo

Identificação do clínico prescritor

Informação clínica relevante

• Que possa auxiliar o microbiologista na pesquisa do

agente infectante.

• Antibioterapia, algaliação, etc.

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Colheita

Regras gerais de colheita

em microbiologia

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Para que um laboratório obtenha um resultado correcto,

algumas regras de colheita devem ser cumpridas

Colheita deve ser efectuada sempre antes do início da terapêutica

antibiótica:

O antibiótico inibe o crescimento bacteriano

Evitar resultados falsos negativos

Colher amostras representativas :

Efectuar a colheita no local onde há maior probabilidade de isolar

o microorganismo

Infecção urinária: colheita de urina

Infecção respiratória inferior: secreções respiratórias

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Colheita

Utilizar condições de assepsia rigorosa em todas as colheitas

Evitar o contacto da amostra com desinfectantes: têm efeito inibitório

Eliminar a presença de microrganismos colonizantes

Colheita de pús de ferida: evitar contacto com microrganismos da pele circundante

Todas as colheitas são efectuadas para recipientes estérilizados

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Colheita

Número de colheitas:

Varia consoante o tipo de exame

Urocultura: 1 colheita é habitualmente suficiente

Hemocultura: são necessárias 2 a 3 colheitas

Pesquisa de Micobactérias

• Efectuar 3 colheitas em 3 dias consecutivos

• Eliminação intermitente das Micobactérias

Quantidade da amostra:

quantidade suficiente que permita a execução dos exames

solicitados

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Colheita

Pesquisa de anaeróbios

Efectuar a colheita por aspiração com agulha e seringa

Enviar de imediato ao laboratório

Se necessário utilizar meio de transporte

Não aceitar zaragatoas para cultura de anaeróbios

Identificação das amostras:

Todas as amostras biológicas têm que estar correctamente identificadas

Nome do doente, número do processo, etc

Transporte: imediato ao laboratório

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Transporte

Imediato

O mais rápido possível

Em caso de demora utilizar um meio de transporte

• Meio de Stuart

• Meio de Trichomonas

• Meio de Cary Blair

Meio

Stuart

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Conservação dos produtos biológicos

Conservação:

É necessária para que os microrganismos mais sensíveispermaneçam viáveis.

No frigorífico de 2 a 8º. C (para impedir a proliferação demicrorganismos contaminantes)

Estufa a 37º.C

• LCR – Meningococo

• Exsudado vaginal – Gonococo, Trichomonas vaginalis

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Quais as colheitas mais

frequentemente efectuadas no

laboratório de microbiologia ?

Quais as suas particularidades ??

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Infecção urinária

Infecção urinária por Proteus mirabilis

Swarming do Proteus

Urocultura

Colheita asséptica de urina

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Colheita asséptica de urina

Jacto médio

Cateterismo vesical

Punção supra púbica

Saco colector

Cistite

Pielonefrite

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Colheita de urina por jacto médio

Colher a 1ª. urina da manhã (a mais concentrada)

Lavar os genitais externos com água e sabão

Não utilizar soluções antisépticas

Desprezar o 1º. Jacto de urina

Colonização da uretra

Recolher a urina do jacto intermédio

Desprezar o jacto final de urina

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Colheita de urina

no doente algaliado

Metodologia:

Desinfectar o local da punção com álcool 70%

Clampar a algália 10 a 15 minutos

Aspirar a urina com agulha e seringa

A algaliação é responsável por UTI em meio hospitalar

As culturas são muitas vezes polimicrobianas

Microrganismos hospitalares

Não algaliar um doente para fazer colheita de urina

Nunca colher urina do saco colector

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Colheita de urina por punção

supra púbica

Procedimento invasivo pouco utilizado

• Pielonefrite criança com fraldas

• Pesquisa de anaeróbios

A colheita é efectuada com a bexiga cheia

Desinfectar a pele da região supra púbica com um antiséptico

Puncionar a bexiga com agulha e seringa

Aspirar a urina

Os microrganismos isolados são sempre valorizáveis

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Colheita de urina para saco colector

Efectuada em crianças com fraldas

Lavar bem a área genital da criança e secar

Aplicar o saco

Transferir a urina para recipiente esterilizado

Se ao fim de 30 minutos não se observar emissão de urina, retirar o saco e repetir todo o procedimento

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Colheita asséptica de urina

Volume + / - 10 ml

Semear de imediato, conservar no frigorífico de 2 a 8 º. C

A urina é um óptimo meio de cultura

Microrganismos responsáveis por UTI:

Bactérias – E.coli

Fungos – Candida albicans

Parasitas – Trichomonas vaginalis contaminação vaginal

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Hemoculturas

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Quando se faz ?

Doente com febre de origem desconhecida

Pesquisa de microrganismos no sangue periférico

Colheita: de sangue numa veia periférica

Inoculação: do sangue num frasco de hemocultura

Meio de cultura líquido enriquecido

Incubação: dos frasco em equipamentos automatizados

Monitorização contínua do crescimento bacteriano

Consumo de O2

Produção de CO2

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Hemocultura: colheita

desinfecção da pele

Evitar a contaminação por microrganismos da pele

Staphylococcus epidermidis

Norma de colheita

1. Desinfecção da pele com álcool / sol. Iodada

2. Limpeza mecânica

3. Deixar actuar (1 a 2 min.)

4. Deixar secar

5. Colher o sangue

6. Limpar a pele com álcool – remover o iodo (hipersensibilidade)

7. Desinfectar a membrana do frasco com álcool

8. Inocular o sangue no frasco de hemocultura

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Equipamento automatizado para

hemoculturas

Frasco de hemocultura com

meio de cultura liquído

Detecção automática do

crescimento bacteriano

Estão disponíveis 4 tipos de frascos

para hemocultura:

•Adultos: aeróbios e anaeróbios

•Pediátricos

•Micobactérias

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Hemocultura

Volume de sangue inoculado

Adulto – 10 ml / frasco (2 frascos aerobiose e anaerobiose)

Criança – 1 a 4 ml / frasco (1 frasco)

.

Frasco de hemocultura pediátrico

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Hemocultura

Número de colheitas

• 1 colheita: insuficiente - falsos positivos e negativos

• 2 colheitas: suficiente - descartam contaminação

• 3 colheitas: Taxa de recuperação de 99%

Frasco de Hemocultura para Micobactérias

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Hemocultura

Quando efectuar a colheita

Bacteriémia contínua – febre persistente

Sempre que o doente tem febre

Bacteriémia transitória

Os doentes apresentam picos febris

Efectuar a colheita antes do pico febril

Após o calafrio ou após o início da subida da temperatura

Altura em que os microrganismos estão presentes na corrente

sanguínea em maior número.

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Hemoculturas – período de incubação

O período de incubação varia com a suspeita clínica

A informação clínica é fundamental

Hemocultura: 5 dias

Brucelose: 28 dias

Fungos: 14 dias

Mycobacterium avium complex (MAC)

doentes imunocomprometidos

Incubação: 42 dias

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Infecções do aparelho

respiratório inferior:

Pneumonias

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Infecção do aparelho respiratório

inferior – produtos a colher

Expectoração

Expectoração emitida por tosse profunda

Na ausência de expectoração

• Induzir a expectoração: nebulização com NaCl 0,85%.

• Indicar que é expectoração induzida

• Amostra de aspecto salivar

Broncoscopia

Processo invasivo

Elimina a contaminação da orofaringe

• Secreções brônquicas

• Lavado bronco – alveolar, etc

Líquido pleural: derrame pleural

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Expectoração

A expectoração é uma má amostra para estudo microbiológico

Apresenta uma baixa sensibilidade: 30 a 50%

É necessário obter uma amostra produtiva

Recusar amostras salivares

Doentes Internados

• 24h após o internamento estão colonizados por microorganismos hospitalares

• Bacilos Gram negativos

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Expectoração produtiva

Pneumococcus Haemophylus influenza

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Colheita de expectoração

A colheita é efectuada de manhã em jejum, após lavagem daboca com água

Rejeitar :

Amostras salivares

Amostras com restos alimentares

Para estudo de Micobactérias:

Efectuar colheita em 3 dias consecutivos

Colheita do suco gástrico: Má amostra

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Outras metodologias utilizadas no

diagnóstico das pneumonias

Pesquisa de antigénios na urina:

Legionella / Pneumococcus

Imunocromatografia

Serologia:

Microrganismos de difícil crescimento

Chlamydia pneumoniae / Mycoplasma pneumoniae

EIA / IF

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Infecção de ferida

ferida da pele

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Infecção de ferida / ferida da pele

Ferida superficial

o Limpar a lesão com soro fisiológico ou água destilada

o Colheita do exsudado da lesão:

Quando possível colher por aspiração com seringa

Se não é possível colher para 2 zaragatoas

• 1ª. zaragatoa para sementeira em meio sólido

• 2ª. zaragatoa para sementeira em meio líquido de

enriquecimento

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Infecção de ferida

Ferida profunda

o Desinfectar a pele circundante com álcool ou sol. iodada

o Colheita:

Colher a amostra por aspiração com seringa

Efectuar a colheita, o mais profundamente possível

Não tocar nos bordos da ferida

• Não contaminar a amostra com flora da pele circundante

Se não é possível, efectuar a colheita com 2 zaragatoas

(a evitar)

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Pus de ferida

Não efectuar estudos microbiológicos de escaras de decúbito:

Amostras fortemente contaminadas

Culturas polimicrobianas (3 ou mais tipos de microrganismos)

Resultados sem interesse clínico

Tratamento:

Limpeza da ferida

Limpeza cirúrgica

Remoção dos tecidos necrosados

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Exame microbiológico das fezes

Estudo das diarreias

Salmonella spp

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Exame bacteriológico (cultura)

Salmonella / Shigella

E. coli OH 157 - criança

Yersinia enterocolitica / Campylobacter

Clostridium dificille (toxinas A e B)

Responsável por diarreia em doentes a fazer antibioterapia

Associado a infecção hospitalar

Microrganismo formador de esporos

Difícil de erradicar

Imunocromatografia

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Vírus

Rotavírus / Adenovírus

• Crianças

• Imunocromatografia

Colheita fezes

Colher fezes não moldadas

Porções que contenham sangue, pus, ou muco

Rejeitar fezes contaminadas com urina

Conservação :

No frigorífico 2 a 8 º.C

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Colheita de fezes

exame parasitológico

Pesquisa de ovos quistos e parasitas

Colheita em 3 dias consecutivos

A quantidade da amostra:

Deve ser mais ou menos do tamanho de uma noz

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Exsudado nasal

Staphylococcus aureus meticilina resistente

Pesquisa de portadores de MRSA

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Pesquisa de MRSA no exsudado nasal

MRSA - Staphylococcus aureus meticilina resistente

Cada vez mais resistente aos antibióticos (vancomicina /teicoplanina)

Está frequentemente associado a infecção hospitalar

Transmite-se doente a doente (pessoal de saúde)

O combate à infecção por MRSA

É uma prioridade em todos os hospitais a nível mundial

Lavagem das mãos

Isolar os doentes infectados

Fazer o despiste dos portadores nasais de MRSA

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Exsudado nasal pesquisa de MRSA

A quem se deve fazer o despiste de portador de MRSA ?

Doentes que vão ser internados

• Provenientes de outros hospitais (grandes hospitais)

• Provenientes de lares de 3ª. Idade

• Provenientes da comunidade (Co MRSA)

Trabalhadores da área da saúde

• Em caso de surto epidémico

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Exsudado nasal pesquisa de MRSA

Como se faz o despiste?

Colheita Efectuada com zaragatoa na parte anterior das 2 narinas

Exame cultural Em meio de MRSA (meio cromogénico) Resultado ao fim de 24 a 48h

Pesquisa de MRSA por PCR Teste caro Resposta em 2h

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Líquido céfalo raquidiano

Colheita: punção lombar

Transporte: deve ser imediato.

Conservação:

Na estufa 35 - 37 º.C

Nunca refrigerar

Processamento:

Exame citológico (contagem células), Gram e Ziehl-Neelsen

Exame cultural bacteriológico e micológico

Pesquisa de antigénios capsulares

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Exsudado vaginal / uretral

Colheita do exsudado:

Exsudado vaginal - efectuada com 2 zaragatoas

Exsudado uretral - se há emissão abundante de pus, colher

directamente uma gota para uma lâmina de vidro

Trabalhar de imediato

Conservar na estufa a 37º.C.

Nunca refrigerar (Trichomonas vaginalis, Gonococo)

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Exsudado vaginal / uretral

Procedimento laboratorial:

Exame citológico: células, leucocitos, Trichomonas vaginalis

Coloração de Gram:

Lactobacilos – conservação da flora vaginal

Presença de “clue cells” - diagnóstico de vaginose bacteriana

Exame cultural:

Streptococcus agalactiae

Neisseria gonorrhoeae

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Exsudado vaginal / uretral

N. gonorrhoeaeEx. vaginal sem alterações

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Exsudado vaginal / uretral

Ex. micológico – C. albicans Ex.parasitológico – T. vaginalis

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Exsudado vaginal / uretral

Chlamydia trachomatis

Colheita: Microrganismo intracelular Colheita com zaragatoas próprias (escova) Recolher células

Diagnóstico laboratorial: Pesquisa directa de antigénios no exsudado

imunocromatografia, EIA

Diagnóstico serológico Pesquisa de anticorpos IgG e IgM no soro

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Colheitas e diagnóstico

em microbiologia

Covilhã 8 de Outubro 2009

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Exsudado faríngeo

amigdalite estreptocócica

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Exsudado faríngeo

Amigdalite Estreptocócica

Colher o exsudado da orofaringe com 2 zaragatoas

Colher pus - placas brancas na orofaringe

Sem tocar na restante cavidade oral

Exame bacteriológico: demorado (48 – 72h)

Cultura:

• gelose sangue

• meio líquido de enriquecimento

Identificação

Pesquisa directa de antigénios de S. piogenes

Teste rápido

Imunocromatografia