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Estudo dirigido – Biologia Celular –Princípios básicos de Tecnologia de DNA recombinante. 1) O que é a tecnologia de DNA recombinante? 2) O que é um plasmídeo? Quais as principais diferenças entre um plasmídeo e um cromossomo? 3) Cite e explique 3 características essenciais de um vetor de clonagem (por ex., plasmídeo). 4) O que é e como agem enzimas de restrição? 5) Qual(is) das sequências abaixo você esperaria que fosse um sítio de reconhecimento para uma enzima de restrição ? Por que ? TGCCGT ----- TGCGCA ----- TGCTGC 6) Você clonou um cDNA que codifica para um hormônio humano, e você deseja produzir esse hormônio em uma bactéria de maneira a tratar uma doença genética severa. No entanto, quando você insere este cDNA em um plasmídeo e após transformar a bactéria com ele, você não consegue produzir o hormônio na bactéria. Dê duas razões válidas pelo fracasso em produzir o hormônio na bactéria, e sugira uma possível solução para isso. 7) É possível, através da tecnologia de DNA recombinante, fazer uma bactéria produzir uma determinada proteína de mamífero a partir de um cDNA. Mas na grande maioria dos casos, isso não ” é possível a partir do DNA genômico de mamíferos. Explique. 8) Explique os termos transformação e transfecção no contexto da Tecnologia de DNA recombinante. 9) Tomando como base o modelo abaixo de construção de bibliotecas de cDNA e DNA genômico e seus conhecimentos sobre a tecnologia do DNA recombinante, explique resumidamente:

ED_tecnologia Do DNA Recombinante

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Estudo dirigido

Estudo dirigido Biologia Celular Princpios bsicos de Tecnologia de DNA recombinante.1) O que a tecnologia de DNA recombinante?2) O que um plasmdeo? Quais as principais diferenas entre um plasmdeo e um cromossomo?3) Cite e explique 3 caractersticas essenciais de um vetor de clonagem (por ex., plasmdeo).4) O que e como agem enzimas de restrio?5) Qual(is) das sequncias abaixo voc esperaria que fosse um stio de reconhecimento para uma enzima de restrio ? Por que ? TGCCGT ----- TGCGCA ----- TGCTGC6) Voc clonou um cDNA que codifica para um hormnio humano, e voc deseja produzir esse hormnio em uma bactria de maneira a tratar uma doena gentica severa. No entanto, quando voc insere este cDNA em um plasmdeo e aps transformar a bactria com ele, voc no consegue produzir o hormnio na bactria. D duas razes vlidas pelo fracasso em produzir o hormnio na bactria, e sugira uma possvel soluo para isso. 7) possvel, atravs da tecnologia de DNA recombinante, fazer uma bactria produzir uma determinada protena de mamfero a partir de um cDNA. Mas na grande maioria dos casos, isso no possvel a partir do DNA genmico de mamferos. Explique.8) Explique os termos transformao e transfeco no contexto da Tecnologia de DNA recombinante.9) Tomando como base o modelo abaixo de construo de bibliotecas de cDNA e DNA genmico e seus conhecimentos sobre a tecnologia do DNA recombinante, explique resumidamente:

a. O que so e como so produzidas as bibliotecas de cDNA e de DNA genmico (0,2 pontos)b. O que so vetores de clonagem, cite ao menos um tipo de vetores utilizados na tcnica do DNA recombinante (0,2 pontos)c. Cite um forma de selecionar os clones com transfeco eficiente. (0,2 pontos)d. Qual a importncia da enzima de restrio na tecnologia do DNA recombinante e em que etapa da tcnica ela utilizada (0,4)