EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE Mariana Veronez Borgo... · EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA

EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE ESTROGNIO E DROSPIRENONA SOBRE A REATIVIDADE CORONARIANA EM

RATAS OVARIECTOMIZADAS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSAS.

MARIANA VERONEZ BORGO

Tese de Doutorado em Cincias Fisiolgicas

Programa de Ps-Graduao em Cincias Fisiolgicas

Centro de Cincias da Sade Universidade Federal do Esprito Santo

Vitria, ES maio de 2015

MARIANA VERONEZ BORGO

EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE ESTROGNIO E DROSPIRENONA SOBRE A REATIVIDADE CORONARIANA EM RATAS

OVARIECTOMIZADAS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSAS.

Tese apresentada ao Programa de Ps-

Graduao em Cincias Fisiolgicas do Centro de Cincias da Sade da Universidade Federal do Esprito Santo, como requisito para obteno do ttulo de Doutor em Cincias Fisiolgicas.

Orientadora

Prof.a Dra. Glucia Rodrigues de Abreu.

VITRIA

2015

EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE ESTROGNIO E DROSPIRENONA SOBRE A REATIVIDADE CORONARIANA EM RATAS

OVARIECTOMIZADAS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSAS.

MARIANA VERONEZ BORGO

Tese submetida ao Programa de Ps-Graduao em Cincias Fisiolgicas do

Centro de Cincias da Sade da Universidade Federal do Esprito Santo, como

requisito para obteno do ttulo de Doutor em Cincias Fisiolgicas.

Aprovada em

COMISSO EXAMINADORA

Prof.a Dra. Glucia Rodrigues de Abreu Orientadora

Prof.a Dra Anglica Espinosa Barbosa Miranda

Prof.a Dra. Sonia Alves Gouva

Prof. Dr. Helder Mauad

Prof.a Dra. Silvana do Santos Meyrelles

Universidade Federal do Esprito Santo

Vitria, Maio de 2015.

Borgo, Mariana Veronez

EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE ESTROGNIO E DROSPIRENONA SOBRE A REATIVIDADE CORONARIANA EM RATAS OVARIECTOMIZADAS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSAS.

Tese de Doutorado Programa de Ps-Graduao em Cincias Fisiolgicas, Centro

Biomdico, Universidade Federal do Esprito Santo.

Orientadora: Prof Dr Glucia Rodrigues de Abreu

1. Hipertenso 2. Menopausa 3. Drospirenona 4. Reatividade Coronariana

UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPRITO SANTO CENTRO DE CINCIAS DA SADE

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FISIOLGICAS

Ao meu marido , meu parceiro e grande incentivador desta longa caminhada.

AGRADECIMENTOS

A Deus pela oportunidade de crescimento.

A meus pais Mara e Robson e meus irmos Pablo, Lia e Eric por estarmos juntos nessa

caminhada.

Ao meu companheiro de vida Bernardo que me apoiou incondicionalmente, sem questionar

minhas ausncias e me estimulou a prosseguir sempre.

Helena, minha filha, por quem busco ser exemplo.

minha orientadora Prof. Dra. Glacia Rodrigues de Abreu por confiar em mim e oferecer

o apio necessario para o meu desenvolvimento como pesquisadora.

Aos colegas do laboratrio Renato e Laz pela ajuda diria com o tratamento dos animais.

Ao Erick meu agradecimento especial pela parceria fundamental em momento to especial da

minha vida. Ao Fabrcio, pela contribuio com o melhoramento grfico da tese e da

apresentao, alm dos maravilhosos momentos de reflexes filosficas. Simone, com quem

dividi momentos que vo alm da pesquisa.

Aos demais colegas: Suelen, Mariza, Paulo, Vincius, Cntia e Renata pelo apoio e

ensinamentos.

Aos colegas do Laboratrio de Corao Isolado que dividiram comigo os momentos de

experimentao no Languendorff com as angustias e as alegrias desse. Ao Prof. Roger por

abrir as portas do seu laboratrio para o desenvolvimento dos trabalhos.

Aos colegas do Laboratrio de Endocrinologia e Toxicologia Celular'Priscila e Gabriela pelo

apoio fundamental para o desenvolvimanto das anlises histolgicas e de biologia molecular

e ao Prof. Jones por abrir as portas do laboratrio.

Profa Snia Golva por sempre me apoiar e auxiliar com carinho.

A todos os professores e funcionrios do departamento que direta ou indiretamente

participaram dessa conquista.

Muito obrigada!

Tenho a impresso de ter sido uma criana brincando beira-mar, divertindo-me em descobrir uma pedrinha mais lisa ou uma concha mais bonita que as outras, enquanto o imenso oceano da verdade continua misterioso diante de meus olhos.

Isaac Newton

RESUMO

A incidncia de hipertenso arterial aumenta de forma significante em mulheres

aps a menopausa, um fenmeno que parece estar associado reduo dos nveis

de estrognio. A drospirenona (DRSP) uma progestina com propriedades anti-

andrognica e anti-mineralocorticide. No entanto, os seus efeitos sobre a

vasodilatao coronria dependente do endotlio no foram avaliadas. Dessa forma,

este estudo investigou os efeitos da terapia combinada com 17-estradiol (E2) e

DRSP sobre a vasodilatao endotlio-dependente do leito coronariano de ratas

espontaneamente hipertensas ovariectomizadas. Os animais foram divididos

aleatoriamente em quatro grupos: Sham operado (Sham), ovariectomizadas (OVX),

ovariectomizadas tratadas com E2 (E2) e ovariectomizadas tratadas com E2 e

DRSP (E2+DRSP), ambos tratados por 6 semanas. Os parmetros hemodinmicos

foram avaliados diretamente por cateterizao da artria femoral. J a vasodilatao

dependente do endotlio, em resposta bradicinina no leito arterial coronariano, foi

avaliada usando coraes isolados de acordo com o mtodo de Langendorff

modificado. O contedo proteico da enzima xido ntrico sintase endotelial e do

receptor de estrognio alfa (ER-) das coronrias foram avaliadas por Western

blotting. Realizou-se a anlise histolgica das artrias coronrias e avaliou-se o

estresse oxidativo in situ por quantificao de superxido pelo mtodo de dihidroetdio fluorescncia. Nossos resultados demonstraram que a ovariectomia

aumentou a presso arterial sistlica, sendo prevenido pelo tratamento com DRSP.

Ambos os tratamentos preveniram a disfuno endotelial causada pela ovariectomia.

A resposta vasodilatadora no grupo DRSP foi significativamente superior para as

trs concentraes mais elevadas em comparao com o grupo OVX. A expresso

de ER- diminuiu em ratos OVX, efeito que foi restaurado pelas terapias hormonais.

Os parmetros morfomtricos e o estresse oxidativo foram aumentados aps a OVX

e prevenidos em ambos os tratamentos E2 e DRSP. A DRSP no prejudicou as

aes vasculares benficas atribudas ao estrognio, como observado com outras

progestinas utilizadas em grandes triagens clnicas. Assim a associao de DRSP

na terapia hormonal com E2 mostra-se como uma opo teraputica interessante,

especialmente nos quadros de hipertenso ps-menopausal, pois parece atuar na

preveno de doenas coronrias.

ABSTRACT

Drospirenone (DRSP) is a progestin with antihypertensive properties. However, its

effects on endothelium-dependent coronary vasodilation have not been evaluated.

This study investigated the effects of combined therapy with E2 and DRSP on the

endothelium-dependent vasodilation of the coronary bed of ovariectomized

spontaneously hypertensive rats. Animals were randomly divided into Sham operated

(Sham), ovariectomized (OVX), ovariectomized treated with E2 (E2) and

ovariectomized treated with E2 and DRSP (DRSP) groups. Hemodynamic

parameters were evaluated directly by cannulation of the femoral artery.

Endothelium-dependent vasodilation in response to bradykinin in the coronary

arterial bed was assessed using isolated hearts according to modified Langendorff

method. Coronary protein expression of endothelial nitric oxide synthase and

estrogen receptor alpha (ER-) were assessed by Western blotting. Histological

slices of coronary arteries were stained with hematoxylin and eosin, and

morphometric parameters were analyzed. Oxidative stress was assessed in situ by dihydroethidium fluorescence. Ovariectomy enhanced systolic blood pressure, which

was prevented only by the DRSP treatment. OVX causes endothelial dysfunction, an

effect prevented by both treatments; however, the vasodilator response in the DRSP

group was significantly higher at the three highest concentrations compared to the

OVX group. ER- expression decreased in OVX rats restored by the treatments.

Morphometric parameters and oxidative stress were augmented by OVX and

reduced by both the E2 and DRSP treatments. Hormonal therapy with E2 and DRSP

may be an important therapeutic option in the prevention of coronary heart disease in

the hypertensive post-menopausal women.

Keywords: Menopause; Hypertension; Hormone therapy; Drospirenone; Coronary

reactivity.

LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Vias de relaxamento vascular induzidas pelo receptor de estrognio ........ 26

Figura 2. Efeitos da aldosterona na doena cardiovascular. ..................................... 31

Figura 3. Diagrama da sequncia de trabalho para anlise da reatividade vascular

coronariana. .............................................................................................................. 42

Figura 4. Diagrama da sequncia de trabalho para colota dos gos. ..................... 43

Figura 5. Presso de perfuso coronariana basal ..................................................... 47

Figura 6. Resposta vasodilatadora dependente do endotlio ................................... 48

Figura 7. Reatividade vascular ao E2 ........................................................................ 49

Figura 8. Expresso protica da enzima xido ntrico si