EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE Mariana Veronez Borgo... · EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA

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  • EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE ESTROGNIO E DROSPIRENONA SOBRE A REATIVIDADE CORONARIANA EM

    RATAS OVARIECTOMIZADAS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSAS.

    MARIANA VERONEZ BORGO

    Tese de Doutorado em Cincias Fisiolgicas

    Programa de Ps-Graduao em Cincias Fisiolgicas

    Centro de Cincias da Sade Universidade Federal do Esprito Santo

    Vitria, ES maio de 2015

  • MARIANA VERONEZ BORGO

    EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE ESTROGNIO E DROSPIRENONA SOBRE A REATIVIDADE CORONARIANA EM RATAS

    OVARIECTOMIZADAS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSAS.

    Tese apresentada ao Programa de Ps-

    Graduao em Cincias Fisiolgicas do Centro de Cincias da Sade da Universidade Federal do Esprito Santo, como requisito para obteno do ttulo de Doutor em Cincias Fisiolgicas.

    Orientadora

    Prof.a Dra. Glucia Rodrigues de Abreu.

    VITRIA

    2015

  • EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE ESTROGNIO E DROSPIRENONA SOBRE A REATIVIDADE CORONARIANA EM RATAS

    OVARIECTOMIZADAS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSAS.

    MARIANA VERONEZ BORGO

    Tese submetida ao Programa de Ps-Graduao em Cincias Fisiolgicas do

    Centro de Cincias da Sade da Universidade Federal do Esprito Santo, como

    requisito para obteno do ttulo de Doutor em Cincias Fisiolgicas.

    Aprovada em

    COMISSO EXAMINADORA

    Prof.a Dra. Glucia Rodrigues de Abreu Orientadora

    Prof.a Dra Anglica Espinosa Barbosa Miranda

    Prof.a Dra. Sonia Alves Gouva

    Prof. Dr. Helder Mauad

    Prof.a Dra. Silvana do Santos Meyrelles

    Universidade Federal do Esprito Santo

    Vitria, Maio de 2015.

  • Borgo, Mariana Veronez

    EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COMBINADA DE ESTROGNIO E DROSPIRENONA SOBRE A REATIVIDADE CORONARIANA EM RATAS OVARIECTOMIZADAS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSAS.

    Tese de Doutorado Programa de Ps-Graduao em Cincias Fisiolgicas, Centro

    Biomdico, Universidade Federal do Esprito Santo.

    Orientadora: Prof Dr Glucia Rodrigues de Abreu

    1. Hipertenso 2. Menopausa 3. Drospirenona 4. Reatividade Coronariana

    UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPRITO SANTO CENTRO DE CINCIAS DA SADE

    PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FISIOLGICAS

  • Ao meu marido , meu parceiro e grande incentivador desta longa caminhada.

  • AGRADECIMENTOS

    A Deus pela oportunidade de crescimento.

    A meus pais Mara e Robson e meus irmos Pablo, Lia e Eric por estarmos juntos nessa

    caminhada.

    Ao meu companheiro de vida Bernardo que me apoiou incondicionalmente, sem questionar

    minhas ausncias e me estimulou a prosseguir sempre.

    Helena, minha filha, por quem busco ser exemplo.

    minha orientadora Prof. Dra. Glacia Rodrigues de Abreu por confiar em mim e oferecer

    o apio necessario para o meu desenvolvimento como pesquisadora.

    Aos colegas do laboratrio Renato e Laz pela ajuda diria com o tratamento dos animais.

    Ao Erick meu agradecimento especial pela parceria fundamental em momento to especial da

    minha vida. Ao Fabrcio, pela contribuio com o melhoramento grfico da tese e da

    apresentao, alm dos maravilhosos momentos de reflexes filosficas. Simone, com quem

    dividi momentos que vo alm da pesquisa.

    Aos demais colegas: Suelen, Mariza, Paulo, Vincius, Cntia e Renata pelo apoio e

    ensinamentos.

    Aos colegas do Laboratrio de Corao Isolado que dividiram comigo os momentos de

    experimentao no Languendorff com as angustias e as alegrias desse. Ao Prof. Roger por

    abrir as portas do seu laboratrio para o desenvolvimento dos trabalhos.

    Aos colegas do Laboratrio de Endocrinologia e Toxicologia Celular'Priscila e Gabriela pelo

    apoio fundamental para o desenvolvimanto das anlises histolgicas e de biologia molecular

    e ao Prof. Jones por abrir as portas do laboratrio.

  • Profa Snia Golva por sempre me apoiar e auxiliar com carinho.

    A todos os professores e funcionrios do departamento que direta ou indiretamente

    participaram dessa conquista.

    Muito obrigada!

  • Tenho a impresso de ter sido uma criana brincando beira-mar, divertindo-me em descobrir uma pedrinha mais lisa ou uma concha mais bonita que as outras, enquanto o imenso oceano da verdade continua misterioso diante de meus olhos.

    Isaac Newton

  • RESUMO

    A incidncia de hipertenso arterial aumenta de forma significante em mulheres

    aps a menopausa, um fenmeno que parece estar associado reduo dos nveis

    de estrognio. A drospirenona (DRSP) uma progestina com propriedades anti-

    andrognica e anti-mineralocorticide. No entanto, os seus efeitos sobre a

    vasodilatao coronria dependente do endotlio no foram avaliadas. Dessa forma,

    este estudo investigou os efeitos da terapia combinada com 17-estradiol (E2) e

    DRSP sobre a vasodilatao endotlio-dependente do leito coronariano de ratas

    espontaneamente hipertensas ovariectomizadas. Os animais foram divididos

    aleatoriamente em quatro grupos: Sham operado (Sham), ovariectomizadas (OVX),

    ovariectomizadas tratadas com E2 (E2) e ovariectomizadas tratadas com E2 e

    DRSP (E2+DRSP), ambos tratados por 6 semanas. Os parmetros hemodinmicos

    foram avaliados diretamente por cateterizao da artria femoral. J a vasodilatao

    dependente do endotlio, em resposta bradicinina no leito arterial coronariano, foi

    avaliada usando coraes isolados de acordo com o mtodo de Langendorff

    modificado. O contedo proteico da enzima xido ntrico sintase endotelial e do

    receptor de estrognio alfa (ER-) das coronrias foram avaliadas por Western

    blotting. Realizou-se a anlise histolgica das artrias coronrias e avaliou-se o

    estresse oxidativo in situ por quantificao de superxido pelo mtodo de dihidroetdio fluorescncia. Nossos resultados demonstraram que a ovariectomia

    aumentou a presso arterial sistlica, sendo prevenido pelo tratamento com DRSP.

    Ambos os tratamentos preveniram a disfuno endotelial causada pela ovariectomia.

    A resposta vasodilatadora no grupo DRSP foi significativamente superior para as

    trs concentraes mais elevadas em comparao com o grupo OVX. A expresso

    de ER- diminuiu em ratos OVX, efeito que foi restaurado pelas terapias hormonais.

    Os parmetros morfomtricos e o estresse oxidativo foram aumentados aps a OVX

    e prevenidos em ambos os tratamentos E2 e DRSP. A DRSP no prejudicou as

    aes vasculares benficas atribudas ao estrognio, como observado com outras

    progestinas utilizadas em grandes triagens clnicas. Assim a associao de DRSP

    na terapia hormonal com E2 mostra-se como uma opo teraputica interessante,

    especialmente nos quadros de hipertenso ps-menopausal, pois parece atuar na

    preveno de doenas coronrias.

  • ABSTRACT

    Drospirenone (DRSP) is a progestin with antihypertensive properties. However, its

    effects on endothelium-dependent coronary vasodilation have not been evaluated.

    This study investigated the effects of combined therapy with E2 and DRSP on the

    endothelium-dependent vasodilation of the coronary bed of ovariectomized

    spontaneously hypertensive rats. Animals were randomly divided into Sham operated

    (Sham), ovariectomized (OVX), ovariectomized treated with E2 (E2) and

    ovariectomized treated with E2 and DRSP (DRSP) groups. Hemodynamic

    parameters were evaluated directly by cannulation of the femoral artery.

    Endothelium-dependent vasodilation in response to bradykinin in the coronary

    arterial bed was assessed using isolated hearts according to modified Langendorff

    method. Coronary protein expression of endothelial nitric oxide synthase and

    estrogen receptor alpha (ER-) were assessed by Western blotting. Histological

    slices of coronary arteries were stained with hematoxylin and eosin, and

    morphometric parameters were analyzed. Oxidative stress was assessed in situ by dihydroethidium fluorescence. Ovariectomy enhanced systolic blood pressure, which

    was prevented only by the DRSP treatment. OVX causes endothelial dysfunction, an

    effect prevented by both treatments; however, the vasodilator response in the DRSP

    group was significantly higher at the three highest concentrations compared to the

    OVX group. ER- expression decreased in OVX rats restored by the treatments.

    Morphometric parameters and oxidative stress were augmented by OVX and

    reduced by both the E2 and DRSP treatments. Hormonal therapy with E2 and DRSP

    may be an important therapeutic option in the prevention of coronary heart disease in

    the hypertensive post-menopausal women.

    Keywords: Menopause; Hypertension; Hormone therapy; Drospirenone; Coronary

    reactivity.

  • LISTA DE FIGURAS

    Figura 1. Vias de relaxamento vascular induzidas pelo receptor de estrognio ........ 26

    Figura 2. Efeitos da aldosterona na doena cardiovascular. ..................................... 31

    Figura 3. Diagrama da sequncia de trabalho para anlise da reatividade vascular

    coronariana. .............................................................................................................. 42

    Figura 4. Diagrama da sequncia de trabalho para colota dos gos. ..................... 43

    Figura 5. Presso de perfuso coronariana basal ..................................................... 47

    Figura 6. Resposta vasodilatadora dependente do endotlio ................................... 48

    Figura 7. Reatividade vascular ao E2 ........................................................................ 49

    Figura 8. Expresso protica da enzima xido ntrico si