electroforese

7/29/2019 electroforese

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Eletroforeses em acetato de celulose -

Aplicao patologia HematolgicaBIOQUMICA II

Ctia Matias

Dina MatosJoana AlvesMiguel Sousa

5 Junho 2012


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So compostos anfotricos: possuem carga negativa, positiva ou nula

consoante o pH do meio envolvente.

Ponto isoelectrico: Quando as protenas possuem carga nula

em funo do valor de pH do meio

Em meio cido estas comportam-se comobases fracas captando ies H+.

Em meio bsico as protenas comportam-secomo cidos fracos libertando ies H+.


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As protenas estas podem diferir entre elas: - dimenso, - carga eltrica, - pontos isoeltricos.

Utiliza-se uma soluo tampo com um pH bsico osuficiente para superar os pontos isoeltricos detodas as protenas, de modo a todas elas ficaremcom carga negativa e serem todas atradas pelonodo.

O meio de suporte de acetato de celulose utilizadopelo facto de conter poros suficientemente largos, afim de permitir a separao das protenasessencialmente pelas suas cargas eltricas.


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Protenas totais: Albumina: sintetizada no fgado

Globulinas: sintetizada no fgado e por linfocitosB

Funes:- transporte- manuteno da presso coloidosmtica- tamponamento de pH

- imunidade humoral- atividade enzimtica- coagulao- resposta da fase aguda


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Electroforese de zona ou de suporte : nestecaso realizada em Acetato de celulose

Mtodo muito antigo mas muito utilizado empatologia clnica

Simples e fcil de usar

Pode ser lido por densitometriadensitmetro


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pH > pIprotena com carga negativa migra para o

plo positivo

pH


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A visualizao dos resultados deuma electroforese feita atravs da

utilizao de uma coloraoespecfica.

No nosso trabalho prtico foiutilizada a soluo de coloraoPonceau S.


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Os resultados de electroforese podemtambm ser visualizados mediante a

utilizao de aparelhos especficoscomo o densitmetro, e podem sertambm ser exibidos atravs de grficoscomo o cas.o dos protenogramas.


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yy

y 2

1 Alb.

+

---------------------------------------------------sentido da corrida de separao


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Separao baseada na carga das molculas.

Protenas so compostos anfotricos

Dependendo do pH do meio vo apresentarcarga elctrica, e, funo dessa carga,conseguimos a separao por migraoelectrofortica.

S a Albumina corresponde a um s tipo deprotena, dentro das outras poderemos terdiferentes tipos de proteinas.


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yy

y 2

1 Alb.

+

---------------------------------------------------sentido da corrida de separao


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Separao baseada na carga das molculas.

Protenas so compostos anfotricos

Dependendo do pH do meio vo apresentarcarga elctrica, e, funo dessa carga,conseguimos a separao por migraoelectrofortica.

S a Albumina corresponde a um s tipo deprotena, dentro das outras poderemos terdiferentes tipos de proteinas.


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Existem dois tipos bsicos de suportes: ossuportes de gel e os suportes de papel.


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A electroforese de hemoglobina provavelmente o mtodo laboratorial maistil para a separao e medio dehemoglobinas.

Atravs da electroforese, d-se a

separao de diferentes tipos dehemoglobinas, formando-se uma srie debandas coradas.


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Nos testes e anlises s hemoglobinaspretende-se em muitos casos medir aquantidade de Hb A, detectarhemoglobinas anormais, auxiliar odiagnstico de talassemia , anemiafalciforme, entre outras.


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As protenas plasmticas podem serseparadas por electroforese em duasfraces principais, sendo uma delas afraco correspondente albumina e aoutra constituda por globulinas, as quais sediferenciam da albumina por apresentarem

maior tamanho e maior peso molecular.


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A fraco globulnica uma mistura muitocomplexa sendo dividida em 5 fraces:

-alfa 1 -alfa 2

-beta 1

-beta 2

-gama globulinas


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Aumento de 1 e2 globulinas

Fracionamentonormal

2 1 Albumina

Ocorrncia:

Processo inflamatrio agudoInfeces bacterianas

Leses de tecidos

Insuficincia cardaca

Coma


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Fracionamentonormal

2 1 Albumina

Aumento de 2 e

globulinas

Ocorrncia:

Processo inflamatrio crnicoInfeces crnicas

Malignidades

Doenas auto-imunes


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Fracionamentonormal

2 1 Albumina

Fuso das fraesbeta e gama

Ocorrncia:

Cirrose hepticaFuso -

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