GAAMSA

Explicação do teste O vírus da dengue, transmitido pelo mosquito Aedes aegypti e Aedes albopictus estão amplamente distribuídos através de áreas tropicais e subtropicais do mundo.Existem quatro sorotipos distintos conhecidos de dengue (vírus dengue 1, 2, 3 e 4). Em crianças, em geral a infecção é subclínica ou causa uma doença febril auto-limitada. No entanto, se o paciente é infectado duas vezes com um sorotipo diferente, uma doença mais severa, dengue, febre dengue hemorrágica ou síndromede choque do dengue é mais passível de ocorrer. A dengue é considerada como sendo a mais importante doença oriunda de artrópodes devido à morbidade emortalidade humana. NS1 é uma glicoproteína altamente conservada que está presente em altas concentrações no soro dos pacientes infectados por denguedurante o estágio inicial da doença.O antígeno NS1 é encontrado a partir do primeiro dia e permanece até 9 dias depois do estabelecimento da febre em amostras de dengue primária ou secundáriaem pacientes infectados. Em geral o IgM não se torna detectável até 5 a 10 dias a partir do início da doença nos casos de infecção primária de dengue e até 4 a 5dias após o início da doença na infecção secundária. Nas infecções primárias, a IgG se apresenta no décimo-quarto dia e persiste por toda a vida. As infecçõessecundárias demonstram que as IgGs se elevam no espaço de 1 a 2 dias após o estabelecimento dos sintomas e induz a resposta IgM após 20 dias de infecção.[Uso pretendido]O SD BIOLINE DENGUE DUO, teste rápido é um ensaio imunocromatográfico in vitro, em uma etapa projetado para detectar o antígeno NS1 do vírus dadengue e diferençar os anticorpos IgG/IgM do vírus da dengue em soro humano, plasma ou sangue total. O SD BIOLINE DENGUE DUO contém doisdispositivos de teste (lado esquerdo: Dengue NS1 teste Ag e no lado direito: teste Dengue IgG/IgM). O teste rápido Dengue NS1 Ag está no lado esquerdo e éum ensaio in vitro imunocromatográfico, em uma etapa, projetado para a determinação qualitativa do antígeno NS1 do vírus da dengue em soro humano,plasma ou sangue total para o diagnóstico precoce da infecção por dengue. Este dispositivo de teste contém uma membrana em tira, que é pré-revestida comanti-dengue NS1 captura nas regiões das bandas do teste. O conjugado outro coloidal NS1-Ag anti-dengue e o soro, plasma ou sangue total se movem aolongo da membrane cromatograficamente para a região do teste (T) e formam uma linha visível assim que o complexo partículas de outro antígeno-anticorpose formam. O Dengue IgG/IgM Teste Rápido do lado direito é um ensaio imunocromatográfico em fase sólida para a detecção rápida, qualitativa e detecta adiferenciação dos anticorpos IgG e IgM. Contra o vírus da dengue em soro, plasma humano ou sangue total. O teste destina-se a uso profissional para auxiliarno diagnóstico presuntivo entre a infecção primária de dengue e a infecção secundária de dengue. Este teste SD BIOLINE DENGUE DUO fornece apenas umresultado preliminar do teste. No entanto, o isolamento do vírus, a detecção do antígeno em tecidos fixados, RT-PCR e testes sorológicos como o teste deinibição de hemaglutinação, diagnóstico alternativo mais específico, deve ser utilizado de modo a obter a confirmação de uma infecção pelo vírus da dengue.[Princípio]A janela do teste Dengue NS1 Ag contém duas linhas pré-revestidas “T” (NS1 Teste Ag) e “C (Linha Controle). As duas linhas de teste e a linha controle najanela de resultados não são visíveis antes de aplicar a amostra. A linha controle é utilizada para o controle do procedimento e deve sempre se apresentar se oprocedimento é realizado corretamente. O Dengue NS1 Ag pode identificar o antígeno NS1 do vírus da dengue no soro, plasma ou sangue total com um altograu de sensibilidade e especificidade. O Dengue IgM/IgG teste rápido é projetado para detector simultaneamente e diferencia os anticorpos IgG e IgM contrao vírus da dengue em soro humano, plasma ou sangue total. Este teste também pode detectar todos os 4 sorotipos do dengue, utilizando uma mistura deenvelopes de proteínas recombinantes do dengue. O teste Dengue IgG/IgM apresenta 3 linhas pré-revestidas, “G” (Linha teste Dengue IgG), “M” (Linha testeDengue IgM) e “C” (Linha Controle) na superfície do dispositivo. Todas as três linhas na janela de resultados não são visíveis antes da aplicação da amostra. ALinha Controle “C” é utilizada pra o controle do procedimento. A Linha Controle sempre deve se apresentar se o procedimento do teste for realizadoadequadamente e os reagentes da Linha Controle estão funcionando corretamente. Uma linha púrpura “G” e “M” tornam-se visíveis na janela de resultadosse houver anticorpos IgG ou IgM suficientes contra o vírus da dengue na amostra. Se os anticorpos IgG e IgM contra o vírus da dengue não estiverempresentes na amostra, não haverá a formação de linha colorida “G” ou “M”. Quando uma amostra é adicionada no poço de amostras, as IgG e IgM anti-dengue presentes na amostra irão reagir com o conjugado ouro coloidal envelope de proteínas recombinante do vírus da dengue e formar um complexoanticorpos-antígeno. Na medida em que este complexo migra ao longo do comprimento do dispositivo de teste por ação capilar, será capturado pelasrelevantes IgG anti-humana e/ou IgM anti-humanas imobilizadas nas duas linhas de teste ao longo do dispositivo do teste e gerar uma linha colorida.

Materiais fornecidos/ingredientes ativos do componente principalO kit do teste SD BIOLINE Dengue Duo contém os seguintes itens para realizar o ensaio.

10 (dez) Dengue NS1 Ag e Dengue IgG/IgM dispositivo Combo1 (um) frasco x Diluente do ensaio para o teste Dengue IgG/IgM10 (dez) Pipetas capilar de 10Cl para o teste Dengue IgG/IgM10 (dez) Conta-gotas descartável para o teste Dengue NS1 AgInstruções de uso

Ingredientes ativos do componente principal[SD BIOLINE Dengue NS1 Ag]

Conjugado ouro coloidal-anticorpo monoclonal de camundongo Antidengue NS1-ouro coloidal, Linha teste – Anticorpo monoclonal decamundongo anti-dengue NS1 e Linha Controle – IgG anti-camundongo (cabra).

[SD BIOLINE Dengue IgG / IgM]Conjugado ouro coloidal - proteína recombinante do envelope do virus da dengue ouro coloidal , Linha Teste G- Anticorpo monoclonal decamundongo, Linha Teste M- Linha teste G - Anticorpo monoclonal de camundongo anti-humano IgG, Linha Controle – IgG coelho anti-dengueDiluente do ensaio : Tampão Fosfato 100mM e azida sódica 0,1%

Precauções/armazenamento e estabilidade do kit O kit SD BIOLINE DENGUE DUO pode ser estocado a temperature ambiente. A tira este é sensível à umidade e também ao calor. Realizar o testeimediatamente após retirar a tira teste do envelope aluminizado. Não utilizar além do prazo de validade.

Coleta e estocagem das amostras Sangue total

Coletar o sangue total utilizando tubo de coleta (contendo EDTA,citrato ou heparina) por venipunção. Se as amostras desangue total não forem testadas imediatamente, devem ser refrigeradas entre 2°C e 8°C. Quando estocado de 2°C e 8°C asamostras devem ser usadas no prazo de 3 dias. Para um período superior a 3 dias, recomenda-se o congelamento da amostra.As amostras devem estar à temperatura ambiente (1°C – 30°C) antes do uso. O uso do sangue após 3 dias pode causarreação não específica.

Plasma or Serum[Plasma] Coletar o sangue total dentro do tubo de coleta (contend anticoagulantes tais como heparina, EDTA e citrato de sódio) porvenipunção e a seguir centrifugar o sangue para retirar a amostra de plasma.[Soro] Coletar o sangue tojal no tubo de coleta (NÃO deve conter nenhum tipo de anticoagulantes como heparina, EDTA e citrato de sódio)por venipunção, deixar em repouso durante 30 minutos para a coagulação do sangue e a seguir centrifugar o sangue para obter a amostrade soro do sobrenadante.Se as amostras de soro ou plasma não forem testadas imediatamente, devem ser refrigeradas entre 2°C e 8°C. Para períodos de estocagemacima de duas semanas, recomenda-se o congelamento. As amostras devem estar à temperatura ambiente (1°C – 30°C) antes do uso.As amostras de plasma ou soro contendo precipitados podem apresentar resultados de teste inconsistentes. Tais amostras dêem serclarificadas antes do ensaio.PrecauçãoAnticoagulante com heparina, EDTA, e citrato não afetam o resultado. Interferência relevantes conhecias, amostras hemolíticas, fatoresreumatóide e lipemica, amostras ictérica pode conduzir a prejudicar os resultados do teste.Use separadamente os dispositivos capilares ou conta-gotas para cada amostra ou poderá haver um contaminação

CuidadosProduto exclusivo para uso em diagnóstico in vitro.Não comer ou fumar ao manipular as amostras.Utilizar luvas protetoras ao manipular as amostras. Lavar muito bem as mãos após o teste.Evitar respingos ou formação de aerosóis.Limpar os respingos totalmente utilizando um desinfetante apropriado.Descontaminar e descartar todas as amostras, kits reagentes e materiais contaminados como resíduos potencialmente contaminantes emrecipiente apropriado para esta finalidade.Não utilizar o kit reagente se a embalagem estiver danificada ou a selagem rompida.

Procedimento do teste[SD BIOLINE Dengue NS1 Ag].

Remover o dispositivo do teste do envelope aluminizado e colocar em uma superfície placa e seca.Utilizando o conta-gotas descartável, adicionar 3 gotas (cerca de 100㎕ da amostra no poço de amostras (S).Assim que o teste começar a funcionar, v. irá ver uma coloração púrpura se movendo ao longo da janela de resultado no centro do dispositivodo teste.Interpretar os resultados do teste no espaço de tempo de 15 a 20 minutos.Um resultado positivo não irá se alterar uma vez que tenha sido estabelecido entre 15-20 minutos. No entanto, de modo a impeder qualquerresultado incorreto, o resultado do teste não deve ser lido após 20 minutos.

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Resultado inválido - Se a linha colorida não for visível dentro da janela de resultados após a realização do teste, o resultado é consideradoinválido. As instruções de uso podem não ter sido seguidas corretamente ou o teste pode ter se deteriorado. Recomenda-se que a amostra sejatestada novamente.

[SD BIOLINE Dengue IgG / IgM]Resultado negativo Somente a linha controle é visível no dispositivo de teste. Não foram detectados anticorpos IgG e IgM. Retestar em 3-5 dias se houver suspeita deinfecção por dengueResultado IgM positivo A linha controle (“C”) e a linha (“M”) são visíveis no dispositivo de teste. A amostra é positiva para anticorpos IgM contra o vírus da dengue. Istoé uma indicação de infecção primária de dengue.Resultado IgG positivo A linha controle (“C”) e a linha (“G”) são visíveis no dispositivo de teste. A amostra é positiva para anticorpos IgG contra o vírus da dengue. Istoé uma indicação de infecção secundária ou uma infecção passada de dengue.Resultado IgM e IgG positivo A linha controle (“C”) e as linhas IgM (“M) e IgG (“G”) são visíveis no dispositivo de teste. A amostra é positive para anticorpos IgG e IgM contrao vírus da dengue. Isto é uma indicação de infecção tardia primária ou uma infecção secundária precoce.Resultado inválido Se a linha colorida não for visível dentro da janela de resultados após a realização do teste, o resultado é considerado inválido. As instruções deuso podem não ter sido seguidas corretamente ou o teste pode ter se deteriorado. Recomenda-se que a amostra seja testada novamente.

Limitações do testeUm resultado negativo pode ocorrer se a quantidade de antigen Dengue vírus NS1 presente na amostra estiver abaixo do limite de detecção do testeou os antígenos que foram detectados não estão presentes durante o estágio da doença quando a amostra foi coletada.Um resultado negativo não pode excluir uma infecção recente.A presença de Dengue vírus NS1 antígeno significa positividade para uma infecção inicial de dengue. Como em todos os testes diagnóstico todos osresultados devem ser considerados em conjunto com outras informações clínicas disponíveis ao médico.Na infecção inicial e em algumas infecções secundárias, níveis detectáveis de anticorpos IgM podem ser baixos. Alguns pacientes podem não produzirníveis detectáveis de anticorpos dentro dos primeiros sete a dez dias após a infecção. Quando os sintomas persistem, os pacientes podem serretestados 3-4 dias após da primeira amostra.A reatividade sorológica cruzada entre o grupo Flavivírus (vírus da dengue, encefalite de St. Louis, encefalite japonesa, febre West Nile e vírus dafebre amarela) são comuns.

Valores esperados Espera-se que o NS1 possa ser detectado um dia após o inicio da febre e que o mesmo persista até 9 dias tanto na infecção de dengue primário como nainfecção de dengue secundário. Mas, se forem produzidos anticorpos anti-NS1, a detecção de NS1 é inibida. O dengue primário é caracterizado pelapresença de IgM detectável 3 a 5 dias após o início da infecção. A dengue secundária é caracterizada pela elevação da IgG específica 1 a 2 dias após oinício da infecção e na maioria dos casos, em geral, é acompanhado por uma elevação de IgM.

Características de desempenho Sensibilidade e Especificidade Dengue NS1 As amostras utilizadas no teste eram confirmadamente positivas pelo teste RT-PR e/ou cultura viral

*Sensibilidade = 104/112 x 100 = 92.8%, Especificidade = 186/189 x 100 = 98.4% Sensibilidade e Especificidade Dengue IgG/IgM A comparação dos resultados do SD BIOLINE Dengue IgG/IgM com o teste de inibição da hemaglutinação demonstrou que o SD BIOLINE DengueIgG/IgM apresenta uma boa correlação com o teste de hemaglutinação.

*Sensibilidade = 159/160 x 100 = 99.4%, Especificidade = 39/42 x 100 = 93%

Sensibilidade do SD Dengue DUO relacionado com surgimento dos sinais clínicos

*1 – Dengue IgG e/ou IgM *2 – Dengue NS1 e/ou anticorpos IgG & IgMReatividade cruzada do teste com outros Flavivírus mediados e doenças originadas por mosquitos

Precisão – Intra-ensaios e entre ensaios foram determinados pelo teste de 10 amostras três vezes: 6 negativas, 3 baixo positivas, 3 médiopositivas e 3 fortemente positivas. Todos os valores foram corretamente identificados em 100% deles.Para avaliar a interferência do Dengue Duo teste rápido com interferentes relevantemente conhecidos, foram testadas amostras hemolíticas,amostras contendo fator reumatóide, amostras lipêmicas, amostras ictéricas. Estes estudos foi observado que não ocorre interferência com este kit.Sensibilidade analítica – O limite de detecção, que é a menor quantidade do valor alvo que pode ser precisamente detectado deve ser igual ousuperior ao teste líder de mercado Dengue NS1 Ag e o teste de detecção de anticorpos rápido

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS Alcon S, Talmin A, Debrynne M, Fakonar A, Deuel V, Falmand M. 2002. Enzyme-linked immunosorbent assay specific to dengue virus type 1 non structural protein NS1reveals circulation of the antigen in the blood during acute phase of disease in patients experiencing primary or secondary infections. J. Clin. Microbiol. 40: 376-381.Bangti Zhao et al. Cloning full-length dengue type 4 viral DNA sequences: analysis of genes coding for structural proteins. Viriol 155, p77-88, 1986.Dengue haemorrhagic fever: Diagnosis, treatment, prevention e control. WHO 2nd Edition 1997Jan Groen et al. Evaluation of six immunoassays for detection of dengue virus specific immunoglobulin M and G Antibodies. Clin. Diagn. Lab.Immunol. Vol 7(6) p. 867-871, 2000.Kevin R. Porter et al. Evaluation of a commercially available immunoglobulin M capture enzyme-linked immunosorbent assay kit for diagnosingacute dengue infections. Clin. Diagn. Lab. Immunol. Vol 6(5) p741-744, 1999Ludolfs D et al. Serological differentiation of infections with dengue virus serotypes 1 to 4 by using recombinant antigens. J Clin Microbiol 40(11) p 4317-4320, 2002Pryor MJ, Wright PJ. The effects of site-directed mutagenesis on the dimerization and secretion of the NS1 protein specified by dengue virus. Virology 1992, 194: 768-80.Richard M. Kinney et al. Construction of infectious cDNA clones for Dengue 2 virus: strain 16681 e its attenuated vaccine derivative, strain PDK-53. Viriol 230, p300-308, 1997Shuenn-Jue L. Wu et al. Comparison of two rapid diagnostic assays for detection of immunoglobulin M antibodies to dengue virus. Clin. Diagn.Lab. Immunol. Vol 7(1) p 106-110, 2000Shung P., Huang J. Curent advances in dengue diagnosis. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2004 Jul. 11 (4): 42-50.Songee L. Ranch e Paul N. Levett. Evaluation of four methods for detection of immunogloulin M antibodies to dengue virus. Clin. Diagn. Lab. Immunol. Vol 6(4) p 555-557, 1999

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Tecnic a usada

MAC-ELISA Comer cial Rapid o

SD DENG UE IgG/Ig M

Nº de amostras

202202202

Ape nasIgM

positivo

394133

ApenasIgG

positivo

458821

IgG+ IgMamb os

positivos

7632108

IgM Totalpositivo

11573

141

IgG Totalpositivo

121120129

Negativo

424140

Doença

Encefalite japonesaFebre amarela

Malária P.falciparumMalaria P. vivax

Total

Dengue IgM Total deNegativos

Dengu e IgG Total deNegativos

25/2525/2525/2525/25

100/100

25/2525/2525/2525/25

100/100

Dengue NS1 Ag Total deNegativos

25/2525/2525/2525/25

100/100

RT-PCR e/ou Cultura Viral Total

Positivo

SD Dengue NS1Ag

NegativoPositivo

Negativo

Total

104

8

112

3

186

189

107

194

301

Teste Referencia: Teste HI Total

Positivo

SD DengueIgG/IgM

NegativoPositivo

Negativo

Total

159

1

160

3

39

42

162

40

202

Primeiro

2do.

Dias apósinicio dosintoma

1~78~14

15~211~78~14

15~21

Numero deamostras

523036363442

AnticorposIgG

9 (17.3)26 (86.7)35 (97.2)24 (66.7)34 (100)42 (100)

AnticorposIgM

21 (40.4)30 (100)36 (100)8 (22.2)18 (53)

24 (57.2)

Anticorpostotais (*1)

23 (44.2)30 (100)36 (100)24 (66.7)34 (100)42 (100)

NS1 Ag

43 (82.7)15 (50)5 (13.9)

24 (66.7)14 (41.2)

3 (7.2)

Resultadofinal (*2)

49 (94.3)30 (100)36 (100)32 (88.9)34 (100)42 (100)

Número de amostras positivas (%)

Explicación de la prueba Los virus del dengue transmitidos por el mosquito, Aedes aegypti y Aedes albopictus, están ampliamente distribuidos al lo largo de las áreas tropicales y sub-tropicales del mundo. Hay cuatro serotipos conocidos distintos (virus dengue 1, 2, 3 y 4). En niños la infección con frecuencia es subclínica o causa una enfermedadfebril autolimitada. De cualquier manera, si el paciente es infectado por segunda ocasión con un serotipo diferente, una enfermedad más severa, fiebre de denguehemorrágico o shock por el síndrome del dengue se puede presentar. El dengue es considerado como la enfermedad viral más importante originada porartrópodos debido a la mortalidad y morbilidad humana que causa. NS1 es una glicoproteína altamente conservada que está presente en altas concentraciones enlos sueros de pacientes infectados con dengue durante la fase clínica temprana de la enfermedad. El antígeno NS1 es encontrado a partir del primer día y hastanueve días después del ataque de fiebre en la muestra de pacientes infectados por primera o segunda vez por dengue. Usualmente la IgM no es detectable hastacinco o diez días después del inicio de la enfermedad en los casos de infección primaria por dengue y hasta cuatro o cinco días después del inicio de la enfermedaden infecciones secundarias. En infecciones primarias, la IgG aparece hacia el día catorce y persiste de por vida. Las infecciones secundarias muestran elevaciones deIgGs a partir del día uno o dos del inicio de los síntomas e induce una respuesta de IgM después de veinte días de infección. [Uso propuesto] La prueba rápida SD BIOLINE Dengue Duo es un ensayo in Vitro inmunocromatográfico de un paso diseñado para detectar tanto el antígeno NS1 del virus del denguecomo los anticuerpos diferenciales IgG/IgM para el virus del dengue en plasma o suero humano. Esta prueba rápida SD BIOLINE Dengue Duo contiene dos dispositivosde prueba (lado izquierdo; prueba del Ag NS1 del dengue, lado derecho; prueba de IgG/IgM para dengue). La prueba rápida de Ag NS1 para dengue en el ladoizquierdo es una prueba de un paso in Vitro inmunocromatográfica diseñada para la determinación cualitativa del antígeno NS1 del virus del dengue en suero humano,o plasma para el diagnóstico de la infección inicial aguda del dengue. Este dispositivo de prueba contiene una tira con membrana, la cual está precubierta con Ag decaptura NS1 anti-dengue en la región de la banda de prueba. El conjugado de coloide de oro con Ag NS1 anti-dengue y la muestra de suero o plasma se mueven a loslargo de la membrana cromatográficamente hacia la región de prueba (T) y forma una línea visible como el complejo anticuerpo-antígeno-anticuerpo partícula de oro. La prueba rápida de IgG/IgM para dengue en el lado derecho es un ensayo inmunocromatográfico de fase sólida para la detección rápida, cualitativa y diferencial de losanticuerpos IgG e IgM para el dengue de virus en suero o plasma humano. Esta prueba es propuesta para uso profesional para auxiliar en el diagnóstico presuntivoentre una infección primaria y secundaria de dengue. Esta prueba rápida SD BIOLINE Dengue Duo provee solamente un resultado preliminar. Por lo tanto, elaislamiento de los virus, la detección del antígeno en tejidos fijados, RT-PCR y la prueba serológica como la prueba de inhibición por hemoaglutinación, método paradiagnóstico más específico debe ser usada para obtener una confirmación de la infección por el virus del dengue. [Principio] La ventana de resultados del equipo de prueba Ag NS1 para dengue tiene dos líneas precubiertas, “T” (línea de prueba Ag NS1) y “C” (línea de control). Tanto lalínea de prueba como la línea de control no son visibles en la ventana de resultados antes de aplicar cualquier muestra. La línea de control es usada para elcontrol del procedimiento y debería aparecer siempre si el procedimiento de la prueba es realizado correctamente. El Ag NS1 para dengue puede identificar alantígeno NS1 para el dengue en muestras de suero o plasma con un alto grado de sensibilidad y especificidad. La prueba rápida de IgG/IgM está diseñada paradetectar y diferenciar simultáneamente anticuerpos IgG e IgM para el virus del dengue en suero o plasma humano. Esta prueba también puede detectar cuatroserotipos de dengue por medio del uso de una mezcla de proteínas recombinantes de la cubierta del virus del dengue. El equipo de prueba IgG/IgM para denguetiene tres líneas precubiertas “G” (línea prueba de IgG dengue), “M” (línea de prueba IgM dengue) y “C” (línea de control) en la superficie del dispositivo. Lastres líneas en la ventana de resultados no son visibles antes de aplicar cualquier muestra. La “línea de control” es usada para el control del procedimiento. Lalínea de control debería aparecer siempre si el procedimiento de la prueba es realizado adecuadamente y lo reactivos de la prueba de la línea de control estánfuncionando. Unas líneas púrpuras “G” “M” serán visibles en la ventana de resultados si hay suficientes anticuerpos IgG y/o IgM para el virus del dengue en lamuestra. Si no hay anticuerpos IgG y/o IgM para el virus del dengue en la muestra no aparecerá color en “G” y/o “M”. Cuando una muestra es añadida al pozode muestras, los IgGs e IgMs anti-dengue en la muestra reaccionarán con los conjugados de oro coloidal y las proteínas recombinantes de la cubierta del virus deldengue y forman un complejo de anticuerpos-antígeno. Como este complejo migra a lo largo de la longitud del dispositivo de prueba por acción capilar, serácapturado por IgG antihumano y/o IgM antihumano inmobilizados en dos líneas de pruebas a través del dispositivo de prueba y generan una línea de color.

Materiales provistos/ingredientes activos de los principales componentes.El equipo SD BIOLINE Dengue Duo contiene los siguientes artículos para realizar el ensayo.

Dispositivo combo que incluye IgG/IgM para dengue y Ag NS1 para dengue. Diluyente del ensayo para la prueba IgG/IgM dengue. Pipeta capilar de 5㎕. para la prueba IgG/IgM dengue Gotero para la prueba Ag NS1 dengue Instructivo de uso.

Ingredientes activos de los principales componentes. [SD BIOLINE Dengue NS1 Ag]

Una tira de prueba incluye; conjugados de oro (como componente principal): Oro coloidal-NS1 antidengue monoclonal de ratón (0.27 +/-0.05㎍.), Línea de prueba (como componente principal): NS1 antidengue monoclonal del ratón (0.72 +/- 0.14㎍.), Línea de control (comoprincipal componente): IgG de chivo anti-ratón (0.72 +/- 0.14㎍.).

[SD BIOLINE Dengue IgG / IgM]Una tira de prueba incluye; conjugado de oro (como componente principal): Oro coloidal-proteína recombinante de la cubierta del virus del dengue (1+/- 0.2㎍), Línea de prueba “G” (como componente principal): IgG antihumano monoclonal de ratón (5 +/- 1㎍.), Línea de prueba “M” (como componenteprincipal): IgM antihumano monoclonal de ratón (5 +/- 1㎍.), Línea de control (como componente principal): IgG antidengue de conejo (2.5 +/- 0.5㎍.)Amortiguador de ensayo incluído; 100 mM amortiguador de fosfatos (5ml), azida de sodio (0.01% w/w).

Estabilidad y almacenamiento del kit La prueba rápida SD BIOLINE Dengue Duo debe almacenarse a temperatura ambiente. La tira de prueba es sensible a la humedad así como al calor.Realice la prueba inmediatamente después de retirar la tira de prueba del empaque de aluminio. No lo use después de la fecha de caducidad.

Colecta de la muestra y almacenamiento Sangre total

Recolectar la sangre total en un tubo de recolección (utilizando el anticoagulante adecuado como heparina, EDTA o Citrato deSodio) por punción venosa.Si las muestras no se someten de inmediato a prueba deberán refrigerarse a 2~8°C.Cuando está almacenada de 2-8°C, las muestras de sangre deben ser usadas hasta por 3 días.Para periodos de almacenamiento mayores a 3 días, se recomienda la congelación. Las muestras deben alcanzar temperaturaambiente (1-30°C) antes de su uso.El uso de muestras de sangre almacenadas por periodos largos de tiempo mayores a 3 días pueden causar reacción no específica.

Plasma or Serum[Plasma] Colecte sangre en un tubo para colecta (que contenga anticoagulantes tales como la heparina, EDTA y citrato de sodio) por mediode minipuntura y después centrifugue la sangre para obtener la muestra de plasma. [Suero] Colecte la sangre en un tubo de muestra (SIN anticoagulantes tales como heparina, EDTA y citrato de sodio) por medio deminipuntura, deje reposar por 30 minutos para la coagulación de la sangre y después centrifugue para obtener la muestra de suero delsobrenadante. Si las muestras de suero o plasma no son probadas inmediatamente, deberìan refrigerarse de 2 a 8 ºC. Para almacenamientos mayores a dossemanas, se recomienda congelar. Ellas deberán ser llevadas a temperatura ambiente (de 1 a 30ºC) antes de usarse.Las muestras de suero o plasma que contienen un precipitado pueden producir resultados inconsistentes. Tales muestras deben serclarificadas antes de analizarlas. Use pipetas capilares desechables o puntas de pipeta desechables.

AdvertenciasSolamente para uso de diagnóstico in vitro. NO REUSAR el dispositivo de prueba. No comer o fumar mientras que maneja las muestras. Use guantes protectores mientras que maneja las muestras. Después lave las manos completamente. Evite la formación de aerosoles y salpicaduras. Limpie las salpicaduras completamente con un desinfectante adecuado. Descontamine y deseche todas las muestras, los equipos de reacción y los materiales potencialmente como si fueran desperdicios infecciosos enun contenedor para bio-riesgos. No use el dispositivo de prueba si el empaque está dañado o el sello está roto. Las instrucciones deben ser seguidas exactamente para obtener resultados precisos.

Procedimiento de la prueba (Referirse a la figura del procedimiento de la prueba) [SD BIOLINE Dengue NS1 Ag].

Retire el dispositivo de muestra del empaque de aluminio y colóquela en una superficie plana y seca. Con un gotero desechable, añada 3 gotas (cerca de 100㎕) de muestra en el pozo de muestra (S). Como la prueba comienza a funcionar, verá moverse color púrpura a través de la ventana de resultados en el centro del dispositivo de la prueba. Interprete los resultados de la prueba a los 15-20 minutos. Un resultado positivo no cambiará una vez que ha sido establecido a los 15-20 minutos. De cualquier modo, para prevenir cualquier resultadoincorrecto, el resultado de la prueba no deberá ser interpretado después de 20 minutos.

[SD BIOLINE Dengue IgG / IgM]Deje que todos los componentes del equipo y la muestra estén a temperatura ambiente antes de probarlos. Retire el dispositivo de prueba del empaque de aluminio y colóquelo en una superficie plana y seca. Con una pipeta capilar de 10㎕, añada 10㎕ de la muestra de suero o plasma en la línea negra dibujada dentro del pozo de muestra cuadradomarcado con “S”. Añada 4 gotas (cerca de 90-120㎕) del diluyente del ensayo en el pozo de forma redonda. Interprete los resultados de la prueba a los 15-20 minutos. Precaución: No leer los resultados de la prueba después de 20 minutos. La lectura demasiado tardía puede dar resultados falsos.

Interpretación de la prueba (Referirse a la figura de interpretación) [SD BIOLINE Dengue NS1 Ag]

Resultado negativo: La presencia de una línea de color dentro de la ventana de resultados indica un resultado negativo. Resultado positivo: La presencia de dos líneas de color (banda “T” y “C”) dentro de la ventana de resultados, no importa cual línea aparezca

Date Issued : 2010. 0211FK45-Pt-0

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primero, indica un resultado positivo. Resultado inválido: Si no es visible la línea de color dentro de la ventana de resultados después de realizar la prueba se considera el resultado inválido.Las instrucciones pueden no haberse seguido correctamente o la prueba puede haberse deteriorado. Se recomienda que la muestra sea re-analizada.

[SD BIOLINE Dengue IgG / IgM]NegativoSolamente es visible la línea de control en el dispositivo de prueba. No se detectaron anticuerpos IgG/IgM. Repita la prueba en 3-5 días si sesospecha de infección por dengue. IgM positivo La línea de control (C) y la línea IgM (M) están visibles en el dispositivo de prueba. Esto es positivo para los anticuerpos IgM para el virus deldengue. Esto es indicativo de una infección primaria de dengue.IgG positivo La línea de control (C) y la línea IgG (G) están visibles en el dispositivo de prueba. Esto es positivo para los anticuerpos IgG para el virus deldengue. Esto es indicativo de una infección secundaria o anterior de dengue. IgG e IgM positivo La línea de control (C), la línea IgM (M) e IgG (G) están visibles en el dispositivo de prueba. Esto es positivo para los anticuerpos IgM e IgG. Estoes indicativo de una infección por dengue primaria tardía o secundaria temprana. InválidoLa línea de control no aparece. Volumen de muestra insuficiente o técnicas de procedimiento incorrectas son las razones más probables para lafalla de la línea de control. Repita la prueba usando un nuevo dispositivo de prueba.

Limitations of the testUn resultado negativo puede presentarse si la cantidad de antígeno NS1 del virus del dengue presente en la muestra está por debajo de los límites dedetección del ensayo, o los antígenos que son detectados no están presentes durante la etapa de la enfermedad en la cual la muestra fue colectada.Un resultado positivo de la prueba no puede excluir una infección reciente. La presencia de Ag NS1 del virus del dengue puede ser positiva para una infección temprana de dengue. Como todas las pruebas de diagnóstico,todos los resultados deben de ser considerados junto con la información clínica disponible para el médico. En infecciones iniciales o algunas infecciones secundarias los niveles detectables de anticuerpos IgM pueden ser bajos. Algunos pacientes nopueden producir niveles detectables de anticuerpos en los primeros 7 a 10 días después de la infección. Cuando los síntomas persisten, lospacientes deben de ser re-probados 3 a 4 días después de la primera muestra. Reactividad cruzada serológica con el grupo de flavivirus (virus del dengue, encefalitis de San Luis, encefalitis japonesa, virus de la fiebre amarillay del Nilo del Oeste) es común.

Control de calidad interno El dispositivo de prueba SD BIOLINE NS1 Ag tiene “línea de prueba”, “línea de control” en la superficie del casette. Y el dispositivo de prueba SD BIOLINE DengueIgG/IgM tiene “G (línea de prueba IgG Dengue)”, “M (línea de prueba IgM Dengue)” y “C (línea de control)”. Todas las líneas de prueba y la línea de control noson visibles en la ventana de resultados antes de aplicar cualquier muestra. La línea de control es usada para el control del procedimiento. La línea de controldebería aparecer siempre si el procedimiento de la prueba es realizado adecuadamente y los reactivos de la prueba de la línea de control están funcionando.

Valor esperado El NS1 es esperado que sea detectado un día después de la aparición de la fiebre y persista hasta los nueve días tanto en las infecciones primarias comosecundarias de dengue. Pero si son producidos anticuerpos anti-NS1, la detección de NS1 es inhibida. El dengue primario se caracteriza por la presenciade IgM detectable de 3 a 5 días después del inicio de la infección. El dengue secundario se caracteriza por la elevación de IgG específico 1 a 2 díasdespués del inicio de la infección y en la mayoría de los casos es acompañada por una elevación de IgM.

Características de rendimiento Sensibilidad y Especificidad de Ag NS1 dengue. Las muestras usadas en esta prueba fueron confirmadas por RT-PCR y/o cultivo viral.

*Sensibilidad = 104/112 x 100 = 92.8%, Especificidad = 186/189 x 100 = 98.4% Sensibilidad y Especificidad de IgG/IgM Dengue La comparación de resultados de la prueba SD BIOLINE Dengue IgG/IgM con la prueba de Inhibición por Hemoaglutinación (IH) mostró que laprueba SD BIOLINE Dengue IgG/IgM tiene buena correlación con la prueba IH.

*Sensibilidad = 159/160 x 100 = 99.4%, Especificidad = 39/42 x 100 = 93%

Sensibilidad el SD Dengue Duo relacionada a la parición de signos clínicos.

*1: IgG y/o IgM Dengue *2: NS1 Dengue y/o anticuerpos IgG/IgMPrueba de reactividad cruzada con otros Flavivirus trasmitidos por mosquitos.

Precisión : Las precisiones intra e intercorridas han sido determinadas por la prueba de diez muetras, tres veces: 7 de negativos, 6 positivosdébiles, 6 positivos medios y 6 positivos fuertes. 6. Todos los valores fueron colectivamente identificados al 100%. Para evaluar la interferencia del equipo rápido de Dengue duo con muestras conocidas relevantes interferentes,se investigaron las muestras hemolíticas, lasmuestras que contienen factores reumatoides y lipémicas, las muestras ictéricas. En estos estudios, aquellas muestras no interfirieron con este equipo de prueba. Sensibilidad analítica: el límite de detección: la cantidad más pequeña del marcador blanco que puede ser precisamente detectado, ha sido igual osuperior a una prueba lider comercial para la detección de anticuerpos y Ag NS1 para Dengue.

Bibliografía de lecturas sugeridas Prior MJ, Wright PJ. The effects of site-mutagenesis on the dimerization and secretion of the NS1 protein specified by dengue virus. Virology 1993:194. 768-80. SHU, P. HUANG, J. Current advances in dengue diagnosis. Clin. Diag. Lab. Inmunol. 2004 Jul: 11(4): 642-50. Alcon S., Talamin A., Debyrne M., Falconar A., Deubel V., Falmard M. 2002. enzyme-linked inmunoabsorbent assay specific tp dengue virus type1non structural protein NS1 reveals circulation of the antigen in the blood during acute phase of didease in patients experiencing primary orsecondary infections. J. Clin. Microbiol. 40: 376-381. Jan Groen et al. Evaluation of six inmunoassays for detection of dengue virus specific inmunoglobulin M and G antibodies. Clin. Diag. Lab.Inmunol. Vol 7(6) p. 867-871, 2000.

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first, indicates a positive result.Invalid Result : If the color line is not visible within the result window after performing the test, the result is considered invalid. Thedirections may not have been followed correctly or the test may have deteriorated. It is recommended that the specimen be re-tested.

[SD BIOLINE Dengue IgG / IgM]NegativeThe control line is only visible on the test device. No IgG and IgM antibodies were detected. Retest in 3-5 days if dengue infection is suspected.IgM PositiveThe control line (C) and IgM line (M) are visible on the test device. This is positive for IgM antibodies to Dengue virus. This is indicativeof a primary dengue infection.IgG PositiveThe control line and IgG line (G) are visible on the test device. This is positive for IgG antibodies. This is indicative of secondary or past dengue infection.IgG and IgM PositiveThe control line, IgM (M) and IgG line (G) are visible on the test device. This is positive for both IgM and IgG antibodies. This isindicative of a late primary or early secondary dengue infection.InvalidThe control line fails to appear. Insufficient specimen volume or incorrect procedural techniques are the most likely reasons for controlline failure. Repeat the test using a new test device.

Limitations of the testA negative result can occur if the quantity of Dengue virus NS1 antigen present in the specimen is below the detection limits of the assay, orthe antigens that are detected are not present during the stage of disease in which a sample is collected. A negative test result cannot exclude a recent infection.The presence of detectable Dengue virus NS1 Ag may mean positive for early Dengue Infection. As with all diagnostic tests, all results must beconsidered with other clinical information available to the physician. In early infections and some secondary infections, detectable levels of IgM antibodies may be low. Some patients may not produce detectable levelsof antibody within the first seven to ten days after infection. Where symptoms persist, patients should be re-tested 3-4 days after the first specimen.Serological cross-reactivity across the Flavivirus group (Dengue virus, St. Louis encephalitis, Japanese encephalitis, West Nile and yellowfever virus) is common.

Internal Quality ControlThe SD BIOLINE Dengue NS1 Ag test device has “Test Line” and “Control Line” on the surface of the cassette. And the SD BIOLINE DengueIgG / IgM test device has “G(Dengue IgG Test Line)”, “M(Dengue IgM Test Line)” and “C(Control Line)”. All the Test Lines and Control Linesin result window are not visible before applying any samples. The Control Line is used for procedural control. Control line should always appearif the test procedure is performed properly and the test reagents of control line are working.

Expected value The NS1 is expected to be detected 1 day after the onset of fever and persist up to 9 days in both primary and secondary dengue infection. Butif anti-NS1 antibodies produced, the detection of NS1 is inhibited. Primary dengue is characterized by the presence of detectable IgM 3-5 daysafter the onset of infection. Secondary dengue is characterized by the elevation of specific IgG 1-2 days after the onset of infection and in themajority of cases this is generally accompanied by an elevation of IgM.

Performance CharcteristicsDengue NS1 Ag Sensitivity and SpecificityThe specimens used in this test were confirmed by RT-PCR and/or Viral culture.

* Sensitivity = 104/112 x 100 = 92.8 %, Specificity = 186/189 x 100 = 98.4 %Dengue IgG/IgM Sensitivity and specificityThe comparison results of SD BIOLINE Dengue IgG/IgM test with Haemagglutination inhibition (HI) test showed that SD BIOLINEDengue IgG/IgM test had good correlation with HI test.

* Sensitivity = 159/160 x 100 = 99.4 %, Specificity = 39/42 x 100 = 93 %

Sensitivity of SD Dengue Duo related to clinical signs apparition

*1 : Dengue IgG and/or IgM *2 : Dengue NS1 and/or IgG&IgM antibodyCross-reactivity test with other Flavivirus mediated and mosquitoes-borne disease

Precision : Within-run and between-run precisions have been determined by the testing of ten specimens three times : 6 of negative, 3 of lowpositive, 3 of medium positive and 3 of strong positive. All values were collectly identified 100% of the time.To evaluate the interference of Dengue Duo rapid kit with known relevant interfering specimens, the hemolytic samples, rheumatoid factors-contained samples and lipaemic, icteric samples were investigated. In these studies, those specimens did not interfere with this test kit.Analytical sensitivity : the limit of detection ; the smallest amount of the target marker that can be precisely detected ; have been equalor superior to a leading commercial dengue NS1 Ag and antibody detection rapid test.

Bibliography of suggested reading Pryor MJ. Wright PJ. The effects of site-directed mutagenesis on the dimerization and secretion of the NS1 protein specified by denguevirus. Virology 1993; 194:768-80SHU, P.,HUANG, J. Current advances in dengue diagnosis. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2004 Jul; 11(4):642-50.Alcon S., Talamin A., Debryyne M., Falconar A., Deubel V., Falmand M. 2002. Enzyme-linked immunosorbent assay specific to denguevirus type 1 non structural protein NS1 reveals circulation of the antigen in the blood during acute phase of disease in patientsexperiencing primary or secondary infections. J. Clin. Microbiol. 40:376-381.Jan Groen et al. Evaluation of six immunoassays for detection of dengue-virus specific immunoglobulin M and G Antibodies. Clin.Diagn. Lab. Immunol. Vol 7(6) p 867-871, 2000

Explanation of the testDengue viruses, transmitted by the mosquito, Aedes aegypti and Aedes albopictus mosquitoes, are widely distributed throughout the tropical andsubtropical areas of the world. There are four known distinct serotypes (dengue virus 1, 2, 3 and 4). In children, infection is often subclinical or causesa self-limited febrile disease. However, if the patient is infected second times with a different serotype, a more severe disease, dengue hemorrhagicfever or dengue shock syndrome, is more likely to occur. Dengue is considered to be the most important arthropod-borne viral disease due to thehuman morbidity and mortality it causes. NS1 is a highly-conserved glycoprotein that is present at high concentrations in the sera of dengue-infectedpatients during the early clinical phase of the disease. NS1 antigen is found from the first day and up to 9 days after onset of fever in sample ofprimary or secondary dengue infected patients. Usually IgM does not become detectable until 5 to 10 days after the onset of illness in cases ofprimary dengue infection and until 4 to 5 days after onset of illness in secondary infections. In primary infections, IgG appear the 14th day and persistfor life. Secondary infections show that IgGs rise within 1~2 days after the onset of symptoms and induce IgM response after 20 days of infection.[Intended Use]The SD BIOLINE Dengue Duo rapid test is an in-vitro immunochromatographic, one step assay designed to detect both dengue virus NS1 antigen anddifferential IgG / IgM antibodies to dengue virus in human serum, plasma or whole blood. This SD BIOLINE Dengue Duo rapid test contains two test devices(left side ; Dengue NS1 Ag test, right side ; Dengue IgG/IgM test). The Dengue NS1 Ag rapid test in the left-side is an in-vitro immunochromatographic, onestep assay designed for the qualitative determination of dengue virus NS1 antigen in human serum, plasma or whole blood for the diagnosis of early acutedengue infection. This test device contains a membrane strip, which is pre-coated with anti-dengue NS1 Ag capture on test band region. The anti-dengueNS1 Ag -colloid gold conjugate and serum, plasma or whole blood sample move along the membrane chromatographically to the test region (T) and formsa visible line as the antibody-antigen-antibody gold particle complex forms. The Dengue IgG / IgM Rapid Test in the right side is a solid phaseimmunochromatographic assay for the rapid, qualitative and differential detection of IgG and IgM antibodies to dengue virus in human serum, plasma orwhole blood. This test is intended for professional use to aid in the presumptive diagnosis between primary and secondary dengue infection. This SDBIOLINE Dengue Duo provides only a preliminary test result. Therefore, isolation of virus, antigen detection in fixed tissues, RT-PCR and serological test likehaemagglutination-inhibition test, more specific alternative diagnosis method must be used in order to obtain a confirmation of dengue virus infection.[Principle]The Dengue NS1 Ag test device result window has 2 pre-coated lines, "T" (NS1 Ag Test Line) and "C" (Control Line). Both the Test Line and theControl Line in result window are not visible before applying any samples. The Control Line is used for procedural control and should always appear ifthe test procedure is performed correctly. The Dengue NS1 Ag can identify dengue virus NS1 antigen in serum, plasma or whole blood specimens witha high degree of sensitivity and specificity. Dengue IgG / IgM rapid test is designed to simultaneously detect and differenciate IgG and IgM antibodiesto dengue virus in human serum, plasma or whole blood. This test also can detect all 4 dengue serotypes by using a mixture of recombinant dengueenvelope proteins. Dengue IgG / IgM test device has 3 pre-coated lines, “G” (Dengue IgG Test Line), “M” (Dengue IgM Test Line) and “C” (ControlLine) on the surface of the device. All three lines in result window are not visible before applying any samples. The “Control Line” is used forprocedural control. Control line should always appear if the test procedure is performed properly and the test reagents of control line are working. Apurple “G” and “M” lines will be visible in the result window if there are enough IgG and/or IgM antibodies to Dengue virus in the sample. If IgGand/or IgM antibodies to Dengue virus are not present in the sample, there is no color appearance in “G” and/or “M”. When a specimen is added tothe sample well, anti-dengue IgGs and IgMs in the specimen will react with recombinant dengue virus envelope proteins-colloidal gold conjugates andforms a complex of antibodies-antigen. As this complex migrates along the length of the test device by capillary action, it will be captured by therelevant anti-human IgG and/or anti-human IgM immobilized in two test lines across the test device and generate a colored line.

Materials provided/ Active ingredients of main componentsSD BIOLINE Dengue Duo kit contains the following items to perform the assay.

Dengue NS1 Ag and Dengue IgG/IgM Combo device Assay diluent for Dengue IgG/IgM test 10㎕ capillary pipette for Dengue IgG/IgM testDisposable dropper for Dengue NS1 Ag testInstruction for use

Active ingredients of main components[SD BIOLINE Dengue NS1 Ag]

1 test strip included ; Gold Conjugates (as main component) : Mouse monoclonal anti-dengue NS1 – gold colloid (0.27±0.05㎍), Test Line (as maincomponent) : Mouse monoclonal anti-dengue NS1 (0.72±0.14㎍), Control Line (as main component) : Goat anti-mouse IgG (0.72±0.14㎍)

[SD BIOLINE Dengue IgG / IgM]1 test strip included ; Gold Conjugates (as main component) : Recombinant Dengue virus envelope protein – gold colloid (1± 0.2㎍), Test Line “G” (as main component) : Mouse monoclonal anti-human IgG (5±1㎍), Test Line “M” (as main component) :Mouse monoclonal anti-human IgM (5±1㎍), Control Line (as main component) : Rabbit anti-Dengue IgG (2.5±0.5㎍),Assay buffer included ; 100 mM Phosphate buffer (5 ml), Sodium azide (0.01% w/w)

Kit Storage and StabilityThe SD BIOLINE Dengue Duo test should be stored at room temperature. The test strip is sensitive to humidity and as well as to heat. Performthe test immediately after removing the test strip from the foil pouch. Do not use it beyond the expiration.

Specimen Collection, Storage and PrecautionWhole blood

Collect the whole blood into the collection tube (containing anticoagulants such as heparin, EDTA and sodium citrate) by venipuncture.If blood specimens are not immediately tested, they should be refrigerated at 2~8°C.When stored at 2~8°C, the blood specimens should be used within 3 days.For storage period longer than 3 days, freezing is recommended. They should be brought to room temperature (1~30°C) prior to use.Using the blood specimens in the long-term keeping more than 3 days can cause non-specific reaction.

Plasma or Serum[Plasma] Collect the whole blood into the collection tube (containing anticoagulants such as heparin, EDTA and sodium citrate) byvenipuncture and then centrifuge blood to get plasma specimen.[Serum] Collect the whole blood into the collection tube (NOT containing anticoagulants such as heparin, EDTA and sodium citrate) byvenipuncture, leave to settle for 30 minutes for blood coagulation and then centrifuge blood to get serum specimen of supernatant.If plasma or serum specimens are not tested immediately, they should be refrigerated at 2~8°C. For storage period longer than 2weeks, freezing is recommended. They should be brought to room temperature (1~30°C) prior to use.Plasma or serum specimens containing a precipitate may yield inconsistent test results. Such specimens must be clarified prior to assaying.

PrecautionAnticoagulants such as heparin, EDTA, and citrate do not affect the test result.As known relevant interference, hemolytic samples, rheumatoid factors-contained samples and lipaemic, icteric samples can lead to impair the test results.Use separately disposable capillary pipettes or pipette tips for each sample in order to avoid cross-contamination of either sampleswhich could cause erroneous results.

WarningsFor in vitro diagnostic use only. DO NOT RE-USE test device. Do not eat or smoke while handling specimens.Wear protective gloves while handling specimens. Wash hands thoroughly afterwards.Avoid splashing or aerosol formation.Clean up spills thoroughly using an appropriate disinfectant.Decontaminate and dispose of all specimens, reaction kits and potentially contaminated materials, as if they were infectious waste, in a biohazard container.Do not use the test kit if the pouch is damaged or the seal is broken.The instruction must be followed exactly to get accurate results.

Procedure of the test (Refer to figure of Test Procedure)[SD BIOLINE Dengue NS1 Ag].

Remove the test device from the foil pouch, and place it on a flat, dry surface.With a disposable dropper, add 3 drops (about 100㎕) of specimen into the sample well (S).As the test begins to work, you will see purple color move across the result window in the center of the test device.Interpret test results at 15~20 minutes.A positive result will not change once it has been established at 15 ~20 minutes. However, in order to prevent any incorrect results,the test result should not be interpreted after 20 minutes.

[SD BIOLINE Dengue IgG / IgM]Allow all kit components and specimen to room temperature prior to testing.Remove the test device from foil pouch, place it on a flat, dry surface.With 10㎕ capillary pipette, add 10㎕ of specimen drawn to black line into the square sample well marked “S”.Add 4 drops (about 90~120㎕) of assay diluent to the assay diluent well round shaped.Interpret test results at 15~20 minutes.Caution : Do not read test results after 20 minutes. Reading too late can give false results.

Interpretation of the test (Refer to figure of Interpretation)[SD BIOLINE Dengue NS1 Ag]

Negative Result : The presence of each one color line within the result window indicates a negative result.Positive result : The presence of two color lines (“T” band and “C” band) within the result window no matter which line appears

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Techniqueused

MAC-ELISACommercial Rapid

SD Dengue IgG/IgM

No. ofsamples

teste

202202202

IgMpositive

only

394133

IgGpositive

only

458821

IgG+IgMBoth

positive

7632108

Total IgMpositive

11573141

Total IgGpositive

121120129

Negative

424140

2.

3.

Disease

Japanese EncephalitisYellow Fever

Malaria P. falciparumMalaria P. vivax

Total

Dengue IgMNegative/Total

Dengue IgGNegative/Total

25/2525/2525/2525/25

100/100

25/2525/2525/2525/25

100/100

Dengue NS1 AgNegative/Total

25/2525/2525/2525/25

100/100

RT-PCR and/or Viral cultureTotal

Positive

SD Dengue NS1Ag

NegativePositive

Negative

Total

104

8

112

3

186

189

107

194

301

Reference assay : HI testTotal

Positive

SD DengueIgG/IgM

NegativePositive

Negative

Total

159

1

160

3

39

42

162

40

202

1st

2nd

Days aftersymptom

onset

1~78~1415~21

1~78~1415~21

No. ofsamples

523036363442

IgGantibody

9 (17.3)26 (86.7)35 (97.2)24 (66.7)34 (100)42 (100)

IgMantibody

21 (40.4)30 (100)36 (100)8 (22.2)18 (53)

24 (57.2)

TotalAntibody(*1)

23 (44.2)30 (100)36 (100)24 (66.7)34 (100)42 (100)

NS1 Ag

43 (82.7)15 (50)5 (13.9)

24 (66.7)14 (41.2)

3 (7.2)

FinalResult(*2)

49 (94.3)30 (100)36 (100)32 (88.9)34 (100)42 (100)

No. of positive samples (%)

1.

2.3.

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Date Issued : 2010. 0211FK45-En-0

English

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1.2.3.4.5.

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Técnica usada

MAC-ELISAComercial rápida

SD Dengue IgG/IgM

Núm. demuestrasprobadas

202202202

Solopositivo a IgM

394133

Solopositivo

a IgG

458821

positivo a IgG+IgM

7632

108

Total IgMpositivo

11573141

Total IgGpositivo

121120129

Negativos

424140

Enfermedad

Encefalitis JaponesaFiebre amarilla

Malaria P. falciparumMalaria P. vivax

Total

IgM DengueNegativo/Total

IgG DengueNegativo/Total

25/2525/2525/2525/25

100/100

25/2525/2525/2525/25

100/100

Ag NS1 DengueNegativo/Total

25/2525/2525/2525/25

100/100

RT-PCR y/o Cultivo ViralTotal

Positivo

SD Dengue NS1Ag

NegativoPositivo

Negativo

Total

104

8

112

3

186

189

107

194

301

Prueba de Referencia: IHTotal

Positivo

SD DengueIgG/IgM

NegativoPositivo

Negativo

Total

159

1

160

3

39

42

162

40

202

1er.

2do.

Días despuésdel inicio de

síntomas

1~78~14

15~211~78~14

15~21

Núm. demuestras

523036363442

AnticuerposIgG

9 (17.3)26 (86.7)35 (97.2)24 (66.7)34 (100)42 (100)

AnticuerposIgM

21 (40.4)30 (100)36 (100)8 (22.2)18 (53)

24 (57.2)

AnticuerposTotal (*1)

23 (44.2)30 (100)36 (100)24 (66.7)34 (100)42 (100)

Ag NS1

43 (82.7)15 (50)5 (13.9)24 (66.7)14 (41.2)3 (7.2)

ResultadoFinal (*2)

49 (94.3)30 (100)36 (100)32 (88.9)34 (100)42 (100)

Núm. de muestras positivas

GAAMSA

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EnglishEspañolPortuguês

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