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FUNDAMENTOS DE ENGENHARIA GENÉTICA
Prof. Ana Rita Rainho
Manipulação genómica
Genoma humano: 3 mil milhões de
pares de bases Cada molécula
contém dezenas de milhão de pares de bases
Como encontrar um determinado gene?Como o separar dos restantes?
Endonucleases de restrição
Mecanismo natural de defesa de algumas bactérias contra os vírus que as infectam.
Actuam em pontos específicos, promovendo o corte da cadeia de DNA viral.
Enzimas de Restrição
Corte de ADN efectuado pela enzima Eco RI.
Só cortará a molécula se encontrar uma sequência específica de 5’ para 3’. Sequência é igual nas duas cadeias, nos dois sentidos.Repete o procedimento sempre que encontrar a sequência.Em cada cadeia simples ficam pequenas extensões – extremidades coesivas.
Formação de um DNA recombinante
Permite a inserção de um gene específico noutro organismo.
Utiliza ligases de DNA que unem fragmentos por complementari-dade de bases às extremidades coesivas que ficaram livres depois da acção das endonucleases de restrição.
Técnica do DNA recombinante
Permite inserir genes de um organismo noutro, conferindo-lhe novas propriedades.
Utiliza vectores que transportam o gene de um organismo para o outro Ex: plasmídeos
das bactérias
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Obtenção de plantas transgénicas
Obtenção de animais transgénicos
DNA complementar
Permite obter DNA a partir de um mRNA maduro.Facilita a obtenção de DNA no seu estado mais puro.
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(PC
R)
Aplicações das Técnicas de Engenharia Genética
PCR – permite a ampliação de uma amostra de material genético para aplicar em vários testes sem perder a amostra inicial.
Enzimas de Restrição (electroforese) – Diagnóstico genético (doenças, testes de paternidade, investigação forense).
DNA recombinante/DNA complementar: OGMs
Utilização de microrganismos geneticamente modificados como “fábricas” de substâncias com interesse (ex: antibióticos, insulina, hormona de crescimento);
Modificação genética de organismos para adquirir determinadas características com interesse (ex: “arroz dourado”, plantas com capacidade de resistir a infecções).
Terapia Génica Somática – substituição (em crianças) de genes que provocam doenças hereditárias num indivíduo adulto.
Terapia Génica Somática
Permite a substituição (em crianças pequenas) de genes que provocariam doenças hereditárias quando se tornasse
num indivíduo adulto
Electroforese em gel
Utilização de enzimas de restrição para seccionar cadeias de DNA
Como cada indivíduo tem uma sequência genómica única, o resultado são padrões específicos individuais
A aplicação de uma corrente eléctrica provoca a migração dos fragmentos de acordo com o seu tamanho.
Electroforese em gel
Aplicação da corrente eléctrica nas amostras
A semelhança do padrão das bandas indica semelhança
no genoma dos indivíduos
Aplicações da técnica de Electroforese em gel(DNA fingerprint)
