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GENÉTICA FORENSES

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Combined DNA Index System

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CODISCombined DNA Index System

• Combina a ciência forense + tecnologia eletrônica

Implantado pelo FBI 1998

• criminosos• evidências coletadas na cena do crime• Entre outros

DNA extraído de

Todos os estados americanos podem ter acesso ao Banco de DNA

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Sociedade Internacional de Genética Forense (ISFG)

Avaliam:

• Reprodutibilidade e exatidão das metodologia utilizadas

O FBI acrescenta

• Controle do laboratório• Realização de periódicos testes de

proficiências ( a cada 180 dias)• Auditorias anuais

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No Brasil

Os testes de proficiência são realizados pelo grupos _ ISFG

• Espanhol• Português

Esses testes constituem:

• Analise de amostras de sangue o outros fluidos biológicos que simulam um caso forense

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Para analise do DNA forense

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Material de coleta

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Cronologia

1985_ Alec Jeffreys• Desenvolve as

sondas multi-locús para a caracterização de vinculo genético

1988_ FBI• Começa a

realizar analises por sondas

1991_ STR• Marcador

fluorescentes são descritos pela primeira vez

1998_ FBI• Cria o CODIS

1999_ Brasil• Resolução SSP-

194 em 2/Ago

2000_ Projeto Genoma• Finaliza o

sequênciamento• Concluído em

Abril de 2003

2004_ SENAP • Online

protocolos de padronização de exame de DNA em pericia criminal

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Os testes de DNA podem ser utilizados:

Teste de paternidade•Caracterização de vínculos genéticos

Desastres em massa• Identificação de fragmentos humanos

Investigação histórica

Identificação de pessoas desaparecidas

Identificação de militares

Banco de DNA de criminosos

Banco de evidencias biológicas

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Amostras Biológicas para analise forense

Sangue

Esfregaços bucais

Saliva

Ossos

Dentes

Tecidos

Órgãos

Cabelo

Sêmen

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Importante

Polimorfismo Genético É a coexistência de alelos múltiplos em um lócus cromossômico; regiões do genoma nas quais existem variações entre as pessoas.

Polimorfismo de sítio de restrição (RFLP)

Polimorfismos de inserção/deleção (indels)

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Recuperação de DNA em amostras de tecidos e fluidos

Amostra (tecidos e fluidos)

Quantidade recuperada Análise de RFLP Análise de STR

1mL de sangue 20 a 40mg SIM SIM

Manchas de sangue seco de 1cm3 200ng NÃO SIM

Sêmen 150 a 300mg por mL SIM SIM

Sêmen (esfregaço vaginal pós-coito)

0 a 3mg (DNA dos espermatozóides) SIM SIM

Cabelo com raiz (contendo bulbo capilar)

1 a 750ng por fio NÃO SIM

Saliva 1 a 10mgpor mL SIM SIM

Retirado de “Os exames de DNA nos Tribunais”, Revista Ciência Hoje (vol. 29, nº 169 - março/2001)

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OBS: Quantas regiões são necessárias?

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STRs

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Qual a importância desses polimorfismos?

Fonte de variabilidade;

• “DNA fingerprint”;Permitem construir um perfil genético indivíduo-específico

importante em Genética Forense

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Alec Jeffreys, 1985

DNA fingerprint

Revolucionou a análise do DNA

Caracteriza o vinculo genético

Regiões polimórficas do tipo VNTR

• Uma fração de DNA repetido consiste de regiões denominadas mini-satélites ou repetição em tandem de número variável (VNTR – “variable number of tandem repeats”).

• Os VNTRs exibem uma enorme variabilidade e são constituídos de 9 à 100 pares de bases repetidos sequencialmente em loci cromossômicos.

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Por que analisar tais polimorfismos no DNA?

Determinação de paternidade;

Resolução de casos criminais envolvendo:

Estupro;Homicídio;Rapto;Troca ou abandono de crianças.

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DE ONDE PODE SER EXTRAÍDO O DNA?

Sangue padrão-ouro;

células epiteliais da mucosa oral: saliva, pontas de cigarro, selos e envelopes, gomas de

mascar, copos, tampas de caneta mordidas,...;

Pêlos e fios de cabelo (com ou sem o bulbo capilar);

Unhas;

Esfregaços;

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Manchas de material biológico: líquido seminal, urina, saliva, sangue;

Tecidos de biópsias cirúrgicas;

Ossadas (carbonizadas ou não);

Tecidos mumificados ou congelados;

Células deixadas por impressão digital;

Dentes;

outras

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Métodos disponíveis para utilização:

VNTRs estudados com sondas multilocais;

STRs estudados com PCR;

DNA mitocondrial (mtDNA);

STRs do Cromossomo Y;

Técnicas mais recentes.

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VNTRs estudados com sondas multilocais

Princípio do método: após clivagem por endonucleases, cada indivíduo tem um padrão de bandas específico com tamanhos determinados pela presença, ou não, do sítio da enzima e pela quantidade de repetições em tandem. Para que possa-se visualizar, esses fragmentos devem ser hibridizados a sondas radioativas de seqüência invariável.Técnica de custo razoável;

DNA não degradado;

Quantidade suficiente de DNA;

Várias dificuldades inerentes à técnica.

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STRs estudados com PCR

Princípio do método: Reação de PCR utilizada para copiar extensivamente várias regiões de STR, fornecendo fragmentos de tamanhos diferentes visualizados por eletroforese em gel de poliacrilamida ou por seqüenciamento

Vantagem sobre a técnica de VNTR: como o DNA é “amplificado”, a amostra a ser analisada pode ter uma quantidade inicial muito menor.

Mesmo existindo contaminação por DNA de outras espécies, a técnica de PCR é específica o suficiente para amplificar apenas o DNA humano

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Características

importantes:Tamb

ém conté

m regiõe

s polimórficas que permitem a “individualização

”

Descendent

es recebem

apenas da

mãe permi

te traçar

a linhag

em materna de uma

pessoa

É mais resistente à degradação que o DNA nucle

ar

Taxa mutaci

onal do

mtDNA é 5-10 vezes maior que a

do DNA

nuclear

poucos mecanismos

de reparo permit

em que as variaç

ões nos

nucleotídeos sejam acumuladas

Princípio do método: Reação de PCR com o objetivo de

copiar extensivamente regiões polimórficas presentes no DNA

mitocondrial, analisado posteriormente por

sequenciamento

mtDNA

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mtDNA

• Utilizado na identificação de corpos em grandes desastres comparar a seqüência de interesse com a obtida nos possíveis irmãos ou ascendentes maternos;

• Identificação de maternidade sem o pai (p/ filhos e filhas)

• Não identifica um indivíduo específico;

• Estudos históricos ou evolutivos.

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STRs crY

Características importantes:• Também contém regiões polimórficas que permitem a “individualização”;

• Homens recebem apenas do pai permite traçar a linhagem paterna de um homem;

• Crossing-over com o crX em regiões homólogas entre os 2 cromossomos.Identificação de paternidade sem o pai (p/

filhos);

Elucidação de estupro (mistura de DNA);

Não identifica um indivíduo específico;

Estudos históricos ou evolutivos;

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Novas técnicas foram desenvolvidas

Analise de Repeti ções curtas ou• STRs

Com gel de• poliacri la

mida corado por prata

Leituras• Laser

• Com indicadores marcados com fl uoróforos.

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Técnicas mais recentes

SNPs

• Minissequenciamento;• São muito numerosos;• Baixa taxa de mutação;• Requer maior nº de marcadores;

Indels

Estudados em produtos de amplificação muito curtos (50pb ou menos).

Vantagem sobre STRs em estudos de DNA extremamente degradado (ex: cadáver em estado avançado de decomposição ou carbonizado)

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Referenciasinteressantes

http://www.sspds.ce.gov.br/noticiaDetalhada.do?tipoPortal=1&codNoticia=1452&titulo=Reportagens&action=detail

http://super.abril.com.br/cotidiano/dna-nao-prova-mais-nada-626306.shtml

http://cienciacontraocrime.blogspot.com.br/2009/08/falsificacao-de-dna.html