Graduação em BiotecnologiaDisciplina de Técnicas Instrumentais

Prof. Fabricio Rochedo Conceiçãofabricio.rochedo@ufpel.edu.br

08 de abril de 2011

CENTRIFUGAÇÃOCENTRIFUGAÇÃO

* A centrifugação é um processo de separação em que a força centrífuga relativa gerada pela rotação da amostra é usada para sedimentar sólidos em líquidos, ou líquidos imiscíveis de diferentes densidades, separando-os

* É usada em diferentes aplicações laboratoriais, industriais e domésticas

CENTRIFUGAÇÃOCENTRIFUGAÇÃO CENTRIFUGAÇÃOCENTRIFUGAÇÃO

• A força centrífuga relativa (FCR) é gerada quando uma partícula ou conjunto de partículas é sujeito a um movimento circular

• A força centrífuga relativa é calculada da seguinte forma:

FCR = 0.00001118 ×R ×N2

R= raio de centrifugação em centímetros (cm)N= velocidade de centrifugação em rotações por minuto (rpm)

• A unidade de medida da força centrífuga relativa é o "g", sendo 1g equivalente à aceleração da gravidade na superfície da terra

Princípio FísicoPrincípio FísicoPrincípio FísicoPrincípio Físico

CENTRÍFUGASCENTRÍFUGASCENTRÍFUGASCENTRÍFUGAS

São equipamentos que aplicam a força centrífuga relativa para separar as partículas de uma solução

* Células

* Vírus

* Organelas

* DNA, RNA e proteínas ...

• Separação de macromoléculas ou células recorrendo a

gradiente de concentração da solução base usada para a separação das

partículas

CENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIALCENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIALCENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIALCENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIAL

CENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTECENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTECENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTECENTRIFUGAÇÃO POR GRADIENTE

• “Peletização”

• Sobrenadante + “pellet” (sedimento)

TIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGAS

BancadaBancadaBancadaBancada ClínicaClínicaClínicaClínica

4.600g

0,2 – 75 mL

17.000g

2 – 180 mL

MicrocentrífugaMicrocentrífugaMicrocentrífugaMicrocentrífuga

16.000g

0,2 – 2 mL

TIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGASTIPOS DE CENTRÍFUGAS

Alta velocidadeAlta velocidadeAlta velocidadeAlta velocidade

15.000g

30 – 500 mL

UltracentrífugaUltracentrífugaUltracentrífugaUltracentrífuga

800.000g

10 – 60 mL

ROTOR DE ÂNGULO FIXOROTOR DE ÂNGULO FIXOROTOR DE ÂNGULO FIXOROTOR DE ÂNGULO FIXO

ROTOR OSCILANTE ROTOR OSCILANTE ROTOR OSCILANTE ROTOR OSCILANTE

• Concentração de amostras• Mais rápido• Pode danificar as células

• Separa suavemente as células• Mais demorado

COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?

1- Escolha da centrífuga e dos tubos - Volume - Composição do tubo: Baixa FCR (plástico, vidro ...) Alta FCR (nitrocelulose, polialômero ...) - Composição da amostra: Aquosa (plástico, vidro) Orgânica (vidros e certos plásticos)

2- Equilibre os tubos *** - Os tubos colocados frente a frente devem ter o “mesmo peso” - Microcentrífuga: ajuste pelo volume e não pelo peso - Equilibrar juntamente com tampas e suportes (partes removíveis) - Preencha os tubos até 1 a 2 cm da borda

3- Confira o peso ***

4- Coloque os tubos sempre na mesma orientação *Aba do Eppendorf

COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?

5- Sempre colocar a cobertura do rotor - As centrífugas geram aerossóis - Quebra do tubo

6- Ajustar os parâmetros de centrifugação - Velocidade (RPM x FCR) - Temperatura - Tempo

7- Sempre espere a centrífuga alcançar a velocidade máxima antes de se afastar

8- Após a centrifugação: “gentileza” para remover tubos

COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?COMO CENTRIFUGAR?

9- Remova o sobrenadante - Decantação (inversão do tubo) “aerossóis” - Aspiração 10- Limpe suportes e rotor

11- Secar o interior da centrífuga

12- Folha de registros e de reserva - Vida útil do rotor “segurança” - Manutenção

13- Feche a tampa das centrífugas refrigeradas no intervalo de uso para evitar condensação