Upload
internet
View
117
Download
6
Embed Size (px)
Citation preview
Imunologia no Quadro da Patologia eAnálises Clínicas
Importância da Detecção de Ag e AC:
1. Elucidar processos patológicos
2. Diferenciar as fases das doenças
3. Selecionar Doadores de Sangue
4. Selecionar doadores e receptores de órgãos transplantados
5. Avaliar o prognóstico das doenças
6. Avaliar a eficácia da terapêutica e da suspensão da terapêutica
Testes Sorológicos
• Chamados ImunoensaiosMarcadosNão marcados
Multiparamétricos
• Respeitar Regras1. Controle Rigoroso2. Técnicas Padronizadas3. Controle de Qualidade
Algumas técnicas usadas
• Eletroforese• Imunoblotting• Citometria de Fluxo• Imunofluorescência• PCR / Real Time PCR
• Precipitação / Imunodifusão• Aglutinação• ELISA• RIA• Nefelometria• Turbidimetria
Automação
Eletroforese (SDS-PAGE)
Transferência
Papel filtro
Gel/ membrana/ filtro
Tampão
( +)( - )
Gel
Membrana transferência
preenchimento
suporte
Imunoblotting ou Western Blotting(proteínas ou glicoproteínas)
1. SDS-PAGE 2. Transferência 3. Bloqueio (BSA ou Leite) 4. Solução AC
5. Quimioluminescência ou Iodo126 6. Revelação 7. Densitometria óptica
Determinação[proteínas]
Imunoprecipitação:Anticorpo 12-14 hProteína-A Sepharose
LavagemCentrifugação
Tampão Laemnli 310
22016010045
SDS-PAGE
Anticorpo(Overnight)
Proteína-A126I
DensitometriaÓptica das
bancasAmostra
interesse
Imunofluorescência
3 Tipos: 1. Direto: • Passos 1 e 2 (Ac marcado com fluorocromo).• Usado para pesquisa de AC em células (imunocitoquímica) e tecidos (imunohistoquímica)• Ex da aplicabilidade: biópsia de doenças imunológicas (pele, rins, sífilis, herpes simples, varicela-zoster) 2. Indireto:• Usado para aumentar a sensibilidade do método• Passos 1, 2 e 33. Sistema Avidina-Biotina:• Técnica de amplificação• Avidina+Biotina = complexo• Avidina pode ser saturada com fluoresceína (verde),ficoeritina (vermelha), peroxidase (M. óptica), ferritina (M.eletrônica).• Várias biotinas podem se ligar ao AC = amplificação dafluorescência