2015

MSc. Romeu Moreira dos Santos

2017

unespunesp

IMUNOVIRIMUNOVIR

unespunesp

IMUNOVIRIMUNOVIR

Relembrando...

AnticorpoMoléculas secretadas

pelas células B emresposta a um imunógeno

(RIH)

Antígeno/Epítopo

Antígenos- moléculas reconhecidassistema imune.

pelo

Epítopos ou determinantes antigênicos- sãosítios nos antígenos aos quais os receptoresde antígenos reconhecem/ligam.

Interação Ag-Ac:Inicial

Conceito

É uma associação bimolecular semelhante àdeinteração de enzimas com seus substratos ou

hormôniosdistinçãoalteraçãopodendo,

com seus receptores, com umabem evidente o Ac não provoca nenhumaquímica irreversível na molécula de Ag,portanto, o produto formado (Ag-Ac) se

dissociarlivres na

nos seus 2 componentes; isto é, Ag e Acsolução.

Ag + Ac AgAc (Imunecomplexos)

Afinidade

Especificidade

É a habilidade do anticorpo em distinguir seuimunógeno de outros antígenos.

• Conceito de chave e fechadura

Fatores que Afetam as Reações Ag/Ac

• Afinidade

• AvidezExcesso de Ag

• Relação [Ag]:[Ac]

• Forma física do Ag(solúvel ou particulado)

Excesso de Ac Excesso de

Equivalência – formação de rede

IMUNODIAGNÓSTICO

Diagnóstico laboratorial realizado pormeio de técnicas imunológicas.

Busca: Anticorpo ou Antígeno no organismo vertebradosuspeito desorológicas.

estar infectado usando ensaios / reações

ENSAIOS SOROLÓGICOSPrimários detectam a interação direta entre antígeno e

anticorpo:ELISA.

Ex. Radioimnoensaio, Imunofluorescência,

Secundários detectam conseqüências da interação entre

antígeno e anticorpo mudanças no estado físico doantígeno: Imunodifusão, Aglutinação, Precipitação, Fixaçãode Complemento.

Van Oss, 2000; Janeway, 2001

Testes Baseados nas Reações Ag/Ac

• Todos os testes baseados nas reações Ag/Acdependerão da formação de rede ou elesterão de utilizar outras vias para detectarpequenos complexos imunes

• Todos testes baseados nas reações Ag/Acpodem ser usados para detectar o Ag ou Ac

Testes de Aglutinação

Formação de rede

Testes de Aglutinação: – simples,mais sensíveis!

baratos, um pouco

Teste qualitativo ou quantitativo

Existem Vários Tipos:a)b)c)d)

Hemaglutinação de EritrócitosAglutinação BacterianaAglutinação PassivaInibição da Aglutinação (Inib. Hemaglutinação –

HI)

3) Mistura-se:

4) Controle negativo:

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5) Leitura do resultado:

negativo positivo

Um resultado positivo é indicado por umaaglutinação visível (aglomeração dos eritrócitosna placa teste), como ilustrado acima.

AGLUTINAÇÃO PASSIVA

AGLUTINAÇÃO INDIRETA PASSIVA

Ag solúveis associados a outras superfícies(Partículas de látex ou superfície de hemácias)

Exemplo: Hemaglutinação Passiva para a Doença de Chagas:

• As hemácias são revestidas com Ag do T. cruzi (ligaçãocovalente) e então distribuídas nos poços da placa.

• O soro teste e os controles positivos e negativos, devidamentediluídos, são adicionados aos poços da referida placa.

• Se houver Ac específico contra o Ag, as hemácias seaglutinam e formam uma camada no fundo do poço. Quandonão existe Ac específico, as células formam um botão no fundodo poço.

Aglutinação Positiva

Negativa

INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO

Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez)

+Resultado negativo:(ausência de hCG naurina).Ocorre aglutinação, poisos anticorpos anti-hCGnão são bloqueados naincubação inicial,porque não havia ohormônio na urina.Livres, podem aglutinaras partículas revestidasde hCG.

Urina Soro anti - hCG

Partículas revestidascom hCG

Adicionam-se

São incubados ecolocados numaplaca

Resultado positivo:(presença de hCGna urina): não ocorreaglutinação.

Ac se ligaram no hCG da urina,(ficando bloqueados), na incubação inicial

32

-Aglutinação Bacteriana

-As infecções bacterianas frequentemente induzem aprodução de Acs séricos específicos para Ags de superfíciedas Bactérias.

-A presença de tais Acs pode ser detectada pelas reações deaglutinação bacteriana.

-Os títulos dos Acs séricos de um indivíduo suspeito édefinido como a recíproca da maior diluição do soro queproduz uma reação positiva de aglutinação.

-O título aglutinante de um soro pode ser usado para odiagnóstico de infecções bacterianas.

Um exemplo de teste de soro-aglutinação com partículas é o testede Látex de aglutinação ou deaglutinação bacteriana.

Ag BacterianoAcs Anti-bacterianos

(-)(+)

Testes de Precipitação

-

-

-

-

-

Formação de rede

Tipo de Ags: Macromoléculas Solúveis

PrincipaisAcs envolvidos: IgG* e IgM

Formação de Precipitado dos Imunocomplexos

Maior formação de precipitado deimunecomplexos na zona de equivalência entreconcentrações de Ag e de Ac

as

Reações de Precipitação:

-Acs e Ags em soluções aquosas formam uma rede/malha =>Precipitação

A formação da rede requer:1) Acs polivalentes2) Ags devem ser bivalentes / polivalentes

Não PrecipitaçãoPrecipitação +

Testes de Precipitação: – simples, baratos,e pouco sensíveis!!!

mas específicos!

Curva de Precipitação

TÉCNICAS DE DIFUSÃO EM GEL

IMUNODIFUSÃO

Imunodifusão Dupla:

• Coloca-se agarose sobre uma lâmina:

• Faz-se em seguida, pequenos orifícios no gel e são adicionadas as soluções

mostrado abaixo:testes de Ag e Ac, como por exemplo, é

Ac

• As soluções sofrem difusão e, quando o Ag e o Ac se encontram emzona de equivalência, se observa a reação pela formação de uma linhade precipitação:

• Pode ser visualizada pós lavagem do gel , para remoção dassolúveis, por coloração dos arcos de precipitação com corante

proteínas

Utilização: muito usada empesquisa e diagnóstico dealgumas doenças, comocisticercoseAg Ag

Ac

Ag AgAg Ag

AcAc

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Técnica de Imunodifusão Duplaem Gel deÁgar - IDGA

2- Anti-soro na coluna

canaleta

IMUNOELETROFORESE

• Pode-se fazer comparação de misturas complexas de Ag que são separados emgel de agarose, pela aplicação de uma corrente elétrica.As moléculas migram para o pólo negativo, distribuindo-se no gel de acordocom os seus PM e cargas elétricas.Uma canaleta é recortada entre os poços e preenchida com Ac, que se difunde.Ag e Ac formam arcos de precipitação.

•

••

50

+

1- Separação de antígenos

Ag

Ag -

2- Anti-soro na canaleta

canaleta

Immunoelectrophoresis reveals the presence of several distinctimmunoglobulin isotypes in normal human serum.