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INSTITUTO DE BIOCIENCIAS
CAMPUS IV
INFLUENCIA DE TRES COMPUESTOS VOLÁTILES EMITIDOS POR
LAS ANTERAS DE Solanum rostrarum EN LA PREFERENCIA DEL
POLINIZADOR Bombus impatiens
TESIS
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE INGENIERO BIOTECNÓLOGO
PRESENTA
JESÚS FERNANDO GARCÍA CRISÓSTOMO
DIRECTOR DE TESIS
DRA. LISLIE SOLÍS MONTERO
ASESORES
DR. DAVID ALAVEZ ROSAS
DR. LEOPOLDO CARIDAD CRUZ LÓPEZ
FECHA
JUNIO 2018
Dedicatorias
Con cariño para:
Mi familia
Mis padres, Sr. Lucindo García-Cruz y Sra. Celia Crisóstomo-Barragán, mi hermana Ma.
Victoria García-Crisóstomo. Por ser mis tres pilares principales de vida, quienes con cariño,
esfuerzo, ejemplo y humildad me han dado inspiración para superarme día a día. Por enseñarme
que no hay nada imposible cuando lo deseas de corazón; a ustedes mi admiración y respeto. Los
amo.
Mi directora de tesis
Dra. Lislie Solís-Montero, que con bondad y paciencia me ha guiado en esta etapa, no me resta
más que agradecer su apoyo incondicional, su amistad y su ternura. Quien con profesionalismo,
ejemplo y perseverancia me haya brindado las oportunidades de adquirir nuevos conocimientos, y
aprender a divertirme en el proceso.
Mis amigos
A cada uno de ustedes, por brindarme su tiempo y espacio. Por permitirme aprender a ver la vida
desde diferentes ángulos. Por cada una de las aventuras. Especialmente a ustedes Karen
Cárdenas y Lupita Meneses, por escucharme y hacerme ver las cosas como son.
Mis profesores
Por enriquecer mi conocimiento guiándome con ternura, constancia y esmero, compartiendo
conmigo sus saberes. Gracias por los consejos de cada uno de ustedes, que me condujeron hasta
la culminación de mi formación profesional. Especialmente a ustedes: Guadalupe B. Sánchez†,
Lauro S. Gerónimo†, Dory Gledis Ramos, Maricela Toledo y Martha Alicia Tlatelpa.
Agradecimientos
A mi directora de tesis, Dra. Lislie Solís-Montero, por el apoyo incondicional y las facilidades brindadas
durante el desarrollo de este proyecto.
A mis asesores Dr. David Alavez-Rosas y Dr. Leopoldo C. Cruz-López por la paciencia, enseñanzas,
tiempo y facilidades que me brindaron, para desarrollar este proyecto.
Al laboratorio de microscopía electrónica de barrido de El colegio de la Frontera sur, Unidad Tapachula,
dirigido por M. en D. Erika R. Bautista-Arredondo, por la atención prestada, el conocimiento, el
procesado de las muestras y el set de microfotografías realizados.
Al laboratorio de Ecología Química, especialmente al Dr. Leopoldo C. Cruz-López y el Dr. Edi A. Malo-
Rivera, por sus consejos y el préstamo de materiales y equipos.
A la M. en C. Ma. Guadalupe Nieto López, por las atenciones prestadas, las enseñanzas y consejos
brindados antes y durante el desarrollo del proyecto.
A la M. en C. Mariana Vázquez-Alonso por el tiempo dedicado antes y durante el desarrollo de este
proyecto.
A El Colegio de la Frontera Sur, Unidad Tapachula, por las instalaciones y todas las facilidades brindadas
durante la realización del proyecto.
A los revisores de tesis, tanto de El Colegio de la Frontera Sur, Unidad Tapachula como del Instituto de
Biociencias, por los consejos, correcciones y sugerencias, realizadas en el escrito.
Así mismo, extiendo mis agradecimientos a todas y cada una de las personas, que contribuyeron de una u
otra forma, a la realización de este proyecto.
Presentación
Las plantas presentan una serie de mecanismos para la atracción de los polinizadores, entre ellas las
señales visuales y olfativas. Siendo las señales olfativas, las que permiten establecer una estrecha relación
entre las plantas y sus polinizadores. En algunas angiospermas, los aromas o compuestos volátiles, suelen
ser emitidos por las anteras a través de regiones glandulares (osmóforos) o por el polen mediante un
compuesto denominado pollenkitt. Un ejemplo de esto es la especie Solanum rostratum, una planta cuyas
flores presentan un dimorfismo floral, denominado heteranteria, es decir, cada flor presenta cuatro anteras
especializadas para la alimentación y una antera especializada para la polinización. Esta especie se
caracteriza por ofrecer granos de polen como única recompensa a sus polinizadores, así también, por
emitir un delicado aroma similar al fruto de durazno.
Esta especie, es una maleza originaria del norte de México, sin embargo, se ha propagado a escala
mundial amenazando cultivos de interés comercial debido a que es hospedero de plagas de importancia
económica. Así como podría estar compitiendo con especies nativas por espacio, nutrientes, agua y
polinizadores. Además, produce un compuesto llamado solanina, que es tóxico para el ganado durante la
alimentación. Esto ha despertado el interés de diversos investigadores por conocer los mecanismos de
polinización, con la finalidad de encontrar una solución y minimizar la propagación de esta especie.
Actualmente, se tiene conocimiento que esta especie es auto-compatible, sin embargo, no puede
reproducirse de manera autónoma, así mismo, que la polinizan insectos que tienen la capacidad de vibrar a
altas frecuencias, que liberan los granos de polen, debido a que esta especie presenta anteras poricidas.
Además, también se tiene conocimiento que esta especie emite compuestos volátiles en el androceo de la
flor. Sin embargo, se desconoce si el polen o las anteras antera de la flor emiten los compuestos volátiles y
cómo influyen algunos de estos compuestos en el proceso de atracción de los polinizadores. Buscando dar
una respuesta a estas interrogantes, la presente investigación de tesis que presenta Jesús Fernando García
Crisóstomo, muestra una descripción morfológica de las anteras y de los granos de polen de las anteras
dimórficas de S. rostratum, así también la cuantificación de algunos compuestos volátiles de interés
producidos en ambos tipos de anteras, También, se realizaron bioensayos con extractos florales para
evaluar la respuesta del abejorro Bombus impatiens, que es un polinizador eficiente en su rango invasor, a
los compuestos emitidos por las anteras de S. rostratum. Los resultados obtenidos, son un aporte al
conocimiento de la comunicación química entre esta planta con sus polinizadores.
Contenido
Resumen...................................................................................................................................... 1
Introducción ................................................................................................................................ 2
Materiales y métodos ................................................................................................................... 3
Material biológico .................................................................................................................... 3
Obtención de granos de polen .................................................................................................. 4
Análisis palinológico................................................................................................................ 4
Análisis morfológico de las anteras .......................................................................................... 5
Identificación de los compuestos .............................................................................................. 6
Cuantificación de los compuestos............................................................................................. 6
Análisis estadístico................................................................................................................... 9
Resultados ................................................................................................................................... 9
Análisis palinológico................................................................................................................ 9
Análisis morfológico de las anteras ........................................................................................ 11
Análisis químico .................................................................................................................... 13
Discusión .................................................................................................................................. 18
Conclusión ................................................................................................................................ 22
Bibliografía ............................................................................................................................... 22
1
INFLUENCIA DE TRES COMPUESTOS VOLÁTILES EMITIDOS POR LAS ANTERAS DE
Solanum rostratum EN LA PREFERENCIA DEL POLINIZADOR Bombus impatiens.
Jesús F. García-Crisóstomo1, David Alavez-Rosas1, Leopoldo C. Cruz-López2 y Lislie Solís-Montero2, 3
1Instituto de Biociencias, Universidad Autónoma de Chiapas, Blvd. Príncipe Akishino S/N, Solidaridad 2000,
Tapachula, C.P 30798, Tapachula de Córdova y Ordoñez, Chiapas, México.
2El Colegio de la Frontera Sur (ECOSUR), Unidad Tapachula, Carretera Antiguo Aeropuerto km 2.5, C.P. 30700,
Tapachula, Chiapas, México.
3Autor de correspondencia: [email protected]
Resumen: Las plantas emiten una serie de compuestos volátiles a través de diversas estructuras florales
(glándulas secretoras) o por difusión de los tejidos florales. En algunas angiospermas, las anteras y/o los
granos de polen son los responsables de la emisión de volátiles. Se usó como modelo de estudio a
Solanum rostratum, una especie con anteras dimorficas (anteras polinizadoras y alimenticias), que ofrece
granos de polen como recompensa para los polinizadores y emite un olor similar al durazno. Se sabe que
esta planta emite compuestos volátiles, sin embargo, se desconoce la influencia de algunos compuestos en
la atracción de los polinizadores. El objetivo de esta investigación es evaluar la preferencia de B.
impatiens por los compuestos volátiles emitidos por las anteras de S. rostratum. Se realizaron extractos de
granos de polen y de anteras vacías, posteriormente se realizaron análisis y se determinaron las
concentraciones de los compuestos de interés. Finalmente se realizaron bioensayos con extractos y
compuestos sintéticos en forma individual y en mezclas, en un olfatómetro “Y”. Como resultado se
observó mayor preferencia de Bombus impatiens por los compuestos emitidos por las anteras alimenticias
en comparación con las anteras polinizadoras. En conclusión los compuestos volátiles de S. rostratum no
son emitidos por los granos de polen, sin embargo, si se producen en las anteras a través de osmóforos en
ambos tipos de anteras, siendo los compuestos volátiles emitidos por las anteras alimenticias más
atractivos en la preferencia de B. impatiens, en comparación con los compuestos emitidos por las anteras
polinizadoras.
Palabras clave: Bombus impatiens, Compuestos volátiles, Heteranteria, Preferencia, Solanum rostratum
2
Introducción
Las plantas presentan una serie de mecanismos para la atracción de los polinizadores como: las señales
visuales y olfativas, las cuales son emitidas a través de diversas estructuras florales e influyen en el
comportamiento de los polinizadores (Chen et al., 2014; Steeghs et al., 2004). Las señales olfativas
(conjunto de sustancias químicas), permiten establecer una relación estrecha entre las diversas especies de
plantas y sus polinizadores, en su mayoría los insectos (Landázuri et al., 2016). Las plantas emiten
compuestos orgánicos volátiles únicos o en mezclas en diferentes proporciones, los cuales influyen en el
proceso de atracción o repelencia de los visitantes florales; estas emisiones dependen de la especie de la
planta, órgano floral, etapa de desarrollo y las condiciones ambientales (Raguso 2004; Landázuri et al.,
2016).
En algunas plantas con flores (angiospermas), las señales olfativas son emitidas por las anteras, esto
mediante diversos mecanismos entre ellos la emisión de compuestos volátiles del polen por medio del
pollenkitt (sustancia compuesta principalmente por lípidos, proteínas, ceras y enzimas que se encuentra en
las cavidades de la exina y recubre a los granos de polen; Acosta et al., 2007) o, a través de los osmóforos
que son glándulas secretoras de compuestos volátiles (Pansarin et al., 2014).
Un ejemplo de familia en donde las anteras son las responsables de la emisión de compuestos volátiles
florales es Solanaceae (D´arcy et al., 1990). Dentro de esta familia se encuentra Solanum rostratum, una
planta que se distingue por emitir un olor similar al durazno (Nee 1993). Esta especie presenta un
dimorfismo en las anteras denominado heteranteria, es decir, que posee cuatro anteras especializadas para
la alimentación y una especializada para la polinización (Vallejo-Marín et al., 2009). Esta especialización
en las anteras se debe a que S. rostratum, ofrece granos de polen como única recompensa para los insectos
que lo polinizan, esto debido a la nula producción de néctar en sus flores (Vallejo-Marín et al., 2010). Los
granos de polen no solo representan los gametos masculinos de la planta sino también la principal
recompensa de los polinizadores; la heteranteria representa una estrategia evolutiva en las plantas sin
néctar para reducir el costo asociado al consumo de polen y optimizar el polen transportado para la
fertilización (Vallejo-Marín et al., 2009). Aunado a que las anteras de S. rostratum presentan un poro en el
extremo superior que evita la pérdida excesiva de granos de polen, restringiendo así el acceso únicamente
a polinizadores especializados, que tengan la capacidad de producir vibraciones para extraer el polen
(Vallejo-Marín et al., 2009; De Luca y Vallejo-Marín et al., 2013).
S. rostratum es una especie auto-compatible, sin embargo, no se puede reproducir de manera autónoma,
debido a esto, la planta mantiene una estrecha relación con los polinizadores especializados (que tengan la
habilidad de vibrar a altas frecuencias) para realizar este proceso (Bowers 1975). Un ejemplo de estos
polinizadores son los abejorros del género Bombus que han sido reportados como polinizadores de plantas
3
con anteras poricidas, siendo capaces de polinizarlas por vibración (Vallejo-Marín et al., 2009, 2013;
Buchanan et al., 2017). Actualmente se sabe que S. rostratum emite compuestos volátiles en diferentes
proporciones en ambos tipos de anteras (Cáceres-García et al., 2016). Sin embargo, se desconoce cómo
influyen de manera individual estos compuestos en el proceso de atracción de los polinizadores. Por lo
anterior, el objetivo general de este trabajo fue evaluar la preferencia de B. impatiens por algunos
compuestos volátiles emitidos por las anteras dimórficas de S. rostratum.
Materiales y métodos
Material biológico
Para la obtención de flores de S. rostratum, para la elaboración de los extractos de granos de polen y de las
anteras de S. rostratum, se sembraron en el invernadero de El Colegio de la Frontera Sur, Unidad
Tapachula, las semillas provenientes del cerro de Amalucán de la ciudad de Puebla, Puebla, México
(19°02’52.6’’N, 98°07’59.4’’O, 2234 msnm). Estas semillas se colectaron previamente en enero del 2013,
a partir de cinco frutos por planta (en total 30 plantas), en bolsas de papel estraza y posteriormente las
semillas se separaron en bolsas de papel encerado y se almacenaron a 4 ºC hasta ser utilizadas. Se
seleccionaron 10 semillas por cada planta, en total 150 semillas (10 semillas x 15 plantas) en octubre de
2016. Con el fin de promover la germinación de las semillas, éstas se colocaron en una solución de 1000
ppm de ácido giberélico y se dejaron reposar durante 24 h a 25ºC (Vallejo-Marín et al., 2013). Después,
se sembraron las semillas en charolas de germinación (con el sustrato All Porpuse Growing Mix, Marca
Promix, Canadá) y se mantuvieron en condiciones de invernadero en las instalaciones de El Colegio de la
Frontera Sur, Unidad Tapachula, manteniendo una temperatura entre 28 y 35 ºC. Después de tres semanas,
las plántulas se trasplantaron a macetas de 10 cm de diámetro con el mismo sustrato. Finalmente, se
realizó el segundo trasplante 4 semanas después, en donde únicamente se sembraron 5 plantas de cada
individuo (75 plantas en total) en macetas de 15 cm de diámetro con el sustrato mencionado anteriormente
y con un fertilizante de liberación lenta (NUTRI-TABS, Miracle-Gro, Holanda).
Para evaluar la preferencia de los polinizadores se usó el abejorro Bombus impatiens Cresson
(Hymenoptera Apidae). Se utilizó una colonia comercial (Natupol®
Smart, Koppert Biological Systems)
ésta no presentaba reina y contenía en promedio 60 abejas forrajeras. Los abejorros se mantuvieron en
condiciones de laboratorio a una temperatura promedio de 18 a 20 ºC, dentro de una jaula de varillas
4
metálicas forradas con tul (65 cm de altura por 43 cm de ancho) y fueron alimentadas con miel y polen
polifloral en el laboratorio.
Obtención de granos de polen
Para el análisis palinológico, se esperó a que las plantas presentaran inflorescencia (dos meses después de
la siembra) y posteriormente se colectaron las flores en antesis (tiempo en el que una flor se desarrolla y
alcanza en estado funcional). Posteriormente, se trasladaron al laboratorio de Artrópodos Polinizadores,
Plagas y Vectores y se colocaron en un recipiente con silica gel para absorber la humedad de las anteras.
Para llevar a cabo la extracción de los granos de polen, se realizó cuidadosamente una disección con aguja
en ambos tipos de anteras y se colocaron por separado en microtubos eppendorf de 1.5 mL en donde se
agitaron con un cepillo eléctrico hasta liberar los granos de polen y estos fueron nuevamente conservados
en silica gel hasta su posterior utilización.
Análisis palinológico
Para conocer si había diferencias entre los granos de polen de ambos tipos de anteras (alimenticias y
polinizadoras) se realizó un análisis palinológico de los granos de polen de S. rostratum. Este análisis se
realizó en dos etapas, a) observación por microscopía fotónica y b) observación por microscopía
electrónica de barrido. Para ambas etapas, los granos de polen se colocaron en fijador (gluteraldehído al
2% en fosfato de sodio a un pH de 7.2) durante 24 h.
Para observación por microscopía fotónica, a los granos de polen se les realizó una tinción con fucsina
ácida al 0.01% y se procedió a tomar fotografías en el microscopio Microscope Axio Imager A2.
Posteriormente, se seleccionaron 60 granos de polen de cada tipo de antera y se midió el diámetro de la
vista polar (Figura 1A) y el largo de la vista ecuatorial (Figura 1B; 30 granos de polen para cada medida)
utilizando el programa Orion 6.50. Mientras que para observar por microscopía electrónica de barrido
(MEB), los granos de polen se colocaron en un gradiente de concentración de alcoholes desde el 30%
hasta el 100%, durante lapsos de 1.5 h, por cada uno, después se colocaron en una solución de cloroformo-
metanol (1:10 v/v) durante 1.5 h y se procedió a dejar secar las muestras en un desecador. Finalmente, se
realizó el montaje de los granos de polen en portaobjetos para MEB y se tomaron las fotos de los granos
de polen procedentes de ambos tipos de anteras (polinizadoras y alimenticias), tanto en vista polar como
en vista ecuatorial, así como de la ornamentación de la exina (capa externa de los granos de polen).
5
º
Figura 1. A) Diámetro de vista polar y, B) Largo de vista ecuatorial de granos de polen de Solanum
rostratum.
Análisis morfológico de las anteras
Para observar la presencia de glándulas con actividad secretora en ambos tipos de anteras de S. rostratum,
se procedió a diseccionar cuidadosamente cada una de las anteras y posteriormente fueron separadas y
colocadas en microtubos eppendorf de 1.5 mL, en donde fueron sumergidas en el colorante rojo neutro
(1:10 v/v), durante un tiempo de 2 h, y posteriormente fueron observadas en un estereoscopio (modelo
Discovery.V20, Zeiss).
Para la observación MEB, se realizó la disección de ambos tipos de anteras (polinizadoras y alimenticias)
de tres flores en antesis de S. rostratum. De cada tipo de antera se dejaron unas anteras y al resto con una
navaja de afeitar se les realizaron cortes transversales y longitudinales. Tanto las anteras completas como
los cortes realizados, se colocaron en fijador (gluteraldehído al 2% en fosfato de sodio a un pH de 7.2) y
posteriormente se sometieron a un tratamiento con alcohol en forma gradual (50%-100%) durante lapsos
de 1.5 h, por cada porcentaje de alcohol.
Realizado este proceso, se retiró cuidadosamente el alcohol en una campana de extracción de gases y se
realizaron 2 cambios de hexametildisilaxano (HMDS) para secar totalmente las muestras, y
posteriormente, se dejó evaporar durante un tiempo de 48 h. Realizada esta etapa, las muestras fueron
colocadas en portaobjetos para microscopía electrónica de barrido y metalizadas con oro-paladio en la
superficie. Finalmente, se realizó la exploración y toma de microfotografías en un microscopio electrónico
de barrido TOPCON modelo SM-510, en el laboratorio de microscopía electrónica de barrido (LMEB) de
El Colegio de la Frontera Sur, Unidad Tapachula.
6
Análisis químico
Identificación de los compuestos
Para determinar sí el polen es el responsable de la emisión de los compuestos volátiles, se realizó la
extracción de granos de polen (equivalente a 80 flores frescas), de ambos tipos de anteras con un cepillo
eléctrico (imitando la polinización por vibración de las abejas) y se depositaron por separado en viales de
10 mL con hexano. Se realizó la extracción de los compuestos mediante maceración en hexano (5 mL).
De la misma manera, para analizar las anteras sin polen, se colocaron en un macerador y se extrajeron los
compuestos con hexano.
Los extractos se transfirieron a un vial de 1 mL y se concentraron a 50 µL. El análisis de la composición
química de los extractos se realizó por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-
EM) en donde se inyecto 1 µl de cada extracto en un cromatógrafo de gases Varian Saturn modelo CP-
3800 acoplado a un espectrómetro de masas Varian Saturn 4D con sistema de datos integrados. El sistema
se equipó con una columna capilar no polar DB5-MS (95% de dimetilpolisiloxano y 5% de
difenilsiloxano), con una longitud de 30 m de largo por 0.25 mm de diámetro interior y 25 µm de grosor
de la película. Las muestras se analizaron mediante un programa de temperatura inicial de 50ºC por 2
min, con un incremento de temperatura de 15ºC/min hasta llegar a una temperatura de 280ºC, la cual se
mantuvo durante 10 min. La temperatura del inyector fue de 250 ºC. La ionización se llevó a cabo por
impacto electrónico a 70 eV y 250 ºC. Se utilizó un flujo constante de helio (gas portador) de 1.8 mL/min.
La identificación se realizó comprobando los índices de retención y los espectros de masas con lo
reportado en la literatura (Solís-Montero et al, sin publicar; NIST 2012).
Cuantificación de los compuestos
La cuantificación se llevó a cabo por el método del estándar interno, se prepararon 3 diluciones por
triplicado de cada compuesto sintético (50, 100 y 150 ng/µL) con decano (50 ng/ µL) como estándar
interno. Estas diluciones se inyectaron en el CG-EM y se midió el área de cada pico. Se realizó una curva
de calibración (área del compuesto/área del estándar interno vs. concentración del
compuesto/concentración del estándar interno). Para determinar la concentración de los compuestos
presentes en cada flor de S. rostratum, se inyecto un extracto de 80 anteras con 50 ng/ µL de estándar
interno en un volumen de 50 µL de muestra. Posteriormente, se procedió a calcular la concentración en la
que se encuentran 3 de los principales compuestos (eugenol, gamma-decalactona y metil- eugenol)
presentes en los extractos realizados con los granos de polen de ambos tipos de anteras y las anteras sin
polen de S. rostratum (Solís-Montero et al., sin publicar).
7
Bioensayos
Los bioensayos tuvieron la finalidad de evaluar la preferencia de B. impatiens por los compuestos volátiles
emitidos por cada tipo de antera de S. rostratum. Se realizaron dos tipos de bioensayos, en el primero con
el fin de evaluar la preferencia de B. impatiens por los extractos florales de anteras polinizadoras y
alimenticias, así como flor completa. Mientras que en el segundo tipo de bioensayo se evaluó el efecto de
la preferencia de los abejorros por los compuestos individuales (eugenol, gamma-decalactona y metil-
eugenol) o en mezclas binarias.
Se trabajó con compuestos como eugenol y metil-eugenol los cuales son mayoritarios en los extractos y
están relacionados con la atracción de los polinizadores. Sin embargo, en el caso de metil-eugenol, la
literatura menciona que la concentración puede producir un efecto de atracción o repelencia de los
polinizadores (Tan y Nishida 2012). En el caso de gamma-decalactona, este compuesto le confiere olor
característico a durazno a S. rostratum (Nee, 1993) y a su vez, está asociado con la repelencia de insectos
(lepidópteros; Ômura et al., 2000).
Los bioensayos se realizaron en un olfatómetro “Y” usando la metodología propuesta por Dasen (2012)
con algunas modificaciones. El olfatómetro “Y” se fabricó con plástico acrílico transparente, el cual tenía
las siguientes dimensiones: el área proximal o base es de 60 cm de largo, mientras que los brazos miden
30 cm de largo, el tubo tiene una forma cuadrada, la cual tiene una amplitud de 11cm (Figura 2).
En el primer bioensayo se usaron tres tipos de extractos 1) anteras polinizadoras, 2) anteras alimenticias y
3) flor completa. Los extractos florales fueron elaborados a partir de 320 anteras alimenticias (80 flores x
4 anteras por flor), 80 anteras polinizadoras y 80 flores completas. Las flores fueron colectadas de la
misma población sembrada en el invernadero (Puebla, Puebla) en septiembre de 2015 y 2016. Estas flores
fueron maceradas en 10 mL de hexano y se eliminó el material vegetal de las muestras por decantación.
Posteriormente, las muestras se concentraron a 2 mL y almacenadas a 4 ºC. Los tratamientos fueron: a)
extractos de flor completa vs. control, b) extracto de anteras polinizadoras vs. control, c) extracto de
anteras alimenticias vs. control y d) extracto de anteras polinizadoras vs. extracto de anteras alimenticias y
e) control vs. control. Los siguientes bioensayos, se realizaron tomando como referencia los resultados de
la cuantificación de los compuestos volátiles presentes en las anteras de S. rostratum. De estos resultados
se seleccionaron tres de los principales compuestos (eugenol, gamma-decalactona y metil-eugenol), los
cuales fueron adquiridos comercialmente (Sigma-Aldrich, Toluca, México®). Cada compuesto sintético se
evaluó en la concentración natural (equivalente a 8 flores). Estos bioensayos se realizaron para el caso de
la gamma-decalactona y metil-eugenol a concentraciones naturales similares a la de ambos tipos de
anteras (polinizadoras y alimenticias) y el eugenol únicamente se trabajó con la concentración natural
8
similar a la encontrada en las anteras alimenticias. Los tratamientos fueron: a) compuestos individuales a
concentración natural vs. control, b) compuestos concentrados 10 veces vs. control, c) compuesto diluidos
10 veces vs. control, d) comparaciones entre éstos compuestos y finalmente, se realizó e) control vs.
control.
Los bioensayos se realizaron en los meses de septiembre-noviembre del 2017. En cada extremo del
olfatómetro se colocaron dos tiras de papel humedecidas previamente con el correspondiente tratamiento y
la otra con el control (hexano). Posteriormente, se introdujo un abejorro en la parte proximal del
olfatómetro, y se dejó circular aire limpio (con un flujo de 1 L/min), se esperó a que el abejorro llegara
hasta la bifurcación y se aprobó la respuesta una vez que este elegía un brazo del olfatómetro. Se
realizaron 10 repeticiones, cada una duró 5 minutos. En cada repetición el olfatómetro “Y” fue limpiado
con hexano y se intercaló el lado en donde se colocó el extracto, compuesto sintético o control (hexano).
Los abejorros fueron utilizados dos veces para los bioensayos con extractos y con compuestos sintéticos
individuales, éstos fueron marcados en el tórax con pintura de agua para diferenciarlos. Mientras que, para
las mezclas de los compuestos sintéticos se realizaron las siguientes combinaciones: a) metil-eugenol y
gamma-decalactona a concentración natural, b) metil-eugenol y gamma-decalactona 10 veces más
concentrados y c) metil-eugenol y gamma-decalactona diluido 10 veces con respecto a la concentración
natural reportada para las anteras polinizadoras. Para estas repeticiones se utilizaron abejorros ya
experimentados, es decir, utilizados de 2 a 3 veces cada uno.
Figura 2. Olfatómetro “Y” utilizado para los bioensayos de doble elección de Bombus impatiens.
9
Análisis estadístico
Para determinar si existen diferencias entre los granos de polen de ambos tipos de anteras de S. rostratum,
de los datos obtenidos, se analizaron con la prueba de Shapiro y la prueba de Bartlett para saber si los
datos presentaban una distribución normal y homogeneidad de la varianza, respectivamente. Debido a que
los datos no presentaron una distribución normal, éstos fueron sometidos a una transformación (Box-Cox
paquete MASS; Venables y Ripley, 2002). Posteriormente, los datos transformados se sometieron a un
análisis de varianza (ANDEVA), sin embargo, a pesar que los datos fueron transformados no presentaron
algunos de los supuestos por lo tanto se realizó una prueba de Kruskal-Wallis. Para determinar la
preferencia de B. impatiens por los compuestos en los bioensayos en olfatómetro, las proporciones
observadas en cada tratamiento y las esperadas al azar se organizaron en tablas de contingencia de 2 x 2.
Los abejorros que no respondieron fueron eliminados. Las proporciones se analizaron usando una X2 con
ajuste de bondad usando la corrección de Yates (McDonald, 2014), se comparó sí la proporción de
abejorros que preferían el tratamiento difería de los esperados por azar.
Resultados
Análisis palinológico
El polen de ambos tipos de anteras en su vista ecuatorial presenta una forma ovalada (Fig. 3 A, C) y en la
vista polar presenta una forma sub-triangular (Fig. 3 B, D). De forma general, los granos de polen de S.
rostratum son tri-colporados y presentan una ornamentación con un patrón granulado en la exina.
Adicionalmente, se observa que no presentan diferencias en su morfología entre los dos tipos de antera
10
Figura 3. Polen de antera alimenticia (A, B) y polen de antera polinizadora (C, D). Vista ecuatorial (A,
C) y vista polar (B, D) de granos de polen de Solanum rostratum.
Sin embargo, se observa una diferencia significativa en el tamaño de acuerdo al tipo de antera, siendo los
granos de las anteras polinizadoras de mayor tamaño tanto en el diámetro de la vista polar (X2= 38.577,
G.L = 1, P≤0.0001; Fig. 4A) como en el largo de la vista ecuatorial (X2
= 41.002, G.L.= 1 P≤0.0001; Fig.
4B) que los granos de las anteras alimenticias.
11
Figura 4. A) Diámetro de vista polar y B) Largo de vista ecuatorial, de granos de polen de anteras
alimenticias (AA) y polinizadoras (AP) de Solanum rostratum.
Análisis morfológico de las anteras
Las anteras de S. rostratum presentan poros apicales así como se logró observar la presencia de suturas
longitudinales, tanto en anteras polinizadoras como en anteras alimenticias (Figura 5). Así mismo, se
observó la presencia de estructuras similares a osmóforos (glándulas que producen las sustancias volátiles)
en la parte dorsal y lateral de la base de las anteras que se tiñeron de rojo intenso. Las fotos de
microscopía electrónica confirman que el tejido teñido son células papilosas (Figura 6) en ambos tipos de
anteras.
12
Figura 5. Micrografías de suturas longitudinales de A) antera polinizadora y B) antera alimenticia de
Solanum rostratum.
Figura 6. Estructuras de posibles osmóforos de anteras de S. rostratum. Antera polinizadora y alimenticia
teñida con rojo neutro (A). Las zonas intensamente teñidas se localizan en parte dorsal y lateral de ambos
tipos de anteras (círculos). Se pueden observar los osmóforos en la parte basal y lateral de la antera
polinizadora (B) y en la antera alimenticia (D). Estos osmóforos son células papilosas en ambos tipos de
anteras: polinizadoras (C) y alimenticias (E).
13
Análisis químico
Se analizaron los extractos de los granos de polen proveniente de ambos tipos de anteras, así como los
extractos de ambos tipos de anteras sin polen de S. rostratum. Los cromatogramas muestran que los
granos de polen no emiten compuestos volátiles, sin embargo, en los extractos realizados de las anteras
polinizadoras y anteras alimenticias sin polen de S. rostratum, si se registró la presencia de compuestos
volátiles en diversas proporciones (Cuadro 1), entre ellos; eugenol, metil-eugenol y gamma-decalactona
(Figura 7).
Cuadro 1. Concentración de compuestos volátiles en extractos de ambos tipos de anteras de Solanum
rostratum.
Figura 7. Cromatograma de los volátiles de extractos florales de: A) polen proveniente de las anteras
polinizadoras, B) polen proveniente de las anteras alimenticias, C) de anteras polinizadoras sin polen y D)
de anteras alimenticias sin polen de Solanum rostratum.
14
Bioensayos
En los bioensayos de doble elección, se observó que B. impatiens prefirió el tratamiento con extracto, ya
sea de antera polinizadora o alimenticia, en comparación con el control. Sin embargo, los abejorros
prefirieron el control en comparación al extracto de la flor completa. Cuando se realizaron los experimentos
comparando ambos tipos de antera, se observó preferencia por las anteras alimenticias (Figura 8).
Figura 8. Bioensayos con extractos florales de Solanum rostratum: Flores (FL), anteras polinizadoras
(AP) y alimenticias (AA), equivalente a 0.8 flores, comparadas contra hexano como control (C). ns= no
significativo, * P<0.05, ** P<0.001, ***P<0.0001. G.L. = grados de libertad; n= número de total de
abejas.
En los bioensayos con eugenol, se observó que este compuesto influye en la preferencia de B. impatiens
en comparación con el control (Figura 9A), Cuando se compararon los compuestos sintéticos metil-
eugenol y gamma-decalactona en concentraciones naturales reportadas en las anteras polinizadoras y
alimenticias; los abejorros prefirieron la concentración del compuesto similar al emitido por las anteras
15
alimenticias. Sin embargo, no difirió significativamente cuando la concentración era similar al emitido
por las anteras polinizadoras. Al compararse metil-eugenol en concentraciones similares a las emitidas
por ambos tipos de anteras, los abejorros prefirieron la concentración natural emitida por las anteras
polinizadoras en comparación a la emitida por las anteras alimenticias (Figura 9A). Sin embargo, cuando
se comparó gamma-decalactona a concentración similar a la encontrada en las anteras polinizadoras
contra el control, los abejorros prefirieron el control, mientras que al estar el compuesto sintético en una
concentración similar a la que emiten las anteras alimenticias no se encontraron diferencias
estadísticamente significativas en la preferencia. Finalmente, cuando la gamma-decalactona se evaluó en
ambas concentraciones a las que se reporta en cada tipo de antera, los abejorros prefirieron la
concentración emitida por las anteras polinizadoras (Figura 9A).
Figura 9 A. Bioensayos de compuestos sintéticos: eugenol (anteras alimenticias Eaa), gamma
decalactona (ambos tipos de anteras Ɣap y Ɣaa), metil-eugenol (ambos tipos de anteras Map y Maa) y
hexano como control (C). ns= no significativo, * P<0.05, ** P<0.001, ***P<0.0001. G.L. = grados de
libertad; n= número de total de abejas.
Cuando las mezclas de gamma-decalactona y metil-eugenol se probaron a concentraciones similares a las
de las anteras polinizadoras contra el control, los abejorros prefirieron la mezcla. Mientras que no se
encontró diferencia significativa al comparar la mezcla reportada por las anteras alimenticias contra el
16
control. Sin embargo, al comparar ambas concentraciones entre sí, las abejas prefirieron la mezcla a la
concentración reportada para las anteras polinizadoras (Figura 9B).
Figura 9 B. Mezcla de compuestos (metil-eugenol y gamma decalactona de ambos tipos de anteras Mɣap
y Mɣaa), y hexano como control (C). ns= no significativo, * P<0.05, ** P<0.001, ***P<0.0001. G.L. =
grados de libertad; n= número de total de abejas.
También se evaluó la preferencia de B. impatiens por los compuestos sintéticos eugenol, únicamente de
las anteras alimenticias y gamma-decalactona y metil-eugenol a diferentes concentraciones de ambos
tipos de anteras (10 veces mayor y 10 veces menor, con respecto a la concentración natural de ambos
tipos de anteras). Al comprar el eugenol en distintas concentraciones contra el control, se observó que la
concentración no influye, puesto que tanto diluido como concentrado actúa como un atrayente de B.
impatiens. Así mismo, se encontró que los abejorros prefirieron la gamma-decalactona 10 veces diluida
con respecto al control, en el resto de los tratamientos no se encontraron diferencias significativas en la
preferencia de los abejorros (Figura 10A). Cuando se evaluó el metil-eugenol contra el control tanto de
forma diluida como concentrada, los abejorros prefirieron los compuestos sintéticos. Sin embargo, cuando
se comparó el metil-eugenol a mayor y menor concentración, se observó mayor proporción de abejorros
que prefirieron el compuesto diluido (Figura 10A).
17
Figura 10 A. Bioensayos de disoluciones de compuestos sintéticos: eugenol diluido 10 veces y
concentrado 10 veces (E10D y E10C), gamma decalactona diluida 10 veces y concentrada 10 veces
(Ɣ10D, Ɣ10C), metil-eugenol diluido 10 veces y concentrado 10 veces (M10D, M10C), a partir de las
concentraciones naturales de las anteras polinizadoras y hexano como control (C). ns= no significativo, *
P<0.05, ** P<0.001, ***P<0.0001. G.L = grados de libertad; n= número de total de abejas.
Se realizaron, bioensayos con mezclas de metil-eugenol y gamma-decalactona, tanto en forma diluida
como concentrada contra el control, por separado. En ambos casos, se observó que B. impatiens prefería
la mezcla de los compuestos. Finalmente, cuando se compararon la mezcla de los compuestos diluidos
contra la mezcla de los compuestos concentrados, los abejorros prefirieron la mezcla de los compuestos
que se encontraban diluidos (Figura 10B).
18
Figura 10 B. Bioensayos de disoluciones de compuestos sintéticos: mezclas de compuestos diluidos 10
veces y concentrados 10 veces (MƔ10D, MƔ10C), a partir de las concentraciones naturales de las anteras
polinizadoras y hexano como control (C). ns= no significativo, * P<0.05, ** P<0.001, ***P<0.0001. G.L
= Grados de libertad; n= número de total de abejas.
Discusión
En la naturaleza, existen diversas especies vegetales que ofrecen polen como única recompensa para los
polinizadores (Vallejo-Marín et al., 2009), las cuales están adaptadas (presencia de anteras poricidas) para
ser polinizadas por abejas mediante la polinización por zumbido (Buchmann, 1983; Laporta, 2004;
Michener, 2007). En especies que presentan dimorfismo floral denominado heteranteria, las flores
presentan dos conjuntos de anteras especializadas que difieren en la posición, tamaño, forma, color y/u
olor, para la atracción de los polinizadores, sin embargo, estas diferencias también podrían inferir en la
cantidad de granos de polen, así como en la forma, tamaño u ornamentación de la exina de los granos de
polen provenientes de cada tipo de antera (Buchmann, 1983; Hrycan y Davis, 2005; Luo et al., 2009). Por
ejemplo, Melastoma malabathricum (Melastomataceae) posee granos de polen tri-colporados y de forma
esférica, en ambos tipos de anteras, sin embargo, difieren en la ornamentación de la exina, en donde los
19
granos de polen que provienen de las anteras de polinización presentan una ornamentación microtruida en
comparación con el polen de las anteras de alimentación que poseen una ornamentación microestriada
(Luo et al., 2009). En el caso de S. rostratum una especie heteranterica que ofrece polen como única
recompensa para los polinizadores (Vallejo-Marín et al., 2009), los granos de polen provenientes de
ambos tipos de anteras no presentaron diferencias morfológicas. Sin embargo, si se encontraron
diferencias morfométricas en el tamaño de los granos de polen de ambas anteras en donde el polen de las
anteras polinizadoras fue ligeramente de mayor tamaño (21.67 ± 0.22 µm en vista ecuatorial y 20.87 ±
0.20 µm en vista polar) que los granos de polen colectados de las anteras alimenticias (18.56 ± 0.20 µm en
vista ecuatorial y 17.58 ± 0.25 µm en vista polar). Estos resultados difieren a lo reportado por Vallejo-
Marín et al. (2009) quienes reportaron que los granos de polen de las anteras alimenticias son ligeramente
de mayor tamaño (19.086 ± 0.014 µm) que los granos de polen de las anteras polinizadoras (18.979 ±
0.028 µm). Estos autores midieron el diámetro del polen lo que correspondería en este estudio con el
diámetro polar. En este estudio encontramos un patrón opuesto probablemente a que el número de granos
de polen que se midieron fue menor (60 granos) comparado con Vallejo-Marín y colaboradores (1999)
quienes midieron los granos de polen de más de 100 anteras. Por lo que en futuras investigaciones será
necesario incrementar el esfuerzo de muestreo midiendo tanto la vista polar como ecuatorial que
caracterizan mejor la morfometría del polen. Ambos estudios concuerdan en que existen diferencias en el
tamaño del polen entre ambos tipos de anteras. Esta diferencia de tamaño no se ve reflejada en la
viabilidad y fertilidad del polen ya que Bowers (1975) realizó cruzas artificiales donde concluyo que la
fertilidad del polen proveniente de los dos tipos de anteras es similar.
Las anteras por su parte son consideran como órganos multifuncionales de las flores, y tienen como
función principal proteger a los granos de polen de los factores ambientales (Lunau, 2007), además de
funcionar como un mecanismo de señalización para los polinizadores y presentan diferencias
morfológicas (como son el tamaño o la forma) u organolépticas (como el color u olor característicos,
Buchmann, 1983; Lunau, 2000, 2006). S. rostratum presenta dos tipos de anteras: una especializada para
el proceso de polinización y cuatro especializadas para la alimentación (Vallejo-Marín et al., 2009). En las
especies heterantericas las anteras de alimentación suelen ser más atractivas para los polinizadores en
comparación con la poca atracción visual y olfativa generada por las anteras polinizadoras (Luo et al.,
2008; Gonzálvez et al., 2013). Sin embargo, a pesar de presentar diferencias morfológicas en el tamaño,
color y forma, las anteras de S. rostratum presentan características en común, tales como, la presencia de
suturas longitudinales y glándulas con actividad secretora. Las suturas longitudinales han sido
previamente reportadas en el género Solanum (Carrizo-García et al., 2008). Actualmente, se tienen
registros de diferentes tipos de aperturas en anteras de especies pertenecientes al género Solanum, tales
como: poros apicales, poros longitudinales y dehiscencia longitudinal (Carrizo-García et al., 2008; Knapp,
20
2002, 2013). Sería interesante indagar en futuras investigaciones el papel que juegan estas suturas en la
dispersión de los granos de polen, durante el proceso de polinización. Por otra parte, los osmóforos son
tejidos florales con actividad secretora, los cuales emiten fragancias florales (Wiemer et al., 2008). Estas
estructuras no han sido reportadas para estas especies, sin embargo, ya han sido reportadas para otras
especies de Solanum, particularmente en el tejido conectivo de las anteras poricidas (Sazima et al., 1993;
Pasarelli y Bruzzone, 2004; Coelho et al., 2016). De forma particular, Falcão y Stehmann (2018) han
reportado la presencia de osmóforos, en la especie Solanum luridifuscescens perteneciente al clado de
Cyphomandra, describiéndolas como células papilosas, que poseen un citoplasma denso y rico en
orgánulos, ubicados la parte dorsal de las anteras. Además, mencionaron que los volátiles son producidos
y posteriormente difundidos, a través de las estrías de la delgada cutícula de los osmóforos. Passarelli y
Bruzzone (2004) los compuestos volátiles emitidos por las anteras a través de los osmóforos influyen en la
atracción de los polinizadores.
Autores como Dobson y Bergström (2000) mencionan que algunos compuestos volátiles, también son
emitidos a través del pollenkitt; una capa de lípidos localizada en la exina, la cual cumple diversas
funciones en el servicio de la polinización (Pacini y Hesse, 2005). Sin embargo, en los resultados
obtenidos en esta investigación, no se registraron compuestos volátiles en los extractos con granos de
polen de ambos tipos de anteras, en comparación con los extractos realizados de las anteras en donde sí se
registró la presencia de compuestos volátiles. Buchmann (1983), menciona que los granos de polen
provenientes de plantas con anteras poricidas no producen pollenkitt.
Actualmente, se sabe que las plantas producen y emiten una amplia diversidad de compuestos volátiles
(Marín-Loaiza y Céspedes, 2007). Los aromas florales influyen en el proceso de comunicación entre las
plantas y los insectos (Chalcoff et al., 2015). Estos aromas suelen ser una mezcla compleja de compuestos
orgánicos volátiles, entre ellos compuestos terpenoides, derivados de ácidos grasos, compuestos
bencenoides, entre otras sustancias (Raguso, 2008). Los compuestos volátiles son emitidos por diversas
especies vegetales para la atracción de los polinizadores (en su mayoría abejas); jugando un papel
importante en la interacción planta-polinizador (Gross et al., 2016; Hetherington-Rauth y Ramírez, 2016).
Estos compuestos son percibidos a través de neuronas receptoras olfativas (NROs), localizados dentro de
los sénsulos (pelos olfativos; Clifford y Riffell, 2013). En los insectos, los aromas son detectados
principalmente por las antenas, sin embargo, también algunos apéndices bucales como los palpos pueden
realizar dicho proceso (Rojas y Malo, 2012).
El aroma que emite cada planta es único para cada especie y esto facilita la interacción planta-polinizador
(Pichersky y Gershenzon, 2002). En el caso de S. rostratum, esta especie con flores heterantericas emite
una mezcla de compuestos volátiles con un aroma similar al fruto de durazno (Nee, 1993). Ambos tipos
anteras de S. rostratum emiten compuestos volátiles en común que varían cualitativa y cuantitativamente
21
según el tipo de antera (Solís-Montero et al., sin publicar). Los resultados obtenidos de los bioensayos,
demostraron claramente que los abejorros de B. impatiens prefieren la proporción de los compuestos
volátiles emitidos por extractos de las anteras alimenticias en comparación con los volátiles emitidos por
los extractos de las anteras polinizadoras. Cáceres-García et al. (2016) evaluaron la preferencia de abejas
sin agujón de la especie Melipona solani a extractos realizados a partir de flores completas y de anteras
con polen de S. rostratum, obteniendo resultados similares a los reportados en este trabajo. Esto a pesar
que, las abejas de la especie M. solani no son polinizadoras efectivas de S. rostratum en comparación con
los abejorros de B. impatiens (Vallejo-Marín et al., 2013; Buchmann et al., 2017). Así mismo, los
bioensayos realizados por Cáceres-García et al. (2016) fueron de múltiple elección y se realizaron al aire
libre, haciendo las pruebas con los extractos florales de flor completa, anteras alimenticias y anteras
polinizadoras, así como un control por separado y adicionalmente se les proporciono sacarosa 2 M, en los
alimentadores como recompensa extra para las abejas. Por su parte, los bioensayos realizados en este
trabajo fueron de doble elección y se realizaron en un olfatómetro y se evaluaron con los extractos puros
sin sacarosa ya que S. rostratum no ofrece néctar como recompensa. Ambos bioensayos demostraron la
preferencia los polinizadores por los extractos de las anteras alimenticias a pesar de haber usado dos
especies diferentes de abejas y dos metodologías distintas.
Se sabe que S. rostratum emite diversos compuestos volátiles entre ellos, eugenol, gamma-decalactona y
metil-eugenol, por mencionar algunos, en diferentes proporciones en ambos tipos de anteras (Cáceres-
García et al., 2016; Solís-Montero et al., sin publicar). Compuestos como eugenol y metil-eugenol, han
sido estudiados en diversas especies de plantas y se ha reportado que tienen un efecto de atracción a los
polinizadores, principalmente abejas (Dobson, 1994). Sin embargo, en el caso de metil-eugenol a altas
concentraciones repele a los insectos (Tan y Nishida, 2012; Aragüez et al., 2013; Shelly et al., 2016).
Esto concuerda con los resultados obtenidos en este trabajo, en donde los abejorros prefirieron el
compuesto sintético diluido en comparación con el concentrado. Por otra parte, se ha reportado que los
abejorros utilizan el eugenol para saber la disponibilidad de polen y realizar las vibraciones para su
obtención (Dobson et al., 1999). Los resultados obtenidos demostraron que la concentración no influyo en
la preferencia de los abejorros por éste compuesto por lo que se sugiere que a cualquier concentración
atrae a los polinizadores. Sin embargo, la gamma-decalactona emitida por Osmanthus fragrans, reportada
por Ômura et al. (2000), como repelente hacia mariposas de la especie Pieris rapae. En los resultados de
los bioensayos realizados con éste compuesto sintético los abejorros prefirieron los compuestos sintéticos
a concentraciones similares a las reportadas en las anteras polinizadoras en comparación con la antera
alimenticia. Cuando se comparó la gamma-decalactona sintética a concentración diluida a la encontrada
en la antera polinizadora contra el control los abejorros prefirieron el compuesto sintético. Por lo que se
sugiere que este compuesto es atrayente para los himenópteros en comparación a los lepidópteros donde
22
funciona como repelente. Sin embargo, al modificarse las proporciones de los volátiles, también se puede
modificar la respuesta en el comportamiento de algunos insectos (Jaenson et al., 2005). Así mismo, en
este trabajo se realizaron mezclas de los compuestos sintéticos a concentraciones diluidas y concentradas,
se observó que los abejorros de B. impatiens prefirieron la concentración diluida, esto puede relacionarse
con la presencia de metil-eugenol a concentración diluida, puesto que, a menor concentración, este
influye mayormente en la atracción de los polinizadores mientras que a mayor concentración repele a los
insectos (Tan y Nishida, 2012; Aragüez et al., 2013; Shelly et al., 2016). Sin embargo, se considera
importante realizar otros estudios de investigación que incluyan bioensayos con un mayor número de
compuestos volátiles, tanto en forma individual y en mezclas en distintas concentraciones, con la
finalidad de comprobar el efecto de los compuestos volátiles emitidos por S. rostratum en el proceso de
atracción o repelencia de polinizadores.
Conclusión
Los compuestos volátiles de las flores de S. rostratum no son emitidos por los granos de polen, sin
embargo, si se producen en las anteras a través de las glándulas secretoras (osmóforos) tanto en anteras
alimenticias como en las anteras polinizadoras. La mezcla de volátiles emitidos por las anteras
alimenticias es más atractiva para B. impatiens en comparación con los compuestos emitidos por las
anteras polinizadoras y la flor completa. En lo que respecta a los compuestos sintéticos, se observó que
metil-eugenol en menor concentración es más atractivo para los polinizadores, a diferencia de eugenol
que actúa como atrayente, de forma independiente a la concentración que se evaluó. Mientras que
gamma-decalactona a baja concentración parece influir en atracción de B. impatiens.
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