Karina Nunes Kasperoviczus Original

KARINA NUNES KASPEROVICZUS

Evoluo das estratgias reprodutivas de Bothrops jararaca

(Serpentes: Viperidae)

So Paulo

2013

KARINA NUNES KASPEROVICZUS

Evoluo das estratgias reprodutivas de Bothrops jararaca

(Serpentes:Viperidae)

Tese apresentada ao programa de Ps-Graduao em

Anatomia dos Animais Domsticos e Silvestres da

Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da

Universidade de So Paulo para a obteno do ttulo

de Doutor em Cincias

Departamento:

Cirurgia

rea de concentrao:

Anatomia dos Animais Domsticos e Silvestres

Orientadora:

Profa. Dra. Selma Maria de Almeida Santos

So Paulo

2013

Autorizo a reproduo parcial ou total desta obra, para fins acadmicos, desde que citada a fonte.

DADOS INTERNACIONAIS DE CATALOGAO-NA-PUBLICAO

(Biblioteca Virginie Buff Dpice da Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade de So Paulo)

T.2849 Kasperoviczus, Karina Nunes FMVZ Evoluo das estratgias reprodutivas de Bothrops jararaca (Serpentes:Viperidae) / Karina Nunes

Kasperoviczus. -- 2013. 134 f. : il.

Tese (Doutorado) - Universidade de So Paulo. Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia. Departamento de Cirurgia, So Paulo, 2013.

Programa de Ps-Graduao: Anatomia dos Animais Domsticos e Silvestres. rea de concentrao: Anatomia dos Animais Domsticos e Silvestres.

Orientador: Profa. Dra. Selma Mara Almeida Santos. 1. Histrias de vida. 2. Variao geogrfica. 3. Ciclo reprodutivo. 4. Viperdae. 5. Biologia

reprodutiva. 6. Bothrops jararaca. I. Ttulo.

FOLHA DE AVALIAO

Autor: KASPEROVICZUS, Karina Nunes

Ttulo: Evoluo das estratgias reprodutivas de Bothrops jararaca (Serpentes: Viperidae)

Tese apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Anatomia

dos Animais Domsticos e Silvestres da Faculdade de Medicina

Veterinria e Zootecnia da Universidade de So Paulo para a

obteno do ttulo de Doutor em Cincias

Data: _____/_____/_____

Banca Examinadora

Prof. Dr._____________________________________________________________

Instituio:__________________________ Julgamento:_______________________

Prof. Dr._____________________________________________________________


Prof. Dr._____________________________________________________________


Prof. Dr._____________________________________________________________


Prof. Dr._____________________________________________________________


DEDICATRIA

Dedico este trabalho aos meus pais, Nivea e

Sergio (in memoria), por tudos que me

ensinaram e pelo que sou hoje! Amo

eternamente!!!

Ao meu marido Henrique Braz, por sua

dedicao, pacincia (muita pacincia) e

amor incondicional. Por estar ao meu lado

nos bons e nos maus momentos, por todo

incentivo, ajudae por confiar em mim! Meu

bem... Sem voc essa tese no teria sado!

Muito obrigado por tudo,eu te amo!!!

AGRADECIMENTOS

Agradeo em primeiro lugar ao meu Deus, por sua bondade comigo.

A minha orientadora Selma Maria de Almeida Santos, pela orientao, pelo exemplo profissional,

pelo incentivo nos momentos difceis (que no foram poucos), por toda confiana, carinho,

respeito, preocupao e acima de tudo pela amizade conquistada nesses anos de convivncia.

Ao Otavio A. V. Marques, pelas valiosas sugestes durante a realizao deste trabalho, pelo

apoio e amizade.

Ao Ricardo J. Sawaya e Fausto Barbo, por me permitirem o acesso aos B. jararaca da ilha dos

Franceses, pelos pelas valiosas sugestes, e principalmente pela amizade.

Ao Hebert Ferrarezzi pelas preciosas sugestes, pela ajuda, amizade.

Aos curadores das seguintes colees: Francisco L. Franco; Coleo Herpetolgica do Instituto

Butantan. Glucia Funk Pontes; Coleo Herpetolgica da Puc Rio Grande do Sul. Mrcio

Borges Martins; Coleo de rpteis da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Julio Cesar

de Moura Leite; Museu de Histria Natural Capo da Imbuia. Daniel Fernandes; Coleo de

rpteis da Universidade Federal do Rio de Janeiro. Paula Passos e Ronaldo Fernandes; Coleo

de rpteis do Museu Nacional do Rio de Janeiro. Paulo Manzani; Coleo de rpteis da Unicamp.

Hussan Zaher; Coleo de rpteis do Museu de Zoologia da Universidade de So Paulo. Luciana

Barreto Nascimento; Museu de Cincias Naturais da Puc-MG. Ricardo J Sawaya; (RJS), pela

permisso do exame dos exemplares.

A Glaucia Funk por disponibilizar dados de nascimento em cativeiro de B. jararacas do Clado

sul.

Serena Migliore, Betina Flora e Daniela Gennari, por toda a ajuda com a coleta de dados e pela

amizade.

Ao querido amigo Valdir Jos Germano pelo companheirismo, por cada palavra de incentivo e

apoio, tanto nos bons, como nos maus momentos, por todo carinho, por cada minuto gasto para

me ajudar no meu trabalho que foi de extrema importncia, sem o qual no teria conseguido

chegar at aqui. Valzinho, muito obrigado! Voc foi e muito importante pra mim!

Ao meu Henrique B. P. Braz, pela amizade, por todo amor, pacincia e carinho. Por toda a ajuda

em todas as fases desse trabalho, sem o qual no teria conseguido finalizar com xito. Muito

obrigado por tudo!

A Marta Antoniazzi e Carlos Jared por gentilmente terem liberado o uso dos equipamentos no

Laboratrio de Biologia Celular e a Simone Jared pelo auxilio no uso dos equipamentos no

mesmo laboratrio.

A Lvia C. Santos e Claudio A. Rojas, pelas discusses, sugestes, confeco de algumas lminas

histolgicas e pela amizade conquistada neste perodo de convivncia.

As funcionrias do Laboratrio de Ecologia e Evoluo, Dona Maria M. Vendramini, Darina B.

Favorito e Vera Moraes Torres, Kelly Kishi, Adriana Batista, Adriano, Fellone, Cristiene

Martins, Regina Elaine da Silva por tanta ajuda com a coleta de dados, fotos, planilhas, enfim...

pela amizade, carinho e pacincia.

Aos colegas e estagirios do Laboratrio de Ecologia e Evoluo: Leticia R. Sueiro, Livia

Cristina dos Santos, Karina Maria Pereira da Silva (Karina 2 hehe), Kalena Barros, Cristian

Gomes, Natlia Torello e a todos os estagirios, pela amizade e pelo convvio e por tornarem

meus dias mais agradveis.

Aos colegas e integrantes do Clube do Caf, Henrique, Cristian, Natalia e Selma por cada

cafezinho e momentos de descontrao, pela amizade e companheirismo.

As minhas grandes amigas Elisabeth M. Montes, Kelly Kishi, Cintia Vieira da Silva, Aline

Barbosa, Silvia Guerra e Vanessa Meira, pela amizade, pelo apoio em todos estes anos de

convivncia e por me fazerem mais feliz s por saber que vocs existem na minha vida. Muito

obrigado meninas!

Ao Ronaldo, Rose e demais funcionrios do laboratrio de histologia do departamento de

anatomia da USP, por todo auxlio prestado.

Ao Gileno Brasileiro, funcionrios e estagirios do Laboratrio especial de Colees Zoolgicas

do Instituto Butantan, pela ajuda com a coleta de dados de B. jararaca e pela pacincia ao longo

do meu doutorado.

A minha famlia, em especial ao meu tio Rodrigues, por todo apoio que tem me dado nestes anos,

pela correo do texto, pelo incentivo, carinho, amizade e por acreditar em mim.

A Vilma Csar, por me ajudar com bibliografias, pela amizade, apoio e por acreditar em mim.

A minha av, pelo amo, oraes, compreenso e apoio.

A minha irm Karen, por existir na minha vida e ser minha irm...K, sou a pessoa mais sortuda

do mundo por ter voc como minha irm... te amo at depois que para de respirar, obrigado por

tudo, compreenso, amizade, cuidado, enfim...

Ao meu cunhado Raniel, e aos mais lindos sobrinhos (Davi e Noah) de todo o mundo de todos os

universos e de todas as galxias rsrs...por tornarem meus dias mais alegres!! Por todo amor, e

distrao (que foram muito importantes). Obrigado por acreditar e confiar em mim.

A meu amigo Ivan de S, por me acompanhar e por trabalhar comigo em tantas colees

visitadas, que mesmo no gostando de serpentes e sem entender direito o que estava fazendo, me

ajudou to prontamente!

A minha sogra Joilza por cada almoo, por cuidar da minha gatinha, pelo cuidado incondicional,

Muito obrigada sogra!

As minhas cunhadas Ana Claudia e Paula.

Aos tios Claribel e Jlio Cesar, por terem cedido a casa de Perube para conseguir escrever a tese

em paz.

A FAPESP (Fundao de Amparo Pesquisa de So Paulo) pelo suporte financeiro essencial a

este trabalho (processo n 2011/50026-0), e a Capes pelo auxilio financeiro no incio deste

trabalho.

A todos que de uma maneira ou de outra, foram extremamente importantes para mim, neste

perodo em que desenvolvi a minha dissertao, mas que por um lapso de memria tenha me

esquecido...

Meu muito obrigado!!!

RESUMO

KASPEROVICZUS, K. N. Evoluo das estratgias reprodutivas de Bothrops jararaca

(Serpentes: Viperidae). [Evolution of reproductive strategies of Bothrops jararaca (Serpentes:

Viperidae)]. 2013. 134 f. Tese (Doutorado em cincias) Faculdade de Medicina Veterinria e

Zootecnia, Universidade de So Paulo, So Paulo, 2013.

Esse trabalho teve como objetivo estudar aspectos importantes das estratgias reprodutivas de

machos e fmeas de Bothrops jararaca do clado norte (CN) e sul (CS) e das ilhas de Bzios (SP),

Ilhabela (SP) e ilha dos Franceses (ES). Para isso, foram analisados exemplares de B. jararaca

preservadas de diversas colees zoolgicas. Machos e fmea de B. jararaca do CN foram

significativamente maiores que os machos e fmeas CS, no entanto tiveram cabeas

relativamente menores e foram menos robustos. Fmeas do CN tm em mdia maior fecundidade

e filhotes maiores do que fmeas do CS. O ciclo reprodutivo de machos e fmeas de ambas as

populaes sazonal e no variou entre as estaes do ano. Fmeas do CN e do CS tem cpula

outonal. A vitelognese tem incio no final do vero e fmeas grvidas so observadas a partir do

final do inverno. Nascimentos de B. jararaca de ambos os clados podem ser observados

principalmente no vero e podem se estender at o incio do outono. A estocagem de

espermatozoides no tero e no infundbulo foi observada principalmente no outono e inverno.

Ciclos reprodutivos de machos de ambos os clados so considerados do tipo ps-nupcial ou do

tipo I. O incio da produo de espermatozoides na primavera e a fase ativa pode ser observada

no vero. No outono e no inverno, os testculos esto inativos. Estocagem de espermatozoides

nos ductos deferentes foi observada durante todos os meses do ano e o segmento sexual renal

(SSR) apresentou a fase mais ativa (fase secretora) na primavera e vero (sincronizado com a

espermatognese nos testculos) e fase no secretora no outono e no inverno. Esse padro dos

ciclos dos machos foi observado em ambos os clados. Dessa forma, foram observadas variaes

geogrficas nas caractersticas de histrias de vida entre as populaes do CN e CS, porm, no

foram observadas diferenas entre os padres de ciclos reprodutivos. Assim, o ciclo reprodutivo

de machos e fmeas de B. jararaca do CN e do CS so conservativo na espcie.

Palavras-chave: Histrias de vida. Variao geogrfica. Ciclo reprodutivo. Viperdae. Biologia

reprodutiva. Bothrops jararaca.

ABSTRACT

KASPEROVICZUS, K. N. Evolution of reproductive strategies of Bothrops jararaca

(Serpentes: Viperidae). [Evoluo das estratgias reprodutivas de Bothrops jararaca (Serpentes:

Viperidae). 2013. 134 f. Tese (Doutorado em cincias) Faculdade de Medicina Veterinria e

Zootecnia, Universidade de So Paulo, So Paulo, 2013.

This research aimed to study important aspects of reproductive strategies in male and female of

Bothrops jararaca from north clade (CN), south clade (CS) including the islands of Bzios (SP),

Ilhabela (SP), and Franceses (ES). We analyzed specimens of B. jararaca preserved on several

zoological collections. Male and female of B. jararaca from CN were significantly longer than

male and female from CS, however they had relatively smaller heads and were less robust. Male

and female of B. jararaca from CN were significantly larger than individuals from CS, had

relatively smaller heads and were less robust. Females from CN had on average higher fecundity

and larger offspring than females of CS. The reproductive cycle of males and females from both

populations was seasonal and the timing of events was also similar between clades. Females of

CN and CS have autumn mating season. The vitellogenesis starts in the end of the summer and

pregnant females are observed from late winter. Births of B. jararaca occurred from early

summer to the beginning of autumn. Sperm storage in the uterus and infundibulum was mainly

observed during autumn and winter. Reproductive cycles of male of both clades are type

postnuptial or a type I. The beginning of the sperm production occurs in spring and the active

phase was observed in the summer. During autumn and winter, the testicles are inactive. Sperm

storage in the different ducts was observed throughout the year and the sexual segment of the

kidney (SSK) shows a more active phase during spring and summer and non-secretory phase on

autumn and winter. This pattern of cycles of male was observed in both clades. In conclusion,

there is geographical variation in life-history characteristics between CN and CS populations.

However, differences among the reproductive cycle pattern were not evident. Then, the

reproductive cycles of male and female of CN and CS are conservative in the species.

Keywords: Life-history. Geographical variation. Reproductive cycle. Viperidae. Reproductive biology.

Bothrops jararaca.

SUMRIO

1 INTRODUO ............................................................................................................ 16

1.1BOTHROPS JARARACA REVISO DA LITERATURA ......................................................... 19

2 OBJETIVO GERAL ................................................................................................... 22

2.1 OBJETIVOS ESPECFICOS .............................................................................................. 22

2.2 HIPTESES E PREDIES PARA AS ESTRATGIAS REPRODUTIVAS DE B. JARARACA ....... 22

3 MATERIAL E MTODOS ........................................................................................ 24

3.1 REA DE ESTUDO ....................................................................................................... 24

3.2 COLETA DE DADOS ....................................................................................................... 28

3.2.1 Morfologia e histrias de vida ................................................................................ 32

3.2.2 ndice de dimorfismo sexual no tamanho (SSD) .................................................... 34

3.2.3 Caracterizao dos ciclos reprodutivos de machos e fmeas ................................. 35

3.2.4 Contrao da Musculatura Uterina (UMT) ........................................................... 35

3.2.5 Histologia Gonadal ................................................................................................ 36

3.2.6 Fecundidade ............................................................................................................ 38

3.2.7 poca de nascimento dos filhotes ........................................................................... 38

3.2.8 Tamanho dos filhotes .............................................................................................. 38

3.3 FORMA DE ANLISE DOS RESULTADOS ......................................................................... 39

4 RESULTADOS ............................................................................................................. 41

4.1 MORFOLOGIA E HISTRIA DE VIDA (COMPARAES INTERSEXUAIS) ............................ 41

4.2 MORFOLOGIA E HISTRIA DE VIDA (COMPARAES INTERPOPULACIONAIS) ................ 47

4.2.1 Morfologia e Maturidade sexual ........................................................................... 47

4.2.2 Fecundidade ............................................................................................................ 51

4.2.3 Tamanho dos filhotes .............................................................................................. 53

4.3 CARACTERIZAO DOS CICLOS REPRODUTIVOS ........................................................... 54

4.3.1 Fmeas ...................................................................................................................... 54

4.3.1.1 Vitelognese, gestao e pocade nascimento dos filhotes .............................. 54

4.3.1.2 poca de cpula ................................................................................................... 56

4.3.1.3 Contrao da musculatura uterina (UMT) e estocagem de esperma .............. 57

4.3.1.4 Morfologia e estocagem infundibular ................................................................ 60

4.3.2 Machos ...................................................................................................................... 66

4.3.2.1 Morfologia macroscpica ................................................................................... 66

4.3.2.2 Ciclo espermatognico, estocagem de espermatozoides nos

ductos deferentes e SSR ........................ 69

4.3.2.2.1 Segmento sexual renal (SSR) ............................................................................ 69

4.3.2.2.2 Ciclo espermatognico ........................................................................................ 73

4.3.2.2.3 Ductos deferentes ............................................................................................... 76

4.4 RESUMO DOS CICLOS REPRODUTIVOS DE MACHOS E FMEAS DE

BOTHROPS JARARACA DO CN E CS ............................... 80

4.5 JARARACAS INSULARES ................................................................................................ 82

4.5.1 Maturidade sexual ................................................................................................. 82

4.5.2 Tamanho do corpo (interpopulacional) .................................................................. 82

4.5.3 Tamanho do corpo entre as populaes insulares ................................................. 84

4.6 CICLOS REPRODUTIVOS ................................................................................................. 85

4.6.1 Fmeas ...................................................................................................................... 85

4.6.1.1 Contrao da musculatura uterina (UMT) ...................................................... 85

4.6.2 Machos ...................................................................................................................... 87

4.6.2.1 Ciclos reprodutivos .............................................................................................. 87

5 DISCUSSO ................................................................................................................. 92

5.1 MATURIDADE E DIMORFISMO SEXUAL INTRAESPECFICO ............................................ 92

5.2 MORFOLOGIA E HISTRIAS DE VIDA ............................................................................. 94

5.3 CARACTERIZAO DOS CICLOS REPRODUTIVOS ........................................................... 98

5.3.1 Fmeas ...................................................................................................................... 99

5.3.2 Machos ................................................................................................................... 104

6 CONCLUSES .......................................................................................................... 112

REFERENCIAS ............................................................................................................ 114

APNDICE ..................................................................................................................... 128

16

1 INTRODUO

Estratgias reprodutivas podem ser definidas como o conjunto de caractersticas

manifestadas por uma espcie para alcanar o sucesso reprodutivo de modo a garantir o equilbrio

populacional (VAZZOLER, 1996). Dentre tais caractersticas podemos citar: tamanho e nmero

de filhotes, idade e tamanho na maturidade sexual, tamanho mdio do corpo do adulto, perodo e

modo reprodutivo, sincronia reprodutiva intersexual, poca da fecundao e frequncia

reprodutiva (SEIGEL; FORD, 1987; SHINE, 2003). Todas essas caractersticas se combinam

entre si e com o ambiente impondo limites e restries de tal maneira que os organismos

necessitam escolher uma em detrimento da outra (trade-offs) levando-os a alcanar um

equilbrio evolutivo nos valores intermedirios (STEARNS, 1989, 1992).

Contudo, as estratgias reprodutivas apresentam considervel variao geogrfica em

diversas espcies animais (SIMPFENDORFER et al., 2001; WAPSTRA et al., 2001;

MORRISON; MARC-HERO, 2003; LITZGUS; MOUSSEAU, 2006; ALTWEGG et al., 2007).

Em particular, rpteis amplamente distribudos frequentemente apresentam variao em

caractersticas reprodutivas como tamanho do corpo, fecundidade, tamanho do filhote, modo e

perodo reprodutivo (TINKLE, 1961; SEIGEL; FORD, 2001; WAPSTRA et al., 2001; JI;

WANG, 2005; JENKINS et al., 2009, ZUFFI et al., 2009). As variaes geogrficas nas

estratgias reprodutivas podem refletir adaptao local s diferentes condies ambientais ou

mesmo plasticidade fenotpica induzida por fatores proximais, como temperatura e

disponibilidade de recursos (BALLINGER, 1979; SAINT-GIRON, 1982; SEIGEL; FITCH,

1985; DUNHAM et al., 1988; SEIGEL; FORD, 2001).

Uma caracterstica chave dentro das estratgias reprodutivas de serpentes e que

frequentemente apresenta grande variao geogrfica o tamanho do corpo, o qual determina

diretamente diversos parmetros reprodutivos importantes. Por exemplo, a fecundidade (i.e.

quantidade, tamanho e massa dos filhotes) positivamente correlacionada com o tamanho do

corpo materno, ou seja, fmeas maiores podem produzir proles mais numerosas ou filhotes

maiores (FITCH, 1970, 1982; SHINE, 1993, 1994). Portanto, variao no tamanho do corpo

consequentemente implica em variao tambm na fecundidade.

17

Diversos processos podem contribuir para a variao no tamanho corpreo em populaes

naturais. Primeiro, o tamanho mdio do corpo influenciado por taxas de sobrevivncia

diferencial nos adultos: Os animais em uma rea podem ser menores do que em outra

simplesmente porque eles so, na mdia, mais jovens (KING, 1989). Segundo, o tamanho do

corpo pode diferir por modificao gentica local (possivelmente por adaptao) ou mesmo

devido a um efeito fenotpico direto da disponibilidade de alimento nas taxas de crescimento

(MADSEN; SHINE, 1993). Caractersticas ecolgicas como diversidade de espcies, competio

interespecfica e dimenses de nicho variam geograficamente e podem afetar a disponibilidade de

alimento em populaes diferentes (BERRY et al., 1987; EBENHARD, 1990).

Contudo, embora algumas publicaes relatem variao clinal no tamanho mdio do

corpo em rpteis Squamata (e.g. ANGILLETTA et al., 2004), um claro padro de variao ainda

no pode ser traado de forma definitiva (ASHTON, 2001; PINCHEIRA-DONOSO et al., 2008).

Apesar disso, pode se notar que por vezes em ambientes pequenos e isolados como as ilhas,

indivduos insulares frequentemente tendem a apresentar valores extremos de tamanhos corporais

comparados a seus parentes continentais mais prximos (CASE, 1978; SHINE, 1987; MORI;

HASEGAWA, 2002; BOBACK, 2003; LIMOLINO, 2005). Nesses ambientes dois padres so

diversas vezes observados: o nanismo, descrito primeiramente por Case (1978) e mais

recentemente o gigantismo (MORI, 1994). Esses diferentes padres sugerem mudanas

evolutivas na taxa e no tempo de desenvolvimento bem como na ocorrncia de determinados

eventos (heterocronia). Neste caso, o crescimento e aquisio da maturidade sexual (GOULD,

1977; MCKINNEY; MCNAMARA, 1991).

Assim como o tamanho do corpo dos adultos, o tamanho dos filhotes no nascimento

uma caracterstica fundamental na histria de vida de uma espcie. O tamanho dos filhotes no

nascimento em muitos animais assumido ser relacionado ao fitness, porque filhotes maiores so

considerados ter melhor desempenho e, portanto, maiores chances de sobrevivncia do que os

menores (SINERVO, 1990; STEARNS, 1992). Entretanto, como os recursos reprodutivos totais

disponveis para qualquer fmea so finitos, ela no pode aumentar o tamanho do filhote sem

uma concomitante reduo na quantidade de filhotes produzida (SINERVO; LICHT, 1991;

EINUM; FLEMING, 2000). A deciso de uma fmea entre produzir poucos ovos grandes ou

muitos ovos pequenos reflete uma estratgia adotada por ela para maximizar o nmero de filhotes

sobreviventes. Esses trade-offs tambm tendem a variar geograficamente. A teoria das histrias

18

de vida prediz que em ambientes os quais retardam o crescimento, a produo de poucos ovos

grandes favorecida por conta do resultante aumento do filhote (TAYLOR; WILLIAMS, 1984;

YAMPOLSKY; SCHEINER, 1996). Caractersticas maternas e ambientais se combinam para

determinar a estratgia reprodutiva tima. Pelo fato das caractersticas maternas serem

parcialmente moldadas pelo ambiente, os fatores ambientais podem ter efeitos diretos e indiretos

na estratgia reprodutiva tima.

Outra caracterstica que varia geograficamente a poca reprodutiva. Serpentes de zonas

temperadas possuem ciclos sazonais sincronizados s estaes mais quentes do ano (SEIGEL;

FORD, 1987). Em regies tropicais, no entanto, os ciclos so mais variveis podendo haver

espcies com reproduo sazonal (MARQUES, 1996a; FOWLER et al., 1998; ALMEIDA-

SANTOS et al., 2004; KASPEROVICZUS, 2009; ROJAS, 2009; MARQUES et al., 2013) e

outras consideradas com reproduo contnua (PIZZATTO; MARQUES, 2002; PIZZATTO et

al., 2008; OROFINO et al., 2010), sendo que estas ltimas podem apresentar picos reprodutivos

(PIZZATTO; MARQUES, 2002).

A extenso do perodo reprodutivo de uma serpente pode estar relacionada a fatores

climticos, disponibilidade de recursos e ao modo reprodutivo (SAINT-GIRONS, 1982;

SEIGEL; FORD 1987; MARQUES, 1996a, b; MADSEN; SHINE, 2000; ALMEIDA-SANTOS;

SALOMO, 2002; BROWN; SHINE, 2006; PIZZATTO et al., 2007; SHINE; BROWN, 2008).

Embora estudos recentes realizados com serpentes neotropicais tenham avaliado a influncia de

alguns destes fatores sobre o ciclo reprodutivo (MARQUES, 1996a, b; HARTMANN et al.,

2004; PIZZATTO; MARQUES, 2002, 2006) ainda difcil fazer uma predio segura para os

diferentes grupos de serpentes.

Correlaes entre estratgias reprodutivas e diferentes fatores ambientais, assim como

traos biolgicos tm estimulado pesquisadores na busca por explicaes adaptativas para a

diversidade reprodutiva das serpentes. Entretanto, grande parte das explicaes para as variaes

derivada de comparaes interespecficas o que acaba confundindo as interpretaes, pois, as

estratgias reprodutivas por vezes so conservativas em determinadas linhagens filogenticas

ocorrendo em diferentes regies (VITT, 1992; ALMEIDA-SANTOS; SALOMO, 2002;

PIZZATTO; MARQUES, 2007). Dessa forma, comparaes intraespecficas so fundamentais

no estudo da evoluo das estratgias reprodutivas por reduzirem a influncia filogentica e

separarem tanto fatores genticos como no genticos, facilitando comparaes robustas na

19

caracterstica de interesse. Nesse sentido, espcies amplamente distribudas so chaves porque

frequentemente ocupam ambientes suficientemente diversos de forma que podemos esperar

significante diversidade nas histrias de vida. Esse foco filogentico restrito permite testes

robustos de hipteses adaptacionistas.

1.1 BOTHROPS JARARACA REVISO DA LITERATURA

A serpente Bothrops jararaca proporciona uma excelente oportunidade de se investigar a

influncia desses fatores nas variaes geogrficas das estratgias reprodutivas. B. jararaca

distribui-se amplamente no Brasil desde o sul da Bahia at o norte do Rio Grande do Sul,

incluindo diversas ilhas continentais (HOGE; ROMANO-HOGE, 1981; CAMPBELL; LAMAR,

2004; CICCHI et al., 2007; CENTENO et al., 2008; SUZUKI; FURTADO, 2008). Portanto, B.

jararaca apresenta ampla distribuio (~15 de latitude). Ocupa reas com climas distintos, ou

seja, do tipo tropical e subtropical e regies tpicas de Mata Atlntica, podendo adentrar algumas

regies de cerrado e populaes de coespecficos isoladas em ilhas. Tais diferenas climticas e

ambientais ao longo de sua distribuio podem resultar em restries sazonais e seleo nos

traos de histria de vida (JI; WANG, 2005; ZUFFI et al., 2009).

Alm disso, trabalhos recentes parecem indicar a ocorrncia de dois filogrupos

geneticamente distintos (um mais ao norte e outro mais ao sul) e provavelmente com histrias

evolutivas diferentes (GRAZZIOTIN et al., 2006, SUZUKI; FURTADO, 2008). Por exemplo,

Grazziotin et al (2006) realizaram anlises da variao no gene mitocondrial citocromo b de B.

jararaca. Tais anlises mostraram uma espcie altamente diversa e a existncia de dois clados

geograficamente estruturados, com uma divergncia bem enraizada e alopatria quase absoluta. O

primeiro grupo, denominado Clado Norte, inclui as populaes mais setentrionais da

distribuio (Norte de SP, MG, RJ e ES) e o segundo, denominado Clado Sul, abrange as

populaes meridionais (Sul de SP, SC, PR, RS). O tempo de divergncia entre os dois clados foi

estimado em cerca de 3,8 milhes de anos atrs, no Plioceno, um perodo de intensas mudanas

climticas e frequentes fragmentaes da floresta tropical. Alm disso, os dados tambm sugerem

que os dois grupos sofreram uma grande expanso em tamanho populacional entre 50 e 100 mil

20

anos atrs. Todavia, o grupo do sul exibiu um sinal mais evidente de flutuao do tamanho

populacional do que o grupo do norte. Em contrapartida, algumas populaes insulares de B.

jararaca apresentam grande similaridade gentica entre si e com as populaes continentais

adjacentes (SUZUKI; FURTADO, 2008).

Interessante notar que a zona de contato entre esses dois clados praticamente se sobrepe

zona de transio entre os climas tropical e subtropical. Assim, diante de todas as observaes

acima algumas questes acerca da evoluo das estratgias reprodutivas de B. jararaca podem

ser levantadas:

(1) Existe variao geogrfica nas estratgias reprodutivas de Bothrops jararaca ao longo de

sua distribuio?

(2) O padro geral das estratgias reprodutivas de B. jararaca ao longo de sua distribuio

geogrfica se adequa aos padres preditos pela teoria das histrias de vida?

(3) O perodo de divergncia entre os dois clados (estimado em 3,8 milhes de anos) e a

provvel exposio a diferentes presses seletivas ao longo de sua histria evolutiva foi

capaz de produzir diferentes padres reprodutivos, similarmente ao que ocorreu com

congnere B. insularis, separado h aproximadamente 10 mil anos?

At o momento, nenhum estudo sistemtico a fim de analisar as variaes nas estratgias

reprodutivas ao longo da distribuio nesta espcie foi ainda realizado. A nica variao descrita

entre as diferentes zonas climticas a ocorrncia de menores quantidades de escamas ventrais

nas populaes meridionais (PR e SC) em comparao s populaes setentrionais (RJ, MG e

ES), com os espcimes de So Paulo. Os valores apresentados so intermedirios entre os dois

padres (HOGE et al., 1977). Na maioria das serpentes, o nmero de escamas ventrais

positivamente correlacionado com o nmero de vrtebras e, consequentemente, com o tamanho

do corpo (LINDELL et al., 1993; LINDELL, 1994). Portanto, a observao de Hoge et al. (1977)

sugere a ocorrncia de maiores tamanhos corpreos nas populaes setentrionais (i.e. Clado

Norte), o que pode ter importantes implicaes para a reproduo.

A reproduo em populaes de B. jararaca do clado norte foi estudada apenas para a

cidade de So Paulo, Serra do Mar e adjacncias (JANEIRO-CINQUINI et al., 1993;

TRAVAGLIA-CARDOSO, 2001; ALMEIDA-SANTOS, 2005; ALMEIDA-SANTOS;

SALOMO, 2002; MORAES, 2008). Apesar da proximidade dessas localidades, tais estudos

revelaram algumas diferenas importantes nas estratgias reprodutivas. Por exemplo, Moraes

21

(2008) constatou diferenas significativas no grau de dimorfismo sexual entre populaes

litorneas e populaes de reas adjacentes a Serra do Mar e do planalto do Estado de So Paulo

e as considerou associadas s diferenas nos tamanhos das presas experimentadas por cada uma

dessas populaes. Para o clado sul, Alves et al (2000) apresentaram dados reprodutivos de

cativeiro de espcimes procedentes do Rio Grande do Sul. As observaes dos autores

aparentemente sugerem algumas diferenas com relao s populaes do clado norte como, por

exemplo, menores tamanhos na maturidade e menores ninhadas.

Com relao s populaes insulares pouco tambm foi feito. Porm, algumas inferncias

podem ser feitas a partir de estudos de algumas populaes de congneres isolados em ilhas. Por

exemplo, B. alcatraz e B. insularis apresentam tamanhos corporais menores e atingem a

maturidade com menores tamanhos do que B. jararaca do continente (MARQUES et al., 2002a,

b; KASPEROVICZUS, 2009). Dados preliminares apontam diferenas no tamanho do corpo e na

maturidade tambm nas populaes de B. jararaca de outras ilhas do estado de So Paulo

(BARBO et al., 2012). Essas diferenas poderiam ter levado a evoluo de diferentes estratgias

reprodutivas como observado recentemente em B. insularis da ilha da Queimada Grande,

estreitamente aparentada com B. jararaca (KASPEROVICZUS, 2009). Qualquer variao no

tamanho e idade na maturidade sexual tem importantes implicaes para as estratgias

reprodutivas de uma populao em particular porque aps a maturidade a energia antes destinada

para o crescimento, manuteno e estoque, agora repartida tambm com a reproduo

(ANDREWS, 1982; ADOLPH; PORTER, 1993).

Variaes nos ciclos reprodutivos tambm j foram evidenciadas. Machos de B. insularis

apresentaram padro reprodutivo singular entre os Bothrops, principalmente quando comparado a

jararaca continental (KASPEROVICZUS, 2009). Enquanto B. jararaca apresenta um ciclo

reprodutivo do Tipo I (ps-nupcial), isto , a espermatognese ocorre na primavera e no vero e a

estocagem de espermatozoides no outono, perodo em que so observadas as cpulas

(ALMEIDA-SANTOS, 2005), B. insularis apresenta um ciclo do tipo III (pr-nupcial), isto , a

espermatognese ocorre do outono a primavera (com um perodo de dormncia no inverno) e

repouso reprodutivo no vero (KASPEROVICZUS, 2009).

22

2 OBJETIVO GERAL

O presente trabalho teve como objetivo verificar a ocorrncia de variao geogrfica nas

estratgias reprodutivas de Bothrops jararaca dos dois filogrupos geneticamente distintos.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

1- Determinar as medidas corpreas dos adultos e verificar a ocorrncia de dimorfismo

sexual;

2 - Estimar o tamanho corporal mnimo de maturao sexual de machos e fmeas;

3 - Caracterizar os ciclos reprodutivos de machos e fmeas avaliando-se o trato reprodutor

macroscpica e microscopicamente;

4 - Estimar o perodo de corte e acasalamento e a poca de fecundao;

5 - Verificar a ocorrncia de espermatozoides no trato reprodutor das fmeas (vagina, tero,

infundbulo) por meio de anlises histolgicas, bem como o fenmeno da estocagem de

espermatozoides por meio de contrao da musculatura uterina (UMT);

6 - Estimar a fecundidade e determinar as medidas corpreas dos neonatos;

7 - Caracterizar a atividade sazonal das populaes dos clados norte e sul.

2.2 HIPTESES E PREDIES PARA AS ESTRATGIAS REPRODUTIVAS DE BOTHROPS JARARACA

Dada a diferena relativamente grande nos climas, extenso da sazonalidade e tipos de

ambientes ao longo da distribuio de B. jararaca, presume-se que haja variao nas estratgias

reprodutivas. Tais diferenas podem resultar em restries sazonais e seleo dos caracteres

reprodutivos.

23

Baseado nas informaes publicadas e na teoria das histrias de vida espera-se que as

populaes do clado sul (clima temperado) apresentem adultos com menores tamanhos corporais

e consequentemente com menores tamanhos na maturidade, pois tal ambiente propenso a maior

sazonalidade dificultando o crescimento. Tal condio acarretaria uma reduo na fecundidade

para essas populaes. Contudo, buscando contrabalancear a perda no nmero de ovo e

maximizar o sucesso reprodutivo elas investiriam em ovos maiores resultando assim em filhotes

maiores no nascimento. Alm disso, a quantidade de filhotes tenderia a variar menos nas

populaes de clima temperado.

Com relao ao ciclo reprodutivo espera-se que o ciclo seja sazonal em todas as

populaes de estudo. Entretanto, as populaes temperadas tenderiam a diferir apenas na

extenso, sendo mais amplo na regio tropical. J o ciclo dos machos espera-se que haja

diferenas, pois o ciclo espermatognico altamente dependente da temperatura e de

disponibilidade de recursos (KASPEROVICZUS, 2009).

24

3 MATERIAL E MTODOS

Consideramos os dados obtidos de alguns exemplares insulares (e.g. ilha de Bzios e ilha

dos Franceses) bastante diferentes dos observados em B. jararaca (Figura 1) continentais,

especialmente com relao s variaes morfolgicas. Dessa forma, essa tese ir tratar essas

populaes insulares de forma separada das populaes continentais. No entanto, os mtodos

utilizados para o estudo dessas populaes foram os mesmos utilizados para as populaes

continentais.

3.1 REA DE ESTUDO

Esse trabalho baseou-se na diviso proposta por Grazziotin et al. (2006) em clado norte e

clado sul (Figura 2). As procedncias dos exemplares de B. jararaca analisados abrangeram

quase toda a distribuio da espcie (CAMPBELL; LAMAR, 2004). O clado norte compreende

as populaes da Bahia, Esprito Santo, Minas Gerais, Rio de Janeiro e So Paulo e o clado sul os

estados do Paran, Santa Catarina e Rio Grande do Sul. No foram examinados neste trabalho

exemplares provenientes da Bahia (GRAZZIOTIN et al., 2006). Foram avaliados tambm

exemplares de B. jararaca provenientes de duas ilhas do litoral de So Paulo (ilha de Bzios e

Ilhabela) e uma ilha do litoral do Esprito Santo (ilha dos Franceses) (Tabela 1).

25

Figura 1 - Foto de um exemplar adulto de Bothrops jararaca

Foto: Ricardo J. Sawaya. (1999)

26

Figura 2 - Mapa da distribuio geogrfica de Bothrops jararaca

Fonte: Mapa extrado com permisso de Grazziottin et al. (2006).

Os indivduos do clado norte so representados por () e os indivduos do clado sul por (). As linhas

slida e pontilhada indicam os limites das supostas barreiras genticas entre os clados.

Tabela 1 Caractersticas das ilhas estudadas

rea da ilha

(km2)

Distncia do

continente

Coordenadas

Geogrficas Municpio/Estado

Ilhabela 335,9 1,8 23 47S e 45 21W Ilhabela/SP

Ilha de Bzios 7,75 24,1 23 48S e 45 08W Ilhabela/SP

Ilha dos Franceses 0,12 4,0 2055S e 4045W Itapemirim/ES

27

As populaes do clado norte ocupam reas de clima tropical mido-seco, com

temperaturas mdias anuais variando entre 18 e 24 C. No vero, as temperaturas variam em

mdia entre 22 e 26 C, podendo atingir os 30 C (Figura 3). As chuvas concentram-se no

principalmente no vero quando cerca de 70% do total mdio de 2000 a 3000 mm da rea

precipita-se entre novembro e maro (MENDONA; DANNI-OLIVEIRA, 2007). J as

populaes do clado sul ocupam regies de clima subtropical mido, onde a variabilidade trmica

bastante acentuada. As mdias anuais situam-se entre 14 e 22 C, com baixas temperaturas no

inverno. O vero apresenta temperaturas mdias mensais que variam de 20 a 26 C (Figura 4). As

chuvas distribuem-se com maior regularidade ao longo do ano (MENDONA; DANNI-

OLIVEIRA, 2007).

Figura 3 Climatograma relativo rea ocupada por Bothrops jararaca do clado norte

0

50

100

150

200

250

0

5

10

15

20

25

J F M A M J J A S O N D

Pre

cipit

ao

acu

mula

da

(mm

)

Tem

per

atura

(C

)

Meses

Temperatura mdia Precipitao acumulada

28

Figura 4 - Climatograma relativo rea ocupada por Bothrops jararaca do clado sul

3.2 COLETA DE DADOS

Este trabalho envolveu a coleta de dados de animais preservados de B. jararaca

disponvel em diversas colees zoolgicas brasileiras (Quadro 1).

0

50

100

150

200

250

0

5

10

15

20

25


Pre

cipit

ao

acu

mula

da

(mm

)

Tem

per

atu

ra (

C)

Meses

Temperatura mdia Precipitao acumulada

29

Quadro 1 - Colees Zoolgicas que tiveram exemplares de Bothrops jararaca analisados.

Clado Coleo (Sigla)

Norte Coleo Herpetolgica Alphonse Richard Hoge (IBSP)

Norte Museu de Zoologia Prof. Ado Jos de Cardoso, Universidade Estadual de Campinas

(ZUEC)

Norte Hospital Vital Brazil (HVB)

Norte Museu de Zoologia da Universidade de So Paulo (MZUSP)

Norte Animais disponibilizados pelo pesquisador Ricardo Sawaya, da Unifesp (RJS)

Norte Pontifcia Universidade Catlica de Minas Gerais (PUC-MG)

Norte Museu Nacional do Rio de Janeiro (MNRJ)

Norte Coleo Zoolgica da Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)

Norte Animais de trabalho de campo de Ricardo J. Sawaya ainda no tombados em coleo

(RJS)

Sul Museu de Histria Natural Capo da Imbuia (MHNCI)

Sul Museu de Cincias e Tecnologia Pontifcia Universidade Catlica do Rio Grande do

Sul (MCP)

Sul Coleo Zoolgica da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)

Foi analisado um total de 1358 exemplares (Apndice A) de Bothrops jararaca machos e

fmeas (maduros, imaturos e neonatos) (Quadro 2), provenientes de diversas colees zoolgicas

brasileiras (Quadro 1). O mapa da distribuio geogrfica dos exemplares analisados encontra-se

na figura 5.

30

Quadro 2 Nmero de exemplares de Bothrops jararaca analisados por clado

Populao Total de animais

examinados Procedncia dos exemplares

Clado Norte

So Paulo 316 IBSP, ZUEC

Ilha de Bzios - SP 52 IBSP

Ilhabela - SP 36 IBSP, RJS

Rio de Janeiro 177 MNRJ, UFRJ, MZUSP

Minas Gerais 55 PUC-MG, MZUSP, MNRJ,IBSP

Esprito Santo 49 MZUSP, RJS, MNRJ, IBSP

Ilha dos Franceses - ES 28 RJS

Total 713

Clado Sul

Paran 298 MHNCI, MCP

Rio Grande do Sul 201 IBSP, MCP, UFRGS

Santa Catarina 146 MCP, UFRJ

Total 645

32

3.2.1 Morfologia e histrias de vida

Os dados de morfologia corprea (comprimento do corpo, comprimento da cauda,

comprimento da cabea e massa) de B. jararaca foram obtidos a partir de exemplares machos e

fmeas maduros sexualmente. A maturidade sexual nas fmeas inferida a partir da observao

do menor indivduo com folculos vitelognicos (>10 mm), embries ou ovidutos pregueados no

trato reprodutivo (Figura 6B; SHINE, 1977a) ou pela constatao da presena de

espermatozoides no trato reprodutor (KASPEROVICZUS, 2009). Nos machos a maturidade

sexual inferida a partir da observao do menor indivduo com ductos deferentes opacos e

enovelados (SHINE, 1977b; ALMEIDA-SANTOS, 2005; Figura 7).

Figura 6 Espcimes fmea de Bothrops jararaca dissecados na regio abdominal

Fonte: Kasperoviczus, K.N. (2013)

A - Fmea madura, porm no reprodutiva com folculos em vitelognese primria. Note o tero posterior

pregueado. B Fmea madura com embries no ovidutos. F (folculo no vitelognicos - V1 no ovrio); I

(intestino); OV (ovrio); UT (tero posterior); VT (vitelo); * (embrio).

A B

33

Figura 7 - Macho de Bothrops jararaca dissecado prximo regio caudal expondo os ductos deferentes

direito e esquerdo


I (intestino); H (hemipnis); Setas apontam os ductos deferentes direito e esquerdo.

Ao todo foram utilizados para as anlises morfolgicas 216 fmeas e 147 machos do

clado norte e 182 fmeas e 157 machos do clado sul.

Para as anlises morfolgicas de Ilhabela foram utilizados dados de 12 machos e 11

fmeas. Da ilha de Bzios avaliamos 20 machos e 12 fmeas e da ilha dos Franceses nove

machos e oito fmeas.

Cada exemplar adulto teve os seguintes dados registrados: (1) comprimentos rostro-

cloacal (CRC) e caudal (CC; ambas as medidas tomadas com fita mtrica milimetrada); (2)

comprimento da cabea (CCAB; com paqumetro digital; 0,01 mm) (Figura 8); (3) massa, aps

drenagem do lquido preservativo conforme Martins et al. (2001), com dinammetro Pesola; 0,5

g e (4) sexo (exame gonadal).

34

Figura 8 Esquema indicando as medidas corpreas tomadas de cada indivduo de Bothrops jararaca

CC (comprimento da cauda); CCAB (comprimento da cabea); CRC (Comprimento rostro-cloacal).

3.2.2 ndice de dimorfismo sexual no tamanho (SSD)

O ndice de dimorfismo sexual (SSD) foi calculado utilizando-se a frmula: SSD = 1-

[CRC mdio dos adultos do sexo de maior tamanho/CRC mdio dos adultos do sexo de menor

tamanho] conforme Shine (1944).

35

3.2.3 Caracterizao dos ciclos reprodutivos de machos e fmeas

Para caracterizar o ciclo reprodutivo de B. jararaca cada exemplar foi dissecado por meio

de uma inciso ventral ao longo de dois teros posteriores do corpo. As fmeas tiveram os

seguintes dados registrados: (1) o estgio folicular, ou seja, se o animal encontrava-se em

vitelognese primria (V1; Figura 6A) ou vitelognese secundria/ovo/embrio (V2; as distines

entre folculos em vitelognese primria (V1) e vitelognese secundria (V2) foram feitas por

meio do comprimento folicular; Figura 6B), (2) nmero de folculos ovarianos ou embries, (3)

tamanho do maior folculo ovariano ou embrio (com paqumetro digital; 0,01 mm) e (4)

presena ou no de contrao muscular uterina (Figura 9). Nos machos, os seguintes dados foram

tomados: (1) comprimento, largura e espessura dos testculos direito e esquerdo (medidos com

paqumetro digital; 0,01mm) e (2) largura do ducto deferente direito e esquerdo na poro caudal

(medidos com paqumetro digital; 0,01mm; Almeida-Santos et al. (2004).

Para clculo do volume testicular, foi utilizada a frmula: VT = 4/3 abc; onde a = 1/2

comprimento, b = 1/2 largura e c = 1/2 espessura (SHINE, 1980). O volume dos testculos foi

utilizado como indicador da atividade espermatognica (FOX, 1952; SHINE, 1977a; VOLSE,

1944).

3.2.4 Contrao da Musculatura Uterina (UMT)

Foi averiguada em cada fmea a regio posterior do tero para constatar a presena de

contrao muscular uterina (UMT; Figura 9). Segundo Almeida-Santos e Salomo (1997, 2002),

contrao muscular uterina uma mudana na morfologia da regio posterior do tero resultando

em uma obstruo que impede a passagem do espermatozoide para o tero anterior at que ocorra

a ovulao A regio posterior do tero de fmeas de B. jararaca que apresentaram contrao

muscular uterina foi coletada para anlises histolgicas a fim de se verificar a presena de

espermatozoides.

36

Figura 9 Exemplar de fmea de Bothrops jararaca dissecada na regio caudal evidenciando os teros

direito e esquerdo contorcido (UMT)


I (intestino); Setas apontam os teros direito e esquerdo com contrao da musculatura uterina (UMT).

3.2.5 Histologia gonadal

Amostras teciduais de fmeas e machos adultos de Bothrops jararaca preservados foram

coletadas aps exames macroscpicos para estudos de microscopia de luz. Fmeas tiveram

fragmentos coletados de tero e infundbulo (fmeas com embries nos ovidutos no tiveram

material coletado) e dos machos foram coletados rim, ductos deferentes e testculos. Para uma

padronizao somente os rgos do lado direito foram coletados. As amostras coletadas foram

recortadas em pequenas peas de 0,5 cm de aresta e colocadas em soluo fixadora de

paraformaldedo a 4%, tamponado em PBS em pH 7,2. O material foi desidratado em uma srie

crescente de etanol de 70 a 100% e diafanizado em xilol, seguido da incluso em parafina. Cortes

I

37

finos foram realizados com 5 m de espessura e em seguida o material foi submetido a colorao

bsica com hematoxilina-eosina.

A documentao do material foi feita por meio de fotografias com cmera digital

(Olympus Q-Color 5) acoplada a um microscpio de luz (Olympus BX-51) utilizando-se o

programa Image-Pro Express Olympus.

A fim de se caracterizar as fases espermatognicas (anlises histolgicas) dos machos de

B. jararaca foi confeccionada uma tabela para classificao dos estgios espermatognicos,

adaptada a partir de Goldberg e Parker (1975); Mcpherson e Marion (1981) e Saint-Girons

(1982), utilizado por Kasperoviczus (2009), buscando assim, uma viso geral do ciclo

espermatognico dos machos com relao s diferentes pocas do ano (Quadro 3).

Quadro 3 - Classificao dos estgios espermatognicos em machos de Bothrops jararaca

Estgios Descrio dos tbulos seminiferous

1 Regresso completa; tbulos seminferos somente com poucas espermatognias

e clulas de Sertoli; podem ter poucos espermatozoides na luz do lmen.

2 Espermatognias aumentando (crescendo) e dividindo-se; espermatcitos

primrios.

3 Espermtides em metamorfose com poucos espermatozoides.

4 Espermiognese; espermas maduros no lmen (nvel mximo de

espermiognese).

6

Epitlio germinal reduzido, com poucas espermatognias, espermatcitos e

espermtides; podem conter ou no espermatozoides no lmen de uma a duas

camadas de clulas.

Fonte: Adaptado de GOLDBERG; PARKER, 1975; MCPHERSON; MARION, 1981 e SAINT-GIRONS,

982).

38

3.2.6 Fecundidade

A estimativa de fecundidade foi realizada contando-se o nmero de ovos/embries nos

ovidutos de fmeas reprodutivas (SEIGEL; FORD, 1987) preservadas em colees zoolgicas

(n=56 CS e n=35 CN). A fecundidade no pode ser estimada em fmeas de ilhas devido ao baixo

tamanho amostral (na ilha de Bzios e ilha dos Franceses, por exemplo, no foi encontrada

nenhuma fmea grvida).

3.2.7 poca de nascimento dos filhotes

Registros de nascimento dos filhotes foram resgatados dos registros de tombo das

colees zoolgicas IBSP, MHNCI e MCP. Alm disso, dados de literatura e registro de

nascimentos em cativeiro tambm foram levantados. Informaes de 21 nascimentos em cativeiro

foram levantadas para o CS. Esses dados foram gentilmente cedidos por Glucia Funk Pontes,

curadora da coleo Herpetolgica da PUC-RS (MCP) a partir de registros de parturio de B.

jararaca provenientes do desativado serpentrio da PUC-RS. Informaes de 43 nascimentos de

B. jararaca do CN foram levantadas a partir de exemplares mantidos em cativeiro ou no

serpentrio semiextensivo do Instituto Butantan. As informaes foram cedidas por Selma

Almeida-Santos e Leonardo Oliveira.

3.2.8 Tamanho dos filhotes

Para comparar o tamanho dos filhotes do CN e CS foi tomado o comprimento rostro-

cloacal de filhotes recm-nascidos preservados em colees zoolgicas.

39

3.3 FORMA DE ANLISE DOS RESULTADOS

As anlises foram realizadas utilizando-se testes paramtricos ou o similar no

paramtrico dependendo da natureza dos dados. As anlises foramo baseadas em Zar (1999) e as

diferenas consideradas significativas quando P < 0,05.

Para as comparaes morfolgicas foram utilizados apenas indivduos sexualmente

maduros para evitar problemas relacionados a mudanas ontogenticas na forma do corpo

(KING, 1989). Os indivduos com itens alimentares e as fmeas grvidas ou com folculos em

fase final de vitelognese foram excludos apenas das comparaes de massa. O grau de

dimorfismo sexual no tamanho corporal (SSD) das populaes foi calculado conforme Shine

(1994) utilizando-se a frmula: SSD = 1 - (CRC mdio dos adultos do sexo de maior

tamanho/CRC mdio dos adultos do sexo de menor tamanho). O dimorfismo sexual nos animais

maduros foi verificado com teste-t (no tamanho do corpo) e com anlise de covarincia (para

tamanho relativo da cauda, massa relativa do corpo e tamanho relativo da cabea). Comparaes

interpopulacionais dos caracteres morfolgicos foram realizadas com teste-t, ANOVA ou

ANCOVA.

O ciclo reprodutivo das fmeas foi caracterizado pela distribuio ao longo do ano do

tamanho dos folculos ovarianos e a presena de embries. A observao de espermatozoides no

trato reprodutivo com uso de anlises histolgicas permitiu inferir o perodo da cpula e

estocagem de esperma tanto em machos como em fmeas. O ciclo dos machos foi caracterizado

pela distribuio ao longo do ano do volume relativo dos testculos e do dimetro relativo dos

ductos deferentes.

O volume testicular foi positivamente correlacionado com o tamanho do corpo em ambos

os clados (CN: r = 0,34; P = 0,0009 e CS: r = 0,34; P < 0,0001). A mesma correlao foi

observada entre o dimetro do ducto deferente e o tamanho do corpo (CN: r = 0,49; P < 0,0001 e

CS: r = 0,32; P < 0,0001). Diante disso, variaes sazonais no volume testicular e no dimetro

dos ductos deferentes foram testadas com anlise de covarincia (ANCOVA) utilizando o CRC

como co-varivel.

No entanto, simples anlises morfomtricas dos testculos e ductos por vezes tm falhado

em encontrar sazonalidade no ciclo espermatognico dos machos (KASPEROVICZUS, 2009;

40

SANTOS, 2009; ROJAS et al., 2013). Assim, anlises histolgicas dos testculos e ductos

deferentes so empregadas paralelamente s anlises morfomtricas para confirmao do ciclo

espermatognico (KASPEROVICZUS, 2009). As fases espermatognicas so determinadas

conforme tabela de classificao dos estgios espermatognicos, buscando assim, uma

confirmao definitiva da sazonalidade do ciclo dos machos (KASPEROVICZUS, 2009).

Quando mencionadas, as estaes do ano foram primavera, vero, outono e inverno.

A relao entre a fecundidade (i.e. quantidade de filhotes) e o tamanho corporal das

fmeas foi investigada por anlises de regresso linear, tendo o CRC como varivel

independente. Comparaes interpopulacionais na fecundidade foram realizadas com ANCOVA,

tendo como covarivel o CRC materno.

A fecundidade de B. jararaca foi estimada calculando-se a mdia e o desvio padro do

numero total de ovos ou embries nos ovidutos (SEIGEL; FORD, 1987) de fmeas reprodutivas

depositadas em colees biolgicas.

Foi realizado um teste t para as comparaes do tamanho dos filhotes entre o CN e CS.

Todas as anlises foram baseadas em Zar (1999) e executadas no programa Statistica

(STATSOFT, 2007) e no programa Instat, as diferenas foram consideradas significativas quando

P < 0,05.

41

4 RESULTADOS

4.1 MORFOLOGIA E HISTRIAS DE VIDA (COMPARAES INTERSEXUAIS)

Os dados morfolgicos obtidos para machos e fmeas dos clados norte (CN) e sul (CS)

foram resumidos na tabela 2. Em ambos os clados machos e fmeas diferiram quanto s variveis

morfolgicas examinadas (CRC, CC, Ccab e massa). Fmeas adultas foram em mdia maiores e

atingiram maiores CRCs que os machos (Tabelas 2 e 3 e Figura 10). Alm disso, em valores

brutos, fmeas apresentaram tambm maiores cabeas e caudas e foram mais pesadas que os

machos (Tabelas 2 e 3).

O CRC foi correlacionado com todas as variveis morfolgicas examinadas em ambos os

clados (Figura 11). Diante disso, os dados foram reexaminados com anlise de covarincia

(ANCOVA), utilizando o CRC como covarivel. Essas anlises mostraram que, em termos

relativos, as fmeas de ambos os clados apresentaram cabeas maiores e foram relativamente

mais pesadas, porm tiveram caudas relativamente menores que machos (Tabela 2, 4 e Figura

11). O ndice de dimorfismo sexual (SSD; Sexual Size Dimorphism) foi de 0,33 para o CN e de

0,21 para o CS.

A menor fmea sexualmente madura do CN mediu 746 mm enquanto que o menor macho

mediu 613 mm. Para o CS, a menor fmea madura observada mediu 689 mm enquanto que o

menor macho mediu 506 mm. O tamanho do corpo dos cinco menores indivduos maduros de

cada sexo diferiu significativamente com fmeas apresentando maiores valores (Tabelas 2 e 3).

Dessa forma, fmeas amadureceram sexualmente com maiores tamanhos corpreos que os

machos em ambos os clados.

42

Tabela 2 - Morfologia de machos e fmeas adultos de Bothrops jararaca dos clados norte e sul. A tabela apresenta valores mdios DP e valores

extremos para as variveis morfolgicas examinadas. CRC: comprimento rostro-cloacal, CC: comprimento da cauda e Ccab:

comprimento da cabea

Varivel

Clado Norte Clado Sul

Machos n Fmeas n Machos n Fmeas n

CRC (mm) 794,6 88,0

613-980

146 1056,2 111,2

746-1383

210 743,0 75,7

506-921

162 902,2 85,2

689-1147

182

CC (mm) 133,0 16,2

90-170

141 153,9 17,4

109-202

199 123,8 12,7

85-152

158 131,8 13,8

96-181

172

Ccab (mm) 31,5 3,2

23,9-38,9

144 44,4 5,0

31,2-65,4

206 31,9 3,1

22,2-37,6

159 40,2 3,5

30,5-50,4

175

Massa (g) 135,9 49,9

47-338

146 416,7 168,6

90-980

202 154,1 54,6

55-390

157 346,3 133,4

75-900

175

CRC maturidade (mm) 621 4,9

613-625

5 790,0 27,6

746-815

5 573,4 38,7

506-596

5 735,2 28,1

689-763

5

42

43

Tabela 3 - Resultados das anlises estatsticas (teste-t) do dimorfismo sexual (dados brutos) em adultos de

Bothrops jararaca dos clados norte (CN) e clado sul (CS)

Varivel

Significncia do dimorfismo sexual

gl T P

CN Machos vs. Fmeas

CRC 354 24,20 < 0,0001

CC 338 11,01 < 0,0001

Ccab 347 29,13 < 0,0001

Massa 346 25,82 < 0,0001

CRC maturidade 8 13,48 < 0,0001

CS Machos vs. Fmeas

CRC 342 18,22 < 0,0001

CC 328 5,48 < 0,0001

Ccab 332 22,84 < 0,0001

Massa 330 19,01 < 0,0001

CRC maturidade 8 7,56 < 0,0001

44

Figura 10 - Distribuio do comprimento rostro-cloacal de machos e fmeas adultos de Bothrops jararaca dos clados norte (A) e clado sul (B)

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

491-5

00

501-6

00

601-7

00

701-8

00

801-9

00

901-1

000

1001-1

100

1101-1

200

12

01-1

300

13

01-1

400

1401-1

500

Fre

qu

nci

a d

e o

bse

rv

a

es

Comprimento rostro-cloacal (mm)

Machos -

Clado Norte

A

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

49

1-5

00

50

1-6

00

60

1-7

00

70

1-8

00

801-9

00

90

1-1

00

0

10

01-1

100

11

01-1

200

12

01-1

300

13

01-1

400

14

01-1

500

Fre

qu

nci

a d

e ob

serva

es

Comprimento rostro-cloacal (mm)

Machos -

Clado Sul

B

45

Tabela 4 - Resultados dos testes estatsticos do dimorfismo sexual em adultos de Bothrops jararaca dos

clados norte e sul. O dimorfismo foi testado com ANCOVA com o sexo como fator e CRC

como covarivel

Varivel relativa ao CRC

Inclinaes Interceptos

gl F P gl F P

Clado Norte

CC 1, 336 1,52 0,22 1, 337 11,69 0,0007

Ccab 1, 343 3,99 0,05

Massa 1, 342 36,5

46

Figura 11 - Correlao entre o comprimento rostro-cloacal e o comprimento da cauda (CC), comprimento da cabea (Ccab) e massa corprea em

machos e fmeas de Bothrops jararaca dos clados norte (A) e sul (B)

46

47

4.2 MORFOLOGIA E HISTRIA DE VIDA (COMPARAES INTERPOPULACIONAIS)

4.2.1 Morfologia e maturidade sexual

Todas as variveis morfolgicas examinadas diferiram entre os clados em ambos os

sexos. Machos de B. jararaca do clado norte foram maiores que os machos do clado sul (U =

7932,0; P < 0,0001; Figura 12), tiveram cabeas relativamente menores e foram menos pesados

(Tabelas 2, 4 e Figura 14). Embora o tamanho relativo da cauda no tenha diferido entre os

clados, a comparao foi marginalmente no significativa, com machos do CN tendendo a

apresentar maiores caudas. Fmeas do CN foram maiores que as do CS (U = 5495,0; P < 0,0001;

Figura 13), tiveram caudas maiores, porm tiveram cabeas relativamente menores e foram

menos pesadas (Tabelas 2, 5 e Figura 14).

O tamanho do corpo na maturidade sexual diferiu entre os clados em ambos os sexos, com

os indivduos do CN atingindo a maturidade sexual com maiores tamanhos corpreos que os

indivduos do CS (machos: U = 0,0; P = 0,008; fmeas: U = 0,0; P = 0,008).

Entretanto, esses resultados diferiram quando considerado o tamanho do corpo na

maturidade relativo ao tamanho mdio do corpo. Machos do CN atingiram a maturidade em

mdia com 79% do tamanho mdio do corpo do adulto, enquanto que os machos do clado sul

esse valor foi de 77% (calculados como a mdia da razo entre o tamanho do corpo dos cinco

menores indivduos e o tamanho mdio do adulto). Essa diferena no foi significativa (U = 9,0;

P = 0,55). Fmeas do CN atingiram a maturidade com tamanhos corpreos proporcionalmente

menores ao tamanho do adulto do que as fmeas do CS (CN = 72% vs. CS = 81%; t = 5,37; gl =

8; P = 0,0007).

48

Figura 12 - Diagrama de Box plot. Mdia e variao do comprimento rostro-cloacal (CRC) entre machos de Bothrops jararaca do clado norte e clado sul. Linhas horizontais no interior das caixas

representam valores mdios, limite das caixas o desvio padro e linhas verticais os valores

mnimos e mximos observados

Figura 13 - Diagrama de Box plot. Mdia e variao do comprimento rostro-cloacal (CRC) entre fmeas

de Bothrops jararaca do clado norte e clado sul. Linhas horizontais no interior das caixas

representam valores mdios, limite das caixas o desvio padro e linhas verticais os valores

mnimos e mximos observados

CN CS

Clado

600

700

800

900

1000

1100

1200

1300

1400

1500

CR

C (

mm

)

CN CS

Clado

400

500

600

700

800

900

1000

CR

C (

mm

)

50

Figura 14 - Correlao entre o comprimento rostro-cloacal e o comprimento da cauda (A), comprimento

da cabea (B) e massa corprea (C) em machos de Bothrops jararaca dos clados norte e sul

1.90

1.95

2.00

2.05

2.10

2.15

2.20

2.25

2.65 2.70 2.75 2.80 2.85 2.90 2.95 3.00 3.05

Log

Co

mp

rim

en

to d

a ca

ud

a

e

Clado Sul

Clado Norte

A

1.30

1.35

1.40

1.45

1.50

1.55

1.60

1.65

2.65 2.70 2.75 2.80 2.85 2.90 2.95 3.00 3.05

Log

Co

mp

rim

en

to d

a ca

be

a

e

B

1.40

1.60

1.80

2.00

2.20

2.40

2.60

2.80

2.65 2.70 2.75 2.80 2.85 2.90 2.95 3.00 3.05

Log

Mas

sa

Log Comprimento rostro-cloacal

C

51

4.2.2 Fecundidade

O tamanho mdio da ninhada diferiu entre os clados (t = 2,95; gl = 88; P = 0,004) sendo

maior no CN (mdia = 15,3 5,4 embries; variao: 6-28; n = 35) do que no CS (mdia = 11,9

4,2 embries; variao: 4-28; n = 56). O tamanho da ninhada foi positivamente correlacionado

com o tamanho do corpo materno nas duas populaes (CN: r = 0,65; n = 34; P < 0,0001 e CS: r

= 0,49; n = 55; P = 0,0002; Figura 15). A variao no tamanho da ninhada explicvel pelo CRC

materno foi de aproximadamente 42% para o CN e 24% para o CS. A taxa na qual o tamanho da

ninhada aumenta em decorrncia de aumentos no tamanho do corpo materno no diferiu entre as

populaes (ANCOVA, inclinaes: F 1,88 = 0,12; P = 0,73; Figura 15). Mesmo aps corrigir a

influncia do tamanho corpo materno, o tamanho da ninhada continuou diferindo entre os clados

(ANCOVA, interceptos: F 1,89 = 4,28; P = 0,04; Figura 15). No entanto, as fmeas do CS

apresentaram uma fecundidade relativa maior do que as fmeas do CN. Dessa forma, o maior

nmero de filhotes produzido por fmeas do CN resulta do maior tamanho corpreo observado

nesse clado.

Figura 15 - Relao entre o nmero de filhotes e o comprimento rostro-cloacal materno em Bothrops

jararaca dos clados norte e sul

0.40

0.60

0.80

1.00

1.20

1.40

1.60

2.85 2.90 2.95 3.00 3.05 3.10

Lo

g N

m

ero

de

filh

ote

s

Log Comprimento rostro-cloacal (mm)

Clado Sul

Clado Norte

52

O comprimento mdio do ovo na populao do CN foi de 38,2 9,6 mm (variao: 24, 3-

75, 5; n = 35) e no CS de 38,6 8,8 mm (variao: 20, 5-63,7; n = 55). No foram observadas

correlaes entre o comprimento mdio do ovo e o tamanho do corpo materno em ambos os

clados (CN: r = 0, 05; n = 34; P = 0, 76 e CS: r = -0,13; n = 54; P = 0, 36; Figura 16). O

comprimento mdio do ovo no diferiu entre as populaes (t = 0, 21; gl = 88; P = 0, 83).

Figura 16 - Relao entre o dimetro do maior ovo e o comprimento rostro-cloacal materno em Bothrops

jararaca dos clados norte e sul

Anlise de correlao foi utilizada para testar a hiptese de existncia de um trade-off

negativo entre o tamanho da ninhada e o tamanho dos ovos. Tal anlise foi conduzida utilizando-

se os resduos derivados da regresso entre o nmero de embries e o CRC materno devido

existncia de relao alomtrica entre elas (Figura 17). Uma correlao negativa entre os resduos

do nmero de embries/CRC materno e o tamanho dos ovos significa que fmeas que produzem

ninhadas relativamente numerosas tambm produzem ovos (e possivelmente filhotes)

relativamente pequenos e vice-versa. Conforme predito, o nmero de filhotes foi inversamente

1.2

1.3

1.4

1.5

1.6

1.7

1.8

1.9

2.0

2.85 2.90 2.95 3.00 3.05 3.10

Lo

g D

Im

etro

do

mai

or

ovo

Log Comprimento rostro-cloacal

Clado Sul

Clado Norte

53

correlacionado com o comprimento do maior ovo para ambos os clados (CN: r = -0,45; n = 33; P

= 0,008 e CS: r = -0,31; n = 54; P = 0,02; Figura 17). Contudo, quando os dados para cada

populao foram contrastados o trade-off entre quantidade e tamanho dos ovos no variou

significativamente entre as populaes (ANCOVA, com a fecundidade relativa como covarivel,

inclinaes: F1,83 = 0,67; P = 0,41; interceptos: F1,84 = 0,01; P = 0,92; Figura 17).

Figura 17 - Trade-off entre a fecundidade relativa e o tamanho do maior ovo em Bothrops jararaca dos

clados norte e sul. A fecundidade relativa foi calculada a partir dos resduos da regresso entre

o nmero de filhotes pelo tamanho do corpo materno

4.2.3 Tamanho dos filhotes

O CRC mdio dos filhotes recm-nascidos diferiu entre os clados (t = 3,34; gl = 181; P =

0,0010). Filhotes de B. jararaca do CS (n = 61) apresentaram menores tamanhos (252,1 20,6

mm; amplitude = 205 248 mm) do que os filhotes do CN (260,4 12,7 mm; amplitude = 176

281 mm; n = 122).

-0.5

-0.4

-0.3

-0.2

-0.1

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 2.0

Fec

undid

ade

rela

tiva

Log Tamanho maior ovo

Clado Norte

Clado Sul

Linear (Clado Norte)

Linear (Clado Sul)

54

4.3 CARACTERIZAO DOS CICLOS REPRODUTIVOS

A seguir, sero apresentados os resultados dos ciclos reprodutivos de machos e fmeas de

B. jararaca do clado norte e sul e de ilhas.

4.3.1 Fmeas

4.3.1.1 Vitelognese, gestao e poca de nascimento dos filhotes

O ciclo reprodutivo de fmeas de Bothrops jararaca do clado norte (CN) e clado sul (CS)

sazonal. Folculos em vitelognese primria (V1) foram observados em todos os meses do ano

tanto para o CN como para o CS (Figuras 18A e B). Folculos ovarianos com incio de deposio

de vitelo (V2; > 10 mm) foram observados a partir de fevereiro (vero) para fmeas de ambos os

clados. No entanto, um aumento substancial na atividade vitelognica (folculos > 20 mm) foi

observado a partir de maro (final do vero) para as fmeas do CS (Figura 18B) enquanto que

para o CN, tal aumento foi evidente mais tardiamente, sendo observado a partir de abril (incio do

outono, Figura 18B). Apesar disso, a durao da vitelognese foi similar entre os clados,

estendendo-se at o incio de dezembro (final da primavera; Figura 18A e B).

Fmeas grvidas foram observadas a partir agosto (inverno) em fmeas do CN e CS

(Figura 18A e B). Fmeas do CS parecem ter um ciclo um pouco mais curto, com fmeas

grvidas observadas somente at metade de maro (final do vero) enquanto que fmeas do CN

parecem ter um ciclo mais extenso onde fmeas grvidas puderam ser observadas at maio

(outono) (Figura 18A e B). Entretanto, nascimentos no foram registrados nesse perodo.

55

Crculos pretos: fmeas em vitelognese primria (V1), crculos brancos: fmeas em vitelognese

secundria (V2) e crculos vermelhos: fmeas com embries nos ovidutos. As figuras de serpentes

correspondem ao perodo de nascimento dos filhotes e a seta a poca de observao de cpula no

serpentrio do Instituto Butantan.

Nascimentos foram registrados durante todo o vero e incio do outono (de janeiro a abril)

nos dois clados (CS; n=21; CN; n=43). A poca de nascimento dos filhotes no diferiu entre os

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90


Di

met

ro d

os

fol

culo

s /e

mb

rio

(mm

)

Meses

B

0

10

20

30

40

50

60

70

80

J F M A M J J A S O N DDi

met

ro d

os

fol

culo

s/em

bri

es

(mm

)

Meses

A

Figura 18- Variao sazonal do dimetro do maior folculo ovariano em fmeas adultas de Bothrops

jararaca do clado norte (A) e clado sul (B)

56

clados (Figuras 18 e 19). Em ambos os clados o maior numero de nascimento ocorreu no ms de

Maro (Figura 19).

Dessa forma, os ciclos reprodutivos de fmeas de B. jararaca do CN e CS so sazonais e

bastante similares em sua extenso, com folculos vitelognicos sendo observados a partir do

final do vero at o a primavera. Fmeas grvidas so observadas principalmente a partir da

primavera e nascimentos acontecendo principalmente no vero.

Figura 19 - Nascimento dos filhotes de Bothrops jararaca do clado norte e do clado sul

4.3.1.2 poca de cpula

Foram resgatados dados de comportamento de corte e cpula entre machos e fmeas de B.

jararaca somente para animais do CN. Esses dados foram obtidos de exemplares de cativeiro e

do serpentrio semiextensivo do Instituto Butantan. Foram observados cpulas no cativeiro em

abril, maio e junho (outono). As observaes de cpula em cativeiro de B. jararaca do CN

corroboram os dados obtidos na histologia, onde animais com espermatozoides foram observados

especialmente no outono (Figura 20). Apesar de no ter resgatado dados de cpula de B. jararaca

do CS, as anlise histolgica dos teros desse clado tambm confirma uma cpula outonal, pois

0%

10%

20%

30%

40%

50%

Janeiro Fevereiro Maro Abril

poca

de

nas

cim

ento

de

B.j

ara

raca

Meses

CS

CN

57

espermatozoides foram observados no lmen uterino principalmente nessa poca do ano (Figura

21).

4.3.1.3 Contrao da musculatura uterina (UMT) e estocagem de esperma

Fmeas de B. jararaca do CN e CS apresentaram contrao da musculatura uterina

(UMT). Foram avaliadas 215 fmeas maduras do CN. Desse total, 30,7% (n=66) apresentaram

UMT enquanto que 64,7% (n=139) no apresentaram. Em dez ocasies (4,7%) no foi possvel

distinguir macroscopicamente se os exemplares apresentavam ou no UMT. Foram realizados

cortes histolgicos em 80 fmeas de B. jararaca do CN. Das 187 fmeas maduras do CS

analisadas at o momento, 32,6% (n = 61) apresentaram UMT, enquanto que 64,2% (n = 120)

no apresentaram. Em seis ocasies (3,2%) no foi possvel distinguir macroscopicamente se os

exemplares apresentavam UMT. Foram realizados cortes histolgicos de 80 fmeas de B.

jararaca do CS.

Anlises histolgicas dos teros das fmeas do CN e CS revelaram uma grande

quantidade de fmeas com espermatozoides estocados nos teros no outono e inverno (Figuras 20

e 21 A e B). No entanto, o outono foi poca em que a maioria das fmeas encontrava-se com

espermatozoides no lmen uterino (Figuras 20 e 21 A). Em ambos os clados, no foram

encontrados espermatozoides estocados em fmeas na primavera (Figuras 20 e 21C). De uma

maneira geral, fmeas de ambos os clados no apresentaram espermatozoides estocados no vero

(Figuras 20 e 21 D) com exceo de trs fmeas do CN e uma fmea do CS (Figuras 20 e 21 E).

Todas as fmeas do CN e do CS que apresentaram espermatozoides estocados nos teros estavam

vitelognicas, isto , apresentavam folculos em V2, com exceo de duas fmeas do CS que

apresentavam folculos em V1.

Dessa forma, espermatozoides so encontrados especialmente no outono tanto para

fmeas do CN como do CS. Com isso, pode-se inferir que a poca de acasalamento para ambos

os clados outonal podendo estender-se at o inverno, confirmado pela observao de cpulas

em cativeiro para o CN.

58

Figura 20 - Histologia de corte transversal do tero posterior de fmeas de Bothrops jararaca do clado

norte

Fontes: Kasperoviczus, K.N. (2013).

A - (Rio de Janeiro) no Outono e B - (Minas Gerais) no Inverno; Exemplares apresentando muito

espermatozoides no lmen uterino. C - (Esprito Santo) na Primavera; Exemplar sem espermatozoides no

lmen uterino. D e E - (So Paulo) no Vero onde, (D) representa a maioria dos exemplares da estao,

sem espermatozoides no lmen uterino e (E) exemplar com espermatozoides no tero. ep (Epitlio

uterino); espL (espermatozoides no lmen uterino); L (lmen uterino) m (camada muscular).

Hematoxilina-eosina.

59

Figura 21 - Histologia de corte transversal do tero posterior de fmeas de Bothrops jararaca do clado sul

Fonte: Kasperoviczus, K.N. (2013).

A (Paran) no Outono e B (Paran) no Inverno; Exemplares apresentando muitos espermatozoides no

lmen uterino. C - (Santa Catarina) Primavera; Exemplar sem espermatozoides no lmen uterino. D - (Rio

Grande do Sul) e E - (Paran) no Vero, onde (D) representa a maioria dos exemplares da estao, sem

espermatozoides no lmen uterino. (E) exemplar com espermatozoides no tero. ep (epitlio uterino);

espL (espermatozoides no lmen uterino); m (camada muscular). Hematoxilina-eosina.

60

4.3.1.4 Morfologia e estocagem infundibular

Neste trabalho, estamos incluindo um dado indito para viperdeos neotropicais. Foram

encontrados pela primeira vez espermatozoides estocados em tbulos de estocagem de

espermatozoides presentes no infundbulo de fmeas do CN e do CS. Foi encontrada uma

variao na morfologia infundibular entre fmeas em V1 (no reprodutiva; Figura 22 A) e V2

(reprodutiva; Figura 22B).

Fmeas que no apresentaram folculos vitelognicos/ovos/embries exibiram um epitlio

infundibular ciliado baixo. As glndulas do infundbulo (presentes no tecido conjuntivo)

apresentaram um tamanho reduzido e provavelmente no secretor (Figura 22A). As fmeas

vitelognicas (V2), ou seja, reprodutivas, apresentaram um epitlio ciliado alto e as glndulas do

infundbulo (presentes no tecido conjuntivo), so maiores, mais desenvolvidas e provavelmente

secretoras (Figura 22B).

Figura 22 - Histologia de corte longitudinal do infundbulo de fmeas de Bothrops jararaca.


A - Regio do infundbulo de fmeas de B. jararaca no reprodutiva (V1) mostrando o epitlio do

infundbulo ciliado baixo e com as glndulas do infundbulo de tamanho reduzido. B - Regio do

infundbulo de fmeas rerprodutivas (V2), mostrando um epitlio ciliado alto, com glndulas

infundibulares grande. ep (epitlio ciliado); Glu (glndula do infundbulo); L (lmen infundibular); m

(camada muscular); tc (tecido conjuntivo). Hematoxilina-eosina.

61

Todas as fmeas tanto do CN como do CS que apresentavam espermatozoides no lmen

infundibular ou estocados em tbulos no infundbulo estavam vitelognicas (V2).

Foram encontrados espermatozoides em grande quantidade no lmen infundibular e em

tbulos de estocagem de espermatozoides presentes no infundbulo de fmeas de ambos os clados

no outono (Figuras 23 e 25A e B) e no inverno (Figuras 23 e 25C e D). Os espermatozoides

encontrados nos tbulos de estocagem encontravam-se alinhados em feixes (Figuras 23 e 25 B e

D). Da mesma forma como observado na estocagem uterina (UMT), espermatozoides foram

encontrados no infundbulo com mais frequncia no outono.

No foram encontrados espermatozoides no lmen infundibular ou em criptas de

estocagem em fmeas na primavera de ambos os clados (Figuras 24A e 25E).

No foram encontrados espermatozoides no infundbulo no vero no CS (Figura 25F).

Todavia, assim como o que ocorreu com relao estocagem no tero (UMT), a regio

infundibular da maioria das fmeas no vero no apresentou estocagem de espermatozoides, com

exceo de trs fmeas que apresentaram espermatozoides estocados em tbulos no infundbulo

(Figura 24C).

62

Figura 23 - Histologia de corte longitudinal do infundbulo de fmeas de Bothrops jararaca do clado norte


A - (So Paulo) e B - (Rio de Janeiro) no outono onde, A - regio do infundbulo apresentando uma

grande quantidade de espermatozoides no lmen e B - espermatozoides estocados nos tbulos de

estocagem. C e D (So Paulo) no inverno onde, C - regio do infundbulo revelando espermatozoides no

lmen infundibular e D - espermatozoides estocados nos tbulos de estocagem. ep (epitlio ciliado do

infundbulo); espL (espermatozoides no lmen); Glu (glndulas do infundbulo); tc (tecido conjuntivo);

tee (tbulo de estocagem de espermatozoide); tringulos apontam os espermatozoides estocados nos

tbulos. Hematoxilina-eosina.

63

Figura 24 - Histologia de corte longitudinal do infundbulo de fmeas de Bothrops jararaca do clado norte

(continuao)


A - (Esprito Santo) na Primavera; Regio do infundbulo sem espermatozoides no lmen ou nos tbulos

de estocagem de espermatozoides. B - (Minas Gerais) e C - (So Paulo) no Vero, onde B - Regio do

infundbulo sem espermatozoides estocados no lmen e C - tbulos de estocagem com espermatozoides

estocados no infundbulo. ep (epitlio ciliado do infundbulo); glu (glndulas do infundbulo); tc (tecido

conjuntivo); tee (tbulo de estocagem de espermatozoide); tringulos apontam os espermatozoides

estocados nos tbulos. Hematoxilina-eosina.

64

Figura 25 - Histologia de corte longitudinal do infundbulo de fmeas de Bothrops jararaca do clado sul


A e B - (Paran) no Outono, onde A - Regio do infundbulo apresentando uma grande quantidade de

espermatozoides no lmen e B - tbulos de estocagem com espermatozoides estocados no infundbulo. C

e D - (Paran) no Inverno onde, C - Regio do infundbulo no inverno apresentando uma grande

quantidade de espermatozoides no lmen e D - tbulos de estocagem com espermatozoides estocados no

infundbulo. E (Santa Catarina) na Primavera. Regio do infundbulo sem espermatozoides no lmen ou

estocados em tbulos de estocagem. F - (Rios Grande do Sul) no Vero. Regio do infundbulo sem

espermatozoides no lmen ou estocados em tbulos de estocagem. ep (epitlio ciliado do infundbulo);

glu (glndulas do infundbulo); tc (tecido conjuntivo); tee (tbulo de estocagem de espermatozoide);

tringulos apontam os espermatozoides estocados nos tbulos. Hematoxilina-eosina.

65

Assim, provavelmente os espermatozoides ascendem do tero logo aps a cpula (outono

ou inverno) at a regio infundibular. Esses espermatozoides chegam ao lmen infundibular

(Figura 26A). Do lmen esses espermatozoides vo em direo aos tbulos de estocagem

(criptas) e l ficam estocados at a poca de fertilizao dos folculos (Figura 26B).

Figura 26 - Histologia de corte longitudinal do infundbulo de fmeas de Bothrops jararaca

Fonte: Kasperoviczus, K.N. ( 2013).

A - Viso aproximada do infundibulo de Bothrops jararaca evidenciando espermatozoides saindo da

regio do lmen infundibular e adentrando a regio onde se encontram os tbulos de estocagem. B

Viso aproximada de espermatozoides posicionados em feixes, estocados nos tbulos de estocagem de

espermatozoides presentes no infundbulo. ep (epitlio do infundbulo); L (Lmen do infundbulo; tee

(tbulos de estocagem de espermatozoides); estrela (indicam as caudas dos espermatozoides); tringulo

(apontam a regio do ncleo dos espermatozoides). Hematoxilina-eosina.

66

4.3.2 Machos

4.3.2.1 Morfologia macroscpica

O volume relativo dos testculos de machos do CN variou entre as estaes (inclinaes:

F3,121 = 0,28; P = 0,84; interceptos: F3,124 = 7,36; P = 0,0001; Figura 27 ). Testes a posteriori

revelaram que o volume dos testculos menor no outono (teste de Tukey: P < 0,03 em todos os

casos; Figura 27) e similar entre as demais estaes (teste de Tukey: P > 0,60 em todos os casos;

Figura 27). No entanto, essa variao no foi observada no dimetro dos ductos deferentes

(inclinaes: F3,122 = 0,64; P = 0,59; interceptos: F3,125 = 0,69; P = 0,56; Figura 28).

Figura 27 - Variao sazonal no volume dos testculos de machos de Bothrops jararaca do clado norte

Linhas horizontais no interior das caixas representam valores mdios, limite das caixas o desvio padro e

linhas verticais os valores mnimos e mximos observados. Estaes que compartilham a mesma letra no

diferiram significativamente (teste de Tukey: = 0,05; a > b).

Vero Outono Inverno Primavera

Estao

-0,8

-0,6

-0,4

-0,2

0,0

0,2

0,4

0,6

Resd

uo

Log C

RC

/Volu

me d

os testcu

los

aa a

b

67

Figura 28 - Variao sazonal no dimetro relativo dos ductos deferentes de machos de Bothrops jararaca

do clado norte


linhas verticais os valores mnimos e mximos observados.

Para o CS, no foram observadas diferenas sazonais tanto no volume relativo dos

testculos (inclinaes: F3,134 = 2,40; P = 0,07; interceptos: F3,137 = 0,62; P = 0,60; Figura 29)

como no dimetro relativo dos ductos deferentes (inclinaes: F3,134 = 1,62; P = 0,19; interceptos:

F3,137 = 0,20; P = 0,89; Figura 30).

Vero Outono Inverno Primavera

Estao

-0,4

-0,3

-0,2

-0,1

0,0

0,1

0,2

0,3

Res

du

o L

og

Crc

/Di

met

ro d

uct

os

def

eren

tes

68

Figura 29 - Variao sazonal no volume dos testculos de machos de Bothrops jararaca do clado sul


linhas verticais os valores mnimos e mximos observados.

Figura 30 - Variao sazonal no dimetro relativo dos ductos deferentes de machos de Bothrops jararaca

do clado sul.


linhas verticais os valores mnimos e m

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