MÃ©todos de laboratorio

8/16/2019 MÃ©todos de laboratorio

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Universidad Autónoma de Coahuila Departamentode Investigación en AlimentosFacultad de Ciencias Químicas

1 Determinación monosacáridos por elmétodo de AntronaTomás López Altunar

Laboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de

Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.

FundamentoLa antrona (orma un compuesto verde en medio )cido (uerte *)cido sul(+rico,con ciertos carbohidratos - sac)ridos% en especial con a +cares - almidones. Lareacción de la antrona en medio sul(+rico produce un derivado del (urano /uetiene su m)'imo de absorción en 0 # nm.Reactivo antrona1l reactivo se prepara de la siguiente manera2

• A3adir 45# mL de agua destilada• Agregar 00# mL de 6 $7 5 concentrado• A3adir 8# g de tiourea• 9osteriormente agregar #.! g de antrona *cristali ado de etanol,

:ota2 el reactivo es estable por semanas almacenado a 5 ;C - la curvaest)ndar se reali a con glucosa.

Procedimiento8. Agregar #. ! mL de muestra a anali ar

. A3adir 8. ! mL reactivo antrona4. $ometer a ba3o maría - de


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PR'($D%#%$)T' PARA D$T$R#%)AR A*+(AR$S T'TAL$S ,D+-'%S.1/0 2

8. !# l de muestra hidroli ada. A3adir !# l de (enol al ! G

4. Agitar en vorte' - de


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Cu 7 Arseno=Molibdato A ul de molibdeno


3 Determinación de az"cares reductorespor el método de Somo45i!)elsonAdriana (arolina Flores Galle4os

Laboratorio de iología Molecular. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de


Fundamento1l m&todo se basa en la capacidad /ue tienen los a +cares reductores *como laglucosa - la (ructosa, de reducir ciertos iones met)licos% como el cobre% en unmedio alcalino - caliente. 1n el proceso% la muestra /ue contiene el a +carreductor se calienta con la solución alcalina de tartrato de cobre *reactivo de

$omog-i,% - como resultado de la reacción se (orma ó'ido cuproso. Nstereacciona con el arseno=molibdato *reactivo de :elson, dando un compuestode color a ul *a ul de molibdeno, *Figura 8,.

Figura 8. Eeacción de a +cares reductores con los reactivos de $omog-i -:elson

La intensidad del color a ul obtenido es proporcional a la cantidad de a +carreductor presente en la muestra de acuerdo a la le- de Lambert - eer.

Reactivos

Reactivo de Somo45i= Eeactivo A

(ompuesto (antidad,46L2

Carbonato de sodio anhidro !

5DIA=UAD1C


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*:a C7 4,$al de Eochelle *@a:aC 56 57 0, !

icarbonato de sodio*:a6C7 4,

#

$ul(ato de sodio anhidro*:a $7 5,

##

1n la me cla de reacción se inclu-e sul(ato de sodio para minimi ar la entradade o'ígeno atmos(&rico en la solución% lo cual podría causar reo'idación deló'ido cuproso.1l reactivo se debe ltrar - almacenar a no menos de #OC% con el n de evitarla cristali ación del sul(ato de sodio.

Eeactivo

(ompuesto (antidad,177mL2

$ul(ato de cobre *Cu$7 5 !6 7, 8!Pcido sul(+rico *6 $7 5, 8= gotas

1l reactivo de $omog-i est) compuesto por ! partes de reactivo A - 8 partede reactivo *la me cla se reali a en el momento,. 1l reactivo es estable hastapor 8 a3o

Reactivo de )elson

Almacenar en un (rasco )mbar o en un (rasco cubierto con aluminio. 1l reactivoes estable por 0 meses.

!DIA=UAD1C

25 g Molidato de amonio ((NH 4)6Mo 7O24) en 450

ml21 ml de ácido sulfúrico (H 2 O4) concentrado

! g "rsenato de sodio (Na 2H"sO 4 7 H 2O) en 25 ml


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8 ml de lamuestra

Agregar 8 mlreactivo$omog-i

* ! partesreactivo A% 8

parte reactivo F,

Fa3o enebullición por #

min

1n(riar en ba3ode hielo # min

Agregar 8 mlreactivo :elson

Completar a !ml

Leer a !## nm


Fi4ura . Desarrollo del compuesto cromog&nico a 4>O C. Curva 8% tiempo #Curva % 8 horas Curva 4% 5 horas Curva 5% 5" horas.

Procedimiento8

)otas8o 1l blanco consiste en agua destilada.o La curva de calibración debe reali arse con un est)ndar del a +car

reductor presente en la muestra *por e


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(uadro 19 (urva estándar 4lucosaSolución madre de

4lucosa,:L2A4ua destilada

,:L2(oncentra

ción,ppm

2# 8### 78## ## 177

## "## 774## >## 3775## 0## ;77!## !## 077

o 1l m&todo es mu- preciso para #.#8 mg de glucosa% galactosa - maltosa%los me


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; Determinación anal>tica de az"cares deacuerdo a sus propiedades ?u>micasDiana -eatriz #u@iz #ár?uez



Fundamento1l m&todo a continuación descrito (undamenta su principio /uímico en lacapacidad reductora de los grupos aldehído -?o cetónicos libres de loscarbohidratos% ante una solución cupro=alcalina% con la consiguiente o'idaciónde los a +cares en el grupo carbonilo - en la (unción alcohol primario% dicha

reacción se mani esta en la precipitación de cobre como ó'ido cuproso. Jalm&todo es aplicable a monosac)ridos% disac)ridos reductores - polisac)ridospreviamente hidroli ados.

#étodo volumétrico de Lane 5 $5non

1n este m&todo el carbohidrato reductor se encuentra en solución - con el sereduce un volumen medido - constante de licor cupro=alcalino *reactivo de

Fehling=$o'hlet,% en presencia de indicador a ul de metileno.

Determinación de az"cares reductoresEeactivos*ver ane'o de preparación de reactivos,

• $olución Fehling= $o'hlet A *F=$A,• $olución Fehling= $o'hlet *F=$ ,• Agua destilada• A ul de metileno 8G• $ubacetato o acetato de plomo 4#G

Material - e/uipo

• ureta• Matraces erlenme-er de !# mL• 9ipetas de ! - 8# mL• 1mbudo

"DIA=UAD1C


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• 9apel ltro Rhatman no.• 9arrilla

Procedimiento8.= $i la muestra es sólida% disolver g en un volumen conocido de agua

destilada - a(orar a 8## ó !# mL. 9ara muestras lí/uidas% hacer una dilución828% dependiendo de la concentración del carbohidrato en an)lisis o bientraba


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e Calcular2

G AT CAE1$ E1DUCJ7E1$ V J F=$ K ol. de a(oro ' 8## mL gastados K g de muestra

J F=$2 título de la solución Fehling= $o'hlet

Determinación de az"cares no reductores

1ste m&todo es aplicable a sacarosa% a +cares hidroli ables% almidón -de'trinas.

Eeactivos*ver ane'o de preparación de reactivos,

• 6Cl concentrado• :a76 5G• $olución F=$ A• $olución F=$ • Agua destilada• A ul de metileno 8G *solución acuosa,

Material - e/uipo• Ee(rigerante• Matra balón (ondo plano• ureta• Matraces erlenme-er de !# ml.• 9ipetas de ! - 8# mL.• 9arrilla

Procedimiento

A 6idrólisis por reWu


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.= 9asar la muestra a un matra balón (ondo plano - acidi carla con 8mL de6Cl concentrado.4.= Conectar el matra al re(rigerante e hidroli ar por 4# minutos *precalentarla parrilla - mantener alta la temperatura durante los 4# minutos /ue dura la

hidrólisis,.5.= 1n(riar el hidroli ado - neutrali ar con 8mL apro'imadamente de :a76 5G.!.= A(orar a ## mL con agua destilada.

, 6idrólisis por calor8. $i la muestra es sólida% disolver g en !# mL de agua destilada. 9aramuestras lí/uidas% hacer una dilución 828 *completando !# mL,% dependiendode la concentración del carbohidrato en an)lisis.

.= 9asar la muestra a un matra balón (ondo plano - acidi carla con 8mL de

6Cl concentrado.4. Introducir el matra con la muestra acidi cada en una estu(a a 5!;C durante

5 hrs.5. Comprobar la hidrólisis de los polisac)ridos adicionando una gota de lugol. $i&ste ad/uiere una coloración morada sobre la muestra% indica /ue la hidrólisisse ha completado% si no es así% continuar el calentamiento por 4 horas m)s.

:7JA2 Cuando la muestra sea colorida% como el caso de los re(rescos% n&ctares%

concentrados de (rutas% chocolates%


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b 9oner el matra en la parrilla caliente - esperar la ebullición.c 1mpe ar la titulación con la solución problema - una ve /ue presente un

ligero cambio de coloración la solución del matra % agregar una gota de a ul demetileno. Continuar titulando hasta el vire a color ro


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8, $olución A. 9esar e'actamente 45.0" g de sul(ato de cobre pentahidratado.Disolver en ## mL de agua destilada - calentar si es necesario. A(orar a!##mL.

, $olución . 9esar e'actamente 8>4 g de tartrato de sodio - potasio - !# g de

hidró'ido de sodio. Disolver por separado cada reactivo. Me clar - a(orar a !##mL.

1standari ación de la solución F=$

8, Medir ! mL de solución A - ! mL de solución *utili ar pipeta limpia - secapara medir cada reactivo,% me clarlos en matra 1rlenme-er de !# mL - diluircon 5# mL de agua destilada.

, 9oner el matra en la parrilla caliente - esperar la ebullición.4, A3adir a una bureta la solución de de'trosa anhidra 8G.5, 1mpe ar la titulación con la solución de de'trosa - una ve /ue presente un

ligero cambio de coloración la solución del matra % agregar una gota de a ul demetileno 8G. Continuar titulando hasta el vire a color ro


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:7JA2 1l J F=$ e'presado para 8# mL del reactivo tiene las siguientese/uivalencias2

• #.#!# g de de'trosa anhidra• #.#04 g de maltosa anhidra• #.#>! g de lactosa anhidra• #.#5>! g de sacarosa anhidra

Hidróxido de sodio 4%

Disolver 5 g de :a76 *lente! g de una u otra sal - a(orar a !# mL con agua destilada.

Referencia


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0Determinación de 4lucosamina ,#étodoindirecto para determinar


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1n el siguiente diagrama de Wu


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:ota2 Se re?uiere determinar la 4lucosamina asociada al Con4o. por lo cual se re?uiere


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Determinación de prote>na soluctor Rodr>4uez DuránLaboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de

Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. $altillo% Coahuila% M&'ico.

Fundamento1sta es una t&cnica espectro(otom&trica% /ue se basa en la (ormación de unacoloración característica al acomple


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• 1n un tubo de ensa-e se colocan #.8## mL de muestra con unaconcentración de 8## a 8### ppm de proteína.

• $e agregan ! mL del reactivo de rad(ord.• Agitar - reposar a temperatura ambiente.• $imult)neamente se prepara un tubo blanco con #.8## mL de agua *o el

buYer apropiado, - ! mL de reactivo de rad(ord.• $e mide la absorbancia a ! ! nm del tubo muestra entre minutos - 8hora despu&s de reali ada la reacción contra el tubo blanco.

#icro!ensa5o

• 1n un tubo de ensa-e se colocan #.8## mL de muestra con unaconcentración de 8# a 8## ppm de proteína.

• $e agrega 8 mL del reactivo de rad(ord%• Agitar - reposar a temperatura ambiente.• $imult)neamente se prepara un tubo blanco con #.8## mL de agua *o el

buYer apropiado, - 8 mL de reactivo de rad(ord.• $e mide la absorbancia a ! ! nm del tubo muestra entre minutos - 8

hora despu&s de reali ada la reacción contra el tubo blanco.

(álculos9ara calcular la concentración de proteína en la muestra% se reali ó una curvapatrón utili ando Alb+mina $&rica ovina * $A, como est)ndar *Jablas 8 - ,.%nterferenciasLos +nicos componentes /ue se ha encontrado /ue producen una inter(erencia

e'cesiva durante la reacción son algunos detergentes en altas concentracionescomo2 dodecil sul(ato de sodio% Jritón Z=8##% - detergentes comerciales. Lasinter(erencias debidas a pe/ue3as cantidades de detergente pueden sereliminadas usando los controles adecuados.

Referencia 8rad(ord% M. M. *8 >0,. A rapid and sensitive method (or the /uantitation o(

microgram /uantities o( protein utili ing the principle o( protein=d-e binding.Anal-tical iochemistr- > *8= ,2 5"= !5.

8DIA=UAD1C


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(uanti=cación de polifenolesCidroliza


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E (uanti=cación de taninos condensadospor la técnica I(l!-utanol#ar>a %sa nanómetros respectivamente.La porción de 6Cl= utanol de 028 (ue propuesta por 6agerman% 8 ". Cuando laporción del reactivo es 528 o 028 sel desarrollo del color se ve incrementado*Dal ell - @erven% 8 ",. 7troo (actor es la temperatura - el tiempo de reacción

*$calbert% 8 ,.#aterial 5 reactivos

• #.! mL de muestra• 4 mL 6Cl= utanol• #.8 mL reactivo (&rrico• Jubos con tapa

DIA=UAD1C


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20 mL HClconcentrado

Aforar a 100 mLH2O

Adicionar 2 g desulfato férrico de

amonio

Conservar enfrasco ámbar 4 °C

10 mL HCl al 3 !

Aforar a 100 mLterbutanol


• a3o metabólico• Agua• 1spectro(otómetro

9reparación de reactivos2

Reactivo férrico

$e agregan # mL de 6Cl concentrado% a(orar a 8## mL con agua destiladaposteriormente se adicionan g de reactivo sul(ato (&rrico de amonio - sealmacena en un (rasco )mbar en re(rigeración *5 ;C, hasta su empleo.

I(l!-utanol ,17 J2

$e agregan 8# mL de 6Cl al 4> G - se a(ora a 8## mL con terbutanol.

(ate?uina ,197 46L2

4DIA=UAD1C


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0"# mL demuestra

3 mL HCl $terbutanol

%1&'(

0"1 mLreactivoférrico

Cerrartubos

Calentar tubos)or 1 * %ba+o

metab,lico 100°C(

-nfriar atem)eratura

ambiente

Leeres)ectrofot,metro

4.0 nm


Diluir ! mg de cate/uina en agua - a(orar a ! mL posteriormente se almacena enun (rasco )mbar en re(rigeración *5 ;C, hasta su uso.

(uanti=cación de taninos condensados por I(l


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cernua D. C., mediante Fermentación en 1stado sólido usando Asper$illus ni$er 9$6. Jesis Químico Farmac&utico iólogo. Universidad Autónoma de Coahuila.

/(uanti=cación de polifenolesCidroliza


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Fi4ura 19 La (ormación del )cido el)gico de un elagitanino - reacción de)cido el)gico con el electró lo :7 S .

La hidrólisis de los elagitaninos produce )cido he'ahidro'idi(&nico*66D9,% donde ocurre una lactoni ación espont)nea para (ormar al )cidoel)gico. Los carbonos /ue no est)n sustituidos en el )cido el)gico% sonsusceptibles al ata/ue electro(ílico. Dos productos posibles pueden ser(ormados% *A, una simple sustitución del producto% * , nitrosil dienona.Nstos (orman /uinona o'ima *C,% cuando se ioni a se (orma *D, productode A o .

$nsa5o• $e pesan 8# mg en caso de /ue la muestra sea sólida. $e

pueden medir !# / L en caso de /ue la muestra sea lí/uida.• $e pasa la muestra a tubos 1ppendor( limpios.• $e a3ade 8 mL de )cido sul(+rico *6 $7 5, :.• $e coloca en una estu(a a ># ;C por un período de 4# horas.

1sto con la nalidad de hidroli ar la muestra.• $e pasan por ltros hatman :o. 5#.• Una ve ltrada la muestra% se colocan mL de piridina en una

relación 828#. 1n esta sección es conveniente contar con todas"

DIA=UAD1C


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las medidas de seguridad personal debido a la to'icidad delreactivo.

• $e pasa 8 mL a un tubo de ensa-e.• $e colocan nuevamente 8.8 mL de piridina.

• $e colocan en ba3o de hielo por ! minutos.• $e a3ade #.8 mL de )cido clorhídrico *6Cl, concentrado.• $e de


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1s una t&cnica poco sensible% se debe de considerar con una cantidadconsiderable de )cido el)gico en tu muestra para /ue (uncionecorrectamente.La curva de calibración se empie a a reali ar a partir del punto n+mero>% estos tubos no son sometidos a previa hidrólisis. 1s importante /ue semane


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$e adicionaron 8.! mL de )cido sul(+rico metanólico *&ste reactivo seprepara adicionando #.8 # mL )cido sul(+rico concentrado por cada mlde metanol /ue se re/uiera,% la adición de &ste reactivo se llevó a caboen un congelador a [ # ;C% despu&s los tubos cerrados herm&ticamentese colocaron en una estu(a de calentamiento por 4# horas a unatemperatura de "# ;C% luego las muestras se destapan - se colocan denuevo en la estu(a de calentamiento ba


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(ondiciones para el análisis por IPL(9

Tiempo,min2 Flu o ,1mL6min29

J A J - J (

%nicial 8.# # # 8##8# 8.# # # 8##

# 8.# # # "#! 8.# # 4# >#0 8.# # 0# 5#

485#

8.#8.#

##

4##

>#8##

ReferenciaAscacio= ald&s% .% Aguilera=Carbó% A.% Martíne =6ern)nde % .L.%Eodrígue =6errera% E.% Aguilar% C.:. * #8#,. up&orbia antis!p&iliticaresidues as a neR source o( ellagic acid. Chemical 9apers. 052 ! " [ !4 .

1(uanti=cación de ácido 4álico por(romato4raf>a l>?uida de altaresolución ,IPL(2

#ónica LizetC (Cávez GonzálezLaboratorio de Fermentaciones. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de


Preparación de la curva de cali


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emplear) un est)ndar de )cido g)lico. La solución est)ndar ser)preparada con una concentración de !## ppm. A partir de &sta soluciónse reali ar)n diluciones% tantas como las /ue el operador considerenecesarias para posteriormente interpolar sus resultados. Una vepreparada las diluciones% ser)n micro ltradas por membrana de #.5!

m.

Preparación de las muestrasComo cual/uier otra muestra /ue ser) introducida en el e/uipo de69LC% deber) ser previamente ltrada *de ser necesario, -posteriormente micro ltrada empleando una membrana de #.5! m. Lo

anterior con la nalidad de evitar la obstrucción de la columna -?ocone'iones dentro del e/uipo. Las muestras se depositar)n en los vialesespeciales para el e/uipo

(ondiciones de operación de IPL(8Los viales /ue contienen tanto la curva de calibración como las muestrasa anali ar ser)n colocadas de manera ordenada en el carrusel del

e/uipo. $e veri car) /ue la numeración de la lista en el programa dele/uipo corresponda con la del carrusel.Las condiciones de uso del e/uipo son2

Columna 7ptisil 7D$ ! \m !# mm ' 5.0 mm.

Flu


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los !.0 min. $e tomar)n - medir)n las )reas ba


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Una de las alternativas para la detección - cuanti cación de etanol es el uso de69LC *6igh 9er(ormance Li/uid Chromatograph-,.

Materiales

• 69LCo Detector con arreglo de diodoso Detector de índice de re(racción *IE,o Columna Metacarb 0>6 7rganic acids 4## ' 0.! mmo 6 $75 #.#5 : *Fase móvil,o #.0 mL?min de Wu


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Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. $altillo% Coahuila% M&'ico.

Fundamento1l m&todo consiste en la medición del )cido g)lico liberado durante la reacción

en im)tica% utili ando como sustrato para la tanasa un &ster del )cido g)lico*metil=galato,. La medición del )cido g)lico se basa en la (ormación de uncromó(oro entre dicho )cido - la =tio=5= cetotia olidina% tambi&n conocidacomo rodanina *Fig. 8,.

Fi4ura 19 Eeacción catali ada por la tanasa - posterior reacción del )cidog)lico con la rodaninaReactivos

9ara la cuanti cación de la actividad tanasa se re/uieren ! soluciones2• uYer de citratos !# mM a p6 !.#• Metil=galato #.#8M en buYer de citratos *!# mM p6 !.#,• Eodanina #.00>G p?v en metanol• @76 #.! :• Pcido g)lico 8## ppm en buYer de citratos *!# mM p6 !.#,

K1l metil=galato% el )cido g)lico - la rodanina deben protegerse de la lu .

$nsa5oLas soluciones se pre=incubaron a 4# ; C durante ! = 8# minutos. $eeti/uetaron tres tubos de ensa-e como blanco% muestra - control% se colocaron#. ! mL de metil=galato #.#8M en buYer de citratos !# mM a p6 !.#. Al tuboblanco se le a3adieron #. ! mL de buYer de citratos - al tubo muestra se leagregaron #. ! mL del e'tracto en im)tico% los tres tubos se incubaron !

40DIA=UAD1C


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minutos a 4# ;C. Despu&s de la incubación% se adicionaron #.4 mL derodanina metanólica *#.00> G p?v,% se incubó a 4# ;C por ! min% se agregaron#. mL de hidró'ido de potasio *#.! :, - se incubó otros ! min. $e agrega ele'tracto en im)tico al tubo control. Despu&s se agregaron 5 mL de agua

destilada% se agitó el contenido de los tubos - se incubaron durante 8# minutosa 4# ;C. $e le-ó la absorbancia a ! # nm en un espectro(otómetro. 1n la gura

se muestra un es/uema de esta t&cnica.

(álculos9ara cuanti car el )cido g)lico liberado se restó la absorbancia del tubomuestra a la absorbancia del tubo control *ecuación 8, - se calculó laconcentración a partir de una curva est)ndar de # a 8## ppm de A.H. en buYer

de citratos.

La unidad de actividad se de nió como la cantidad de en ima necesaria paraliberar 8 mol de )cido g)lico por min. B se calculó con la ecuación 2

⋅ ×

⋅⋅⋅⋅=min5

1

**1

**101

**12*170

**1

**1000

**1

25*0

5** 6

GmolAGmolA

G gAGmolA

GmgAG gA

mLmL

LGmgA

LUI µ

4>DIA=UAD1C


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Fi4ura 9 1s/uema del ensa-o en im)tico propuesto por $harma et al . * ###,ariantes

1sta t&cnica ha sido modi cada en m+ltiples ocasiones% a continuación semencionan las principales2

• 1l volumen se puede reducir para ahorrar reactivos -?o muestra o paraa


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10 Determinación de actividad ela4itanasaRe5naldo De La (ruz Muiroz

Laboratorio de Microbiología . Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad de


#ateriales ReactivosMicropipetas de 8## l a 8### l -

de 8# l a !# l.9untillas de 8 ml - de 8## l

Jubos de ensa-e o tubos eppendorY Hradilla

$olución madre del est)ndar de)cido el)gico

1tanol absolutouYer de citratos p6 !

$olución de elagitaninos 8 mg?ml

Procedimiento$e usaron dos controles% uno de sustrato *C$, - el otro de en ima *C1,.

La me cla de reacción contenía elagitaninos *8 mg?mL, S e'tracto en im)tico.C$2 8 ml de elagitaninos *8 mg?ml, en buYer de citrato p6 ! *#.#! M, S !#

l de buYer de citratos.C12 8 ml de buYer de citratos p6 ! *#.#! M, S !# l de e'tracto en im)tico.Me cla reacción2 8 ml de elagitaninos *8 mg?ml, en buYer de citratos S !# l

de e'tracto en im)tico.• $e de


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A partir de la solución madre preparar soluciones a 5##% 4##% ##% 8## - # ppmde A1% para reali ar una curva de calibración.

Referencia

Míreles=Eamíre % M.C. ##". Determinación de las condiciones de reacción de laen ima elagitanasa obtenida por Asper$illus ni$er H68 en cultivo en mediosólido. Jesis de licenciatura. Universidad Autónoma de Coahuila.

5#DIA=UAD1C


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1 Determinación de actividadendo4lucanasa#i4uel Kn4el #edina #orales

Laboratorio de Microbiología. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad deCiencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%

M&'ico.

9ara reali ar la detección de la acción responsable de la depolimeri ación de lacelulosa es necesario determinar tres actividades en im)ticas% las cuales son2actividad endoglucanasa% e'o=glucanasa - ^=glucosidasa.

Determinación de actividad endo4lucanasa

1n este caso se detecta la actividad de las en imas responsables de lahidrólisis de los enlaces ^=8%5 locali ados en las regiones internas de lamol&cula de celulosa% contribu-endo a la disminución del grado depolimeri ación.

#etodolo4>a#aterial

Jubos de ensa-e *84 ' 8##,

Carbo'imetil celulosa a !## ppm *$ustrato,uYer de ACC:a #.8 M a p6 5."a3o maría a !# ;C

Eeactivos para determinación de a +cares reductores *$omog-i=:elson,

Procedimiento-lanco de sustrato ,-S2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de buYer mas !# L de e'tracto

en im)tico

-lanco de enzima ,-$2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de sustrato m)s !# L de buYer.

#ezcla de reacción ,#R2 258

DIA=UAD1C


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1n un tubo de ensa-e colocar ## L de sustrato m)s !# L de e'tractoen im)tico.

Cada tubo se coloca en ba3o maría durante 8# minutos - se detiene la reacción

mediante ebullición en ba3o maría durante ! minutos.A cada tubo se le miden a +cares reductores. Cada una de las determinacionesdebe reali arse por triplicado o de acuerdo a las muestras /ue se tengan. Lostubos pueden ser incubados simult)neamente.

Referencia

Hhose% J.@. *8 ">,. Measurement o( cellulase activities. 9ure ] Appl. Chem. ! 2!> [ 0".

5DIA=UAD1C


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1 Determinación de actividade o4lucanasa#i4uel Kn4el #edina #orales


M&'ico.

1n este caso se detecta la actividad de las en imas responsables de lahidrólisis de los enlaces ^=8%5 locali ados en las regiones e'ternas de lamol&cula de celulosa% contribu-endo a la disminución del grado depolimeri ación.

#etodolo4>a#aterial

Jubos de ensa-e *84 ' 8##, Jiras de papel ltro hatman _8 de 8 cm ' 0 cm *$ustrato,

uYer de ACC:a #.8 M a p6 5."a3o maría a !# ;C

Eeactivos para determinación de a +cares reductores *$omog-i=:elson,.

Procedimiento-lanco de sustrato ,-S2 21n un tubo de ensa-e colocar 8 mL de buYer - se colocan !# L de e'tractoen im)tico

-lanco de enzima ,-$2 21n un tubo de ensa-e colocar 8 mL de buYer - se colocan una tira de papel

ltro

#ezcla de reacción ,#R2 21n un tubo de ensa-e colocar 8 mL de buYer - se colocan una tira de papel

ltro. $e adicionan !# L de e'tracto en im)tico.

54DIA=UAD1C


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Cada tubo se coloca en ba3o maría durante 8 h - se detiene la reacciónmediante ebullición en ba3o maría durante ! minutos.A cada tubo se le miden a +cares reductores. Cada una de las determinacionesdebe reali arse por triplicado o de acuerdo a las muestras /ue se tengan. Los

tubos pueden ser incubados simult)neamente.

Referencia

Hhose% J.@. *8 ">,. Measurement o( cellulase activities. 9ure ] Appl. Chem. ! 2!> [ 0".

55DIA=UAD1C


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1E Determinación de actividad N!4lucosidasa#i4uel Kn4el #edina #orales


M&'ico.

1n este caso se detecta la actividad de las en imas responsables de lahidrólisis de los enlaces ^=8%5 locali ados en la celobiosa liberada por e(ecto dela acción de la e'oglucanasa. La hidrólisis de la celobiosa libera glucosa comoproducto para nali ar la hidrólisis de la celulosa.

#etodolo4>a#aterial

Jubos de ensa-e *84 ' 8##,p=:9H mM *$ustrato,:a C7 4 #.8 M

uYer de AAA:a #. M a p6 5.0a3o maría a !# ;C

Eeactivos para determinación de a +cares reductores *$omog-i=:elson,.

Procedimiento#ezcla de reacción ,#R2 2

• 1n un tubo se colocan "## L de buYer• $e agregan 8## L de sustrato• A la me cla se adicionan 8## L de e'tracto en im)tico

Cada tubo se coloca en ba3o maría durante 8# minutos - se detiene la reacciónagregando 8## L de :a C7 4 #.8 M.A cada tubo se le miden a +cares reductores. Cada una de las determinacionesdebe reali arse por triplicado o de acuerdo a las muestras /ue se tengan. Lostubos pueden ser incubados simult)neamente.

5!DIA=UAD1C


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Referenciaattem% D - $hett-% @. * ## ,. $olid=state production o( phenolic antio'idants

(rom cranberr- pomace b- Ehi opus oligosporus. Food biotechnolog-. 802 8" [

8#.

50DIA=UAD1C


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1/ Determinación de actividad ilanasa#i4uel Kn4el #edina #orales



La actividad 'ilanasa es la responsable de la degradación de los 'ilanoscontenidos en la mol&cula de hemicelulosa

#etodolo4>a#aterial

Jubos de ensa-e *84 ' 8##,Zilanos a !## ppm *$ustrato,

uYer de ACC:a #.#! M a p6 5."a3o maría a !# ;C

Eeactivos para determinación de a +cares reductores *$omog-i=:elson,

Procedimiento-lanco de sustrato ,-S2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de buYer mas !# L de e'tractoen im)tico

-lanco de enzima ,-$2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de sustrato m)s !# L de buYer.

#ezcla de reacción ,#R2 21n un tubo de ensa-e colocar ## L de sustrato m)s !# L de e'tractoen im)tico.

Cada tubo se coloca en ba3o maría durante 8# minutos - se detiene la reacciónmediante ebullición en ba3o maría durante ! minutos.

5>DIA=UAD1C


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A cada tubo se le miden a +cares reductores. Cada una de las determinacionesdebe reali arse por triplicado o de acuerdo a las muestras /ue se tengan. Lostubos pueden ser incubados simult)neamente.Referencia

Hhose% J.@.% isaria% .$. *8 ">,. Measurement o( hemicellulase activities. 9art82 Zilanasas. 9ure ] Appl. Chem. ! 2 8>4 [ 8>! .

5"DIA=UAD1C


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• A3adir a la cubeta de reacción 8 mL de solución etanólica de A J$ - 8#L de muestra. De.

!#DIA=UAD1C


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1 Técnica para medir reducción de DPPI)orma Paola #eléndez Renter>a


Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. $altillo% Coahuila% M&'ico.Fundamento1l radical % =di(enil=8=picril=hidracil *D996, posee coloración morada% cuandoencuentra un 6 S con el cual complementar su estructura pierde la coloración.1l cambio de coloración es lo /ue permite cuanti car el poder antio'idante dela sustancia colocada como muestra.

Técnica8

• 9reparar el radical a una concentración de 0# M% en soluciónmetanólica.

• Determinar la longitud de onda de absorbancia del radical% mediante unbarrido en el rango visible.

• 1mplear como blanco de lectura solo metanol - como absorbanciacontrol la de la solución D996=metanol.

• A3adir a la cubeta de reacción ## L de solución metanólica de D996- 8## L de muestra. Cuanti car el cambio de absorbancia de maneracin&tica. $i es necesario deben hacerse diluciones de la muestra% dondela reacción de neutrali ación del radical sea paulatina.

• De nir el tiempo en el cual el valor de la absorbancia permanececonstante. Jomar este valor para hacer las reacciones a tiempo nal.

• $i las muestras son e'tractos de plantas% e'presar los resultados comoe/uivalentes de D996? g de material% utili ando el n+mero de Avogadropara su c)lculo. as)ndose en la concentración de la solución del radical- la cantidad de solución /ue reaccionó con la muestra.

!8DIA=UAD1C


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• 9ara gra car los datos% pueden emplearse tambi&n las relaciones de Abss concentración *curva de calibración, o bien el porcenta


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Técnica para medir reducción de DPPIen microplaca)orma Paola #eléndez Renter>a

Laboratorio de iología Molecular. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad deCiencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. $altillo% Coahuila% M&'ico.

Fundamento1l radical % =di(enil=8=picril=hidracil *D996, posee coloración morada% cuandoencuentra un 6 S con el cual complementar su estructura pierde la coloración.1l cambio de coloración es lo /ue permite cuanti car el poder antio'idante dela sustancia colocada como muestra.

Técnica8

• 9reparar el radical a una concentración de 0# M% en solución

metanólica.• Determinar la longitud de onda de absorbancia del radical% mediante un

barrido en el rango visible. $e puede usar el procedimiento espectroD996 del so(tRare Hen !.

• 1mplear como blanco de lectura solo metanol - como absorbanciacontrol la de la solución D996=metanol.

• Colocar en la microplaca las muestras del blanco.• Colocar en la microplaca 8 4 L de solución D996=metanol - > L de la

muestra a anali ar. Japar con un papel aluminio para evitar el contacto

directo con la lu mientras se llenan los pocillos con D996 - muestras.• Cuanti car el cambio de absorbancia de manera cin&tica. $i es necesario

deben hacerse diluciones de la muestra% donde la reacción deneutrali ación del radical sea paulatina. 1l nombre del programa en el1poch es D996 cin&tica.

!4DIA=UAD1C


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• De nir el tiempo en el cual el valor de la absorbancia permanececonstante. Jomar este valor para hacer las reacciones a tiempo nal.

• Modi car el tiempo de lectura del programa D996 punto nal delso(tRare Hen !.

• $i las muestras son e'tractos de plantas% e'presar los resultados comoe/uivalentes de D996? g de material% utili ando el n+mero de Avogadropara su c)lculo. as)ndose en la concentración de la solución del radical- la cantidad de solución /ue reaccionó con la muestra.

• 9ara gra car los datos% pueden emplearse tambi&n las relaciones de Abss concentración *curva de calibración, o bien el porcenta


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Referencia8 Mol-neu' 9. * ##5,. Jhe use o( the stable (ree radicaldiphen-lpicr-l=h-dra -l *D996, (or estimating antio'idant activit-.$ong lana arin . $ci. Jechnol. 0 * ,2 88= 8 .

!!DIA=UAD1C


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3 $valuación electro?u>mica de laactividad anti!radicalariaDulce A


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Flores=Maltos% D.A. * #8#,. Desarrollo de un microelectrodo para la evaluacióndel poder antio'idante total del e'tracto de damiana. Jesis de Maestría.Universidad Autónoma de Coahuila.

;Secado de muestras 5 determinaciónde materia seca total

Romeo Ro as #olinaLaboratorio de Jecnología de Alimentos. Departamento de Investigación en Alimentos.

Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo%Coahuila% M&'ico.

%ntroducción

La humedad es una de las determinaciones m)s importantes -

ampliamente usadas en el control - procesamiento de muestras. 1nalimentos% inWu-e en las estructura% apariencia - gusto de los productos%determina su susceptibilidad al deterioro *(ísico% /uímico omicrobiológico, - permite determinar adulteraciones. La determinaciónde humedad puede ser el an)lisis m)s importante llevado a cabo en unproducto alimentario pero es posible /ue sea el an)lisis del /ue seobtienen resultados poco e'actos - precisos. 1ste valor analítico es degran importancia económica para un (abricante de alimentos% -a /ue elagua es un llenador barato % así2

• 1l contenido de humedad es un (actor de calidad en la conservaciónde algunos productos% -a /ue a(ecta la estabilidad de2 (rutas -vegetales deshidratados% leches deshidratadas huevo en polvo% papasdeshidratadas - especias.

• La determinación de humedad se utili a como (actor de calidad de2 DIA=UAD1C


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deshidratados *&stos son mu- di(íciles de empacar si poseen un altocontenido de humedad


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MST = Pesocrisol conmuestra seca− Peso decrisol solo

g demuestra x 100

H = 100 − MST

)'TA8 Eeali ar la determinación por triplicado - la di(erencia no debeser superior al ! G del promedio.

ReferenciaInstituto :acional de :ormali ación% :Ch "58 o( >".7Xcial Methods o( Anal-sis. A.7.A.C. 8! th 1dition 8 #

0 Determinación de cenizasRomeo Ro as #olinaLaboratorio de Jecnología de Alimentos. Departamento de Investigación en Alimentos.

Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo%Coahuila% M&'ico.

%ntroducción

La determinación de ceni as es tambi&n conocida como el an)lisis deresiduos inorg)nicos /ue /uedan despu&s de la ignición u o'idacióncompleta de la materia org)nica de un alimento. 1s esencial elconocimiento b)sico de las características de varios m&todos paraanali ar ceni as así como el e/uipo para llevarlo a cabo para garanti arresultados con ables. 9ara esto% e'isten tres tipos de an)lisis de ceni as2ceni as en seco para la ma-oría de las muestras de alimentos ceni ash+medas *por o'idación, para muestras con alto contenido de grasa*carnes - productos c)rnicos, como m&todo de preparación de lamuestra para an)lisis elemental - an)lisis simple de ceni as de plasmaen seco a ba


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:7JA$

• :o poner cinta a los crisoles para identi carlos. Usar el n+meroimpreso en el crisol por el (abricante.

• Una (orma r)pida de poner a peso constante los crisoles es

meterlos por 8! min a la muWa a una temperatura de !!#=0## ;C -en(riar en desecador por 8!= # min *no cerrar completamente eldesecador -a /ue el calor de los crisoles puede provocar /ue latapa se pro-ecte - se rompa,.

ReferenciaInstituto :acional de :ormali ación% :Ch "58 o( >".7Xcial Methods o( Anal-sis. A.7.A.C. 8! th 1dition 8 #A7AC. 8 "#. 7Xcial Methods o( Anal-sis. Association o( 7Xcial

Anal-tical Chemists. ashington% D.C.Eanganna% $. 8 >>. Manual o( Anal-sis o( Fruits and egetable 9roducts.

McHraR=6ill.

Determinación de l>pidos ,#étodo deSo Clet 2

%smael #enera LópezDepartamento de Investigación en Alimentos. Facultad de Ciencias Químicas. Universidad

Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila% M&'ico.

F+)DA#$)T'

La muestra seca se e'trae con alg+n disolvente *he'ano% &ter etílico% &ter depetróleo, posteriormente se determina el e'tracto seco por di(erencia de peso%del /ue se elimina el disolvente,.

#AT$R%AL & $M+%P'8. 1'tractor so'leth *si(ón% re(rigerante% manta de calentamiento,

. Cartucho poroso de celulosa o papel ltro4. 9arilla el&ctrica% o manta de calentamiento5. Eegulador de volta


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>. Disolvente

#$T'D'L'G A

Colocar de [ ! g en papel ltro de muestra o en un cartucho de celulosa de

poro mediano% el cual se coloca en el anterior del si(ón de un aparato dee'tracción $o'leth. $acar un matra redondo plano% boca esmerilada de laestu(a /ue este a peso constante% en(riar por 4# minutos - pesar% adicionar eldisolvente *&ter etílico% &ter de petróleo o he'ano, hasta la mitad del matra %acoplar el re(rigerante del depósito so'leth. 1'traer por un periodo de 5=!horas% al nali ar la e'tracción colocar a peso constante nuevamente elmatra bola (ondo plano en la estu(a a 8## [ 8#4;C por 5 horas% transcurridoel tiempo% sacar% en(riar - pesar.

C)lculos2

GH V m [ m8 ' 8## m

Donde2

GH V 9orcenta


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Determinación de =


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La bra tambi&n proporciona propiedades (ísicas a los alimentos% -generalmente ba


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>. Jranscurrido el tiempo sacar - ltrar a trav&s de lino - lavar con 4porciones de agua destilada caliente - hacer prueba de papel tornasolpara veri car si ha- presencia de reacción alcalina.

". 1scurrir el e'ceso de agua presionando la tela de lino.. $acar la tela del lino del embudo% e'tender - retirar la bra con una

esp)tula - depositarla en un crisol de porcelana% previamenteidenti cado.

8#.9oner a peso constante en la estu(a a 8##=8#4 ;C por 8 h.88.$acar de la estu(a% en(riar *a peso constante en desecador, - pesar.8 .9re=incinerar la muestra en parrilla - meter en la muWa a !!#=0## ;C por

=4 h.84.$acar% en(riar *a peso constante en desecador, - pesar85.Calcular.

C)lculos

%FC = peso crisolcon fi raseca− pe socrisol fi racenizas

g de muestra x100

ReferenciaInstituto :acional de :ormali ación% :Ch "58 o( >".7Xcial Methods o( Anal-sis. A.7.A.C. 8! th 1dition 8 #

E Determinación de nitró4eno por elmétodo Q eldaCl#i4uel Kn4el #edina #orales 1 5 Romeo Ro as #olina

Laboratorio de Microbiología 8. Laboratorio de Jecnología de Alimentos . Departamento deInvestigación en Alimentos. Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Autónoma de

Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila% M&'ico.

%ntroducción

1n esta t&cnica se digieren las proteínas - otros componentes org)nicosde los alimentos en una me cla con )cido sul(+rico en presencia decatali adores. 1l nitrógeno org)nico total es convertido en sul(ato deamonio. La me cla digerida se neutrali a con una base - se destilaposteriormente en una solución de )cido bórico. Los aniones del borato

00DIA=UAD1C


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así (ormado se titulan con 6Cl estandari ado% lo cual se convierte en elnitrógeno de la muestra. 1l resultado del an)lisis representa elcontenido de proteína cruda del alimento -a /ue el nitrógeno tambi&nproviene de componentes no prot&icos.

Fuentes de errorConstitu-en (uentes de error en este m&todo son2 la inclusión denitrógeno no prot&ico como parte de la proteína la p&rdida de nitrógenodurante la digestión% la digestión incompleta de la muestra.Las proporciones e'cesivas de sul(ato de sodio o potasio /ue se a3adenal )cido *para elevar el punto de ebullición, pueden resultar en una

descomposición por calor - la consecuente p&rdida de amoníaco.Heneralmente se recomiendan temperaturas de digestión de 4>#=58#;C.

Jambi&n puede ocurrir p&rdida de nitrógeno si se utili a demasiadoselenio o la temperatura de la digestión no se controla cuidadosamentelas condiciones son a+n m)s críticas /ue con el cobre o el mercuriocuando se usan como catali adores.

Reacciones llevadas a caDIA=UAD1C


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TITULACIÓN1l anión borato *proporcional a la cantidad de nitrógeno, es titulado con

6Cl estandari ado2

*5, 6 7 4=S 6 S 6 4 7 4

#AT$R%AL

• 8 matra de digestión @


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pentahidratado *proporcionada por la coordinación delaboratorios,.

# T'D'

$LA-'RA(%') D$ R$A(T% 'S

8.= Me cla Indicadora.= 9repare por separado los indicadores verde debromocresol al #.8G - el ro


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PR'($D%#%$)T'

Di4estión

8.= 9ese e'actamente #.8!g de harina de trigo en un matra de micro=@


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en donde2

:6Cl V :ormalidad del 6Cl en moles?8###ml.olumen del )cido corregido V *ml. del )cido estandari ado para la

muestra, = *ml. de )cido estandari ado para el blanco,.85 V 9eso atómico del nitrógeno.

$e utili a un (actor para convertir el porcenta4DIA=UAD1C


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/ $ tracción de AD) ,método de (TA-2#ariana Del4ado Garc>a



La e'tracción de AD: por la t&cnica de CJA (ue propuesta por Do-le - Do-le*8 ">,. 1ste m&todo es apropiado para le e'tracción - puri cación del AD: deplantas% productos alimenticios% cepas (+ngicas% - es utili ado para laeliminación de polisac)ridos - componentes poli(enólicos% /ue a(ectan lapure a del AD:% por lo tanto la calidad de este.

La t&cnica consta de tres pasos. 1l primero consta de una lisis de la paredcelular. La muestra se trata con un buYer /ue contiene 1DJA% Jris?6Cl - CJA %de esta manera se eliminan los lípidos - las proteínas de la pared celular. 1lCJA tiene la (unción de capturar los lípidos - así% liberar el AD:. 1l 1DJA es uncomponente /uelante% /ue con otros metales se enla a al Mg el cual es unco(actor de las AD:asas% por lo /ue al unirse el Mg con el 1DJA se reduce laactividad de estas en imas. 1l Jris?6Cl da a la solución un p6 adecuado para elAD: no se da3e.La e'tracción total de AD:% se reali a utili ando una solución de cloro(ormo=

alcohol isoamílico el cual (acilita la eliminación de polisac)ridos%proteínas% etc.

$ tracción81n este paso% los polisac)ridos% compuestos (enólicos% proteínas - otros lisados

celulares son disueltos en una solución acuosa% separados del CJA -comple5DIA=UAD1C


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nucleicos en la (ase org)nica tienden a partirse si el p6 de la solución acuosano ha sido adecuadamente e/uilibrado de un valor de p6 de >."=".#% de sernecesaria la e'tracción con cloro(ormo se reali a dos o tres veces para así remover completamente las impure as de la capa acuosa.

La +ltima etapa /ue es la precipitación% se separan los )cidos nucleicos deldetergente% para lo cual la solución acuosa se trata primero con una soluciónde precipitación compuesta por una me cla de CJA - :aCl en concentraciónelevada. Una alta concentración salina es necesaria para /ue se (orme unprecipitado de )cidos nucleicos. 9uede ser pre(erible emplear acetato de sodioen lugar de :aCl por su capacidad tampón. 1n estas condiciones% eldetergente% /ue es m)s soluble en alcohol /ue en agua% puede eliminarse por

lavado% mientras /ue los )cidos nucleicos precipitan. 1l posterior tratamientocon etanol al ># G permite una ma-or puri cación o elución de los )cidosnucleicos de la sal residual.

Protocol o:

19 9esar #.8g de material a e'traer - se envuelve en papel aluminioeti/uetado previamente.

9 Colocar las muestra dentro del termo de nitrógeno lí/uido por 8# S?=

minutos.39 Inmediatamente despu&s macerar la muestra a polvo no con un

mortero esterili ado - congelado previamente.:7JA2 A partir de este momento se re/uiere utili ar guantes de l)te' - bata

de manga larga.;9 Jrans(erir el te!DIA=UAD1C


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sobrenadante - trans(erirlo a un tubo nuevo de 8.!ml previamenteesterili ado - eti/uetado.

9 Agregar el mismo volumen de cloro(ormo2 alcohol isoamílico * 528, altubo con el sobrenadante.

E9 Me clar por inversiones suaves durante 8= minutos. Centri(ugar en laultracentrí(uga por 8# minutos a 8 %###rpm.

*+A de manera opcional se puede obtener el lí/uido sobrenadante - volver ame clarse con un volumen e/uivalente de cloro(ormo2 alcohol isoamílico

528 para volverse a lavar. $eguir el paso " - continuar con el siguientepaso.

/9 Jrans(erir a otro tubo est&ril de 8.!ml la (ase acuosa *(ase superior de lasolución,. Agregar !# l de acetato de amonio >.!M m)s "## l de etanol

(río al 0G.179 Me clar por inversiones suaves. Colocar en un congelador por 0#

minutos.119 Centri(ugar a 8 %###rpm por ! minutos - descartar el

sobrenadante.1 9 Lavar la pastilla adherida al tubo */ue es el AD:, dos veces con

etanol al >#G *v?v, me clado cada ve por inversión suave. Colocar eltubo destapado en posición invertida hasta /ue el olor a etanol

desapare ca.139 Eesuspender el AD: con "# l de :a76 "mM. Ee(rigerar las

muestras.:7JA A partir de esta etapa las muestras deben permanecer re(rigeradas

Referencia9Do-le . % Do-le .L *8 ">, A rapid D:A isolation procedure (or small/uantities o( (resh lea( tissue. 9h-tochem ull 8 288=8!

>0DIA=UAD1C


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37 $nsa5o in vitro de actividad antif"n4ica#i4uel Kn4el De León *apata

Laboratorio de Fermentaciones. Departamento de Investigación en Alimentos. Facultad deCiencias Químicas. Universidad Autónoma de Coahuila. ! "#. $altillo% Coahuila%M&'ico.

1l presente ensa-o es para determinar el porcenta


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potenciación de la capacidad anti(+ngica contra hongos topatógenos%/ue se calculó seg+n la ecuación 5.

P AF = AF F

AF &F

*5,

Donde 9AF V 9otenciación de la actividad anti(+ngica por la aplicacióndel proceso de (ermentación AF 1F V Inhibición del e'tracto (ermentado*G, - AF 1:F V Inhibición del e'tracto sin (ermentar *G,.

1l c)lculo de 9AF *potenciación de la actividad anti(+ngica por laaplicación del proceso de (ermentación,% se determina al considerar /ueel e(ecto de inhibición en el crecimiento (+ngico es similar con ambos om)s e'tractos% por lo /ue se procede a dividir el G de inhibición deambos e'tractos% dando un valor cercano a 8 o inclusive 8% lo /ue nosindica una perspectiva mu- general del e(ecto de potenciación de laactividad anti(+ngica durante el proceso de (ermentación del e'tracto.

Jomando el valor 8 como el valor central% a partir del cual se interpretala concentración en la /ue se obtiene el ma-or e(ecto potencial de laactividad inhibitoria en el crecimiento de hongos topatógenos.

1 1M9L7 D1 HEPFICA2

>DIA=UAD1C


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0 200 400 .00 00 1000 12000

0"2

0"4

0".

0"1

1"2

1"4

1".

1"

Concentracion (ppm)

PAF

1


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)eu

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MÃ©todos de laboratorio