MBL Oligomer ELISA Kit - BioExe · 2010. 10. 28. · secreta nel sangue dove costituisce un importante elemento nella immunodifesa innata contro micror-ganismi invasori. Le sue forme

MBL Oligomer ELISA Kit


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Leggere attentamente queste istruzioni

DESTINAZIONE D’USOPer la determinazione in vitro della lecitina legante mannosio nel siero e nel plasma-eparina.

IMPORTANZA CLINICA Determinazione della suscettibilità alle infezioni e quindi di una aggressiva somministrazione di antibiotici in:

• Pazienti sottoposti o che stanno per sottoporsi a chemioterapia o a trattamento immunosoppres-sivo

• Pazienti affetti da fibrosi cistica• Bambini con infezioni ricorrentiPuò anche essere usato come marker prognostico della gravità della malattia nell’artrite reumatoide e nel lupus eritematoso sistemico.

La lecitina legante-mannosio (MBL, chiamata anche proteina legante il mannosio) è una proteina multime-rica che si lega ai carboidrati, prodotta nel fegato e secreta nel sangue dove costituisce un importante elemento nella immunodifesa innata contro micror-ganismi invasori. Le sue forme di norma oligome-rizzate si associano alle specifiche pro-proteasi del siero (le MASP) che si attivano quando MBL si lega alle superfici microbiche del carboidrato e, succes-sivamente, attivano il complemento attraverso il percorso di MBL o della lecitina1. La mancanza di MBL normalmente oligome-rizzata può essere associata con una accresciuta suscettibilità alle infezioni quando il sistema immune adattivo è immaturo (nella prima infanzia)2 o è stato soppresso (per es. dopo un trapianto o durante la chemioterapia)3. La mancanza è anche associata con gravi malattie auto-immuni come il lupus eritematoso sistemico (SLE)4 o l’artrite reumatoide5 e con una prognosi infausta nella fibrosi cistica6. La mancanza di MBL può essere causata da varianti alleliche nelle regioni promotrici e/o struttu-rali del gene MBL7. Certi alleli promotori vengono associati con concentrazioni di MBL più basse nel siero mentre le varianti strutturali hanno effetto sia sulla normale oligomerizzazione di MBL che

sulla sintesi totale della catena. Soggetti omozigoti per un difetto strutturale mostrano livelli di MBL oligomerizzerata molto bassi mentre gli eterozigoti mostrano livelli basso-intermedi. In 100 donatori di sangue danesi sani, le concentrazioni di MBL nel siero determinate da un immunotest oligomero-selettivo mostrarono valori bassi (

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domini leganti i carboidrati. Il materiale non legato viene rimosso per mezzo di lavaggio. Fase 2. Anticorpo biotinilato MBL monoclonale di rilevamento viene aggiunto a ciascun pozzetto e incubato. L’anticorpo di rilevamento si attacca agli oligomeri MBL attraverso i domini leganti i carboidrati che non sono occupati essendo legati al rivestimento. L’anticorpo di rilevamento non legato viene rimosso per mezzo di lavaggio. Fase 3. Streptavidina-HRP viene aggiunta a ciascun pozzetto a formare un complesso con l’anticorpo biotinilato legato. Il coniugato non legato viene rimosso per mezzo di lavaggio. Fase 4. Un substrato cromogenico per la perossidasi contenente tetrametilbenzidina (TMB) viene aggiunto a ciascun pozzetto del test. La HRP-streptavidin legata reagisce con il substrato generando un prodotto colorato. La reazione enzimatica viene interrotta chimicamente e l’inten-sità del colore viene letta a 450 nm in un lettore ELISA. La densità del colore (densità ottica) è una funzione della concentrazione delle forme oligome-riche di MBL originariamente aggiunta a ciascun pozzetto. I risultati per i calibratori vengono utiliz-zati per costruire una curva di calibrazione da cui vengono lette le concentrazioni di MBL presenti nei campioni.

PRINCIPIO DELLA PROCEDURA DEL TEST

Anticorpo MBL

Le piastre sono pre-rivestite con an-ticorpo primario MBL. Le piastre sono pronte per l’uso

MBL

Campioni e calibratori diluiti sono ag-giunti a ciascun pozzetto e incubati

Anticorpo Biotilinata MBL

Anticorpo Biotilinata MBL di rivelazione è aggiunto a ciascun pozzetto e incu-bato

Streptavidina HRP-conjugata

Streptavidina HRP-conjugata -è aggiun-ta a ciascun pozzetto e incubata

Substrato TMB

Il substrato è aggiunto a ciascun poz-zetto. Sviluppare per 15 minuti al buio

Soluzione di Arresto viene aggiunta a ciascun pozzetto. Leggere la piastra entro 30 min.

I risultati qualitativi si ottengono misu-rando le assorbanze dei pozzetti 450 nm

Soluzione di Arresto

Mannan

Plates are precoated with Man-nan. The plates are ready for use

MBL

Diluted samples and calibrators are added to each well and incu-bated

1 hour

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Biotinylated MBL antibody

Biotinylated detection antibody is added to each well and incuba-ted

1 hour

Streptavidin - HRP

HRP-conjugated streptavidin is added to each well and incuba-ted

1 hour

S

S

SS

TMB Substrate

Substrate is added to each well. Develop for 15 minutes in the dark

15 min.

Stop Solution is added to each well. Read plate within 30 min.

Quantitative results are obtained by measuring the absorbances of the wells at 450 nm

Total assay time lessthan 4 hours

Stop solution

B B

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B B

Mannan


MBL


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Streptavidin - HRP


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S

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TMB Substrate


15 min.




Stop solution

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Mannan


MBL


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Streptavidin - HRP


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TMB Substrate


15 min.




Stop solution

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Mannan


MBL


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Streptavidin - HRP


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TMB Substrate


15 min.




Stop solution

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Mannan


MBL


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Streptavidin - HRP


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SS

TMB Substrate


15 min.




Stop solution

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Mannan


MBL


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Streptavidin - HRP


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S

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TMB Substrate


15 min.




Stop solution

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Mannan


MBL


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Streptavidin - HRP


1 hour

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TMB Substrate


15 min.




Stop solution

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Mannan


MBL


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Streptavidin - HRP


1 hour

S

S

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TMB Substrate


15 min.




Stop solution

B B

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Mannan


MBL


1 hour

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Streptavidin - HRP


1 hour

S

S

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TMB Substrate


15 min.




Stop solution

B B

B B

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Mannan


MBL


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1 hour

Streptavidin - HRP


1 hour

S

S

SS

TMB Substrate


15 min.




Stop solution

B B

B B

B B

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COMPONENTI DEL KIT

Nota: i reagenti liquidi contengono i conservanti azoturo di sodio, timerosal o Bronidox L. Le sostanze in esso contenute possono essere nocive se ingerite.

MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI 1. Micropipette regolabili in una gamma da 1 a

1000 µL e corrispondenti punte per pipette usa e getta

2. Provette il polipropilene in grado di contenere fino a 1000 µL

3. Porta-provette 4. Micropipetta regolabile da 8- o 12-canali

(gamma 50-250 µL) o micropipetta a ripetizione (opzionale)

5. 1 cilindro pulito graduato da 1 L6. Acqua deionizzata e distillata7. Coperchio per micropiastra 8. Contenitore pulito per soluzione di lavaggio diluita9. Dispositivo per pulire i pozzetti durante la

procedura di lavaggio (opzionale)10. Fazzoletti di carta non garzati o carta

assorbente11. Serbatoi per pipettaggio usa e getta 12. Timer (60-minuti)13. Lettore a piastra ELISA calibrato in grado di

leggere a 450 nm (preferibilmente sottraendo i valori di riferimento a 650° 620 nm)

14. Ipoclorito di sodio (candeggiante domestico diluizione 1:10) per la decontaminazione di campioni, reagenti e materiali)

PRECAUZIONI Solo per uso diagnostico in vitro 1. L’utilizzo di questo kit è riservato esclusiva-

mente a personale di laboratorio qualificato. 2. I calibratori MBL furono preparati da MBL

purificata di plasma umano. Ciascuna unità di sangue usata per la preparazione fu testata secondo metodi approvati e trovata non reattiva per l’antigene superficiale dell’epatite B (HBsAg) e per anticorpi contro il virus da immuno-deficienza umana (HIV) e il virus dell’epatite C (HCV). Inoltre il prodotto fu sottoposto a procedure di disattivazione dei virus. siccome, però, nessuna metodica di test può offrire la completa sicurezza che siano assenti agenti infettivi, i calibratori e i campioni dei pazienti devono essere maneggiati a livello di biosicu-rezza 2 come raccomandato nel manuale CDC/NIH “Biosafety In Microbiology and Biomedical Laboratories”, 1999. Per qualsiasi siero umano o campione di sangue potenzialmente infetto, le soluzioni contenenti siero umano devono essere trattate come potenzialmente infette e maneggiate di conseguenza.

3. Usare punte di pipette separate per ciascun campione, calibratore e reagente per evitare la contaminazione incrociata.

4. Usare serbatoi separati per ciascun reagente. Questo si applica soprattutto al substrato TMB.

5. Dopo l’uso, decontaminare tutti i campioni, i reagenti e i materiali immergendo per almeno 30 minuti in soluzione di ipoclorito di sodio (candeggiante domestico diluito 1:10).

6. Per evitare la formazione di goccioline durante il lavaggio, aspirare la soluzione di lavaggio in una bottiglia contenente candeggiante.

7. Evitare il rilascio nell’ambiente. Smaltire i contenitori e il contenuto inutilizzato in modo sicuro e in conformità con le disposizioni nazionali e locali.

Articolo Contenuto Quantità

112 x 8 Pozzetti ricoperti + supporto

96 pozzetti

2 Diluente per campione 1 x 60 mL

3a - 3h Calibratori MBL, 1-8 8 x 1 mL

425x soluzione di lavaggio concentrata

1 x 30 mL

5 Anticorpo biotinilato MBL 1 x 12 mL

6 Streptavidina-HRP 1 x 12 mL

7 Substrato TMB 1 x 12 mL

8 Soluzione di arresto 1 x 16 mL

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8. I reagenti di questo kit sono conservati con un massimo di 0,05% di azoturo di sodio, 0,038% timerosal, chiamato anche tiomersal o mertio-lato, o 0,2% Bronidox L. Questi possono essere tossici se ingeriti.

9. La soluzione di arresto contiene 0,5 mol/L di acido solforico e può causare irritazioni o ustioni alla pelle e agli occhi. In caso di contatto, sciacquare abbondantemente con acqua e consultare immediatamente un medico.

10. Non scambiare i componenti di kit con numeri di lotto diversi. I componenti sono stati standar-dizzati come unità per un dato lotto.

11. Campioni emolizzati o iperlipemici possono dare risultati errati.

12. Non diluire i campioni di siero o il plasma direttamente nei micropozzetti.

13. Non toccare né raschiare il fondo dei micropoz-zetti quando si pipetta o si aspira il liquido.

14. Tempi e temperature diversi da quelli specificati possono dare risultati errati.

15. Non lasciare che i pozzetti si asciughino una volta che il test è iniziato.

16. Il substrato TMB è sensibile alla luce. Conser-vare lontano da fonti di luce.

17. Non riutilizzare i pozzetti né versare di nuovo i reagenti nelle bottiglie una volta versati.

STABILITÀ E CONSERVAZIONE1. Conservare il kit con tutti i reagenti a 2-8°C.

Non congelare.2. Usare tutti i reagenti prima della data di

scadenza riportata sull’etichetta delle fiale.3. La soluzione di lavaggio diluita resta stabile

per 4 settimane a 2-8°C. Se non devono essere utilizzati tutti i pozzetti, diluire solo la parte di soluzione di lavaggio concentrata richiesta.

4. Per l’uso successivo, conservare le strisce di pozzetti nella sacca di alluminio con il dissec-cante in dotazione e sigillare di nuovo. Lasciare sempre che la sacca protettiva si equilibri a temperatura ambiente prima di aprire per evitare la condensazione in/su i micropozzetti rivestiti.

RACCOLTA DEI CAMPIONIManeggiare e smaltire tutti i campioni di sangue, siero e plasma come se fossero potenzialmente infetti. Vedere Precauzioni, sezioni 2, 3, 5, 6 e 7.La determinazione di MBL in un singolo campione richiede 5-50 µL di siero o plasma. I campioni di sangue devono essere raccolti in modo asettico in una provetta semplice o eparinizzata da parte di personale qualificato che usa tecniche di venopun-tura approvate. Il siero o il plasma devono essere preparati con tecniche standard per test clinici di laboratorio. Coprire i campioni e conservarli a 2-8°C per testarli entro 24 ore. Se il test non può essere eseguito entro 24 ore o se il campione deve essere spedito, coprire il campione e tenerlo congelato ad una temperatura di almeno −20°C. Evitare congelamento e scongelamento ripetuti. Non usare campioni emolizzati, iperlipemici, trattati a caldo o contaminati.

PREPARAZIONE DI REAGENTI E CAMPIONI 1. Portare tutti i campioni e i reagenti a tempera-

tura ambiente (20-25°C). Mescolare a fondo i campioni capovolgendoli delicatamente e, se necessario, eliminare materia particellare visibile con una centrifugazione a bassa velocità.

2. Stabilire il numero di campioni da testare (in duplicato) oltre a qualunque campione di controllo interno del laboratorio (in duplicato) e qualsiasi pozzetto del bianco reagente. I pozzetti pre-rivestiti possono essere utilizzati nel formato strip o singolarmente. I pozzetti singoli possono essere utilizzati spaccandoli individualmente ed inserendoli nell’apposita cornice nella posizione prevista. Lettere e numeri permettono l’identificazione di ogni pozzetto. Aggiungere 16 pozzetti per gli 8 calibratori (in duplicato). Estrarre il numero di micropozzetti necessario e rimettere le rimanenti nel sacchetto di alluminio con il dissecante a 2-8°C.

3. Soluzione di lavaggio: Diluire la soluzione di lavaggio concentrata 25x versando tutto il contenuto della bottiglia (30 mL) in un cilindro

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graduato da 1 L e aggiungere acqua distillata o deionizzata fino a raggiungere un volume di 750 mL. Mescolare bene e, dopo l’uso conservare a 2-8°C.

4. Diluente per campione: Pronto all’uso, non diluire ulteriormente.

5. Calibratori MBL: Pronti all’uso. Le concentra-zioni assegnate sono indicate sulle etichette. Non diluire ulteriormente.

6. Anticorpo biotinilato MBL: Pronto all’uso, non diluire ulteriormente.

7. Streptavidina HRP-coniugata: Pronta all’uso, non diluire ulteriormente.

8. Substrato TMB: Pronto all’uso, non diluire ulteriormente.

9. Soluzione di arresto: Pronta all’uso, non diluire ulteriormente.

10. Campioni paziente: Diluire ciascun campione in una proporzione registrata con diluente per campione fino ad ottenere almeno 250 µL di soluzione diluita che può essere impostata in pozzetti duplicati a 100 µL per pozzetto. Per la maggior parte dei campioni, si consiglia uno screening iniziale ad una diluizione di 1/100 (per es. 5 µL di siero + 495 µL di diluente per campione, mescolati capovolgendo o ruotando lentamente), seguito da un nuovo test di campioni fuori gamma a diluizione più bassa o più alta secondo come è appropriato. Non usare diluizioni inferiori a 1/10.

PROCEDURA DEL TEST1. Preparare il protocollo del test, assegnando i

pozzetti appropriati per impostare calibratori, campioni paziente diluiti e qualsiasi controllo interno di laboratorio in duplicato. Se non è disponibile una lunghezza d’onda di riferimento di 650 o 620 nm sul lettore ELISA, può essere assegnato un pozzetto del bianco-reagente Questo viene impostato con 100 µL di diluente per campione invece che siero o plasma diluiti ed elaborati come gli altri pozzetti.

2. Pipettare volumi di 100 µL di ciascun calibra-tore, campioni diluiti e qualsiasi controllo interno di laboratorio nelle corrispondenti

posizioni di micropozzetti. Coprire i pozzetti e incubare per 60 minuti a temperatura ambiente su una piattaforma oscillante impostata a 200/minuto.

3. Aspirare il contenuto dei micropozzetti e lavarli tre volte con almeno 300 µL di soluzione di lavaggio diluita. Se il lavaggio si esegue manual-mente, svuotare i micropozzetti capovolgendoli e scuotendoli delicatamente in un contenitore adatto tamponando successivamente in posizione capovolta su un asciugamano di carta. Si consiglia una sosta di 1 minuto prima di svuotare almeno per l’ultimo lavaggio del ciclo. La forza con cui la soluzione di lavaggio entra o esce dai pozzetti influenza lo sviluppo finale del colore. Il pipettaggio manuale, che può essere molto delicato e portare ad un elevato sviluppo di colore, è consigliato solo in assenza di alternative come il riempimento dei pozzetti per immersione, utilizzando un dispenser di lavaggio manuale multicanale o un dispositivo di lavaggio automatico.

4. Versare 100 µL di anticorpo biotinilato MBL (pronto all’uso) in ciascun micropozzetto. Può essere usata una micropipetta multicanale o a ripetizione. Coprire i pozzetti e incubare per 60 minuti a temperatura ambiente su una piatta-forma oscillante (200/minuto).

5. Lavare come descritto in precedenza, nella fase 3.

6. Versare 100 µL di streptavidina HRP-coniugata (pronta all’uso) in ciascun micropozzetto. Può essere usata una micropipetta multicanale o a ripetizione. Coprire i pozzetti e incubare per 60 minuti a temperatura ambiente su una piatta-forma oscillante (200/minuto).

7. Lavare come descritto in precedenza, nella fase 3.

8. Versare 100 µL di substrato TMB (pronto all’uso) in ciascun micropozzetto. L’uso di una micropipetta multicanale è consigliato per ridurre il tempo di pipettaggio. Coprire i pozzetti ed incubare per esattamente 15 minuti a temperatura ambiente, al buio. Impostare l’orologio quando si riempie il primo pozzetto.

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9. Aggiungere 100 µL di soluzione di arresto (pronta all’uso) a ciascun pozzetto, mantenendo la stessa sequenza e lo stesso tasso di pipettaggio della fase 7. Mescolare scuotendo delicatamente per 20 secondi, evitando fuoriu-scite. Leggere i pozzetti entro 30 minuti.

10. Leggere le densità ottiche (OD) o assorbanze dei pozzetti a 450 nm in un lettore per micropiastra appropriato (lunghezza d’onda di riferimento 650 o 620 nm). Se non è disponi-bile alcuna lunghezza d’onda di riferimento, il valore di ciascun bianco reagente è sottratto da ciascuno degli altri valori prima di eseguire gli altri calcoli.

VISTA SCHEMATICA

CALCOLO DEI RISULTATIIl principio di base è quello di costruire una curva di calibrazione punteggiando la media dei valori di densità ottica duplicata per ciascun MBL calibratore sull’asse y rispetto alle corrispondenti concentra-

Lavare x 3Incubare1 h a TA

Calibratori o campione diluito 100 µL


100 µL Anticorpo Biotilinato MBL


100 µL Streptavidina HRP-coniugata

Incubare15 min a TAal buio

100 µL Substrato TMB

Leggere a 450 nm

Diluire i campioni dei pazienti

Portare i reagetni a TA

100 µL Soluzione di Arresto

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zioni di MBL in ng/mL sull’asse x. La curva di calibra-zione deve corrispondere ai requisiti di validazione. La concentrazione di MBL per ciascun campione di siero diluito viene quindi trovata localizzando il punto sulla curva che corrisponde alla media dei valori di densità ottica in duplicato per il campione diluito e leggendo la concentrazione corrispondente in ng/mL sull’asse x. La concentrazione di MBL nel campione di siero non diluito è calcolata moltipli-cando questo risultato per il fattore di diluizione del campione. Questa procedura può essere eseguita manualmente usando grafici con scale lineari x e y. Una curva intera può essere disegnata attraverso i punti oppure i punti adiacenti possono essere uniti con linee diritte. La seconda procedura può leggermente sovrastimare i valori di concentrazione tra i punti nel caso in cui la curva è leggermente convessa verso sinistra, cosa che si riscontra comunemente. Sebbene la curva può approssimarsi ad una linea diritta, è praticamente e teoricamente scorretto calcolare e tracciare la linea diritta del miglior adattamento e leggere i risultati da questo. La procedura può anche essere eseguita con un programma software di lettura ELISA che include procedure di adattamento alla curva. La procedura maggiormente scelta è usare assi lineari x e y con adattamento logistico alla curva a 4-parametri. Campioni diluiti che danno un valore di densità ottica medio superiore a quello per il MBL calibra-tore da 40 ng/mL o al di sotto di quello per il MBL calibratore da 0,5 ng/mL sono fuori dalla gamma del test e le loro concentrazioni devono essere annotate rispettivamente come >40 ng/mL e (fattore di diluizione 40 x) ng/mL e 1,5. Il valore medio OD per ogni calibratore MBL dovrebbe essere superiore a quello del precedente calibratore MBL, per es. OD(10 ng/mL MBL) > OD(5 ng/mL). La curva standard dovrebbe essere lievemente convessa verso sinistra quando i risultato vengono plottati su un asse lineare.

Punti fuori linea per singoli calibratori: Uno o più calibratori singoli possono dare letture anomale dell’OD. Uno o entrambi i valori duplicati possono essere fuori linea e la media dei duplicati può essere fuori linea. Questo errore è significativo se crea problemi ad un adattamento soddisfacente della curva con il metodo logistico a 4 parametri che, come risultato del valore anomalo, viene allontanato dagli altri punti del calibratore che sono in realtà corretti. I punti del calibratore e la curva adattata devono essere esaminati per verificare l’adattamento corretto prima di accettare qualunque calcolo della concentrazione desunto da esso. Una curva che non si adatta in modo soddisfacente sarà rivelata anche da un’alta somma di quadrati residuali. Se è influenzato solo un calibratore, che non è il più alto, sono possibili due azioni: i) Un risultato erroneo singolo o duplicato deve essere eliminato dalla curva e i rimanenti risultati riadattati con la procedura logistica a 4-parametri. Se si ottiene un adattamento soddisfacente, i risultati di concentrazione di previsione possono essere calcolati a partire da esso. ii) Se non si può ottenere un adattamento soddisfacente in questo modo ma la curva è comunque coerente, i risultati di previsione si possono ottenere dalle linee diritte tra le medie dei duplicati, omettendo i punti erronei. Se sono influenzati due o più calibratori, il test deve essere ripetuto. Un risultato deviante per un singolo calibratore può essere dovuto ad un errore dell’operatore o ad un deterioramento del calibratore. Se entrambi i valori duplicati sono coerentemente fuori linea

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in test successivi, il calibratore è difettoso e deve essere tralasciato.

TRACCIABILITÀ DEL VALORE DEL CALIBRATOREL’assegnazione del valore MBL è stata realizzata da ELISA assicurando la tracciabilità rispetto agli standard interni applicati presso lo Statens Serum Institut (Danimarca).

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATIL’intera gamma delle concentrazioni di MBL nel siero o nel plasma di donatori umani sani così come misurata da questo test è da 0 a 7000 µg/mL. Valori al di sotto di 100 ng/mL possono essere trovati in genotipi strutturali O/O (dove O = B, C o D) qualunque sia il genotipo promotore, o in genotipi strutturali A/O (dove A = di tipo selvatico) in combinazione con genotipi promotori HY/LX o LX/LY, o nel genotipo promotore LX/LX. Valori tra 100 ng/mL e 1000 ng/mL possono essere trovati in genotipi strutturali A/O o in genotipi strutturali LX/LY o LX/LX. Valori al di sopra di 1000 ng/mL sono associati con MBL di tipo selvatico (A/A), sebbene eterozigoti A/D possono occasionalmente raggiungere questo livello. Il genotipo promotore HY/HY di solito mostra valori al di sopra di 1500 ng/mL per MBL di tipo selvatico ma tali valori sono anche mostrati da altri genotipi promotori in assenza di alleli strutturali O. Studi clinici hanno usato valori di cut-off di 50 ng/mL o 100 ng/mL per definire una grave deficienza di MBL. Valori al di sotto di questi cut-off possono essere associati, in certi soggetti, con una storia di accresciuta suscettibilità alle infezioni.

CONTROLLO DELLA QUALITÀLaboratori che intendono eseguire test ripetuti devono fissare i propri sieri di controllo ad alta lettura (>1000 ng/mL) e a bassa lettura (

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Riproducibilità intertest (fra cicli) (giorni/operatori diversi): Gli stessi due sieri furono elaborati in duplicato in 4 diversi test eseguiti da 2 operatori in giorni diversi per stabilire la riproducibi-lità tra cicli. Si ottennero i seguenti risultati:

Specificità: Il Western blot di plasma o frazioni di plasma non ha identificato bande che reagiscono con l’anticorpo se non quelle attribuibili a MBL. L’assenza di reazioni incrociate con altri componenti del plasma è supportata dal fatto che letture non distinguibili da zero si ottengono da alcuni donatori con deficienza di MBL ma normali sotto altri profili.

RESPONSABILITÀPer le diagnosi in vitro è consentito l’utilizzo solo all’interno dell’Unione europea, il Canada e l’India. Per motivi di ricerca, è possibile l’utilizzo nel resto del mondo. Non è ancora stata inoltrata una richiesta di approvazione per l’utilizzo diagnostico nel resto del mondo. Questo kit è destinato solo alla determinazione in vitro della lecitina legante mannosio nel siero e nel plasma umano. Il kit è destinato ad essere usato solo da personale qualificato che svolge attività di ricerca o di diagnostica. Se la persona che riceve questo kit, lo passa in qualunque modo a terzi, queste istruzioni devono essere allegate, e il suddetto ricevente deve a

proprio rischio rendersi garante nei confronti della BioPorto Diagnostics A/S per tutti i relativi limiti e responsabilità. BioPorto Diagnostics A/S non sarà responsa-bile per danni o perdite causati dall’uso di questo kit diverso da quello espressamente dichiarato in queste istruzioni. La responsabilità di BioPorto Diagnostics A/S non andrà in alcun modo oltre il valore commerciale del kit. In nessuna circostanza, BioPorto Diagnostics A/S sarà responsabile per danni indiretti, speciali o consequenziali compresa, ma non solo, la perdita di profitti.

REVISIONE: MO2007-12-EN-IT

Siero 1 Siero 2

Conc. MBL media 2279 ng/mL 28,4 ng/mL

SD 81,2 1,07

CV 3,6% 3,8%

Siero 1 Siero 2

Conc. MBL media 2310 ng/mL 29,7 ng/mL

SD 212 1,28

CV 9,2% 4,3%

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BIBLIOGRAFIA

1. Turner MW (1998) Mannose-binding lectin (MBL) in health and disease. Immunobiology 199:327-339.

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Numero di catalogo

Dispositivo medico-diagnostico in vitro

Codice del lotto

Consultare le istruzioni per l’uso

Conformità europea

Utilizzare entro

Fabbricante

Evitare l’esposizione alla luce del sole

Limiti di temperatura

Non riutilizzare

REF

IVD

LOT

2˚C

8˚C

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WASH SOLUTION 25X

SAMPLE DILUENT 5X

Soluzione di lavaggio concentrata Diluire prima dell’uso.

Diluente per campione concentrata. Diluire prima dell’uso.

Attenzione, vedere le istruzioni per l’uso

Rischio biologico

Non utilizzare se la confezione è danneggiata

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MBL Oligomer ELISA Kit - BioExe · 2010. 10. 28. · secreta nel sangue dove costituisce un importante elemento nella immunodifesa innata contro micror-ganismi invasori. Le sue forme