Métodos e inovações em microscopia

eletrônica aplicada a Paleoparasitologia

Juliana Dutra

Laboratório de Paleoparasitologia

ENSP-FIOCRUZ

Como os parasitos em material arqueológico podem ser estudados?

• Sir Armand Ruffer (1910) – primeiras observaçoes de ovos de parasitoem tecido mumificado

• Callen and Cameron (1960) – técnica de reidratação• Sedimentação espontânea – a técnica de Lutz

Fotos: Lab. Paleoparasitologia

Microscopia de luz – Primeira etapa

Diphyllobothrium sp. Acanthocephala sp.

Trichuris trichiura Pediculus capitis

Como inovar o diagnóstico?

• Microscopia eletrônica;• Primeiros estudos – Macadan & Sandison (1969), Horne & Lewin

(1977);

Pele. Somente a derme está preservada e

consiste em uma trama de fibras de colageno,

com vários danos causados pela tecnica de

processamento (X 21,000). Macadan & Sandison,

1969

Ovo de Taenia( x 18 800) Hemacia achada em conteúdointestinal e vista pormicroscopia de varredura

Horne & Lewin (1977)

Microscopia eletronica de varredura

• Alto vácuo• Baixo vácuo• Modo ambiental

Qual a melhor técnica para material antigo?

Amostras antigas

• Estado dessecado• Fragilidade• Artefatos

MEVAlto vácuo

Vácuo < 6e-4 Pa Fixação química Desidratação em etanol

Secagem porponto crítico

metalização

Maior intensidade de sinal – melhor resolução

Material pode serguardado

Muito dano ao material Alto custo

Alto Vácuo

Trichuris trichiura Oxiuridae

Ascaris lumbricoides Pediculus capitis

Baixo vácuo

• Sem fixação química;• Sem metalização;• Sem danos a amostra que pode ser

guardada ou reutilizada em outrastécnicas;

Observação direta

Baixo vácuo

Vácuo (low) < 10 to 130 Pa

Pediculus capitis

Modo Ambiental

Modo ambiental< 10 to 2600 Pa

• Permite a imagem de material umido;• Menor manipulação• Reduz a chance de artefatos;• Baixa temperatura – estágio de Peltier• Amostras só podem ser observadas

uma única vez.

Observação diretaem água

Oxiuridae

Acanthocephala

Modo ambiental Baixo vácuo de amostra dessecada

Conclusões

• Amostras antigas precisam de protocolos especiais• O surgimento de artefatos é problemático pois, em alguns casos, não

há material moderno para comparar;• As várias técnicas de MEV precisam ser adaptadas para a natureza

dessecada ou úmida da amostra;• Atualmente o baixo vácuo é a opção mais promissora para materiais

antigos.

Apoio: FAPERJ and CNPq

Metas

• Estabelecer protocolos padronizados para material antigo• Criar um banco de dados com informações tridimensionais de ovos de

parasitos, amostras de pelos, dentes, cabelo etc• Disponibilizar o acesso aos protocolos visando padronizar o uso de

material arqueológico, diminuindo os danos a peças de coleção.