Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica IX Semana de Biologia da UFPB Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM

Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica

IX Semana de Biologia da UFPB

Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM

Biossegurança e Rotina LaboratorialBiossegurança e Rotina Laboratorial


Técnicas MicrobiológicasTécnicas Microbiológicas

BiossegurançaBiossegurança



Conjunto de procedimentos, ações, técnicas, metodologias, equipamentos e dispositivos capazes de eliminar ou minimizar riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, desenvolvimento, tecnológico, ensino e prestação de serviços, que podem comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.


HistóricoHistórico

Conclusão:“A manipulação de culturas, espécies ou inalação de poeira contendo a bactéria Brucella é eminentemente perigosa para os trabalhadores de um laboratório.”

1941 – Meyer e Eddie – 74 casos de brucelose associados a laboratórios


222 infecções, sendo 21 fatais – 12% por acidentes relatados

1949 – Sulkin e Pike – Pesquisa sobre infecções associadas a laboratórios


1342 casos de infecções, sendo 72% das infecções por brucelose, tuberculose, tifo e infecção estreptocócica

1951 - Sulkin e Pike – Nova pesquisa





1974 – Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos

1980 – Precauções universais na manipulação de fluídos corpóreos

1984 – Primeiro Workshop Brasileiro de Biossegurança - Fiocruz

1995 – Lei Brasileira de Biossegurança – Lei 897/95


1999 – Fundação da Associação Nacional de Biossegurança (ANBio)

1999 – Primeiro Congresso Brasileiro de Biossegurança

2000 – Biossegurança como discíplina científica universitária

2001 – Indução de ações em biossegurança pelo CNPq



Tipos de RiscosTipos de Riscos

Físicos

Químicos

Biológicos

Acidentes e Ergonômicos



Físicos

Químicos

Biológicos


-Provocados por algum tipo de energia;

- A caracterização depende do equipamento;

- Principais:* Equipamentos que geram calor ou chamas;

* Equipamentos de baixa temperatura;

* Material radioativo



-Conhecimento das substâncias químicas;

- Cuidados adequados para o manuseio.

Físicos

Químicos

Biológicos




- Decorrentes da exposição à produtos de animais, vegetais e microrganismos;

- Agentes microbiológicos:* Grau de patogenicidade* Poder de invasão* Resistência a esterilização* Virulência* Capacidade mutagênica

- Vias de contaminação.

Físicos

Químicos

Biológicos




- Fatores que gerem situações de risco para a integridade física e moral;

- Fatores que possam interferir nas características psicofisiológicas.

Físicos

Químicos

Biológicos



Classificação dos MicroorganismosClassificação dos Microorganismos

Classe 2:

Risco individual moderado e baixo risco para a comunidade.

Nível de Segurança 2


Uso de BarreirasUso de Barreiras

Equipamentos de Proteção Individual (EPI):

Proteção contra o contato com agentes infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor excessivo, fogo dentre outros.



Uso de BarreirasUso de Barreiras

Equipamentos de Proteção Coletiva:

Proteção dos pesquisadores, do ambiente e da pesquisa desenvolvida.



Manuseio de produtos biológicos envolve:

Limpeza

Desinfecção

Esterilização

Descontaminação

Anti-sepsia

Assepsia


EsterilizaçãoEsterilização

Calor

Radiação

Filtração

Processos Físicos:



Calor

Radiação

Filtração

- Calor úmido (vapor sob pressão) – Autoclave, maior poder de penetração e redução do número de microrganismos.

- Calor seco - Incineração, flambagem ar quente (estufa)

Processos Físicos:


EsterilizaçãoEsterilizaçãoAUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de vapor sob pressão.


ESTUFA - Calor secoAção: desnaturação das proteínas microbiana




Calor

Radiação

Filtração

- Flambagem

Esterilização de alças e agulhas.

Processos Físicos:



Calor

Radiação

Filtração

- Radiação eletromagnética Exemplos:• microondas• radiação ultravioleta• raios X• raios γ• elétrons

Processos Físicos:


Radiação ultravioleta – Capela de Fluxo Laminar




Calor

Radiação

Filtração

- Remoção dos microrganismos de líquidos e gases sensíveis ao calor:

* Glicose

* Antibióticos

* Reagentes químicos

Processos Físicos:



Tipos de filtros:

A) Filtro de profundidadeB) Membrana filtranteC) Filtro de trilhas de nuleação

A) B) C)


EsterilizaçãoEsterilizaçãoFiltração:


EsterilizaçãoEsterilizaçãoFiltro de trilhas de nucleação - microscopia eletrônica de varredura


EsterilizaçãoEsterilizaçãoProdutos Químicos – Desinfetantes e Esterilizantes


Atividades no laboratório:

Planejamento das tarefas

Condições adequadas

Material necessário

Maior segurança

Menor desperdício



Técnicas MicrobiológicasTécnicas Microbiológicas

Rotina LaboratorialRotina Laboratorial


Cultivo e ManutençãoCultivo e Manutenção

Meios de Cultura:

Mistura de nutrientes requeridos para a sobrevivência e crescimento dos microorganismos em um sistema artificial.

Podem ser em caldo (líquido) ou ágar (sólido).

Meios líquidos - úteis para a obtenção de grande biomassa de microrganismos


Cultivo e ManutençãoCultivo e Manutenção

Meios quimicamente definidos:(Meios com finalidades especiais)

Meios seletivos

Meios diferenciais

Meios de enriquecimento

Meios para anaeróbios

Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI)


Métodos de CultivoMétodos de Cultivo

Inoculação:

• Técnica de esgotamento por estrias

• Técnica da semeadura em superfície

• Inundação

• Diluição por extinção(Obtenção de cultura pura, originada à partir de uma

única célula (UFC) – A suspensão original da amostra é diluída seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluição))


Medida do CrescimentoMedida do Crescimento

Método Quantitativo:• Avaliação do número de células - UFC/mL – Unidades Formadoras de Colônias por mL

ex.: Contagem celular microscópica ou eletrônica, contagem em placa ou através de membrana filtrante..

Método Qualitativo: Avaliação do peso celular ou estimativa de unidades de absorbância da massa de células

em caldo ou suspensões (turbidez)..


Identificação dos MicroorganismosIdentificação dos Microorganismos

Características Culturais

Morfologia Colonial

Características Morfológicas

Coloração simples

Coloração diferencial

Coloração de Gram

Microscopia Óptica

Características Metabólicas

Características Fisiológicas

Características Antigênicas

Características patogênicas

Características genéticas


EstocagemEstocagem

Conservação de Culturas Puras:

• Conservação por um curto período (dias a meses):

Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4°C a 10°C) - Repiques freqüentes

• Conservação por longos períodos:Nitrogênio líquido a -196°CFreezers a -70°C/ -120°CLiofilização – congelamento a seco - viabilidade das

culturas por muitos anos - coleção de microrganismos como referência.


Material: Material: Tubos Tubos de Cultura e Placas de Petri de Cultura e Placas de Petri


Material Material Instrumentos Instrumentos para Transferência de Culturas para Transferência de Culturas


Obrigada!!!!!Obrigada!!!!!

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