MONOGRAFIA Carina Sofia Medeiros Pavão

UNIVERSIDADE DE LISBOA

FACULDADE DE FARMCIA

MONOGRAFIA

DIAGNSTICO DAS ALERGIAS: O PAPEL DO LABORATRIO DE

ANLISES CLNICAS

Orientao: Prof. Doutora Maria Cristina Marques

MESTRADO EM ANLISES CLNICAS

Carina Sofia Medeiros Pavo

Lisboa, 2015

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ndice

Resumo/Abstract ............................................................................................................... 5

Lista de abreviaturas .......................................................................................................... 6

1. Introduo ...................................................................................................................... 8

2. Hipersensibilidade, alergia e atopia ............................................................................... 9

3. Fisiopatologia da alergia .............................................................................................. 10

4. Diagnstico da alergia ................................................................................................. 13

4.1. Determinao da IgE srica .................................................................................. 14

4.1.1. IgE total .......................................................................................................... 14

4.1.2. IgE especfica - RAST ................................................................................... 15

4.1.2.1. ImmunoCAP Ensaio imunoenzimtico fluorescente ......................... 17

4.1.2.2. Limitaes da metodologia RAST .......................................................... 19

4.1.2.3. Marcha atpica e Painis de alergnios - Phadiatop

............................. 19

4.2. Determinao de mediadores da resposta alrgica e de marcadores de

ativao ....................................................................................................................... 21

4.2.1. Ativao de basfilos por estimulao com alergnios ................................. 21

4.2.1.1. Libertao de histamina e sulfidoleucotrienos ....................................... 21

4.2.1.2. Marcadores de ativao e citometria de fluxo ........................................ 22

4.2.2. Protena Catinica Eosinoflica (ECP) ........................................................... 23

4.2.2.1. Teste ImmunoCAP ECP ....................................................................... 24

4.2.3. Triptase ........................................................................................................... 25

4.3. Outras metodologias laboratoriais ........................................................................ 26

4.3.1. Immunoblotting .............................................................................................. 26

4.3.2. Hemograma .................................................................................................... 26

4.3.3. Anlise de secrees ...................................................................................... 27

4.3.3.1. Quantificao de eosinfilos ................................................................... 27

4.3.3.2. Exame microbiolgico de secrees ....................................................... 27

4.4. Alergologia molecular: uma nova era no diagnstico .......................................... 28

4.4.1. Diagnstico resolvido por componentes e tecnologia microarray ................ 28

4.4.1.1. Tecnologia microarray ImmunoCAP

ISAC ...................................... 29

5. Concluses e perspetivas futuras ................................................................................. 32

6. Referncias Bibliogrficas ........................................................................................... 34

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ndice de figuras

Figura 1 Fisiopatologia da reao alrgica ................................................................... 10

Figura 2 Fase de provocao com o alergnio ............................................................. 12

Figura 3 Comparao entre Immulite 2000 e ImmunoCAP

..................................... 16

Figura 4 FEIA (Thermo Scientific) .............................................................................. 17

Figura 5 Marcha atpica ............................................................................................... 20

Figura 6 Plataforma e esquema de hibridao do microarray ..................................... 30

Figura 7 Expresso semiquantitativa dos resultados do ISAC .................................. 30

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ndice de tabelas

Tabela 1 Patologias que cursam com IgE total elevada ............................................... 15

Tabela 2 Interpretao de valores de IgE especfica (ImmunoCAP) ......................... 18

Tabela 3 IgE especfica (kU/L) no soro em crianas com valor preditivo de reao

clnica superior a 95% .................................................................................................... 18

Tabela 4 Propriedades funcionais da ECP .................................................................... 24

Tabela 5 Vantagens e desvantagens de ISAC, ImmunoCAP

e testes cutneos ....... 31

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Resumo

Um diagnstico preciso da alergia pode ser completado por testes in vivo ou in vitro

depois da realizao de uma completa e clara histria clnica. O laboratrio de anlises

clnicas detm um papel importante no diagnstico e monitorizao do paciente

alrgico, sobretudo nas situaes em que os testes in vivo no podem ser realizados ou

so inconclusivos.

O exame laboratorial mais utilizado no diagnstico da alergia a determinao das IgE

especficas no soro e a sua determinao pode ser feita por singleplex

(monocomponentes) com a tecnologia ImmunoCAP ou, mais recentemente, por

multiplex, atravs da tecnologia ISAC (ImmunoCAP Solid-Phase Allergen Chip).

Alm desta, existem outras metodologias laboratoriais disponveis, como o teste de

ativao de basfilos com citometria de fluxo, realizado em laboratrios especializados;

a medio dos nveis de triptase, que podem confirmar ou excluir uma reao anafiltica

e a ECP no soro, que pode ser utilizada como indicador de ativao eosinoflica em

asmticos. Este trabalho pretende fazer uma reviso atualizada das metodologias

laboratoriais atualmente disponveis para o diagnstico da alergia.

Abstract

An accurate allergy diagnosis can be made by means of in vivo or in vitro tests, after

producing a thorough and comprehensive clinical history. Clinical laboratory is of

foremost importance for diagnosing and monitoring an allergic patient, especially when

in vivo tests cannot be conducted or are inconclusive.

The most widely used laboratory test for allergy diagnosis consists in measuring the

specific IgE in the serum. The test can be done either by singleplex technology or, more

recently, by multiplex, using ImmunoCAP Solid-Phase Allergen Chip technology.

Other laboratory methodologies can also be used, namely the basophil activation test

with cytometry flow, which is performed in specialized laboratories; the measuring of

the tryptase levels, which may confirm or rule out an anaphylactic reaction, and

the identification of ECP in the serum, which can serve as an indicator of eosinophilic

activation in patients suffering from asthma.

This study makes an updated review of laboratory methodologies currently used for

allergy diagnosis.

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Lista de Abreviaturas

AMP Adenosina mono-fosfato

APCs Clulas apresentadoras de antignios

BAT Teste de ativao de basfilos

Ca Clcio

CAST Celular allergosorbent test

CD Cluster of diferentiation (nomenclatura para antignios de membrana)

CRD Component Resolved Diagnosis

Da Daltons

EAACI European Academy of Allergy and Clinical Immunology

ECP Protena catinica eosinoflica

EDTA cido etilenodiamino tetra-actico

ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay

FAST Flow Cytometric Cellular Allergen Stimulation Test

FcRI Recetor de alta afinidade para IgE

FEIA Ensaio imuno-enzimtico fluorescente

gp glicoprotena

Ig Imunoglobulina

ISAC ImmunoCAP Solid-Phase Allergen Chip

ISU-E ISAC Standardized Units

sIgE Imunoglobulina do tipo E especfica

IL Interleucina

kU/mL Kilo unidades por mililitro

LAMP-3 Lysosyme associated membrane protein

LBA Lavado broncoalveolar

LT Leucotrieno

MHC Complexo major de histocompatibilidade

mm Milmetro

Ng/mL Nanogramas por mililitro

OMS Organizao Mundial de Sade

PAF Fator ativador de plaquetas

PD2 Prostaglandina D2

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RAST Radioalleergosorbent test

SPT Skin Prick test

Th1 Linfcito T helper do tipo 1

Th2 Linfcito T helper do tipo 2

TNF Fator de necrose tumoral

WAO World Allergy Organization

g/L Micrograma por litro

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1. Introduo

As reaes alrgicas atravessam importantes reas da medicina e atingem na sua

heterogeneidade diferentes rgos e sistemas, como a pele, as vias respiratrias e

digestivas [1]

. Esto associadas sensibilizao a alergnios do ambiente, como

alimentos, plenes, caros, fungos, insetos e medicamentos. As doenas alrgicas mais

importantes incluem a asma, rinoconjuntivite, anafilaxia, urticria, eczema e

angioedema, bem como alergias alimentares e a