MONOGRAFIA Carina Sofia Medeiros Pavão

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  • UNIVERSIDADE DE LISBOA

    FACULDADE DE FARMCIA

    MONOGRAFIA

    DIAGNSTICO DAS ALERGIAS: O PAPEL DO LABORATRIO DE

    ANLISES CLNICAS

    Orientao: Prof. Doutora Maria Cristina Marques

    MESTRADO EM ANLISES CLNICAS

    Carina Sofia Medeiros Pavo

    Lisboa, 2015

  • 2

    ndice

    Resumo/Abstract ............................................................................................................... 5

    Lista de abreviaturas .......................................................................................................... 6

    1. Introduo ...................................................................................................................... 8

    2. Hipersensibilidade, alergia e atopia ............................................................................... 9

    3. Fisiopatologia da alergia .............................................................................................. 10

    4. Diagnstico da alergia ................................................................................................. 13

    4.1. Determinao da IgE srica .................................................................................. 14

    4.1.1. IgE total .......................................................................................................... 14

    4.1.2. IgE especfica - RAST ................................................................................... 15

    4.1.2.1. ImmunoCAP Ensaio imunoenzimtico fluorescente ......................... 17

    4.1.2.2. Limitaes da metodologia RAST .......................................................... 19

    4.1.2.3. Marcha atpica e Painis de alergnios - Phadiatop

    ............................. 19

    4.2. Determinao de mediadores da resposta alrgica e de marcadores de

    ativao ....................................................................................................................... 21

    4.2.1. Ativao de basfilos por estimulao com alergnios ................................. 21

    4.2.1.1. Libertao de histamina e sulfidoleucotrienos ....................................... 21

    4.2.1.2. Marcadores de ativao e citometria de fluxo ........................................ 22

    4.2.2. Protena Catinica Eosinoflica (ECP) ........................................................... 23

    4.2.2.1. Teste ImmunoCAP ECP ....................................................................... 24

    4.2.3. Triptase ........................................................................................................... 25

    4.3. Outras metodologias laboratoriais ........................................................................ 26

    4.3.1. Immunoblotting .............................................................................................. 26

    4.3.2. Hemograma .................................................................................................... 26

    4.3.3. Anlise de secrees ...................................................................................... 27

    4.3.3.1. Quantificao de eosinfilos ................................................................... 27

    4.3.3.2. Exame microbiolgico de secrees ....................................................... 27

    4.4. Alergologia molecular: uma nova era no diagnstico .......................................... 28

    4.4.1. Diagnstico resolvido por componentes e tecnologia microarray ................ 28

    4.4.1.1. Tecnologia microarray ImmunoCAP

    ISAC ...................................... 29

    5. Concluses e perspetivas futuras ................................................................................. 32

    6. Referncias Bibliogrficas ........................................................................................... 34

  • 3

    ndice de figuras

    Figura 1 Fisiopatologia da reao alrgica ................................................................... 10

    Figura 2 Fase de provocao com o alergnio ............................................................. 12

    Figura 3 Comparao entre Immulite 2000 e ImmunoCAP

    ..................................... 16

    Figura 4 FEIA (Thermo Scientific) .............................................................................. 17

    Figura 5 Marcha atpica ............................................................................................... 20

    Figura 6 Plataforma e esquema de hibridao do microarray ..................................... 30

    Figura 7 Expresso semiquantitativa dos resultados do ISAC .................................. 30

  • 4

    ndice de tabelas

    Tabela 1 Patologias que cursam com IgE total elevada ............................................... 15

    Tabela 2 Interpretao de valores de IgE especfica (ImmunoCAP) ......................... 18

    Tabela 3 IgE especfica (kU/L) no soro em crianas com valor preditivo de reao

    clnica superior a 95% .................................................................................................... 18

    Tabela 4 Propriedades funcionais da ECP .................................................................... 24

    Tabela 5 Vantagens e desvantagens de ISAC, ImmunoCAP

    e testes cutneos ....... 31

  • 5

    Resumo

    Um diagnstico preciso da alergia pode ser completado por testes in vivo ou in vitro

    depois da realizao de uma completa e clara histria clnica. O laboratrio de anlises

    clnicas detm um papel importante no diagnstico e monitorizao do paciente

    alrgico, sobretudo nas situaes em que os testes in vivo no podem ser realizados ou

    so inconclusivos.

    O exame laboratorial mais utilizado no diagnstico da alergia a determinao das IgE

    especficas no soro e a sua determinao pode ser feita por singleplex

    (monocomponentes) com a tecnologia ImmunoCAP ou, mais recentemente, por

    multiplex, atravs da tecnologia ISAC (ImmunoCAP Solid-Phase Allergen Chip).

    Alm desta, existem outras metodologias laboratoriais disponveis, como o teste de

    ativao de basfilos com citometria de fluxo, realizado em laboratrios especializados;

    a medio dos nveis de triptase, que podem confirmar ou excluir uma reao anafiltica

    e a ECP no soro, que pode ser utilizada como indicador de ativao eosinoflica em

    asmticos. Este trabalho pretende fazer uma reviso atualizada das metodologias

    laboratoriais atualmente disponveis para o diagnstico da alergia.

    Abstract

    An accurate allergy diagnosis can be made by means of in vivo or in vitro tests, after

    producing a thorough and comprehensive clinical history. Clinical laboratory is of

    foremost importance for diagnosing and monitoring an allergic patient, especially when

    in vivo tests cannot be conducted or are inconclusive.

    The most widely used laboratory test for allergy diagnosis consists in measuring the

    specific IgE in the serum. The test can be done either by singleplex technology or, more

    recently, by multiplex, using ImmunoCAP Solid-Phase Allergen Chip technology.

    Other laboratory methodologies can also be used, namely the basophil activation test

    with cytometry flow, which is performed in specialized laboratories; the measuring of

    the tryptase levels, which may confirm or rule out an anaphylactic reaction, and

    the identification of ECP in the serum, which can serve as an indicator of eosinophilic

    activation in patients suffering from asthma.

    This study makes an updated review of laboratory methodologies currently used for

    allergy diagnosis.

  • 6

    Lista de Abreviaturas

    AMP Adenosina mono-fosfato

    APCs Clulas apresentadoras de antignios

    BAT Teste de ativao de basfilos

    Ca Clcio

    CAST Celular allergosorbent test

    CD Cluster of diferentiation (nomenclatura para antignios de membrana)

    CRD Component Resolved Diagnosis

    Da Daltons

    EAACI European Academy of Allergy and Clinical Immunology

    ECP Protena catinica eosinoflica

    EDTA cido etilenodiamino tetra-actico

    ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay

    FAST Flow Cytometric Cellular Allergen Stimulation Test

    FcRI Recetor de alta afinidade para IgE

    FEIA Ensaio imuno-enzimtico fluorescente

    gp glicoprotena

    Ig Imunoglobulina

    ISAC ImmunoCAP Solid-Phase Allergen Chip

    ISU-E ISAC Standardized Units

    sIgE Imunoglobulina do tipo E especfica

    IL Interleucina

    kU/mL Kilo unidades por mililitro

    LAMP-3 Lysosyme associated membrane protein

    LBA Lavado broncoalveolar

    LT Leucotrieno

    MHC Complexo major de histocompatibilidade

    mm Milmetro

    Ng/mL Nanogramas por mililitro

    OMS Organizao Mundial de Sade

    PAF Fator ativador de plaquetas

    PD2 Prostaglandina D2

  • 7

    RAST Radioalleergosorbent test

    SPT Skin Prick test

    Th1 Linfcito T helper do tipo 1

    Th2 Linfcito T helper do tipo 2

    TNF Fator de necrose tumoral

    WAO World Allergy Organization

    g/L Micrograma por litro

  • 8

    1. Introduo

    As reaes alrgicas atravessam importantes reas da medicina e atingem na sua

    heterogeneidade diferentes rgos e sistemas, como a pele, as vias respiratrias e

    digestivas [1]

    . Esto associadas sensibilizao a alergnios do ambiente, como

    alimentos, plenes, caros, fungos, insetos e medicamentos. As doenas alrgicas mais

    importantes incluem a asma, rinoconjuntivite, anafilaxia, urticria, eczema e

    angioedema, bem como alergias alimentares e a