MONOGRAFIA:

EFEITO DA OUABAÍNA NA EFEITO DA OUABAÍNA NA RECICLAGEM DE VESÍCULAS RECICLAGEM DE VESÍCULAS

SINÁPTICAS EM JUNÇÃO SINÁPTICAS EM JUNÇÃO NEUROMUSCULARNEUROMUSCULAR

Aluna: Luciana Ferreira Leite

Orientadora: Profª. Dra. Cristina Guatimosim Fonseca

Laboratório de Biologia da Neurotransmissão

JUNÇÃO NEUROMUSCULAR DE RÃ

http://academic.wsc.edu/faculty/jatodd1/351/ch6outline.html

Ca++

RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS

Abreu, B.J.

http://www.standford.edu/group/Urchin/GIFS/exocyt.gifhttp://thalamus.wustl.edu/nonetlab/ResearchF/svcycle.html

RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS

http://www.erin.utoronto.ca/~w3bio315/RME.htm

http://www.neuro.ki.se/molsyn/Brodin_home.html

RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS

RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS

Royle and Lagnado, 2003

+ Positivehead

Lypophilic tail

bridges

FM1-43 STAINING

Abreu, B.J.

FM1-43 STAINING

Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min

FM1-43 STAINING

Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min

FM1-43 DESTAINING

Abreu, B.J.

COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM

• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995)

COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM

• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995)

• Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996)

COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM

• OUABAOUABAÍNAÍNA (Adam-Vizi & Ligeti, 1984; Haimann et al, 1985; Prado et al, 1990; Prado et al, 1993; Lomeo et al, 2003).

• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995)

• Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996)

OBJETIVOS

Objetivo geralObjetivo geral

- Investigar o efeito da ouabaína na reciclagem de vesículas sinápticas “ in vivo”

Objetivos específicosObjetivos específicos

- Padronizar a técnica de marcação de terminais axônicos com a sonda fluorescente FM1-43.

- Investigar o efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas.

- Investigar o efeito da ouabaína na endocitose de vesículas sinápticas.

- Investigar se a ação da ouabaína é dependente de cálcio extracelular.

OBJETIVOS

RESULTADOS

Marcação e desmarcação dos terminais nervosos com estímulo elétrico

A

B

Desmarcação evocada por estímulo elétrico

Tempo (min)

0 2 4 6 8 10 12

Fluo

resc

ênci

a (%

)

40

60

80

100

120

C

1 terminação / 6 spots

RESULTADOS

Efeito da ouabaína na marcação de terminais nervosos

Estímulo elétrico Ouabaína

RESULTADOS

Efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas

Desmarcação evocada pela ouabaína

Tempo (min)

0 10 20 30 40 50 60 70

Flu

ore

scên

cia

(%)

40

60

80

100

120

Queda sem estímuloDesmarcação com 100 µMde ouabaína

34 spots 6 terminações

RESULTADOS

O efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas é dependente de cálcio extracelular?

Desmarcação com Ouabaína

Tempo (min)

0 10 20 30 40 50 60 70

Flu

ore

scên

cia

(%)

40

60

80

100

120

Desmarcação sem estímuloOuabaína em Ringer NormalOuabaína em 0Cálcio + EGTA(2mM)

68 spots 12 terminações

RESULTADOS

Efeitos da ouabaEfeitos da ouabaína:ína:

RESULTADOS

Efeitos da ouabaEfeitos da ouabaína:ína:

• Bloqueia a endocitose

RESULTADOS

Efeitos da ouabaEfeitos da ouabaína:ína:

• Bloqueia a endocitose

• Promove a exocitose

RESULTADOS

Efeitos da ouabaEfeitos da ouabaína:ína:

• Bloqueia a endocitose

• Promove a exocitose

• O efeito da ouabaína é independente de cálcio extracelular

PERSPECTIVAS...

AGRADECIMENTOS ...

OBRIGADA PELA

ATENÇÃO!