Morfometria Arteriolar Comparativa de Tendão Calcâneo de Ratos Normais e de Tendão Calcâneo de Ratos Após o Uso da

Crochetagem

Rodrigo M. Nascimento¹; Henrique Baumgarth¹; Luciano W. S. Lauria²; Roberta V. L. Nascimento² ; Severo de Paoli¹ ²

Curso de Fisioterapia¹ - Universidade Estácio de Sá - Rio de Janeiro

Curso de Farmácia² - Universidade Estácio de Sá - Rio de Janeiro

Resumo: a Crochetagem é uma técnica utilizada em fisioterapia; está indicada em qualquer afecção osteomioarticular que apresente uma fibrose ou formação de aderências. O presente estudo foi realizado com 10 ratos Wistar machos submetidos a uma raspagem no tendão calcâneo das patas posteriores direitas do grupo experimental e as demais patas neste grupo foram desprezadas, já no grupo controle nenhuma das patas foi submetida a tratamento algum, porém, as patas direitas posteriores serviram de controle comparativo com as patas posteriores direitas do grupo experimental. A pesquisa teve como objetivo principal à análise das possíveis alterações no diâmetro vascular após vinte segundos de fricções com o gancho de aço cirúrgico na junção osteotendínea. A Crochetagem foi aplicada uma vez ao dia, durante sete dias com um dia de intervalo e, após a aplicação, os ratos foram sacrificados após uma hora. Foi realizada análise comparativa em lâminas histológicas por meio da morfometria computadorizada, onde se observou que o diâmetro arteriolar da junção osteotendínea das patas tratadas aumentou. Ao contrário do que foi observado no diâmetro arteriolar da junção osteotendínea das patas direitas posteriores que não foram tratadas, onde o diâmetro vascular manteve-se inalterado.Concluiu-se que, a Crochetagem pode estimular uma hiperemia profunda. Sendo assim, o estudo contribuiu para mostrar efeitos vasculares satisfatórios, por esta técnica, visto a ocorrência da dilatação arteriolar nas patas tratadas.

Palavras-chaves: Diafibrólise percutânea, Hiperemia reativa, Inflamação induzida.

Abstract: The Crochetagem is one of them Physiotherapy technique, also known as diafibrólise percutânea, and it is indicated to bone and articulations diseases thiperemia ativat presents fibrosis or tacks, as well as in the pains. The present study it was carried through 10 male Wistar rats submitted to a scraping in the tendon of calcaneus on the right post treated group, where the Crochetagem technique was not submitted; already the control group, both the legs not been submitted too of the treatment, serving only of the comparative control group constituent control of the treated group. The research hiperemia ativad a principal objective the analysis of the possible alterations in the vascular diameter, after friction with the surgical steel hook in the bone-tendous-calcaneus junction. The Crochetagem was applied one time/day during seven days, with one day of interval and after application the actions on the rats it’s hiperemia ativad been sacrificed. It was carried through comparative analyzed by histological blades and through the morphometric software computer, where it’s observed in yours arteriolar diameters of the bone junction. In contrast, it was perceived in the arteriolar diameter of the posterior left right legs junction, hyiperemia ativad not been treated, where the vascular diameter was remained without alterations and when compared with the diameter to arteriolar control group, thiperemia ativat it’s hiperemia ativad been equivalent. It is concluded thiperemia ativat the Crochetagem can stimulate a deep hyperemia. So, the study contributes to satisfactory clarify about vascular effects, with the technique, through the date to arteriolar alteration in the treated legs.

Key-words: Diafibrólise percutânea, reactive hyperemia, Inflamation induzed.

INTRODUÇÃO

A Crochetagem mioaponeurótica é uma técnica manipulativa, desenvolvida

pelo fisioterapeuta sueco Kurt Eckman, colaborador do Dr. James Cyriax, à partir da

limitação palpatória das técnicas convencionais, também conhecida como

diafibrólise percutânea. Está indicada em qualquer afecção osteomioarticular que

apresente uma fibrose ou formação de aderências, assim como nas neuralgias.

Nestas, em especial nas ocasionadas por alterações miofasciais com indicação de

rupturas das aderências, onde a Crochetagem seja capaz de remover corpúsculos

irritativos após uma reação inflamatória nos tecidos conjuntivo e musculares

(ECKMAN,1968; GUISSARD, 2000; BAUMGARTH, 2005).

Esta técnica baseia-se na utilização de ganchos ou “crochets”, que são

princípios utilizados na quebra das aderências do sistema mio-esquelético, sendo

objetivo principal da Crochetagem é o rompimento de pontos de fibrose, geralmente

causados pelo acúmulo de cristais de oxalato de cálcio nos planos aponeuróticos,

causando irritação (BAUMGARTH, 2005).

O tema foi escolhido devido à boa resposta ao tratamento de humanos com a

utilização desta técnica, a qual é facilitada pelo transporte e manuseio do

instrumental, bem como pela simplicidade de sua execução e necessidade de pouco

tempo de aplicação.

O objetivo da pesquisa foi realizar uma análise comparativa das possíveis

alterações no diâmetro arteriolar após o uso da Crochetagem em tendões de ratos,

verificando se ocorre aumento vascular local.

MATERIAIS E MÉTODOS

A pesquisa é considerada direta (aquisição direta de dados à fonte

pesquisada) e indireta (utilização de informações sem conexão direta com a fonte),

com amostra de conveniência (TEIXEIRA, 2003).

A pesquisa foi realizada em um período de 4 meses , divididos em 7 dias de

aplicação do método crochetagem com um dia de intervalo somando 14 dias de

visitas. Os demais dias foram para processar e analisar o material colhido. Os

experimentos seguiram o protocolo éticodo Instituto de Biologia Roberto Alcântara

Gomes, número CEA115/2006, UERJ.

Foram utilizados 10 (dez) ratos machos adultos Wistar (Rattus norvegicus),

com aproximadamente 300 g de peso corporal, provenientes do Biotério do

Departamento de Fisiologia da Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro

(UNIRIO), criados e mantidos em condições convencionais, com temperatura

24oC±2oC sob ciclo de luz claro/escuro de 12 horas, alimentados com ração

balanceada para roedores de laboratório ( marca Purina e tipo Labiva ) e água foram

oferecidos ad libitum.

Experimento I - Foram utilizados 5 (cinco ) animais que não foram tratados pelo

método da Crochetagem e suas patas posteriores direitas serviram de controle,

para análise histológica e morfométrica.

Experimento II - Foram utilizados 5 (cinco ) animais que foram tratados pelo método

da Crochetagem durante 20 segundos, somente na pata posterior direita com

intervalo de 24 horas durante sete dia e as demais patas foram desprezadas em

ambos os grupos.Todos os animais foram anestesiados todos com injeção

intraperitoneal de ketamina (35mg/kg) e xilazina (4mg/kg) e, em seguida, as patas

posteriores direitas do grupo experimental foram tracionadas levemente e os

tendões do calcâneo posicionados para aplicação do método Crochetagem

realizando fricções no ponto de inserção desse tendão no osso calcâneo com a

utilização de uma gancho de aço inoxidável com 13,3 cm de comprimento, 0,3 cm de

espessura e 14,550 g de peso, com duração de vinte segundos de aplicação (Figura

1).

Figura 1 - Gancho, (BAUMGARTH, 2004)

No sétimo dia de aplicação da crochetagem os animais componentes do grupo

experimental foram anestesiados e tratados com a técnica da Crochetagem; em

seguida, os animais dos grupos controle também foram anestesiados e todos os

animais de ambos os grupos foram sacrificados através do deslocamento cervical.

As patas posteriores direitas dos animais dos grupos experimental e controle foram

coletadas através de cortes na altura do joelho. Foram pesadas e foi realizada uma

tricotomia, dissecadas com o objetivo da obtenção do tendão calcâneo na junção

osteotendínea. Os tendões do calcâneo foram separados em 4 recipientes (A -

Experimental pata direita; B - Controle pata direita).

O modo de coleta de dados utilizou corte longitudinal por um período de 14

dias, em uma amostra de 10 animais (N=10), período este adequado na observação

de uma amostra de população deste tipo. A amostra foi dividida em grupo

experimental (n=5) e grupo controle (n=5) com desenvolvimento de certa variação

fisiológica (VIEIRA E HOSSNE, 2001; MARCONI E LAKATOS, 2001).

O tendão calcâneo foi a parte corpórea escolhida nesta pesquisa pó

apresentar lesões relativamente freqüente provocada por traumas e injúrias

medicamentosas e estresses mecânicos posturais (JÓZSA,1997).

Processamento do Material para Microscopia de Luz.

1) Os fragmentos de tecido com uma espessura inferior 5 mm foi fixado em Formol

a 4% por 72 horas.

2) Os fragmentos de tecido foram descalcificados em uma solução na qual o

volume era 100 vezes maior que os dos fragmentos , trocando-se de líquido

diariamente, até que o tecido ficasse praticamente desmineralizado (geralmente 25 a

30 dias). O tempo é determinado transpassando o tecido com um alfinete. Quando

não houver resistência está no ponto de poder ser cortado.

O Descalcificador utilizado foi: EDTA – 10g; Ácido nítrico -10 ml; Aldeído fórmico (37

– 40 %) - 10ml; Água Destilada - 80ml.

3) Os fragmentos de tecido foram tratados com uma solução de Sulfato de sódio

tamponado 5% em pH 7,4 por 24 horas.

4) Desidratados em álcool 80% e absoluto;

5)Foram colocados em Xilol até a diafanização;

6) Logo após, os fragmentos foram clivados, processados rotineiramente e incluídos

em parafina. Esse tempo deve ser controlado até completa penetração da parafina.

7) Cortados na espessura de 5 a 6 µm com auxílio do micrótomo (AMERICAN

OPTICAL modelo Spencer 820);

8) Monta-se e cora-se de maneira usual.

O Tricrômico de gomori foi técnica de rotina utilizada para coloração, cuja

principal característica é destacar o componente colágeno (corado em verde). O

citoplasma de algumas células encontradas no tecido intersticial (como macrófagos

e leucócitos polimorfonucleares) pode se corar em vermelho devido ao chromotrop

2R, presente na solução (BEHMER; 1976).

Para a obtenção dos dados morfométricos a análise baseou-se nas imagens

coradas, capturadas pelo sistema de videomicroscopia composto de microscópio

Olympus BX40 (Olympus, Japão) e câmera digital Optronics (Optronics, USA), do

departamento de fisiologia, do Instituto de Biologia Roberto Alcântara Gomes, UERJ.

Três campos da cada espécime, contendo artérias de diversos calibres, foram

digitalizados com aumento aproximado de 400x. Foram medidas a área da luz e a

área da luz acrescida da túnica média, de cada vaso, com o auxílio do software

Image Pro Plus (Media Cybernetics, USA). A área da parede dos vasos foi deduzida

pela subtração da área da luz do vaso, da área contendo a luz do vaso e sua túnica

média. Para relativizar as medidas, tornando possível a comparação entre vasos de

diferentes tamanhos, incluídos e cortados em diferentes ângulos, foram usadas as

medidas resultantes da razão entre a área da parede do vaso pela área da sua luz.

(Figura 2).

Fig.2- corte histológico de tendão do rato controle na qual foi demarcado a superfície dos vasos.Cada imagem obtida foi representada pela média destas medidas, para aplicação do método de análise estatística.

Este procedimento se justifica por relativizar as medidas, tornando possível a

comparação entre vasos de diferentes tamanhos, incluídos e cortados em diferentes

ângulos, usando a medida resultante da razão entre a área da parede do vaso pela

área da sua luz.

Para testar a significância das diferenças entre o grupo controle e

experimental, foi usado o teste de Mann-Whitney, disponível no software Prism

(GraphPad Inc., USA).

RESULTADOS

As imagens do grupo controle mostraram tendões calcâneos de aspecto

regular, com tecido conjuntivo denso próximo ao osso e mais frouxo nas

proximidades dos vasos sangüíneos. Feixes de fibras colágenas se inserem no osso

de um lado e sustentam uma rede de vasos sangüíneos. Numerosos fibroblastos,

com núcleos fusiformes,são observados entre as fibras dos feixes colágenos (figura

3).

Fig.3 - microfotografia de rato controle mostrando osso (em vermelho), fibras colágenas (em verde), diversos vasos sangüíneos e algumas células encontradas no tecido intersticial (como fibroblastos, macrófagos e leucócitos polimorfonucleares (em vermelho). Coloração: Tricrômico de GOMORI 400x.

As imagens do grupo experimental mostraram uma disposição diferente nos

tendões calcâneos, com tecido conjuntivo denso próximo ao osso mais irregular em

relação ao grupo controle e mais denso nas proximidades dos vasos sangüíneos, os

quais apresentam paredes mais espessadas. Numerosos fibroblastos com núcleos

fusiformes são observados entre as fibras dos feixes colágenos (figura 4).

Figura 4 - microfotografia de rato do grupo experimental mostrando osso (em vermelho), fibras colágenas (em verde), vasos sangüíneos com suas paredes espessadas e alguns fibroblastos, em vermelho; coloração Tricrômico de GOMORI 400x.

Os valores obtidos da morfometria de vasos sangüíneos realizadas nosOs valores obtidos da morfometria de vasos sangüíneos realizadas nos

animais do grupo experimental apresentaram alterações significativas naanimais do grupo experimental apresentaram alterações significativas na

morfometria de vasos sangüíneos em relação animais do grupo controle, conforme émorfometria de vasos sangüíneos em relação animais do grupo controle, conforme é

mostrado na tabela 1.mostrado na tabela 1.

tabela 1 – valores morfométricos

Features Area Length

Area

Parede

AP/Luz do

vaso

Media

AP/Luz

control1 gomori 40x Luz 276,18 76,35 401,94 1,455 1,996

control 2 gomori 40x Luz 10692,14 515,23 842,76 0,079 1,395

control 3 gomori 40x Luz 653,46 97,47 1025,21 1,569 1,894

control 4 gomori 40x Luz 73,68 40,16 171,745 2,331 1,650

control 5 gomori 40x Luz 95,29 46,88 250,139 2,625 2,275

tratado 1 gomori 40x Luz 578,39 99,02 1345,430 2,326 2,330

tratado 2 gomori 40x Luz 510,25 107,87 1808,311 3,544 3,234

tratado 3 gomori 40x Luz 3296,12 493,87 7530,468 2,285 4,143

tratado 4 gomori 40x Luz 429,64 94,13 1049,030 2,442 2,442

tratado 5 gomori 40x Luz 34,90 27,06 162,050 4,643 7,383

Para mensurar isoladamente alterações no diâmetro dos vasos sanguíneos e

linfáticos, utiliza-se um recurso conhecido como morfometria, através de objetivas

micrometradas (microscopia de luz) e associadas aos softwares de informática

específicos para este fim. Utilizando princípios matemáticos já estabelecidos, a

partir de valores de dimensões lineares, estes programas levam às possíveis

resultados seguros (p<0,05) de diâmetros de vasos, superfícies, volumes das mais

diversas estruturas celulares e teciduais, permitindo determinar com boa precisão os

valores intrínsecos em duas ou três dimensões (BOGLIOLO, 2006).

Cada espécime foi representado pela média destas medidas, para fins de

análise estatística. Testadas as diferenças entre grupo controle e tratado com o teste

de Mann-Whitney (software Prism – Graphiperemia passivaad Inc.USA), escolhido

por se tratar-se de um teste adequado para comparação entre grupos de amostra

pequena (n<10) e um intervalo de confiança de 95%, normalmente aceito em

Ciências Médicas, em análises com animais. Consideram-se grupos com valores

diferentes de p<0,05 (nível de significância; ANOVA). Nestes experimentos o valor

de p<0.007, extremamente significativo, com desvio padrão na amostra sem

conseqüências (fig.6 e 7 ).

Fig.7

Fig.6

Controle tratado

N 5 5

Média 1,842 3,906

Erro Padrão 0,1501 0,928

Mann-Whitney (P) 0,0079Controle Tratado

0

1

2

3

4

5

área

par

ede

/ áre

a lu

z(µ

m2 /µ

m2 )

DISCUSSÃO

Analisando os resultados encontrados, chama-se a atenção para o

espessamento da parede vascular do grupo experimental em relação aos controles,

com valores matematicamente satisfatórios, confirmando a hipótese de hiperemia

profunda.

Importante destacar a organização das fibras colágenas dos tendões tratados

em relação aos do controle. Esses aspectos permitem a possibilidade de efeitos

simultâneos entre sistema circulatório e ações mecânicas da Crochetagem

(ECKMAN, 1968; GUISSARD, 2000; BAUMGARTH, 2005).

Embora o método seja ratificado por procedimentos de Cyriax (2001), com o

uso da massagem transversa profunda conceituada em vasodilatação profunda por

ações mecânicas, há a liberação de histamina produzida por terminais nervosos

livres (TNL – substância “P”) que levam à vasodilatação, com maior aporte

sanguíneo na região.

Ainda muito discutido esse aporte sanguíneo, segundo o mesmo autor há

uma hiperemia profunda quando realiza-se fricções locais em tecido conjuntivo

propriamente dito, anexo aos demais tecidos.

O meio pelo qual um órgão regula seu fluxo sanguíneo local não é de todo

conhecido, havendo muitas discussões à respeito. Fato é que existe uma conexão

entre a necessidade de oxigênio e este fluxo (GUYTON, 1998).

Em todos os tipos de hiperemia a micro circulação tem um papel importante e

a vaso regulação está vinculada às túnicas íntima, média, adventícia, sangue e

estroma circundante aos vasos (CONTRAN, 2004; RUBIM, 2006).

Henk (1986), afirma que, o fluxo sanguíneo na microcirculação aumenta

quando submetido aos movimentos de fricções locais.

Outra consideração é a de que a pouca vascularização nos tendões e a alta

sensibilidade reflexa adaptativa da musculatura lisa, leva ao aumento do calibre dos

vasos (MONTENEGRO, 1999; GARTNER, 2003;JUNQUEIRA E CARNEIRO,2004).

Assim, a pressão contínua da Crochetagem sobre tendões e ligamentos

poderá levar a efeitos semelhantes a os descritos anteriormente. Os dados obtidos e

a análise estatística apresentam conclusões cabíveis à hipótese substantiva gerada

inicialmente; ou seja, há uma relação direta entre o uso da Crochetagem e a

hiperemia dos tecidos.

CONCLUSÃO

Os resultados apresentados nesta pesquisa experimental quali-quantitativa

confirmam a hipótese substantiva de que a Crochetagem é uma técnica capaz de

produzir melhor aporte sanguíneo à região tratada, permitindo uma recuperação

mais adequada e mais rápida do que a fisiologia natural do indivíduo.

Sugerimos continuidade nos estudos para dimensionamento de calibre dos

vasos e outras conseqüências de revascularização, bem como outros possíveis

efeitos. Técnicas de imuno-marcação, entre outras, são indicativas de possíveis

hiperemia ativados.

REFERÊNCIAS

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