No caso da espécie humana, para quê?

Em 2005 o brasileiro José Luiz Vali, 41 anos, foi submetido a um tratamento pioneiro que lhe rendeu excelente recuperação de tecido cardíaco lesado por um infarto.

Pluripotentes

Clonagem terapêutica

Células-tronco totipotentes

Depois da fertilização, a célula-ovo começa a se dividir. Até o estágio de oito células, cada uma delas é chamada de célula-tronco totipotente. Qualquer uma dessas células, se for inserida em um útero, tem potencial de formar um ser completo.

Células-tronco pluripotentesCom a continuidade da embriogênese, forma-se o blastocisto. As células externas já estão programadas para formar a placenta e os anexos, enquanto a massa interna vai formar os diferentes tecidos do corpo. As células que formam a massa interna, são chamadas células-tronco pluripotentes. Assim, não conseguem formar um ser completo.

Massa celular externa

Massa celular interna

Blastocisto de 5 ~ 6 dias

Clonagem Molecular de DNA

•O sistema de clonagem molecular se dá a partir da estruturação de um DNA recombinante, que se replica quando é colocado em uma célula bacteriana.•Para a técnica da clonagem molecular é de fundamental importância a utilização das enzimas de restrição, também chamadas de “tesouras” moleculares.

Enzima de restrição

Enzima de restrição

Extremidades livres

Clonagem Molecular de DNA

•O sistema de clonagem molecular se dá a partir da estruturação de um DNA recombinante, que se replica quando é colocado em uma célula bacteriana.•Para a técnica da clonagem molecular é de fundamental importância a utilização das enzimas de restrição, também chamadas de “tesouras” moleculares.

Clonagem Molecular de DNA

Clonagem Molecular de DNA

•O sistema de clonagem molecular se dá a partir da estruturação de um DNA recombinante, que se replica quando é colocado em uma célula bacteriana.•Para a técnica da clonagem molecular é de fundamental importância a utilização das enzimas de restrição, também chamadas de “tesouras” moleculares.

•Os pontos de clivagem (ou sítios de restrição) variam de acordo com a enzima utilizada.

Clonagem Molecular de DNA

•O sistema de clonagem molecular se dá a partir da estruturação de um DNA recombinante, que se replica quando é colocado em uma célula bacteriana.•Para a técnica da clonagem molecular é de fundamental importância a utilização das enzimas de restrição, também chamadas de “tesouras” moleculares.

•Os pontos de clivagem (ou sítios de restrição) variam de acordo com a enzima utilizada.

Clonagem Molecular de DNA

•O sistema de clonagem molecular se dá a partir da estruturação de um DNA recombinante, que se replica quando é colocado em uma célula bacteriana.•Para a técnica da clonagem molecular é de fundamental importância a utilização das enzimas de restrição, também chamadas de “tesouras” moleculares.

Ficou claro o mecanismo de ação das Enzimas de Restrição?

http://www.youtube.com/watch?v=-sI5vy-cD2g&mode=related&search=

Clonagem Molecular de DNA

•Uma vez produzidos os fragmentos de restrição, pode-se realizar a clonagem molecular.

Clonagem Molecular de DNA

Clonagem Molecular de DNACélula bacteriana

Células eucarióticas doadoras

ruptura e isolamento dos plasmídeos

extração do DNA nuclear

tratamento com enzima de restrição

DNA ligase conecta DNA doado ao plasmídio

gene da célula doadora

DNA recombinante

Acrescenta à cultura de células bacterianas

As bactérias incorporam o plasmídio recombinante que

será replicado à medida que as células se duplicarem.

http://www.youtube.com/watch?v=MMAYhXH1PBw

Clonagem Molecular de DNA

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.

Por enzimas de restrição

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.

DNA fragmentado por enzimas de

restrição

eletrodo negativo

eletrodo positivo

gel tempo decorrido

Fragmento (ou banda) de DNA

maior

Fragmento (ou banda) de DNA

menor

http://www.youtube.com/watch?v=CpnPLk5b2fU

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.

Amostras de DNA + enzimas de restrição “Pocinho”

gel

Cada amostra é colocada num pocinho e se desloca no gel sob ação da corrente elétrica.

Resultado

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.•Aplicação: teste de paternidade, perícia criminal, diagnósticos de doenças, etc.

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.•Aplicação: teste de paternidade, perícia criminal, diagnósticos de doenças, etc.

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.•Aplicação: teste de paternidade, perícia criminal, diagnósticos de doenças, etc.

Exemplo de aplicação de eletroforese na identificação

de um criminoso

Técnica de Eletroforese em gel

•Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa.•Aplicação: teste de paternidade, perícia criminal, diagnósticos de doenças, etc.

Exemplo de aplicação de eletroforese na identificação

de um criminoso

GENE

GENE

Padrão em pares de

bases (pb)

200

170

140

110

20

80

50

Fragmento de Restrição com

125 pb

AmostraHomozigoto

Gel de Eletroforese

Pólo (-)

Pólo (+)

GENE

Padrão em pares de

bases (pb)

200

170

140

110

20

80

50

Fragmento de Restrição com

180 pb

AmostraHomozigoto

AmostraHeterozigoto

Gel de EletroforesePólo (+)

Pólo (-)

Padrão em pares de

bases (pb)

200

170

140

110

20

80

50

Fragmento de Restrição com

180 pb

AmostraHomozigoto

AmostraHomozigoto

Afetado

Gel de EletroforesePólo (+)

Pólo (-)

GENE