O composto E6446 poderia proteger animais de desenvolver malaria cerebral e também alterar o perfil de citocinas?

O composto E6446 aumenta sobrevivência dos animais infectados com malaria.

Sobrevivência

12E6446 (120mg/Kg)

1

iRBC (P. berghei ANKA)

- Citocinas no soro (ELISA)- Parasitemia Sangue

Baço Cultivo com LPS ou CpG - Citocinas no sobrenadante (ELISA)

E6446 (120mg/Kg) - via oral 6p

iRBC (P. berghei ANKA)

infecção

Análise da produção de citocinas pelas DC (citometria)

Qual o efeito do E6446 nas células dendríticas de camundongos infectados com P. berghei?

A infecção pelo Plasmodium aumenta a produção de TNF- e o tratamento com E6446 pode reduzir esta citocina produzidas pelas DC.

Extração do baçoe obtenção celular

Células dendríticas

Qual o efeito do E6446 em animais com malaria cerebral estabelecida?

E6446 é eficiente no estágio inicial da malaria cerebral.

E6446 (120mg/Kg) ou água - via oral

3 5 7

iRBC (P.berghei ANKA)

12

– Sobrevivência

Os efeitos promovidos pelo E6446 estão realmente relacionados com os receptores Toll-like endossomais?

Mutação UNC93B1

Camundongos 3d

Akira, S. Takeushi, O. 2010.

Os efeitos promovidos pelo E6446 estão realmente relacionados com os receptores Toll-like endossomais?

Mutação UNC93B1

Camundongos 3diRBC (P. berghei ANKA)

Perfil de citocinas (Citometria)SobrevivênciaParasitemia

Os camundongos deficientes na resposta para TLR3, 7 e 9 apresentaram resultados semelhantes aos obtidos por animais infectados e tratados com E6446.

O tratamento de camundongos com E6446 pode atenuar os sintomas da malária cerebral?

Análise cerebral

12

E6446 (120mg/Kg) ou água - via oral

iRBC (P.berghei ANKA)

Score clínicoTempo de infecção

12d

7d

200l A.evans (1%) Morte e retirada do cérebro1h depois

O tratamento com E6446 de camundongos infectados com malaria significativamente diminuiu os focos de derrame cerebral.

Desequilibrio - 6Paralisia - 8Coma,convulsão e morte - 10

O composto E6446

Não altera a parasitemia nos animais;

Inibe a ativação de TLR endossomais (7 e 9);

Reduz a responsividade dos TLRs ativados em animais com malaria;

Reduz a produção de citocinas tais como IFN-γ, TNF-α, IL-6;

Aumenta a sobrevida de camundongos infectados com malaria;

Atenua os sintomas de malaria cerebral.

Conclusão...

O E6446 atua como antagonista de TLR sensíveis a ácidos nucleicos (endossomais) e

pode ser uma alternativa para prevenção de malaria cerebral.

Pressão seletiva:

Proteção contra Malária Grave x Efeitos deletérios

• Polimorfismo FCγRIIB Deficiência + Comum em Africanos, relacionado com LES em descendentes fora da Africa;

• Willcocks et al. (2010) – Crianças africanas que possuíam proteção contra malária grave, possuíam alguma perda de função nesse receptor

Será que a susceptibilidade ao LES está relacionada à proteção frente às formas graves da Malária?

Camundongos com predisposição ao LES são

protegidos contra a forma cerebral de Malária?

WT ouFCγRIIB -/- .Yaa

I.P. 1x106

P. berghei

% Sobrevivência, Parasitemia

Camundongos com predisposição ao LES são

protegidos contra a forma cerebral de Malária?

WT Brain Pathology

Kidney Inflammation

Peso órgão, Score Clinico

WT ouFCγRIIB -/- .Yaa

I.P. 1x106

P. berghei

Os animais propensos ao LES sobrevivem por mais tempo, resistem à parasitemias maiores e não apresentam sinais de edema cerebral

Brain

Camundongos com predisposição ao LES também são

protegidos contra a forma não cerebral de Malária?

I.P. 1x104

P. yoelii

% Sobrevivência, Parasitemia

WT ouFCγRIIB -/- .Yaa

Camundongos propensos ao LES não são protegidos no caso de malária grave não cerebral

O aumento da expressão de TLR7 ou a deficiencia de FCγRIIB

protegem contra a forma cerebral de Malária de forma independente?

Brain microhemorrhagies

WT, TLR7.tg ouFCγRIIB -/-

I.P. 1x106

P. berghei

% Sobrevivência, Parasitemia, Score Clínico

Ambos os camundongos TLR7.tg e FCγRIIB-/-

demonstram proteção contra as formas graves de malária

Qual é o perfil de produção de citocinas nos

camundongos propensos ao LES?

WT ouFCγRIIB -/- .Yaa

Citocinas (soro) ELISA

I.P. 1x106

P. berghei

9, 9, 10, 10, 11, 20, 25, 50, 200

10

50

100

200 o

10

50

150

300

o

10, 100, 150, 160, 160, 200, 220, 250, 300

172

Qual é o perfil de produção de citocinas nos

camundongos propensos ao LES?

WT ouFCγRIIB -/- .Yaa

Citocinas (soro) ELISA

I.P. 1x106

P. berghei

A proteção dos animais propensos ao LES provavelmente se deve aos níveis elevados de IL-10

antes, e os baixos níveis de citocinas inflamatórias após a infecção

Qual o padrão celular no baço dos animais propensos ao LES?

Quantificação de célulasCitometria

7 dias

WT ouFCγRIIB -/- .Yaa

I.P. 1x106

P. berghei

Germinal center B cells

Plama cells

Activated B Cells

Activated Helper T Cells

Inducible Costimulator

Activated T Cells

Activated Cytotoxic T Cells

Macrophages, DC

CD4+ ICOS High

↑ IL-2, IL-3 e IFN-γ

Características de infecção crônica controlada antes da infecção, presença de células Foxp3+

após, deve conferir resposta controlada

Qual o padrão de resposta no cérebro dos animais infectados?

WT ouFCγRIIB -/- .Yaa

I.P. 1x106

P. berghei

Quantificação de células(Citometria),

Real Time PCR

7 dias

IL-10,IFN-γ,IL-6,IL-12

MØ

M2 MØAltos níveis de

Arginase

IL-10

IL-12TNF

Conclusão

Terapias e vacinas

LES, Hb-S

+