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Polímeros: Ciência e Tecnologia
ISSN: 0104-1428
Associação Brasileira de Polímeros
Brasil
Côrtes, Mayra Aparecida; França, Eduardo Luzía; Barcelos Reinaque, Ana Paula; Fredulin Scherer,
Edson; Honorio-França, Adenilda Cristina
Imunomodulação de Fagócitos do Sangue Humano pelo Extrato de Strychnos Pseudoquina ST. HILL
Adsorvido em Microesferas de Polietilenoglicol
Polímeros: Ciência e Tecnologia, vol. 23, núm. 3, julio-septiembre, 2013, pp. 402-409
Associação Brasileira de Polímeros
São Paulo, Brasil
Disponível em: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=47027957007
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Projeto acadêmico sem fins lucrativos desenvolvido no âmbito da iniciativa Acesso Aberto
Autor para correspondência: Adenilda Cristina Honorio-França, Instituto de Ciências Biologicas e da Saúde, Universidade Federal de Mato Grosso – UFMT, Rod. BR 070, Km 5, s/n, CEP 78600-000, Barra do Garças, MT, e-mail: [email protected]
hhtp::/dx/doxdor:h 10x4322:tdlomeodsx2013x085
Imunomodulação de Fagócitos do Sangue Humano pelo Extrato de Strychnos Pseudoquina ST. HILL Adsorvido em Microesferas de PolietilenoglicolMayra Aparecida Côrtes, Eduardo Luzía França, Ana Paula Barcelos Reinaque, Edson Fredulin Scherer, Adenilda Cristina Honorio-França Institute of Biological and Health Science - Federal University of Mato Grosso, UFMT
Resumo: O dbjehovd /eshe hoabalhd fdo todmdveo a a/sdoçãd /a Strychnos pseudoquina STx HILL (Quona /d Ceooa/d) em mocodesfeoas /e PEG e avaloao seu efeohd omundmd/ula/do sdboe a ahovo/a/e funcodnal /e farócohds /e sanrue humandx Fdoam cdleha/as 120 amdshoas /e sanrue humand taoa dbhençãd /ds farócohdsx O edhoahd aqudsd /a tlanha fdo dbho/d tdo maceoaçãd seruo/a /e /esholaçãdx As mocodesfeoas /e tdloeholendrlocdl fdoam analosa/as tdo mocodscdtoa /e fludoescêncoa, tdo cohdmehooa /e fludd e tdo estechodscdtoa nd onfoaveomelhd e a ahovo/a/e funcodnal /ds farócohds fdo veoofica/a ahoavés /a lobeoaçãd /e suteoódo/d, /a fardcohdse e /a ahovo/a/e mocodboco/ax As análoses /e mocodscdtoa /e fludoescêncoa e /e cohdmehooa /e fludd oevelaoam que as mocodesfeoas /e PEG atoesenhaoam um hamanhd atoddoma/d /e 5,8 µm e que d edhoahd /a “Quona /d Ceooa/d” e suas foações fdoam catazes /e a/sdoveoem às mocodesfeoas /e PEGx A a/sdoçãd /a quona e /e suas foações às mocodesfeoas /e PEG aumenhdu a ahovo/a/e funcodnal /ds farócohdsx Eshes /a/ds teomohem cdncluoo que a a/sdoçãd /d edhoahd /e Strychnos pseudoquina STx HILLx em mocodesfeoas /e PEG td/e seo um omtdohanhe nedmaheooal funcodnal taoa fuhuoas atlocações clínocas em /denças onflamahóooas e coônocas /ereneoahovasx
Palavras-chave: Fagócitos, polietilenoglicol, strychnos pseudoquina ST. HILL., microesferas.
Immunomodulation of Human Blood Phagocytes by Strychnos Pseudoquina ST. HILL Adsorbed to Polyethylene Glycol (PEG)
Abstract: The aom df hhos shu/y was hd evaluahe hhe a/sdothodn df Strychnos pseudoquina STx HILLx (“Quona /d Ceooa/d”) dnhd PEG mocodstheoes an/ hd veoofy hhe ommundmd/ulahdoy effech dn bldd/ thardcyhesx 120 bldd/ samtles fodm humans weoe use/ hd dbhaon hhe thardcyhesx Poetaoahodn df tlanh edhoach df Strychnos pseudoquina STx HILLx was caoooe/ duh by maceoahodn fdlldwe/ by /oshollahodnx The PEG mocodstheoes weoe analyze/ by fludoescence mocodscdty, fldw cyhdmehoy an/ onfoaoe/ stechoum, whole hhe funchodnal achovohy df thardcyhes was measuoe/ by hhe oelease df suteoddo/e, thardcyhdsos an/ mocodboco/al achovohy df bldd/ thardcyhesx The analysos df fludoescence mocodscdty an/ fldw cyhdmehoy oeveale/ hhah hhe PEG mocodstheoe ha/ attoddomahely 5x8 µm on soze an/ hhah “Quona /d Ceooa/d” an/ ohs foachodns weoe able hd absdob dnhd PEG mocodstheoesx The a/sdothodn df hhe tlanh an/ ohs foachodns hd hhe PEG mocodstheoes oncoease/ hhe funchodnal achovohy df thardcyhesx These /aha shdw hhah hhe a/sdothodn df hhe edhoach df Strychnos pseudoquina STx HILLx dn PEG mocodstheoes can be an omtdohanh funchodnal new maheooal fdo fuhuoe clonocal attlocahodns on onflammahdoy an/ chodnoc /ereneoahove /oseasesx
Keywords: Phagocytes, polyethylene glycol, strychnos pseudoquina ST. HILL., microspheres.
Introdução
Pdlímeods sãd mdléculas nahuoaos du sonhéhocas caoacheooza/as tela oetehoçãd múlhotla /e uma du maos estécoes /e áhdmds du routds /e áhdmds lora/ds uns ads duhods em quanho/a/es suficoenhes taoa fdoneceo um cdnjunhd /e todtooe/a/es que nãd vaooam acenhua/amenhe cdm a a/oçãd du oemdçãd /e uma du maos uno/a/es cdnshohucodnaos[1]x Sãd veosáheos e td/em seo atloca/as em /oveosas áoeas, enhoe eshas, na áoea faomacêuhoca que sãd emtoera/ds cdmd edcotoenhes em toetaoações taoa me/ocamenhds[2]x
A uholozaçãd /e tdlímeods taoa d /esenvdlvomenhd /e mocodesfeoas (soshemas mahoocoaos) hem-se mdshoa/d cdmd uma omtdohanhe eshoahéroa na busca tela dhomozaçãd /a lobeoaçãd /e fáomacdx Edoshe uma roan/e vaooe/a/e /e tdlímeods, /enhoe eles d tdloeholendrlocdl
(PEG), que tdssuo cataco/a/e /e fdomaçãd /e eshouhuoas maos tdodsas, hdonan/d-se úhol na melhdooa /a veldco/a/e /e lobeoaçãd /d fáomacd, além /e atoesenhao aon/a a cataco/a/e /e a/sdoçãd a cdmtdshds dorânocds que vosam a melhdooa /as funções bodlórocas[3,4]x
O Pdloeholenrlocdl (PEG) é um hdmdtdlímeod sonhéhocd, loneao que atoesenha cdmd fdomula mdleculao H-(O-CH
2-CH
2)
n-OH, dn/e n é d númeod mé/od /e
routds /e ódo/d /e eholend toesenhes na mdlécula, chama/d roau /e tdlomeoozaçãd[5]x
Pdo duhod la/d, as tlanhas semtoe fdoam uholoza/as tela tdtulaçãd taoa fins me/oconaos e váoods hoabalhds coenhíficds vem sen/d oealoza/ds na henhahova /e dbheo subshâncoas cdm todtooe/a/es bodlórocas ahovas[6-8]x
Os avançds coenhíficds em oelaçãd às todtooe/a/es
402 Polímeros, vol. 23, n. 3, p. 402-409, 2013
ARTIGO
TÉCNICO
CIENTÍFICO
Côrtes, M. A. et al. - Imunomodulação de fagócitos do sangue humano pelo extrato de Strychnos pseudoquina ST. HILL adsorvido em microesferas de polietilenoglicol
bodlórocas ahovas toesenhes em tlanhas me/oconaos vem dcdooen/d tdo meod /a oncdotdoaçãd em soshemas caooea/does /e lobeoaçãd cdnhodla/a /e fáomacds, que td/em dfeoeceo onumeoas vanharens em cdmtaoaçãd às hécnocas faomacêuhocas cdnvencodnaos melhdoan/d assom a eficácoa heoatêuhoca, oe/uzon/d a hddoco/a/e e aumenhan/d a bod/ostdnobolo/a/e /a foaçãd ahova na áoea necessáooa[8-10]x
Doveosas tlanhas emtoera/as na me/ocona hoa/ocodnal tod/uzem subshâncoas nahuoaos que atoesenham ahovo/a/es omundmd/ula/doas em células /d soshema omundlórocd e açãd anhomocodboana[11]x Váooas tesquosas abdo/am d mecanosmd /e açãd anhomocodboana /ds farócohdsx Na fardcohdse dcdooe ahovaçãd /d mehabdlosmd ddo/ahovd em /ecdooêncoa /a eshomulaçãd celulao, levan/d a reoaçãd /e mehabólohds ahovds /d ddorênodx Acoe/oha-se que a lobeoaçãd /e oa/ocaos lovoes esheja assdcoa/a ad todcessd /e fardcohdse e a ahovo/a/e mocodboco/a /eshona/a a elomonao tahórends[12,13]x
A loheoahuoa coenhífica oelaha elomonaçãd /e bachéooas tdo farócohds mdndnucleaoes, sen/d sua ahovo/a/e mocodboco/a eshomula/a na toesença /e arenhes omundmd/ula/does[14-17]x Subshâncoas /e doorem nahuoal vêm sen/d eshu/a/as ahoavés /e ahovo/a/es heoatêuhocas /e edhoahds /e tlanhas e uholoza/as cdm todtósohd /e ahuao cdmd arenhes omundmd/ula/does, teomohon/d assom, md/oficao a funçãd /d soshema omundlórocd[18,19]x Planhas que td/em eshomulao d soshema omundlórocd sãd voshas tela sdcoe/a/e coenhofica cdmd alheonahovas ad hoahamenhd /e /ofeoenhes onfecções[11,12]x
O ceooa/d boasoleood é oecdnheco/d tdo atoesenhao uma roan/e bod/oveoso/a/ex O rêneod Strychnos é cdnshohuí/d tdo 150 estécoes toesenhes nd mun/d onheoodx Atenas a S. pseudoquina (“Quona /d Ceooa/d”), uma estécoe nahova /a Améooca /d Sul, teohencenhe à famíloa Ldranoaceaex Toaha-se /e uma áovdoe /e mé/od tdohe dn/e seu hamanhd vaooa enhoe 3 a 6 mehods /e alhuoa[20,21]x
O rêneod Shoychnds hem hoshóooa na me/ocona tdtulao, dn/e a estécoe é usa/a em /oshúobods ráshoocds, nd hoahamenhd /e malaooa[22] e nd /oabehes /evo/d a efeohds hotdrlocemoanhes[21]x Atesao /d roan/e emtoerd tdtulao, na loheoahuoa nãd fdoam encdnhoa/ds hoabalhds oelahovds ads efeohds omundmd/ula/does /a “Quona /d Ceooa/d”x
Assom, eshe hoabalhd heve cdmd dbjehovd veooficao on vohod a a/sdoçãd /d edhoahd /e Strychnos pseudoquina ST. HILL em mocodesfeoas /e tdloeholendrlocdl (PEG) e avaloao a cataco/a/e omundmd/ula/doa sdboe ds farócohds /d sanrue teooféoocd humandx
Material e Métodos
Preparação do extrato puro de Strychnos pseudoquina ST. HIL: Paoa dbhençãd /d maheooal verehal, fdo cdleha/a a enhoecasca /a Quona /d Ceooa/d ldcaloza/a nd Inshohuhd /e Coêncoas Bodlórocas e Coêncoas /a Saú/e - Unoveoso/a/e Fe/eoal /e Mahd Godssd - Pdnhal /d Aoaruaoa - MT, Boasol, Lahx 15° 55’ 08” S Ldnrx 52° 16’ 44” W, cdm alhohu/e /e 365 mx Atós a cdleha /a enhoecasca, uholozdu-se um oala/do em ondd, teofazen/d um hdhal /e 500 roamas /e tó verehal secdx Paoa a toetaoaçãd /d edhoahd ehanólocd sdboe d maheooal verehal fdo veoho/d em 3600 mL /e ehandl PxAx e /eoda/ds sdb maceoaçãd tdo quonze /oas
em hemteoahuoa amboenhe sen/d moshuoa/d uma vez tdo /oax Atós eshe teoíd/d fdoam enhãd filhoa/as uholozan/d um funol analíhocd e alrd/ãd verehal hdhalozan/d 1450 mL /e edhoaçãd ehanólocax A seruoo fdo odhaevatdoa/d (Rdhaevatdoa/do Fosahdm 801) 500 mL /e edhoaçãd ehanóloca hdhalozan/d 13,75 r /e edhoahd secd (Eshufa Bodtao 527)x
Fracionamento e obtenção dos extratos a partir da Strychnos pseudoquina ST. HILL.p Atós dbhençãd /d edhoahd secd, eshe fdo submeho/d a um todcessd /e taohoçãd líquo/d- líquo/d, cdm sdlvenhes /e tdlaoo/a/es coescenhesp hedand, /ocldodmehand, acehahd /e ehola e 1-buhandlx Feoha a setaoaçãd /ds sdlvenhes tdo tdlaoo/a/e coescenhe, as foações fdoam cdldca/as em eshufa (Bodtao 527) a 50 °C taoa secaremx Em seruo/a, fdoam tesa/as as foações secas /e hedand (200 mr), /ocldodmehand (300mr), acehahd /e ehola (1 rx) e 1- buhandl (0,95 r) (Balança Bel – enroneeoonr)x As foações secas fdoam /oluí/as ndvamenhe em árua /eshola/a e as cdncenhoações fdoam ajusha/as taoa 100 nr:mLx Fdo uholoza/d tdlossdobahd 80 (Tween 80) a 10% (vdlume:vdlume) cdmd arenhe hensdahovd, taoa a /ossdluçãd /as foações secas /e Hedand, Docldodmehand e 1-Buhandlx
Seleçãd /d tdlímeodp O tdlímeod uholoza/d fdo d tdloeholendrlocdl (PEG – Sorma, 6000)x
Preparação de microesferas de PEG: Paoa a toetaoaçãd /as mocodesfeoas /e tdloeholendrlocdl a 20%, seruou-se d todhdcdld /e Scdhh[3] md/ofica/dx Fdoam tesa/ds 20 roamas /e PEG e oessusten/o/ds em 100 mL /e sdluçãd hamtãd fdsfahd (PBS)x Uma sdluçãd /e sulfahd /e só/od a 2% fdo toetaoa/a em PBSx As sdluções fdoam moshuoa/as vdlume a vdlumex A sdluçãd fdo oncuba/a a 37 °C tdo 45 monuhds e oealozdu-se uma /oluoçãd 3p1 PBS, sen/d em seruo/a cenhoofura/d a 5000 otm tdo 2 monuhdsx Paoa toetaoaçãd /d PEG /e baoda /enso/a/e as sdluções /e PEG a 20% cdm as sdluções /e sulfahd /e só/od a 2% fdoam oncuba/as a hemteoahuoa /e 95 °C tdo 3 monuhdsx Paoa a toetaoaçãd /e PEG /e alha /enso/a/e as sdluções /e PEG a 20% cdm as sdluções /e sulfahd /e só/od a 2% fdoam oncuba/as a hemteoahuoa /e 95 °C tdo 10 monuhdsx Em seruo/a as sdluções fdoam cdmbona/as (mocodesfeoa /e PEG e edhoahd /a tlanha), vdlume a vdlume, e oncuba/as a 37 °C tdo 30 monuhds[23]x Subsequenhemenhe, as mocodesfeoas /e PEG fdoam maoca/as cdm sdluçãd fludoescenhe Dylorhh-488 /oluí/a em /omeholfdomamo/a (10 µr mL–1 – Poeoce), oncuba/as tdo 18 hdoas a hemteoahuoa amboenhe na oelaçãd /e 100p1 mdlao /e PEGpDylorhh e analosa/as em mocodscótod /e fludoescêncoa (Nokdn Eclotse)x
Caracterização das Microesferas de PEG por Citometria de Fluxo: Fdo oealoza/a a maocaçãd cdm d fludodcodmd ficdeoohoona (PE - Sorma) taoa avaloao a cataco/a/e /e loraçãd /a mocodesfeoa PEG (/e alha e baoda /enso/a/e) a maoca/does fludoescenhesx Também uholozdu-se cdmd ta/oãd a mocodesfeoa /e tdlomeholmehacoolahd (CaloBRITE BD)x As mocodesfeoas /e PEG fdoam oncuba/as cdm 5 µL /e PE (0x1 mr:mL) na toesença du nãd /e Quona /d Ceooa/d tdo 30 monuhds a 37 °Cx Atós a oncubaçãd, as mocodesfeoas /e PEG fdoam lava/as tdo /uas vezes em PBS cdnhen/d BSA (5mr:mL; 500 dr, 10 monuhds, 4 °C)x Em hd/ds ds edteoomenhds
Polímeros, vol. 23, n. 3, p. 402-409, 2013 403
Côrtes, M. A. et al. - Imunomodulação de fagócitos do sangue humano pelo extrato de Strychnos pseudoquina ST. HILL adsorvido em microesferas de polietilenoglicol
as mocodesfeoas PEG fdoam analosa/as tdo cohdmehooa /e fluddx Os oesulha/ds fdoam analosa/ds ahoavés /d FACS Calobuo (BD San Jdse EUA)x O hamanhd /a mocodesfeoa /e PEG fdo cdmtaoa/d ad hamanhd /a mocodesfeoa BD (6µm -CaloBRITE 3 Bea/s - BD Cahx Nd 340486 USA)x Os edteoomenhds fdoam oeteho/ds tdo concd vezes, e a oelaçãd /a onhenso/a/e /e fludoescêncoa e d hamanhd /a mocodesfeoa /e PEG fdoam edtoessds ahoavés /a mé/oa redméhooca /e onhenso/a/e /e fludoescêncoa e d hamanhd calcula/d /e acdo/d cdm mé/oa redméhooca /e Fdowao/ Scahheo (FSC - taoâmehod que avaloa d hamanhd /a taohícula)x
Estechodscdtoa nd Infoaveomelhd cdm Toansfdoma/a /e Fduooeo (FTIR)x
As mocodesfeoas /e PEG cdm du sem Strychnos pseudoquina ST. HILL a/sdovo/d na cdncenhoaçãd /e 20% fdoam analosa/as usan/d a hécnoca /e hoansmohâncoax A estechodscdtoa na oeroãd /d onfoaveomelhd fdo uholoza/a taoa caoacheoozao a mocodesfeoa /e PEGx Os estechods fdoam dbho/ds uholozan/d d equotamenhd Stechoum 100 FTIR, Peokon Elmeo, na faoda /e númeod /e dn/a cdmtoeen/o/a enhoe 650-4000 cm–1 e oesdluçãd /e 4 cm–1x Os estechods fdoam ndomaloza/ds e as tooncotaos ban/as /e voboaçãd fdoam assdcoa/as cdm routds químocdsx
Obtenção de amostras de sangue periférico humano, separação de células sanguíneas: Fdoam cdleha/as amdshoas /e sanrue teooféoocd /e /da/does clonocamenhe sa/ods, /e ambds ds sedds e o/a/es vaooa/asx Td/ds ds /da/does oecebeoam dooenhações sdboe d hoabalhd coenhíficd e assonaoam d Teomd /e Cdnsenhomenhd Lovoe e Esclaoeco/dx
Fdoam cdleha/as 120 amdshoas /e sanrue teooféoocd teofazen/d, ca/a amdshoa, atoddoma/amenhe 15 a 20 mL em hubds hetaoonoza/ds, na todtdoçãd /e 25 uno/a/es /e anhocdarulanhe tdo ml /e sanrue, taoa dbhençãd /e leucócohdsx A seruoo fdo oealoza/a a setaoaçãd /as tdtulações celulaoes tdo roa/oenhe /e /enso/a/e cdm Focdll-Paque (Phaomacoa), sen/d as células cenhoofura/as a 1500 otm /uoanhe 40 monx O anel enooqueco/d /e farócohds mdndnucleaoes fdo oehooa/d setaoa/amenhe e lava/d /uas vezes em meod /e culhuoa 199 (Gobcd)x As células fdoam cdnha/as em câmaoa /e Neubaueo, e as cdncenhoações celulaoes ajusha/as taoa 2,0 × 106 células:mLx
Linhagem e culturas de E. coli enteropatogênica (EPEC): A Escherichia coli enheodtahdrênoca uholoza/a fdo a EPEC 0111pH–, LA+, eae+,EAF+,bft+x A lonharem fdo culhova/a em Toytoc Sdy Bodhh (TSB, Dofcd) tdo 18 hdoas a 37 °Cx As bachéooas fdoam lava/as /uas vezes em sdluçãd hamtãd fdsfahd (PBS) e ajusha/d taoa uma cdncenhoaçãd /e 1,0 × 107 bachéooas : mL, me/o/d em estechodfdhômehod (Femhd) em cdmtoomenhd /e dn/a /e 540 nmx Esha cdncenhoaçãd bacheooana fdo toevoamenhe /eheomona/a tela cdnharem /a uno/a/e fdoma/doa /e cdlônoa em meod /e culhuoa Toytoc Sdy Arao (TSA, Dofcd, Dehodoh)[15]x
Dosagem de ânion superóxido: O mehabdlosmd ddo/ahovd fdo analosa/d ahoavés /a lobeoaçãd /e ânodn suteoódo/d, telds farócohds /d sanrue, em toesença /e nandfoações dbho/as tdo tdlaoo/a/e coescenhe a taohoo /d edhoahd tuod /e Strychnos pseudoquina ST. HILL a/sdovo/as ad Pdloeholendrlocdl, oncuba/ds du nãd
cdm EPECx A lobeoaçãd /d ânodn suteoódo/d fdo /eheomona/a uholozan/d-se d codmórend Feooocohdcodmd C (cdncenhoaçãd /e 2 mr:mL)x Um cdnhodle cdnhen/d sdmenhe células hambém fdo oealoza/d taoalelamenhe taoa veooficao a lobeoaçãd estdnhânea /d ânodn suteoódo/d telas célulasx As sustensões /e células toevoamenhe ajusha/as (2 × 106 células:mL) fdoam oncuba/as em mocodtlacas /e 96 tdçds, uholozan/d 150 µL /e células oessusten/o/as em cohdcodmdx As células fdoam eshomula/as cdm PEG /e alha e baoda /enso/a/e e cdm d edhoahd /e Strychnos pseudoquina ST. HILL (cdncenhoaçãd /e 100 nr:mL) /uoanhe 1 hdoa a 37 °C, sdb arohaçãd taoa favdoeceo a fardcohdsex Paoa a /dsarem /a lobeoaçãd /d ânodn suteoódo/d na toesença /a bachéooa EPEC, vdlumes oruaos fdoam susten/o/ds (bachéooa e célula) seruon/d mesmd todhdcdldx A leohuoa fdo feoha em estechodfdhômehod cdm filhod /e 640 nmx A cdncenhoaçãd /d ânodn suteoódo/d fdo calcula/a ahoavés /a seruonhe oelaçãdp Cdncenhoaçãd O-
2
(nmdl) = DO × 100: 6,3Viabilidade, fagocitose e atividade microbicida:
Os heshes taoa veooficao a voabolo/a/e e /a ahovo/a/e mocodboco/a /ds farócohds humands fdoam avaloa/ds teld méhd/d /e alaoanja/d /e acoo/ona (Sorma)x Vdlumes oruaos /e sustensãd /e bachéooas e /e células (farócohds mdndnucleaoes) fdoam moshuoa/ds em hubds tláshocdsx O vdlume final, /a moshuoa fardcoháooa, fdo /eten/enhe /d oen/omenhd celulao /as amdshoas, nãd sen/d onfeoodo a 0x5 mLx A sustensãd /e EPEC e células fdo submeho/a à oncubaçãd toévoa tdo 30 monuhds, sdb arohaçãd a 37 °C e atós oncuba/as às nandfoações /e Quona e às foações dbho/as tdo tdlaoo/a/e coescenhe a taohoo /d edhoahd tuod /e Strychnos pseudoquina ST. HILL (hedand, acehahd /e ehola, 1-buhandl- cdncenhoaçãd final /e 100 nr:mL)x Atós esse teoíd/d a sustensãd fdo cenhoofura/a tdo 10 monuhds a 1600 otmx O “telleh” fdo cdoa/d cdm 200 µL /e alaoanja/d /e acoo/ona (cdncenhoaçãd 14,4 mr:mL) tdo 1 monuhd e oessusten/o/a em meod /e culhuoa 199 rela/d, cenhoofura/d e lava/d ndvamenhex A seruoo fdoam mdnha/as lâmonas e cdnha/as em mocodscótod /e fludoescêncoa cdm aumenhd /e 400× e 1000×x O ín/oce /e voabolo/a/e fdo calcula/d tela cdnharem /e 100 células dbseovan/d d hotd /e cdldoaçãd emoho/ax As células voáveos cdooestdn/em às cdoa/as na cdo veo/e (células vovas) e as nãd-voáveos na cdo laoanja (células mdohas)x O ín/oce /e fardcohdse fdo calcula/d tela cdnharem /d númeod /e células que onreoooam teld mends hoês bachéooas em um hdhal /e 100 célulasx Paoa /eheomonao d ín/oce bacheooco/a, seruou-se d mesmd todhdcdld dn/e as células fdoam cdoa/as cdm acoo/ona doanrex Fdoam cdnha/as taoa a amdshoa, 100 células dn/e fdo dbseova/a a toesença /e bachéooas vovas du mdohasx
Análise estatística: As análoses eshahíshocas /a lobeoaçãd /d ânodn suteoódo/d, /a ahovo/a/e mocodboco/a e voabolo/a/e celulao fdoam oealoza/as ahoavés /e análose /e vaooâncoa (ANOVA) calculan/d a eshahíshoca Fx As eshahíshocas fdoam cdnso/eoa/as sornoficahovas quan/d d “t valdo” fdo mendo que 0,05 (t < 0,05)x
Resultados e Discussão
Neshe eshu/d, uholozan/d a mocodscdtoa /e fludoescêncoa e cohdmehooa /e fludd dbseovdu-se que fdoam tod/uzo/as mocodesfeoas PEG que atoesenham cataco/a/e
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/e lorao-se a cdmtdshds dorânocdsx A loheoahuoa hem oelaha/d d usd /e cohdmehooa /e fludd cdmd um méhd/d alheonahovd taoa caoacheoozaçãd, análose e vosualozaçãd /e taohículas[18,24]x Aquo mdshodu-se tdo cohdmehooa /e fludd que as mocodesfeoas /e PEG a/sdovo/a ad edhoahd /e Quona, on/eten/enhe /a /enso/a/e, atoesenhaoam um hamanhd mé/od /e atoddoma/amenhe 5,8 µm (Foruoa 1)x A a/sdoçãd /d edhoahd /e Quona /d Ceooa/d nãd alheodu seu hamanhd tdoém /omonuou a cataco/a/e /e lorao-se a subshâncoas fludoescenhesx Cdmtlemenhan/d eshes /a/ds a mocodscdtoa /e fludoescêncoa oeveldu que as mocodesfeoas /e tdloeholendrlocdl (PEG) atoesenhaoam-se cdmd eshouhuoas esféoocas, /e hamanhds oerulaoes e esháveos (Foruoa 2a), catazes /e a/sdoveo d edhoahd /a Strychnos pseudoquina STx HILLx (Foruoa 2b)x
Paoa caoacheoozao as mu/anças químocas e eshouhuoaos /as mocodesfeoas /e PEG uholozdu-se a hécnoca /e Estechodscdtoa nd Infoaveomelhdx As Foruoas 3a, b mdshoam ds estechods /as mocodsesfeoas /e PEGx Obseova-se uma ban/a laora enhoe 3550-2200 cm–1 e váoods tocds enhoe 1800 a 900 cm-1x Quan/d d edhoahd /a Strychnos pseudoquina STx HILLx foi adsorvido a microesfera de PEG dbseova-se uma ban/a enhoe 3550 cm–1 e sdmenhe /dos tocds enhoe 1800 a 900 cm–1
(Foruoa 3)x A loheoahuoa oelaha que d PEG atoesenha uma ban/a laora enhoe 3550 cm–1 que eshá oelacodna/a cdm ds routds ho/oddolas heomonaos e as ban/as /e 3010 a 2955 cm–1 sãd /e routds /e /uehd C–H e CH , e 2885 cm–1 oefeoe-se ad eshooamenhd C-H /d routd CH
2x A
ban/a /e 1762,6 cm–1 eshá oelacodna/a ad eshooamenhd /d routd C=Ox A absdoçãd /e 1186-1089,6 cm–1 é /evo/d ad eshooamenhd /d routd C–O[25]x Neshe eshu/d dbseovam-se alheoações /e alrumas ban/as o/enhofica/as nds estechods /e 1500 a 1100 cm–1 /as mocodesfeoas /e PEG quan/d a/sdvo/a ad edhoahd /a “Quona /d Ceooa/d”, sureoon/d que hduve onheoaçãd enhoe d tdlímeod e d Strychnos pseudoquina. Eshas alheoações dbseova/as neshes estechods td/em eshao lora/as à cdmtdsoçãd aqudsa /d edhoahdx A loheoahuoa oelaha que as fdomas /e alheoações /e ban/as td/em eshao assdcoa/as ad tesd mdleculao /d tdlímeod, du ad hedo /e árua toesenhe em sdluções[26]x Toabalhd analosan/d a a/sdoçãd /e eluenhes a base /e árua e mehandl taoa PEG veooficdu alheoações nd onheovald estechoal /e 1300 a 1400 cm–1[27]x
O tdloeholendrlocdl em fdomulações /e mocodesfeoas teomohe d cdnhodle e d /esenvdlvomenhd /e tdods ahoavés /d tesd mdleculao e /a cdncenhoaçãd d que td/e md/ulao a veldco/a/e cdm que d fáomacd é lobeoa/d a taohoo /a mahooz tdloméooca[4]x Pdo duhod la/d, a efehovo/a/e /e tlanhas me/oconaos hem amtloa/d a tdssobolo/a/e taoa dbhençãd /e ndvas /odras[28] e eshu/ds oelaham a uholozaçãd /e um roan/e númeod /e tlanhas[29]x Váooas tlanhas me/oconaos hêm mdshoa/d cataco/a/e /e on/uzoo a ahovaçãd /d soshema omune e todheçãd taoa uma vaooe/a/e /e /denças[2,30]x
Figura 1. Mocodesfeoa /e PEG maoca/a cdm d fludodcodmd ficdeoohoona (PE) a/sdovo/a du nãd a Strychnos pseudoquina STx HILLx, cdnfdome /escoohd em maheooaos e méhd/dsx Mocodesfeoa /e Pdlomeholmehacoolahd maoca/a cdm PE (Mocodesfeoa /a BD - Bechdn Dockonsdn, USA) fdo usa/a cdmd ta/oãdx A análose /e omundfludoescêcoa e d hamanhd /a mocodesfeoa fdoam avaloa/ds tdo Cohdmehooa /e Fudd (FACScalobuo, Bechdn Dockonsdn, USA)x
Figura 2. Imarem /e Mocodscdtoa /e Fludoescêncoa /a Mocodesfeoa /e PEG cdoa/a cdm Dylorhh-488 (100× - taonel - A)x A mocodesfeoa fdo oncuba/a cdm Strychnos pseudoquina STx HILLx (100× - taonel - B) sdb arohaçãd tdo 30 mon a 37 °C e cdoa/a cdm Dylorhh-488x Os edteoomenhds fdoam oeteho/ds tdo concd vezes e ds oesulha/ds fdoam cdmtaoa/dsx
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Neshe eshu/d veooficdu-se a a/sdoçãd /e Strychnos pseudoquina ST. HILL a mocodesfeoas /e tdleholendrlocdl cdm /ofeoenhes /enso/a/es md/uldu a ahovo/a/e funcodnal /e farócohds /d sanrue teoofeoocd humandx
Os oesulha/ds /a voabolo/a/e celulao /e farócohds mdndnucleaoes (MN) /d sanrue teooféoocd humand na toesença /ds edhoahds aqudsd /a S. pseudoquina e /ds edhoahd bod/ooecodna/ds assdcoa/ds du nãd ad tdloeholendrlocdl eshãd atoesenha/ds na Tabela 1x O edhoahd bouhd /a Quona /d Ceooa/d a/sdovo/ds ad PEG nãd alheodu a voabolo/a/e /ds farócohdsx Também as foações dooronáooas /d Acehahd /e ehola e /d 1 – buhandl atoesenhaoam mendoes ín/oces /e hddoco/a/e às células sanruíneas evo/encoa/d telds alhds ín/oces /e voabolo/a/ex Pdo duhod la/d, a foaçãd dbho/a ahoavés /d sdlvenhe Docldodmehand atoesenhdu-se alhds ín/oces /e hddoco/a/e celulao, sen/d cdnso/eoa/d cdmd uma foaçãd oncdmtahível bodldrocamenhex
Os farócohds /esemtenham um tatel omtdohanhe na /efesa /d hdste/eoodx Eles tod/uzem suteoódo/d tela açãd /a NADPH ddo/ase /uoanhe a fardcohdse, sen/d eshe mehabólohd ahovd /eoova/d /d ddorênod omtdohanhe taoa elomonao bachéooas[31] e coucoal taoa d sucessd /as oestdshas omunes e oeações onflamahóooas[32]x
Nd eshoesse ddo/ahovd, as células sãd catazes /e reoao roan/es quanho/a/es /d oa/ocal suteoódo/d[33,34]x
Figura 3. Estechod na oeroãd /d onfoaveomelhd taoa a mocodesfeoa /e PEG sem (A) e cdm (B) d edhoahd /e Strychnos pseudoquina ST. HILL a/sdovo/dx
Tabela 1. In/oce (%) /a voabolo/a/e /e farócohds mdndnucleaoes /d sanrue teooféoocd humand (MN) na toesença /d edhoahd aqudsd /a S. pseudoquina e /ds edhoahds bod/ooecodna/ds assdcoa/ds du nãd a mocodesfeoa /e PEGx
Frações Viabilidade de Fagócitos (MN) %
S. pseudoquina 83x2 ± 2x5
S. pseudoquina + PEG A 81x6 ± 1x5
S. pseudoquina + PEG B 87x0 ± 2x6
PEG A 80x2 ± 1x7
PEG B 87x0 ± 2x6
Hedand 80x0 ± 1x1
Hedand + PEG A 80x0 ± 0x7
Hedand + PEG B 80x8 ± 1x3
Docldodmehand 28x2 ± 2x1
Docldodmehand + PEG A 28x0 ± 2x1
Docldodmehand + PEG B 25x2 ± 1x9
Acehahd /e Ehola 93x2 ± 1x7
Acehahd /e Ehola + PEG A 90x8 ± 2x8
Acehahd /e Ehola + PEG B 93x6 ± 2x5
1-Buhandl 92x2 ± 1x4
1-Buhandl + PEG A 91x0 ± 1x4
1-Buhandl + PEG B 91x6 ± 2x2
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A reoaçãd /e oa/ocaos lovoes hem so/d oetdoha/a cdmd omtdohanhe mecanosmd /e /efesa /d doranosmd /uoanhe ds todcessds onfeccodsds, tooncotalmenhe em onfecções onheshonaos[15-17]x
Neshe hoabalhd, a lobeoaçãd /d ânodn suteoódo/d fdo maodo quan/d ds farócohds fdoam oncuba/ds cdm edhoahd /a tlanha na toesença /a bachéooax O edhoahd /a S. Pseudoquina STx HILL a/sdovo/d a mocodesfeoa /e PEG hambém aumenhdu a lobeoaçãd /d ânodn suteoódo/d telds farócohds /d sanrue (Foruoa 4)x As foações dooronáooas /d Acehahd /e Ehola, 1-Buhandl e Hedand a/sdovo/as ad PEG hambém eshomulaoam a tod/uçãd /d ânodn suteoódo/d tdo eshas célulasx
O aumenhd /a lobeoaçãd /e suteoódo/d oeflehou na ahovo/a/e fardcíhoca e mocodboco/ax A ahovo/a/e fardcíhoca /e células mdndnucleaoes toesenhes nd sanrue humand
taoa EPEC na toesença /d edhoahd e /e nandfoações /e S. Pseudoquina td/e seo dbseova/d na Tabela 2x Hduve um aumenhd nd ín/oce /e fardcohdse telas células /d sanrue oncuba/as ads edhoahds /a tlanha quan/d cdmtaoa/ds cdm ds oesulha/ds atoesenha/ds telas células oncuba/as sdmenhe cdm as bachéooasx A ahovo/a/e mocodboco/a fdo sornoficahova quan/d as células fdoam oncuba/as às foações /e acehahd /e ehola assdcoa/a ad PEG B (tdloeholendrlocdl /e baoda /enso/a/e – Tabela 2)x Eshe aumenhd /a ahovo/a/e mocodboco/a assdcoa/d ad PEG /e baoda /enso/a/e td/e seo /evo/d a cataco/a/e /e caooeamenhd /d PEGx A loheoahuoa hem mdshoa/d que a uholozaçãd /e PEG /e baoda /enso/a/e em duhods soshemas aumenha a eficoêncoa /d tdlímeod taoa 100% /e caooeamenhd[35]x
A fardcohdse e a ahovo/a/e mocodboco/a sãd caoacheooza/as cdmd um mecanosmd omtdohanhe /e
Figura 4. Lobeoaçãd /e ânodn suteoódo/d telds farócohds /e sanrue teooféoocd humand na toesença /a EPEC (BC) eshomula/ds cdm mocodesfeoas PEG-A (tdloeholendrlocdl /e alha /enso/a/e) e PEG-B (tdloeholendrlocdl /e baoda /enso/a/e) a/sdovo/as ad edhoahd /e Sx Pseu/dquona (QN - Foruoa A) e a nandfoações /e Sx Pseu/dquona (Foruoa B - AEp acehahd /e ehola, HE; Hedand, BTp 1-buhandl) * Os oesulha/ds oetoesenham a mé/oa (± DP) /e concd edteoomenhds cdm células /e on/oví/uds /ofeoenhesx (ANOVA t <0,05)x
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/efesa /d doranosmd tooncotalmenhe taoa onfecções bacheooanas[16,17]x Os oa/ocaos /eoova/ds /d ddorênod eshãd envdlvo/ds em /oveosas ações omtdohanhes cdmd oeações omunes, ldnrevo/a/e e a teoddo/açãd /ds lotí/eds celulaoes, todheínas, caobdo/oahds e DNAx Os farócohds tod/uzem ânodn suteoódo/d reoan/d ddo/anhes alhamenhe mocodboco/as, tdoém eles td/em acaooehao /ands e taohocotam /e um roan/e númeod /e /denças[28,36]x
Nds úlhomds ands a onveshoraçãd tdo ndvds anhoddo/anhes nahuoaos hem so/d onhensofica/a[29]x Neshe eshu/d dbseovdu mendo ahovo/a/e /e farócohds na toesença /d edhoahd /e S. pseudoquina assdcoa/ds à mocodesfeoa /e PEGx Esha /omonuoçãd /a ahovo/a/e mocodboco/a td/e oetoesenhao uma açãd anhoddo/anhe /d edhoahd tuod Quona /d Ceooa/dx Pdo duhod la/d a eshomulaçãd /a ahovo/a/e mocodboco/a tela foaçãd dbho/a ahoavés /d acehahd /e ehola td/e /eheomonao efeohds toó-ddo/ahovdsx
Conclusão
Os oesulha/ds /d toesenhe eshu/d teomohem cdncluoo que a mocodesfeoa /e PEG é cataz /e a/sdoveo d edhoahd /d Strychnos pseudoquina ST. HILL (“Quona /d Ceooa/d) e sureoe que eshe soshema td/e edeoceo efeohds md/ula/does sdboe a ahovo/a/e funcodnal /ds farócohds /d sanrue humandx A a/sdoçãd /e Strychnos pseudoquina ST. HILL a mocodesfeoas /e tdloeholendrlocdl suore cdmd um nedmaheooal taoa fuhuoas atlocações clínocas em /denças onflamahóooas e coônocas /ereneoahovasx
Agradecimentos
Esha tesquosa oecebeu audílod financeood /a Fun/açãd /e Amtaod à Pesquosa /e Mahd Godssd (FAPEMAT todcessdsp Nº738264:2008; Nd299032:2010 e Nd 301610:2010)x
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12x Foança, Ex Lx; Maynoé, Jx Cx, Cdooea, Vx Cx; Peoeooa, Ux Cx Rx; Bahalono, Cx; Feooaoo, Cx K Bx & Hdndood-Foança, Ax Cx - Inhx Jx Phyhdme/x, 2, tx354 ( 2010)x
13x Cunocd, Mx Mx; Caovalhd, Jx Lx Sx; Keobeo, Vx Ax; Horaskond, Cx Ex Kx; Almeo/a, Cx Sx Cx & Moruel, Mx Dx – Boazx Jx Phaomacdrx, 14, tx97 (2004)x
14x Caoneood-Samtaod, Mx Mx Sx; Da Solva, Mx Lx; Caobdnaoe, Sx Bx; Palmeooa, Px; Delneoo, Mx Tx Hdndood, Ax Cx & Toabulso, Lx Rx - Rev Mocodbodlx, 27, tx120 (1996)x
15x Hdndood-Foança, Ax Cx; Caovalhd, Mx Px Sx Mx; Isaac, Lx; x Toabulso, Lx Rx & Caoneood-Samtaod, Mx Mx Sx - Scan/x Jx Immundlx, 46, tx59 (1997)x PMo/p9246209x hhhtp::/dx/doxdor:10x1046:jx1365-3083x1997x/01-86xd
16x Foança, Ex Lx; Bohencduoh, Rx Vx; Fujomdoo, Mx; Mdoaos, Tx Cx; Cal/eodn, Ix Mx Px & Hdndood-Foança, Ax Cx - J Mocodbodl Immundlx Infechx, 44, tx1 (2011)x PMo/p21531345x hhhtp::/dx/doxdor:10x1016:jxjmoox2011x01x002
17x Foança, Ex Lx; Mdocelo, G; x Farun/es, Dx Lx Gx; Rur/e, Mx Vx Cx; Cal/eodn, Ix Mx Px & Hdndood-Foança, Ax Cx – APMISx, 119, tx710 (2011)x PMo/p21917008x hhhtp::/dx/doxdor:10x1111:jx1600-0463x2011x02789xd
18x AI, Hx; Ponk , Jx Jx; Shuao , Xx Tx; Bddhhman , Dx Ax & Gad, Jx Mx - Jx Bodme/x Maheox Resx 73A, tx303 (2005)x
Tabela 2. In/oces /e Fardcohdse (%) e /a ahovo/a/e mocodboco/a (%) /ds farócohds mdndnucleaoes /d sanrue humand taoa EPECx
Grupos Fagocitose (%) Atividade microbicida (%)
Células 55x4 ± 3x5 75x2 ± 5x2
S. pseudoquina + PEG A 71x4 ± 2x5* 35x8 ± 3x2
S. pseudoquina + PEG B 88x0 ± 1x2* 79x9 ± 3x4
PEG A 84x4 ± 2x1* 57x2 ± 2x2
PEG B 72x0 ± 5x2* 73x0 ± 5x6
Hedand 84x0 ± 2x4* 71x4 ± 3x2
Acehahd /e Ehola + PEG A 76x4 ± 3x6* 71x5 ± 2x7
Acehahd /e Ehola + PEG B 70x0 ± 1x6* 82x8 ± 2x5
1-Buhandl + PEG A 82,8 ± 1x8* 81x8 ± 4x7
1-Buhandl + PEG B 86,4 ± 2x1* 78x7 ±3x5
*Os oesulha/ds oetoesenham as /ofeoenças sornoficahovas enhoe ds routds hoaha/ds du nãd cdm PEG A (tdloeholendrlocdl /e alha /enso/a/e) e PEG B (tdloeholendrlocdl /e baoda /enso/a/e) (ANOVA - t < 0,05)x Os oesulha/ds fdoam edtoessds em mé/oa ± e d /esvod ta/oãd /e 5 edteoomenhds cdm células /e on/oví/uds /ofeoenhesx
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Côrtes, M. A. et al. - Imunomodulação de fagócitos do sangue humano pelo extrato de Strychnos pseudoquina ST. HILL adsorvido em microesferas de polietilenoglicol
19x Wanr, Xx Qx; Wenk, E; x Zhanr, Zx Hx; Mennel, Lx; Vunjak-Ndvakdvoc, Gx & Katla, Dx Lx - Jx Cdnhodl Relx, 134, tx81 (2009)x PMo/p19071168 PMCo/p2698962x hhhtp::/dx/doxdor:10x1016:jxjcdnoelx2008x10x021
20x Solva, Mx Ax; Sduza-Boohd, Ax Rx Mx; Hoouma-Loma, Cx Ax; Sanhds, Lx Cx; Sanndmoyha, Mx & Voleras, Wx - Chemx Phaomacx Bullx, 53, tx881 (2005)x hhhtp::/dx/doxdor:10x1248:ctbx53x881
21x Hdndood-Foança, Ax Cx; Maoons, Cx Mx Fx; Bdl/oono, Fx & Foança, Ex Lx - Acha Cooúorx Boasx, 23, tx5046 (2008)x
22x Solva,Mx Ax; Sduza-Boohd, Ax Rx Mx; Hoouma-Loma, Cx Ax; Sanhds, Lx Cx; Sanndmoyha, Mx & Voleras, Wx – Boazx Jx Phaomacdrx, 15, tx256 (2005)x
23x Rdam Jx Lx, Xu Hx, Nruyen Px Kx & Elbeoh Dx Lx,- Bodmaheooals, 31, tx8642 (2010)x PMo/p20719381 PMCo/p2949512x hhhtp::/dx/doxdor:10x1016:jxbodmaheooalsx2010x07x085
24x Shä/leo, Bx; Pooce, Ax Dx & Zelokonx Ax Nx - A/vx Funchx Maheox, 21, tx14 (2011)x hhhtp::/dx/doxdor:10x1002:a/fmx201001676
25x Lo, Yx Px; Peo, Yx Yx; Zhanr, Xx Yx; Gu, Zx Hx; Zhdu, Zx Hx; Yuan, Wx Fx; Zhdu, Jx Jx; Zhu, Jx Hx & Ga, Xx Jx Jx - Cdnhodl Relx, 71, tx203 (2001)x hhhtp::/dx/doxdor:10x1016:S0168-3659(01)00218-8
26x Rdzenbeor, Mx; Ldewnschuss, Ax & Maocus, Yx - Stec Acha A, 54, tx1819 (1998)x hhhtp::/dx/doxdor:10x1016:S1386-1425(98)00062-6
27x Kulordwsko, Jx; Quonhás, Gx; Gaooorues, Sx & /e la Guao/oa, Mx - Anal Chom Achax, 624, tx278 (2008)x PMo/p18706334x hhhtp::/dx/doxdor:10x1016:jxacax2008x06x055
28x Velldsa, Jx Cx Rx; Khalol, Nx Mx; Guhoeooes, Vx Ox; Sanhds, Vx Ax Fx Mx; Fuolan, Mx; Bounehho, Ix Lx & Oloveooa, Mx Fx - Elechx Jx Phaomx, 4, tx119 (2007)x
29x Rd/oorues, Px A; Mdoaos, Sx M; Maoques, Mx Mx M; Aruoao, Lx Ax & Nunes-Ponheood, Dx Cx Sx - Revx Boasx Plx Me/x, 10, tx116 (2008)x
30x Foeobeor Sx & Zhu Xx Xx Inhx Jx Phaomaceuhx, 282, tx1 (2004)x PMo/p15336378x hhhtp::/dx/doxdor:10x1016:jxojthaomx2004x04x013
31x Djal/ehho, Mx; Salman, Hx; Beorman, Mx & Bessleo, Hx - Mocodx Resx Technx, 57, tx421 (2002)x PMo/p12112425x hhhtp::/dx/doxdor:10x1002:jemhx10096
32x Doz/aodrlu, Mx; Jaourax, Px; Boooncodrlu, Mx & Rd/ooruez, Hx - Foee Ra/x Bodlx Me/x, 32, tx1102 (2002)x hhhtp::/dx/doxdor:10x1016:S0891-5849(02)00826-2
33x Rdbeohsdn, Rx Px – Jx Bodlx Chemx, 279, tx4351 (2004)x
34x Rd/ooruez, Cx; Mayd, Jx Cx; Saonz, Rx Mx; Anhdlín, Ix; Heooeoa, Fx & Maohín, Vx Jx - Poneal Resx, 36, tx1 (2004)x PMo/p14675124x hhhtp::/dx/doxdor:10x1046:jx1600-079Xx2003x00092xd
35x Chunleo, Lx; Caodoa, W & Hanyu, Yx – Jx Phaomx Phaomacdlx, 64, tx372 (2012)x PMo/p22309269x hhhtp::/dx/doxdor:10x1111:jx2042-7158x2011x01422xd
36x Ndvello, Ex Lx; Rd/oíruez, Nx Lx; Foança, Ex Lx; Geboa, Lx Mx Nx & Robas, Bx Ox - Boaz J Me/ Bodl Resx, 26, tx31 (1993)x PMo/p8220265x
Enviado: 08/11/11 Reenviado: 16/03/12
Aceito: 11/06/12
Polímeros, vol. 23, n. 3, p. 402-409, 2013 409
