InterpretaçãoGuia de

Placa para Contagem de E.coli e ColiformesPlaca para Contagem de Coliformes

3MTM PetrifilmTM

Não use esta placa para a detecção de E.coli 0 157. Como a maioria dos outros meios para E.coli e Coliformes, esta placa não indicará, especificamente, a presença de qualquer cepa 0 157.

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Este guia apresenta resultados das Placas 3MTM PetrifilmTM para Contagem de E.coli e Coliformes. Para maiores informações, contate o representante de produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.

As Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de E.coli e Coliformes (EC) contêm nutrientes do meio Vermelho Violeta Bile (VRB), um agente geleificante solúvel em água fria, um indicador de atividade glicuronidásica e um indicador que facilita a enumeração da colônia. A maioria das E.coli (cerca de 97%) produz beta-glicuronidase na qual forma um precipitado azul associado a colônia. O filme superior retém o gás formado pelos coliformes e E.coli que são fermentadores de lactose. Cerca de 95% das E.coli produzem gás indicadas pelas colônias azuis a vermelho-azuladas, associadas ao gás retido na Placa Petrifilm EC (dentro de, aproximadamente, o diâmetro de uma colônia).

AOAC INTERNATIONAL e U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) definem coliformes como bacilos gram-negativos produtores de ácido e gás a partir da lactose durante a fermentação metabólica. Colônias de coliformes que crescem na Placa Petrifilm EC produzem ácido, fazendo com que o indicador de pH torne a cor do gel vermelho mais escuro.O gás retido ao redor das colônias vermelhas de coliformes indica coliformes confirmados.

A identificação de E.coli pode variar para cada país (veja a seção Instruções de Uso para tempos e temperaturas de incubação):

Método validado pela AOAC INTERNATIONALE.coli = 49 (colônias azuis com gás)Coliformes Totais = 87 (colônias vermelhas e azuis com gás).

Placa para Contagem de E.coli e Coliformes3MTM PetrifilmTM

Sem crescimento = 0Contagem de Coliformes Totais = 28Observe as mudanças na cor do gel nas figuras de

2 a 8. Quando a contagem de E.coli ou coliformes aumenta, a cor do gel se torna vermelha escura ou roxo-azulada.

Contagem de E.coli = 3

Qualquer azul na colônia (azul a vermelho-azulado) indica a presença de E.coli. Iluminação frontal realçará a detecção do precipitado azul formado pela colônia.

O círculo 1 mostra uma colônia vermelho-azulada contada usando iluminação de fundo. O círculo 2 mostra a mesma colônia com iluminação frontal. O precipitado azul é mais evidente no círculo 2.

Contagem de E.coli = 17Contagem estimada de Coliformes Totais = 150

A área circular de crescimento é aproximadamente 20 cm2. Estimativas podem ser feitas nas placas contendo mais de 150 colônias, através da contagem do número de colônias em um ou mais quadrados representativos e determinando o número médio por quadrado. Multiplique o número médio por 20 para determinar a contagem estimada por placa.

Contagem de E.coli = 13

A faixa de contagem para a população total na Placa Petrifilm EC é de 15 a 150.Não conte as colônias que aparecem na barreira de espuma, pois elas não estão sob a influência seletiva do meio. Veja o círculo 1.

Iluminação de Fundo

Iluminação Frontal

1

1

2

2 3

54

Contagem atual ~ 10 Contagem atual ~ 10

Placas Petrifilm EC que são incontáveis têm uma ou mais das seguintes características: muitas colônias pequenas, muitas bolhas de gás, e uma alteração da cor do gel de vermelho para roxo-azulada.

Altas concentrações de E.coli podem tornar a área de crescimento roxa-azulada.

Contagem de E.coli presuntiva ~8Contagem de Coliformes Totais estimada ~ 10

Quando altos níveis de coliformes estão presentes (>108 ), algumas cepas de E.coli podem produzirmenos gás e colônias azuis podem ser menos definitivas. Conte todas as colônias azuis sem gás e/ou zonas azuis como E.coli presuntiva. Pegue colônias azuis sem gás e confirme, se necessário.

Contagem atual ~ 10

Quando altos números de organismos não-coliformes, tais como Pseudomonas, estão presentes nas Placas Petrifilm EC, o gel pode se tornar amarelo.

6 7

98

INC (Incontáveis) Para obter uma contagem mais precisa, dilua a amostra

6

8

8

8

Partículas de alimentos têm formatos irregulares e não estão associadas as bolhas de gás.

As bolhas podem variar. O gás pode romper a colônia de forma que a colônia contorne a bolha. Veja os círculos 1 e 2.

Bolhas artificiais podem resultar de uma inoculação inadequada ou do ar retido na amostra. Elas são irregulares e não estão associadas a colônia. Veja o círculo 3.

Os exemplos de 1 a 10 mostram várias bolhas associadas as colônias produtoras de gás. Todas devem ser enumeradas.

1

2

3

4

75

8

6

9 10

12

123

10 11

Contagem de Coliformes Totais = 3 Contagem Total de Coliformes = 78

Bolhas

Este guia apresenta resultados das Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Coliformes. Para maiores informações, contate o representante de produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.

As Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Coliformes (CC) contêm nutrientes do meio Vermelho Violeta Bile (VRB), um agente geleificante solúvel em água fria e um indicador tetrazólico que facilita a enumeração das colônias. O filme superior retém o gás formado pelos coliformes fermentadores de lactose.

AOAC INTERNATIONAL e U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) definem coliformes como bacilos gram-negativos produtores de ácido e gás a partir da lactose durante a fermentação metabólica. Colônias de coliformes que crescem na Placa Petrifilm CC produzem ácido, fazendo com que o indicador de pH torne a cor do gel vermelho mais escuro. O gás retido ao redordas colônias vermelhas de coliformes indica coliformes confirmados.

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Placa para Contagem de Coliformes3MTM PetrifilmTM

A identificação de coliformes pode variar para cada país (veja a seção Instruções de Uso para tempos e temperaturas de incubação):

Método validado pela AOAC INTERNATIONALColiformes Totais = 69 (colônias com gás).

Sem crescimento = 0 Contagem de Coliformes Totais = 79

Observe as mudanças na cor do gel nas figuras de 2 a 8. Quando a contagem de coliformes aumenta, a cor do gel escurece.

Bolhas de fundo são características do gel e não indicam crescimento de coliformes.

Contagem Estimada de Coliformes Totais = 220A área circular de crescimento é aproximadamente 20 cm2. Estimativas podem ser feitas nas placas contendo mais de 150 colônias, através da contagem do número de colônias em um ou mais quadrados representativos e determinando o número médio por quadrado. Multiplique o número médio por 20 para determinar a contagem estimada por placa. Diluição posterior da amostra é recomendada para uma contagem mais precisa.

A faixa de contagem para a população total na Placa Petrifilm CC é de 15 - 150.

Não conte as colônias que aparecem na barreira de espuma, pois elas não estão sob a influência seletiva do meio. Veja o círculo 1.

INC

Placas Petrifilm CC que são incontáveis têm uma ou mais das seguintes características: muitas colônias pequenas, muitas bolhas de gás e um escurecimento da cor do gel.

2

o

5

3

4

1

8

Partículas de alimentos têm formatos irregulares e não estão associadas as bolhas de gás.

As bolhas podem variar. O gás pode romper a colônia de forma que a colônia contorne a bolha. Veja os círculos 1 e 2.

Bolhas artificiais podem resultar de uma inoculação inadequada ou do ar retido na amostra. Elas são irregulares e não estão associadas a colônia. Veja o círculo 3.

Os exemplos de 1 a 10 mostram várias bolhas associadas as colônias produtoras de gás. Todas devem ser enumeradas.

Contagem atual = 4

Contagem de Coliformes Totais = 8

Contagem de Coliformes Totais = 2

Quando altos números de organismos não-coliformes, tais como Pseudomonas estão presentes nas Placas Petrifilm CC, o gel pode se tornar amarelo.

7

1

2

3

4

75

8

6

9 10

9

6

1

2

3

5 6

2 3

Prepare uma diluição 1:10 ou superior da amostra. Pese ou pipete a amostra num recipiente adequado, como saco para homogeneização, frasco de diluição ou outro recipiente estéril.

Adicione a quantidade adequada de um dos diluentes estéreis a seguir: tampão fosfato de Butterfield, água peptonada 0,1%, diluente salina peptonada (método ISO 6887), água peptonada tamponada (método ISO 6887-1), solução salina (0,85-090%), caldo letheen sem bissulfito ou água destilada.

Misture ou homogeneíze a amostra utilizando métodos de rotina.

Refrigere os pacotes fechados a < 8°C. Use antes da data de vencimento impresso na embalagem. Em áreas de alta umidade onde a condensação pode ser um problema, deixe os pacotes atingirem a temperatura ambiente antes de abrí-los.

Para selar os pacotes abertos, dobre a extremidade e sele com fita adesiva.

Mantenha os pacotes re-selados a< 25ºC e < 50% UR. Não refrigere os pacotes abertos. Use as Placas Petrifilm em um mês, após abertos.

Petrifilm

Petrifilm

Petrifilm

Armazenamento

Preparo da Amostra

1

4

Para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, REJEIÇÃO DE GARANTIAS/RECURSO LIMITADO, RESTRIÇÕES DE RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO veja a bula do produto.

Não use tampões contendo citrato, bissulfito ou tiossulfato; eles podem inibir o crescimento.

• para produtos ácidos use NaOH1 1N

• para produtos alcalinos use HCI 1N

• para a placa de E.coli, ajuste o pH da amostra diluída entre 6,5 e 7,5

• para a placa de Coliformes, ajuste o pH da amostra diluída entre 6,6 e 7,2

Instruções de UsoPlaca para Contagem de E.coli e de Coliformes3MTM PetrifilmTM

Com o lado LISO para baixo, coloque o difusor no filme superior sobre o inóculo.

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Lado côncavo

Lado liso

DELICADAMENTE pressione o difusor para distribuir o inóculo na área circular antes do gel se formar. Não gire nem arraste o difusor.

Retire o difusor. Espere um minuto, no mínimo, para o gel solidificar.11 12

8 9Coloque a Placa Petrifilm em uma superfície plana. Levante o filme superior.

Com a pipeta posicionada perpendicularmente à Placa Petrifilm, coloque 1 ml da amostra no centro do filme inferior.

Cuidadosamente DESÇA o filme superior de forma a evitar a formação de bolhas de ar. NÃO deixe o filme superior cair.

Inoculação

7

<70°F

Incubação

Incube as placas com a face transparente para cima, em pilhas de até 20 placas. Pode ser necessário umidificar a estufa para minimizar a perda de umidade.

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Interpretação

As Placas Petrifilm podem ser contadas em um contador de colônias comum ou outro sistema de amplificação. Consulte o Guia de Interpretação para a leitura dos resultados.

14 As colônias podem ser isoladas para identificação futura. Levante o filme superior e retire a colônia do gel.

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Coliformes Totais

• Método Oficial AOAC 991.14 (alimentos) incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°C

• Métodos Oficiais AOAC 986.33 e 989.10 (leite, leite cru, outros produtos lácteos) incube 24h ± 2h a 32°C ± 1°C

• Método NMKL (147.1993) incube 24h ± 2h a 37°C ± 1°C

• Métodos validados AFNOR 3M 01/2 – 09/89A e B (todos os tipos de alimentos exceto ostra) incube 24h ± 2h a 30°C ± 1°C

Coliformes Termotolerantes • Método validado AFNOR 3M 01/2 – 09/89C (todos os tipos de alimentos) incube 24h ± 2h a 44°C ± 1°C • Umidificação da estufa é necessária nesta temperatura elevada.

O tempo e a temperatura de incubação variam de acordo com o método. Os métodos aprovados mais comuns são:

Placa para Contagem de E.coli e Coliformes (EC)

Placa para Contagem de Coliformes (CC)

Método Oficial AOAC 991.14Para coliformes: incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°CPara E.coli: incube 48h ± 2h a 35°C ± 1°C

Método Oficial AOAC 998.08Para E.coli (carnes, aves e pescados): incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°C

Método NMKL (147.1993)Para coliformes: incube 24h ± 2h a 37°CPara E.coli: incube 48h ± 2h a 37°C

Microbiologia3M do Brasil Ltda.

Via Anhanguera, km 11013181-900 - Sumaré - SP

Abril/

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Breta

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