PROPAGAÇÃO ASSEXUADA DE GINDIROBA (F evillea trilobata L ... · culture medium used was Murashige & Skoog (MS), supplemented with vitamins of Morel and Wetmore, 3% sucrose, 0.01%

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE

PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA NÚCLEO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM DESENVOLVIMENTO E MEIO AMBIENTE

ÁREA DE CONCENTRAÇÃO: DESENVOLVIMENTO REGIONAL PROGRAMA REGIONAL DE DESENVOLVIMENTO E MEIO AMBIENTE

PROPAGAÇÃO ASSEXUADA DE GINDIROBA (Fevillea trilobata L.),

UMA ESPÉCIE COM POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO

Autora: Karla Cunha

Orientadora: Drª Marlucia Cruz de Santana

Abril - 2009

São Cristóvão – Sergipe

Brasil


PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA NÚCLEO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM DESENVOLVIMENTO E MEIO

AMBIENTE ÁREA DE CONCENTRAÇÃO: DESENVOLVIMENTO REGIONAL

PROGRAMA REGIONAL DE DESENVOLVIMENTO E MEIO AMBIENTE

Dissertação apresentada ao Núcleo de Pós-Graduação em Desenvolvimento e Meio Ambiente da Universidade Federal de Sergipe, como parte dos requisitos exigidos para a aquisição do título de Mestre em Desenvolvimento e Meio Ambiente.

Autora: Karla Cunha

Orientadora: Drª Marlucia Cruz de Santana

Abril - 2009

São Cristóvão – Sergipe

Brasil

FICHA CATALOGRÁFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL


C792p

Cunha, Karla

Propagação assexuada de Gindiroba (Fevillea trilobata

L.), uma espécie com potencial biotecnológico / Karla

Cunha. – São Cristóvão, 2009.

58 f. : il.

Dissertação (Mestrado em Desenvolvimento e Meio

Ambiente) – Universidade Federal de Sergipe, 2009.

Orientadora: Profª. Dra. Marlucia Cruz de Santana

1. Meio ambiente - Flora. 2. Gindiroba. 3. Fevillea trilobata.

4. Biotecnologia. 5. Carmópolis - Sergipe. I. Título.

CDU 502.3/.7(813.7)


PRÓ-REITORIA DE PÓS-GRADUAÇÃO E PESQUISA NÚCLEO DE PÓS-GRADUAÇÃO EM DESENVOLVIMENTO E MEIO AMBIENTE

ÁREA DE CONCENTRAÇÃO: DESENVOLVIMENTO REGIONAL PROGRAMA REGIONAL DE DESENVOLVIMENTO E MEIO AMBIENTE

PROPAGAÇÃO ASSEXUADA DE GINDIROBA (Fevillea trilobata L.), UMA

ESPÉCIE COM POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO

Dissertação de Mestrado defendida por Karla Cunha e aprovada em 14 de Abril de 2009 pela banca examinadora constituída pelos doutores:

________________________________________ Profª. Drª. Marlucia Cruz de Santana

Universidade Federal de Sergipe – PRODEMA

________________________________________ Profº. Drº. Lauro Xavier Filho

Universidade Tiradentes - UNIT

________________________________________ Profª. Drº. Carlos Dias da Silva Júnior


Este exemplar corresponde à versão final da Dissertação de Mestrado em Desenvolvimento e Meio Ambiente

________________________________________ Profª. Drª. Marlucia Cruz de Santana


É concedida ao Núcleo responsável pelo Mestrado em Desenvolvimento e Meio Ambiente da Universidade Federal de Sergipe permissão para disponibilizar, reproduzir cópias desta dissertação e emprestar ou vender tais cópias.

_________________________________ Karla Cunha

Universidade Federal de Sergipe

Primeiramente ao meu maravilhoso e eterno DEUS, a minha filha Karolyne e ao meu marido e amigo Kenny.

DEDICO

Aos meus pais José Carlos e Maria de Fátima que me ensinaram o que é a vida.

OFEREÇO

AGRADECIMENTOS

A DEUS, pela saúde e perseverança concedida.

À minha linda filha Karolyne e esposo Kenny Rogers pelo apoio, compreensão e companheirismo.

À minha maravilhosa mãe, Maria de Fátima pela força e compreensão nos meus momentos de ausência.

Aos meus irmãos Enmeson, Luciana, Júnior e Antônio pela harmonia concedida.

À minha querida e amiga sogra, Maria Verônica pelo apoio, amizade e incentivo.

À minha cunhada Iracema Nunes pelo apoio no abstract.

Aos amigos Sheyla, Aléria, Edval e Moisés que proporcionaram descontração e alegria em momentos de angústia.

Aos colegas do FPH, Paulo Valença, César, Homero, Eliude, Simone e Lurdinha pelas palavras de incentivo e apoio.

À profª. Drª. Marlucia Cruz de Santana pela orientação, incentivo e dedicação.

Ao prof. Dr. Lauro Xavier Filho (UNIT) que sempre me incentivou me ensinando que “na vida para acontecer basta querer”. Muito obrigada!

Ao Prof. Dr. Carlos Dias da Silva Júnior, pela participação da banca de qualificação e defesa final.

À profª. Sheila Alves (UNIT), pela ajuda concedida.

À EMBRAPA Tabuleiros Costeiros pela doação de sementes e apoio técnico, em especial ao Engº. Agrônomo Evandro Almeida Tupinambá e Erivaldo Fonseca Moraes (Supervisor de campo).

Aos colegas de mestrado pelos momentos de harmonia e integração, em especial Carlos David, Aline Borba e Carina Souza.

Ao Sr. João (Tec. Laboratório DBI/UFS), pela simpatia e apoio.

RESUMO

O presente trabalho é um estudo sobre duas técnicas para multiplicação e conservação da Fevillea trilobata L., bem como uma avaliação sobre o conhecimento popular da referida planta. Para o estudo de multiplicação foram utilizadas as técnicas de propagação “in vitro” e estaquia. Para a avaliação do conhecimento popular da gindiroba foi aplicado um questionário semi-estruturado a vendedores que comercializam sementes e/ou produtos naturais no Mercado Municipal Albano Franco e da feira-livre da praia do Mosqueiro, ambos situados em Aracaju/SE, além de alguns proprietários do município de Carmópolis/SE. Plantas-matrizes de gindiroba, fontes de explantes para experimentos de micropropagação, foram cultivadas no do mini-horto do Departamento de Biologia/UFS, oriundas de sementes fornecidas pela EMBRAPA-CPATC. Na propagação “in vitro” o meio de cultura utilizado foi o Murashige & Skoog (MS), suplementado com vitaminas de Morel e Wetmore, sacarose a 3%, caseína e mio-inositol a 0,01%, ágar a 0,6%, acrescido de BAP a (0; 1; 2; 4 e 6 mgL-1 ), pH ajustado em 5,8, temperatura de 27º±1º C, fotoperíodo de 12 horas e irradiância de 45µmol.m-2.s-1 com luz branca fria. O experimento de estaquia foi conduzido na estufa do Departamento de Biologia/UFS. Para essa técnica foram desenvolvidos dois experimentos, sendo o primeiro com estacas medianas de planta em fase juvenil e o segundo com estacas de plantas em fase reprodutiva. Os tratamentos utilizados foram formados pela combinação tipo de estaca (caule e caule+folha) com concentração de AIB(0; 1 e 2mgL-1), em substrato areia+solo argiloso (2:1). Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância, onde as interações significativas foram analisadas através do teste de Tukey em nível de 5% de probabilidade. Os dados foram analisados como auxilio do software GraphPad Prism, versão 4. De acordo com os resultados obtidos com a propagação in vitro, houve maior formação de calos em plântulas tratadas com 1 mgL-1 de BAP e para a variável brotamento de folhas, o tratamento 2 apresentou diferença significativa estatisticamente. O experimento 1 de estaquia, estaca+folha sem imersão em AIB apresentou maior formação de raízes e folhas novas. Já para estacas em fase reprodutiva, estaca+folha imerso em 1mg L-1 de AIB foi mais efetivo na formação de raízes e folhas. Estacas em fase juvenil e reprodutiva dos tratamentos 4, 5 e 6 apresentaram desidratação, embora algumas delas tenham emitido raízes e pequenas folhas. Estacas mais jovem e sem imersão em AIB, mostraram-se mais adequadas para a técnica de estaquia. De acordo com os resultados das entrevistas, a gindiroba é utilizada em Sergipe como planta medicinal. Entretanto os usuários desconhecem o potencial biotecnológico dessa espécie.

PALAVRAS-CHAVE: Gindiroba, propagação in vitro, estaquia, alternativa biotecnológica.

ABSTRACT

The present work is a study of two techniques for multiplication and conservation of Fevillea trilobata L., and an evaluation of popular knowledge of the related plant. For the multiplication study, techniques were used for propagation “in vitro” and cutting. For the evaluation of popular knowledge of gindiroba was applied a semi-structured questionnaire to sellers who sell seeds and / or natural products in the Municipal Market Albano Franco and in fair-free in Mosqueiro Beach, both located in Aracaju / SE, beyond some sellers from the municipality of Carmópolis / SE. Plant-matrices of gindiroba, sources of explants for micropropagation experiments, were grown in the mini-garden of the Department of Biology / UFS, from seeds provided by EMBRAPA-CPATC. "In vitro" propagation, the culture medium used was Murashige & Skoog (MS), supplemented with vitamins of Morel and Wetmore, 3% sucrose, 0.01% casein and myo-inositol, and 0.6% agar plus the BAP (0, 1, 2, 4 and 6 mgL-1), pH adjusted to 5.8, temperature 27 º ± 1 º C, photoperiod of 12 hours and irradiance of 45µmol.m-2.s-1 with cool white light. The cutting experiment was conducted in the greenhouse of the Department of Biology / UFS. For this technique had been developed two experiments. The first one with medium plant cuttings in juvenile phase and the second with cuttings of plants in reproductive phase. The treatments were formed by the combination type of cutting (stem and stem + leaf) with concentration of AIB (0, 1 and 2mg L-1) in substratum sand + clay soil (2:1). The results were submitted to analysis of variance, where significant interactions were analyzed by the Tukey test at 5% level of probability. The data were analyzed by the software GraphPad Prism, version 4. According to the results of the in vitro propagation, callus formation was higher in seedlings treated with 1 mg/L-1 BAP. For the variable of sprouting of leaves, the treatment 2 showed a statistically significant difference. The cutting experiment 1, cutting + leaf without immersion in AIB showed higher formation of new roots and leaves. For cuttings in reproductive stage, cutting + leaf immersed in 1 mg L-1 of AIB was more effective in the formation of roots and leaves. Cuttings in juvenile and reproductive phase of treatments 4, 5 and 6 had presented dehydration, although some of them have given roots and small leaves. Stakes younger and without immersion in AIB, were most suitable for the technique of cutting. According to the results of the interviews, gindiroba is used as a medicinal plant in Sergipe. However the users are unaware of the biotechnological potential of this species.

KEYWORDS: Gindiroba, in vitro propagation, cutting, alternative biotech.

SUMÁRIO

LISTA DE TABELAS xii

LISTA DE FIGURAS xiii

INTRODUÇÃO 1

CAPÍTULO 1- REVISÃO DE LITERATURA 4

1.1- SOCIEDADE, BIODIVERSIDADE E DESENVOLVIMENTO 5

1.2- FEVILLEA TRILOBATA L. 9

1.2.1- Características físico-químicas 10

1.2.2- Características morfofisiológicas 11

1.2.3- Importância econômica 13

1.3- BIODIESEL 14

1.4- BIOTECNOLOGIA 17

1.4.1- Micropropagação 18

1.4.2- Técnica de estaquia 19

CAPÍTULO 2- METODOLOGIA 22

2.1- Micropropagação 23

2.1.1- Obtenção do material vegetal 23

2.1.2- Desinfestação do material vegetal 23

2.1.3- Meio de cultura, procedimento e armazenamento 23

2.1.4- Tratamentos 23

2.1.5- Desenho experimental 24

2.2- Estaquia 25

2.3- Entrevistas 28

2.4- Análise estatística 29

CAPÍTULO 3- RESULTADO E DISCUSSÃO 30

3.1- Micropropagação 31

3.2- Estaquia 33

3.3- Entrevistas 40

CAPÍTULO 4- CONCLUSÕES 44

CAPÍTULO 5- SUGESTÕES 47

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 49

ANEXOS 56

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 – Influência de BAP em diferentes concentrações na formação de calos em segmento de Fevillea trilobata L. ........................................................................ 31

Tabela 2 – Distribuição do número de entrevistados por localidade. ................................ 37

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 – Cultura de F. trilobata L. localizada no Campo Experimental da Embrapa Tabuleiros Costeiros, situado no Município de Itaporanga D’ajuda/SE. ............... 9

Figura 2 – Flores masculinas em panículas (A) e femininas isoladas (B) de F. trilobata L 11

Figura 3 – Sementes maduras de gindiroba. ....................................................................... 12

Figura 4 – Óleo puro e biodiesel de gindiroba. .................................................................. 13

Figura 5 - Atividade antifúngica do óleo puro de gindiroba sobre duas diferentes cepas de Candida spp comparada com o solvente hexano utilizado para extração e diluição do óleo. .................................................................................................................. 14

Figura 6 – Estantes com inóculos de Fevillea trilobata L. em meio Murashige & Skoog (1962). .............................................................................................................. 24

Figura 7 – Estacas sem folhas (a) e com folhas (b) de plantas em fase juvenil de Fevillea

trilobata L. ......................................................................................................... 25

Figura 8– Estacas de Fevillea trilobata L. com folhas (a e b) e sem folhas (c e d) de plantas em fase reprodutiva ............................................................................................... 26

Figura 9 – Micro-estacas em meio MS apresentando calos após o 8º de inoculação (seta vermelha) e crescimento de folhas 13 dias após a inoculação (seta azul). ........... 30

Figura 10 – Indução do BAP na formação de folhas em segmentos de F. trilobata L. ...... 31

Figura 11 – Influência do AIB , sobre a formação de raízes em estacas em fase juvenil de Fevillea trilobata L. ............................................................................................ 32

Figura 12 – Influência do AIB na formação de folhas novas em estacas em fase juvenil de Fevillea trilobata L. ............................................................................................ 33

Figura 13 – Influência do AIB na massa de folhas novas em estacas em fase juvenil de F. trilobata L. ......................................................................................................... 33

Figura 14 – Estacas de plantas em fase juvenil com 60 dias . ........................................... 34

Figura 15 – Influência do AIB , sobre a formação de raízes em estacas de plantas em fase reprodutiva de Fevillea trilobata L. ................................................................... 35

Figura 16 – Influência do AIB , sobre a formação de folhas em estacas de plantas em fase reprodutiva de Fevillea trilobata L. ................................................................. 36

Figura 17 – Influência do AIB na massa de folhas novas em estacas de plantas em fase reprodutiva de F. trilobata L. ............................................................................. 36

Figura 18 – Usos da gindiroba segundo a medicina popular. ............................................. 38

Figura 19 – Alternativas de propagação da Fevillea trilobata L. ........................................ 39

INTRODUÇÃO

1.0 INTRODUÇÃO

O homem, desde os seus primórdios retira da natureza a sua sobrevivência, mas

diante da exploração, crescimento populacional e a industrialização descontrolada, o

mundo começou a sentir os efeitos negativos na natureza. Uma alteração negativa

marcante que vem sendo estudada e criticada por todas as classes sociais é o chamado

efeito estufa gerado por grandes emissões de gases tóxicos e particulados, principalmente o

CO² liberado pelas indústrias e veículos que utilizam fonte de energia fóssil, ou seja, não

renovável.

Tal problemática levou o governo a investir em novas tecnologias para prevenção e

redução desses gases tóxicos. Uma alternativa foi o investimento em combustíveis

renováveis, dentre eles o biodiesel.

O biodiesel é uma evolução na tentativa de substituição do óleo diesel por

biomassa, iniciada pelo aproveitamento de óleos vegetais “in natura”. A busca de uma

alternativa energética para os combustíveis fósseis retoma a agenda internacional, como

um elemento novo: a crescente preocupação ambiental.

Uma das grandes vantagens do biodiesel é a adaptabilidade aos motores do ciclo

diesel, a viabilidade relacionada à substituição das importações e as vantagens ambientais

inerentes, como a redução de emissão de materiais particulados e de enxofre, que evitará

custos com a saúde pública e diminuição de gases responsáveis pelo efeito estufa.

O aproveitamento de óleos vegetais é, também, benéfico para a sociedade, pois gera

postos de trabalho e aumenta a oferta de fração protéica das oleaginosas – importante

insumo para a indústria de alimentos e de ração animal, além de nitrogenar o solo durante

o crescimento, viabilizando consorciar o plantio de outras culturas.

Entre as alternativas de oleaginosas podemos encontrar a Fevillea trilobata L. ,

conhecida como gindiroba que é uma trepadeira, dióica, perene (SILVEIRA, 1949), na

qual a planta feminina produz frutos que contém sementes riquíssimas em óleo (cerca de

70%). A gindiroba possui um alto potencial biotecnológico, pois além de ser uma grande

produtora de biodiesel, pode também nos beneficiar com várias atividades farmacológicas.

Apesar de tal vantagem em relação ao seu uso biotecnológico, a planta apresenta

uma grande dificuldade de germinação de suas sementes, e as mesmas quando germinadas,

referem-se a 95% de plantas do gênero masculino e apenas 5% do gênero feminino. Tal

fator pode ser decisivo na vida dessa espécie, pois com a exploração de plantas com alto

potencial biotecnológico, a Fevillea trilobata L. poderá entrar em extinção.

Tendo em vista que a propagação vegetativa é uma técnica com grande aplicação

na agricultura, além de ser uma ferramenta com alto potencial para aplicação no

melhoramento vegetal, o presente trabalho teve por finalidade, gerar conhecimentos sobre

a conservação e multiplicação da espécie, bem como apresentar alternativas de utilização

farmacológicas segundo a medicina popular.

CAPÍTULO 1

REVISÃO DE LITERATURA

Capítulo 1 – Revisão de Literatura 5

1.0 -REVISÃO DA LITERATURA

1.1- SOCIEDADE, BIODIVERSIDADE E DESENVOLVIMENTO

O homem sempre tirou da natureza o seu sustento atendendo suas necessidades

básicas, pois ele não vive sem a natureza e a sociedade não se desenvolve sem o meio

ambiente. O crescimento da sociedade bem como o atendimento das suas necessidades são

feitos à custa dos recursos naturais. Entender a natureza tornou-se um caminho para a

melhoria da qualidade de vida humana.

O conceito de natureza vem do latim natura, cujo sentido primitivo é “ação de

fazer nascer”, “nascimento” (KESSELRING, 1992). A dessacralização da natureza, a

quantificação do mundo a peso e medida e a exploração espoliativa, são posicionamentos

filosóficos frente à natureza que contribuem para mudança de atitudes. Dessa forma, a

relação sociedade-natureza aparece subordinada ao capital, a natureza é apenas fonte de

recursos, as unidades de produção passaram a responder à demanda do mercado, visando o

lucro, sem levar em conta possíveis efeitos sobre o meio ambiente e os recursos naturais.

Falar em uma consciência ambiental implica na busca e na consolidação de novos

valores na forma de ver e viver no mundo, a partir da complexidade ambiental, que

possibilita a construção de novos padrões cognitivos na relação homem/natureza, ou seja,

na produção de processos cognitivos que reconheçam a interdependência e o inacabamento

de qualquer ação, de (des)construir e (re)construir o pensamento a partir da ciência, da

cultura e da tecnologia, a fim de mover o processo criativo humano para gerir novas

possibilidades diante dos fenômenos da vida e da sobrevivência a partir da sinergia

existente no tecido social, ambiental e tecnológico (LEFF, 2001).

O meio ambiente é uma realidade histórica e social, seus problemas não podem ser

entendidos isoladamente, os fenômenos acontecem em rede, tudo está interconectado e

interdependente, inseridos nos processos cíclicos da natureza para a manutenção da vida.

As redes constituem o padrão básico de organização de todos os sistemas vivos, esses


sistemas são todos cujas estruturas específicas resultam das interações e interdependência

de suas partes (COIMBRA, 2002; CAPRA, 2001).

O século XX testemunhou o maior e mais rápido avanço tecnológico da história da

humanidade e também as maiores agressões ao meio ambiente, decorrentes de um

desenvolvimento que não considerou os impactos relevantes da revolução industrial e a

finitude dos recursos naturais. Por outro lado, nas últimas décadas, o conceito ecológico

vem se ampliando, dentro de um modelo de desenvolvimento que busca uma relação de

equilíbrio, resgatando uma nova ética na relação do homem com a natureza (SCHRAMM,

1999). Foi então que surgiu o pensamento do desenvolvimento sustentável.

Segundo Leis (1999), o conceito de desenvolvimento sustentável faria parte de um

processo de “adoção oportunista e instrumental [...]”, por parte dos estados e das empresas,

de novos valores trazidos pelo ambientalismo, com o objetivo de garantir a continuidade

do sistema produtivo. Assim, a racionalidade econômica dominante diluiu o potencial

transformador das origens do movimento ambiental, confundindo e dispersando suas ações

(LEFF, 2000).

As causas sociais da insustentabilidade passaram a ser abordadas, e a

sustentabilidade social foi incluída como parte imprescindível do desenvolvimento

sustentável (LELÉ, 1991). Porém, isso não significou o reconhecimento das relações

sociais como responsáveis pela insustentabilidade ecológica.

A necessidade de conciliar desenvolvimento econômico e preservação ambiental,

duas questões antes tratadas separadamente, levou a formação do conceito de

desenvolvimento sustentável. A consciência de que é necessário tratar com racionalidade

os recursos naturais, uma vez que estes podem se esgotar mobiliza a sociedade no sentido

de se organizar para que o desenvolvimento econômico não seja predatório, mas sim

“sustentável”. No entanto o processo de desenvolvimento sustentável, baseado na

manutenção da biodiversidade e no equilíbrio dos ecossistemas, requer mudança completa

no comportamento dos processos humanos de produção diante da natureza (SOARES E

FERREIRA, 2004).


Para Capra (1996; 2001) a crise ambiental é uma crise de paradigmas, fruto de uma

percepção equivocada da não finitude dos recursos naturais. Desta forma, a população e os

governos desenvolvem os seus planejamentos, políticas e práticas sem a preocupação com

a escassez, já que esta não é percebida na sua real dimensão. Esta visão pode ser válida

para a macroeconomia, a qual, desvinculada da visão micro e local de mundo e sua

limitação física e temporal, está buscando mecanismos para a inserção da externalidade

econômica quanto à análise dos recursos naturais, através de instrumentos econômicos.

A consciência ambiental é estruturada, na atualidade, sobre fatos reais e confiáveis:

a existência do chamado “efeito-estufa”, por exemplo, confirmada por meteorologistas e

cientistas renomados, assim como outros problemas ecológicos de natureza global, vem

sendo enfocados por organismos de credibilidade internacional como a ONU, que

notabilizou o seu programa de estudos ambientais (PNUMA, 2003), cuja importância vem

sendo acolhida inclusive pelas classes empresariais dos países em desenvolvimento.

O mundo atual nos apresenta a soberania da ciência e da tecnologia através dos

avanços científicos jamais registrados anteriormente pela história da humanidade. A

ciência e a tecnologia confirmaram benefícios para o homem, mas também possibilitou

comprometimentos negativos relativos ao ambiente social e natural. Esses efeitos

colocaram em pauta a necessidade de uma reapropriação subjetiva do conhecimento. A

inserção das novas tecnologias da informação e comunicação nos processos educativos,

assim como o estímulo a percepção crítica do que é oferecido como novas tecnologias,

poderá induzir que, o homem enquanto sujeito se reaproprie do conhecimento para

promover suas escolhas na perspectiva da construção do pensamento.

Uma nova forma de civilização, fundamentada no aproveitamento sustentável dos

recursos renováveis, não é apenas possível, mas essencial (SACHS, 2002).

Uma tarefa operacional primordial é a de disponibilizar a biotecnologia moderna

para os pequenos fazendeiros, capacitando-os assim, a participarem da segunda revolução

verde (GRIFFON, 1995).


Para os Países tropicais, esta oportunidade é particularmente desafiadora. O clima

tropical, por muito tempo encarado como uma deficiência desponta agora como uma

duradoura vantagem comparativa natural, por permitir produtividades maiores que as

apresentadas nas zonas temperadas. Freqüentemente, diz-se que os recursos naturais

perderam a sua importância diante dos recursos humanos e do conhecimento (SACHS,

2002).

Por mais difícil que possa parecer, essa tarefa não é impossível. Existe, todavia,

uma série de políticas complementares (acesso justo a terra, ao conhecimento, ao crédito e

ao mercado, bem como uma melhor educação rural). Igualmente importante na busca de

uma moderna civilização de biomassa serão os esforços direcionados em favor do

desenvolvimento de uma química verde, como complemento ou até como substituto pleno

da petroquímica, trocando energia fóssil por biocombustíveis (SACHS, 2002).

O Brasil em particular, tem hoje uma chance de pular etapas para chegar a uma

moderna civilização de biomassa, alcançando uma endógena “vitória tripla”, ao entender

simultaneamente os critérios de relevância social, prudência ecológica e viabilidade

econômica, os três pilares do desenvolvimento sustentável (SACHS, 2002).

Enfim, de acordo com Larrère (1997), o objetivo das idéias sustentáveis deveria ser

o do estabelecimento de um aproveitamento racional e ecologicamente sustentável da

natureza em benefício das populações locais, levando-as a incorporar a preocupação com a

conservação da biodiversidade aos seus próprios interesses, como um componente de

estratégia de desenvolvimento.

1.2-FEVILLEA TRILOBATA L.

A Fevillea trilobata L. é uma planta dióica, oleaginosa e perene, pertencente à

família Cucurbitaceae e vulgarmente conhecida como nhandiroba ou gindiroba em Sergipe

e Bahia, é encontrada no Brasil e em países ao norte da América do Sul (CORREA, 1984).

Típica de Mata Atlântica, o seu habitat predominante são lugares sombreados e úmidos,


com solo rico em matéria orgânica, de constante renovação pela ação das águas, como

várzeas de rios e base de encostas (SILVEIRA, 1949).

Em Sergipe podemos encontrar a F. trilobata em suas condições ambientais em

resquícios de Mata Atlântica, a exemplo de Carmópolis e em cultivo no Campo

Experimental da Embrapa Tabuleiros Costeiros, situado no Município de Itaporanga

D’ajuda/SE (Figura 1), servindo assim como local de coleta das sementes para realização

do trabalho em questão.

Figura 1 – Cultura de F. trilobata L. localizada no Campo Experimental da Embrapa Tabuleiros Costeiros,

situado no Município de Itaporanga D’ajuda/SE (Foto: Karla Cunha), 2007.

1.2.1- Características físico-químicas

A primeira tentativa do estudo por Sterllfield sobre a composição química data de

1937, mas somente em 1979, Tullocht e Bergter, empregando principalmente a técnica de

ressonância magnética nuclear de C-13 (RMN 13C), detectaram a presença de ácidos

graxos saturados e insaturados neste óleo (VALENTE, 1996).


As propriedades físico–químicas do óleo da semente da gindiroba foram analisadas

por vários pesquisadores. Os dados mais recentes descrevem: acidez: 0,48%; ponto de

fusão: 21,6 °C; densidade a 15ºC: 0,925g/mL; coloração: 1,8 red e 22,0 yellow; e odor

característic. Além de o óleo apresentar grandes concentrações de esteróides, média

concentração de flavonóides, fósforo e saponinas e inexistência de alcalóides e taninos

(RAMOS, 1986).

Observa-se que em termos quantitativos ao teor de lipídios encontrados foi superior

ao das sementes oleaginosas já comercializadas a exemplo da soja (17%), algodão (15%),

amendoim (40-43%), dendê (20%), girassol (28-48%), mamona (43-45%) e pinhão manso

(50-52%). Os constituintes majoritários no mesocarpo foram os ácidos palmíticos

(26,53%), ácido esteárico (20,47%), ácido oléico (10,86%) e ácido linoléico (7,97%). Nas

amêndoas foram detectados os ácidos palmíticos (30,97%), ácido esteárico (16,03%), ácido

oléico (12,60%) e o ácido linoléico (7,85%). O resultado da análise do óleo da semente de

F. trilobata apresentou 48% de gordura saturada. As análises físicas das sementes

apresentam 71,7% de amêndoa; 27,0% de casca e 1,3% de mesocarpo (RAMOS, 1986).

A composição centesimal da amêndoa foi 5,64% de umidade; 51,48% do teor de

lipídios; 33,1g/100g de proteína; 1,85g de fibra; 8,1% de amido e 0,046g de cinza,

enquanto que no mesocarpo foram encontrados 4,18% de umidade; 37,38% de lipídios;

31,1g/100g de proteínas; 6,30g de fibra e 0,035g de cinza (RAMOS, 1986).

Análises feitas com o extrato metanólico da amêndoa da semente deram conta de

alguns compostos polares, foram eles: quatro norcucurbitacinas glicosiladas, três

norcucurbitacinas diglicosiladas e uma heptanocucurbitacinas (VALENTE, 1996).

Das sementes da gindiroba, a amêndoa é parte da planta com possibilidades de

extração de óleo para produção de biodiesel, uma vez que o porcentual de óleo bruto

extraído pode chegar a 70% do seu peso/volume. Assim, 1kg de sementes pode gerar uma

até 700mL de óleo bruto (RAMOS, 1985).


1.2.2 - Características morfofisiológicas

A gindiroba apresenta flores de cor amarela ou rósea, as masculinas em panículas

(figura 2), as femininas separadas, raramente em pares (figura 2). Frutos arredondados e

casca resistente de 2mm de espessura, com 6 a 14 sementes redondas, tão juntas que

formam uma bola de aproximadamente 4,5cm de diâmetro. Sem a casca, a semente tem

um sabor amargo forte (RÊGO; XAVIER-FILHO, 2003).

Figura 2 – Flores masculinas em panículas (A) e femininas isoladas (B) de F. trilobata L. (Foto: Karla

Cunha) 2007.

As sementes são irregularmente circulares com 2,5 a 3,5cm de largura, formadas

por três camadas distintas. A primeira camada é amarelada, tenra, fácil de destruir pelo

atrito, corresponde à amêndoa. A camada média e escura, muito delgada, quebradiça

formada de fibras muito curtas aglutinadas, perpendiculares à sua superfície, ou irradiando

do centro da amêndoa para sua circunferência, o mesocarpo. A camada mais externa, a

casca, é escura, dura e resistente (Figura 3).

A BA


Figura 3 – Sementes maduras de gindiroba (Foto: Evandro Tupinambá), 2007.

Cunha et al. (2007a) demonstraram que sementes de F. trilobata L. que receberam

diferentes tratamentos para quebra de dormência quando submetidas a testes de

germinação apresentaram melhor desenvolvimento, em termos de tempo e quantidade de

sementes, quando tratadas com escarificação ou quando cultivadas ao natural, mas ainda

assim, apresentava valores baixos de germinação.

Cunha et al. (2007b) ainda em pesquisas, concluíram que o período de 15 dias após

coleta das sementes, representa mais fidedignamente o período de maior produtividade de

óleo, alcançando valores de até 70%.

Tupinambá et al. (2007) em estudos preliminares, demonstraram que a gindiroba

com um ano de plantada, produz cerca de 13 frutos por planta, pesando por volta de 32,3 a

77,2 g por fruto o qual produz em torno de 3 a 17 sementes, gerando uma produtividade de

268,5 Kg/ha. Quanto à extração de óleo das amêndoas foi constatado que de cada 1000g

utilizados na extração, eram obtidos 685 mL de óleo bruto, e após a transesterificação esse

volume variava de 380 a 430 mL de biodiesel (Figura 4).


Figura 4 – Óleo puro e biodiesel de gindiroba (Foto: Sheila Alves), 2008.

1.2.3 - Importância econômica

Além da potencial produção do biodiesel, a presente atividade antimicrobiana do

óleo sobre a bactéria Staphylococcus aureus, abriu possibilidade de confecção de sabões

para o tratamento de infecções na pele visto os resultados significativos obtidos em

laboratório (RAMOS, 1986).

A F. trilobata já há muito tempo é usada na medicina popular. A fécula que se

extrai da raiz é denominada “tapioca de purga” ou “goma de batata” e é empregada no

combate ás doenças exantematicas (febres eruptivas). As sementes, na forma de chá, são

conhecidas como febrífugas, tônicas, estomáticas, eméticas e emenagogas. É ainda usada

como anti-helmíntica (principalmente contra ancilostomíase), e com atividade contra

afecções renais causadas pela febre amarela (CORRÊA, 1984; CASTRO, 1940).

É indicada também contra flatulência, prisão de ventre e cólicas intestinais bem

como na icterícia e outras doenças hepáticas. O óleo das sementes é usado topicamente

como, antiofídico, contra picada de escorpião e ferroada de abelha, e também para erisipela


e impigens, mas principalmente como anti-reumático friccionando-se o óleo sobre a região

dolorida (CORRÊA, 1984; CASTRO, 1940). É ainda possível, a utilização do óleo como

antifúngico combatendo a candidíase (Figura 5).

Figura 5 - Atividade antifúngica do óleo puro de gindiroba sobre duas diferentes cepas de Candida spp

comparada com o solvente hexano utilizado para extração e diluição do óleo (Foto: Sheila Alves,

2007).

1.3 - BIODIESEL

Biodiesel é o nome de um combustível alternativo de queima limpa, produzido de

recursos renováveis. O biodiesel não contém petróleo, mas pode ser adicionado a ele

formando uma mistura; pode ser usado num motor de ignição a compressão (diesel) sem

necessidade de modificação. O biodiesel é simples de ser usado, biodegradável, não tóxico

e essencialmente livre de compostos sulfurados e aromáticos (PARENTE, 2003).

O biodiesel é fabricado através de um processo químico chamado

“transesterificação”, na qual a glicerina é separada da gordura ou do óleo vegetal. O

processo gera dois produtos: ésteres (o nome químico do biodiesel) e glicerina-produto

valorizado no mercado de sabões (PARENTE, 2003). O biodiesel de qualidade deve ser

produzido seguindo especificações industriais restritas, em nível internacional tem-se a

ASTM D6751; no Brasil, recentemente, a Agência Nacional do Petróleo (ANP) emitiu a

portaria nº 255, especificando as características do produto.


Nos EUA o biodiesel é o único combustível alternativo a obter completa aprovação

no Clean Air Act de 1990 e autorizado pela Agência Ambiental Americana (EPA) para

venda e distribuição. Os óleos vegetais puros não estão autorizados a serem utilizados

como óleo combustível. A lei que regulamenta o biodiesel no Brasil é a de nº 11097, de

janeiro de 2005, na qual estão especificadas todas as regras para sua produção e

comercialização de biodiesel.

No Brasil os estudos acerca de combustíveis alternativos iniciaram na década de

1970, com a experiência do Proálcool, o qual foi implementado em razão do choque do

petróleo (PLÀ, 2002). A idéia de utilizar o biodiesel no Brasil surgiu na Universidade do

Ceará, nos últimos anos da década de 70. O uso do biodiesel como combustível poderá se

tornar um apoio às políticas governamentais na área social e ambiental, tendo em vista a

contribuição que este combustível poderá representar para a atividade econômica do país.

Dentre elas pode-se destacar (MCT, 2005):

• Criação de emprego e geração de renda no campo;

• Redução dos índices de emissões de gases causadores do efeito estufa;

• Redução da emissão de poluentes locais com melhorias na qualidade de vida e da saúde

pública;

• Possibilidade de utilização dos créditos de carbono vinculados ao mecanismo de

desenvolvimento limpo decorrentes do Protocolo de Quioto;

• Uso de terras inadequadas para a produção de alimentos;

• Diversificação da matriz energética.

Em oposição a essas vantagens, a viabilidade econômica para o uso comercial do

biodiesel ainda requer análises mais aprofundadas, que deverão envolver, além das

variáveis meramente econômicas, a mensuração das vantagens indiretas com a utilização

de um combustível de origem renovável e a maior utilização de mão-de-obra na cadeia

produtiva, promovendo, assim, a inclusão social dos brasileiros menos favorecidos (MCT,

2005), além da possibilidade de o País se beneficiar dos créditos de carbono, advindos dos

projetos de produção de combustíveis renováveis, dentre outras ações.

O desenvolvimento de um projeto dessa envergadura requer análises detalhadas e

integradas das condições necessárias para sua implantação, em especial as relacionadas


com as garantias de oferta regular e qualidade do produto e suas conseqüências para os

usuários, logística de produção e distribuição (MCT, 2005).

A exemplo do que ocorreu com o programa de produção de etanol, existe a

possibilidade de uma redução dos custos de produção de biodiesel pelo aproveitamento dos

subprodutos e otimização das cadeias de fornecimento de insumos, ou seja, com o

aprendizado e a organização da cadeia produtiva do biodiesel novas possibilidades surgirão

para contribuir para sua viabilização (MCT, 2005).

Dentro do projeto brasileiro de biodiesel existem estudos que visam apoiar e

difundir novas tecnologias. Dentre as principais diretrizes do programa estão:

• Sustentabilidade da matriz energética: desenvolver tecnologias ambientalmente corretas;

• Sustentabilidade e autonomia energética comunitária: propiciar às comunidades isoladas,

agricultores e assentamentos disporem de energia elétrica;

• Conquista e manutenção da liderança do Brasil como biotrade.

As propostas envolvem a formação de equipes multidisciplinares, parcerias

organizacionais e a mobilização das competências para atuar no programa resolvendo seus

principais entraves (MCT, 2005). Especificamente em relação ao biodiesel, a atuação na

cadeia produtiva visa, preliminarmente, dentre outras ações:

• Propiciar o adensamento energético da matéria-prima, tendo como referencial 2.000

kg/há-1 de óleo para curto prazo e de 5.000 kg/há-1 para longo prazo;

• Aprimorar as atuais rotas de produção de biodiesel, com valorização do etanol como

insumo, e desenvolvimento de novas rotas;

• Desenvolver tecnologias para racionalização do uso de energia na propriedade e

substituir fontes de carbono fóssil por fontes renováveis.

Em síntese, o programa brasileiro de biodiesel tem programas, metas e ações bem

definidas para os próximos anos. Embora planejar não seja a garantia de execução, já é um

passo na direção de tornar o Brasil um player importante no cenário mundial.


1.4 - BIOTECNOLOGIA

Todas as formas de melhoramento de plantas envolvem a seleção. Há 10.000 anos

que este processo se realiza, por meios progressivamente mais científicos, conduzindo a

maiores ganhos em produtividade, conservação, qualidade e diversidade das plantas

exploradas. O mais recente estágio de desenvolvimento da tecnologia de melhoramento de

plantas é a moderna biotecnologia. Os ganhos que se podem atingir pela biotecnologia de

plantas têm reflexo sobre os agricultores, a indústria alimentar, os consumidores e,

sobretudo, o meio ambiente (OLIVEIRA, 2003).

O desenvolvimento tecnológico recente, especialmente com relação à biotecnologia

abriu inúmeras oportunidades para investimento no aproveitamento sustentável dos

recursos genéticos e da diversidade biológica. Atualmente as novas técnicas de exploração

dessa biodiversidade permeiam o conceito conservacionista, através do manejo sustentado.

Objetivando-se não somente o ganho econômico, mas, principalmente a conservação dos

recursos naturais (ODALIA-RÍMOLI, et al., 2000).

A biotecnologia em seu sentido mais amplo compreende a manipulação de

microorganismos, plantas e animais, objetivando a obtenção de processos e produtos de

interesse púbico. Desta maneira, toda atividade que envolva a aplicação dos conhecimentos

de fisiologia, bioquímica e genética, é considerada como técnica biotecnológica, podendo

assim, ser uma ferramenta importante para tentar solucionar as dificuldades encontradas na

propagação da F. trilobata. Em seu senso mais restrito as biotecnologias estão associadas

ao emprego das técnicas modernas de biologia molecular e celular, incluindo entre outros,

o uso das técnicas de propagação vegetal (FERNANDES, 2003).

Uma das principais características das biotecnologias modernas são sua

abrangência ampla e seu caráter multidisciplinar. Assim biotecnologias apropriadas seriam

aquelas que contribuem com o desenvolvimento sustentável por serem tecnicamente

viáveis no atual contexto de desenvolvimento técnico-científico do país, proporcionarem

benefícios mensuráveis aos destinatários, serem ambientalmente seguras, sócio-

economicamente e culturalmente aceitáveis no atual estágio de desenvolvimento do país,


entre as quais, podemos citar a micropropagação e a estaquia vegetal, duas ferramentas de

alto poder biotecnológico (GUERRA & NODARI, 2006).

Dentro deste contexto a biotecnologia deve ser entendida como mais uma forma de

propiciar a conservação da biodiversidade, através de ferramentas biotecnológicas como: a

utilização dos seres vivos (vegetais, animais e microorganismos) ou dos seus produtos no

processamento de materiais para produzir bens de consumo ou serviços, incluindo-se para

tal, as aplicações dos atuais métodos científicos e das técnicas de modificação, de

melhoramento e de conservação dos sistemas biológicos (ODALIA-RÍMOLI et al., 2000).

1.4.1-Micropropagação

A micropropagação é uma técnica com grande aplicação na agricultura. Nessa

técnica, pequenos fragmentos de tecido vivo, chamados explantes são isolados de um

organismo vegetal, desinfestados e cultivados assepticamente, por períodos indefinidos em

um meio de cultura apropriado. O objetivo é obter uma nova planta idêntica a original, ou

seja, realizar uma clonagem vegetal que é definida como uma propagação assexuada de

células ou organismos de modo a obter novo indivíduo, mantendo-se o genótipo idêntico

àquele do ancestral comum (TORRES et al., 2000).

As diferentes formas de propagação promovem a captura do fator genético da

planta-matriz com suas características desejadas. Com a recombinação gênica, as plantas

resultantes destes processos possuem uma uniformidade de crescimento e morfologia

(ASSIS & TEIXEIRA, 1998).

A micropropagação pode ser empregada para a multiplicação de espécies de difícil

propagação, como por exemplo, algumas espécies nativas do Cerrado. Outro exemplo de

grande importância é a limpeza clonal por meio da qual é possível, em algumas espécies,

como abacaxi, citrus, morango, batata e outras, a produção de mudas livre de vírus

(FERREIRA et al., 1998).


A propagação por meio de micropropagação pode ser feita por via direta ou

indireta, esta última, via formação de calos que é considerada uma forma potencial de

propagação em massa (PIERIK, 1987; LANDA et al., 2000). Estudos com calos devem ser

desenvolvidos para determinar as condições de cultura que os explantes requerem para

sobreviver e crescer (SIQUEIRA & INOUE, 1992).

O cultivo de calos pode ser utilizado para se estudar o desenvolvimento celular,

explorar produtos provenientes do metabolismo primário e secundário, obter suspensão

celular e propagação via formação de gemas ou embriões somáticos (LANDA et al., 2000).

A variabilidade genética é a base para um programa de melhoramento e,

normalmente, conservada em acesso de bancos de germoplasma in vivo. No entanto, em

alguns casos, sobretudo, em espécies propagadas vegetativamente, a manutenção in vitro é

uma alternativa menos dispendiosa que in vivo. A micropropagação vegetal também pode

aumentar a variabilidade genética pela variação somaclonal ou dando suporte para outras

técnicas como a introgressão de genes e a transformação genética. Finalmente a

micropropagação permite a multiplicação do material genético, auxiliando a troca de

germoplasma para avaliação em diversos ambientes, como por exemplo, a multiplicação de

genótipos para análise em experimentos replicados (FERREIRA et al., 1998).

1.4.2- Técnica de estaquia

Segundo Pasqual et al. (1997) e Hartmann et al. (2002) a estaquia é um processo de

propagação altamente desejável, notadamente pelo fato de as plantas originadas serem

idênticas entre si e a planta matriz, além de simples, rápido e não requer técnicas especiais

como no caso da enxertia, em que pode haver problemas de incompatibilidade entre o

porta-enxerto e o enxerto. É ainda uma técnica de multiplicação vegetativa apropriada para

a produção de mudas de plantas em grande quantidade e qualidade (FLORIANO, 2004).

O termo estaquia é usado para designar o processo de propagação no qual ocorre a

indução do enraizamento adventício em segmentos destacados da planta mãe, que em


condições favoráveis, originam uma nova planta. O termo estaca é utilizado para

denominar qualquer segmento de uma planta, com pelo menos uma gema vegetativa, capaz

de originar uma nova planta, podendo haver estacas de ramos, raízes e folhas

(FACHINELLO et al., 1995).

A estaquia é preferida por possibilitar um maior rendimento do número de mudas

obtidas e conseqüentes reduções de custos. O sucesso de sua utilização é variável devido a

uma série de fatores, quer sejam de natureza genética ou ambiental, necessitando-se de

estudos mais aprofundados para cada espécie (FACHINELLO et al., 1995).

Alguns fatores podem influenciar a propagação por estaquia, entre eles a posição da

estaca no ramo, pelo grau de lignificação, quantidade de reservas e diferenciação dos

tecidos, o tipo de substrato, pelas suas características químicas e físicas, o genótipo, as

condições fisiológicas da planta matriz e as condições ambientais, além dos resultados

poderem ser melhorados com um tratamento prévio das estacas com hormônios vegetais

(HARTMANN et al., 2002).

A presença de folhas e gemas influenciam bastante na formação de raízes em

estacas. O efeito estimulante de folhas no início da formação de raízes tem, em geral, sido

atribuído à produção de carboidratos pela fotossíntese, auxina endógena e cofatores de

enraizamento sintetizados pelas folhas e a regulação do estado hídrico na estaca

(FACHINELLO et al., 2005).

O método de propagação por estacas é baseado na capacidade na regeneração de

tecido e na emissão de raízes (Meletti, 2000). A formação de raízes adventícias se deve a

interação de vários fatores existentes dos tecidos e a translocação de substâncias

localizadas nas folhas e gemas. Os reguladores de crescimento são de fundamental

importância (FACHINELLO et al., 2005).

Segundo Floriano (2004), os fatores ambientais mostram que as estacas são

sensíveis às variações de temperatura e umidade, assim com a incidência luminosa e o

fotoperíodo a que a planta é exposta na área de cultivo precisam ser controlados para não

haver ressecamento.


Os hormônios vegetais, em pequenas quantidades, inibem ou aceleram

qualitativamente o crescimento e o desenvolvimento de plantas. Podem ser usados na

propagação visando possibilitar ou acelerar a formação de raízes de estacas de espécies que

apresentem difícil enraizamento (PASQUAL et al., 2001). Os principais hormômonios

utilizados são o ácido indolacético (AIA), ácido naftaleno acético (ANA) e o ácido

indolbutírico (AIB) (FLORIANO, 2004).

O grupo de reguladores de crescimento usado com maior freqüência é o das auxinas

(HINOJOSA, 2000). O ácido indolbutirico (AIB), além de ser o hormônio sintético mais

recomendado para a propagação vegetativa devido ao seu caráter fotoestável, atóxico e não

ser biodegradado, nos tratamentos de estaquia promove a indução do número e qualidade

das raízes (HOFFMANN et al., 1996).

As estacas de muitas espécies de plantas enraízam com facilidade numa grande

diversidade de meios, porém, em plantas que as estacas apresentem essa dificuldade, o

substrato é um dos fatores que mais influenciam nesse processo, com reflexo direto na

porcentagem de raízes formadas e na qualidade das mesmas (HOFFMANN et al., 1996).

CAPÍTULO 2

METODOLOGIA

Capítulo 2 – Metodologia 23

2 - METODOLOGIA

2.1 – MICROPROPAGAÇÃO

2.1.1 – Obtenção do material vegetal

Plantas-matrizes de gindiroba (Fevillea trilobata L.), fontes de explantes para

experimentos de micropropagação, foram cultivadas no do mini-horto do Departamento

de Biologia/UFS, oriundas de sementes fornecidas pela EMBRAPA-CPATC.

2.1.2 – Desinfestação do material vegetal

Segmentos internodais com 2cm de comprimento, foram desinfestados através de

lavagem em uma solução com três gotas de detergente em água destilada autoclavada,

durante 10 minutos, seguido de imersão rápida em álcool a 70%, enxágüe em água

destilada autoclavada. Em seguida o material foi imerso em hipoclorito de sódio (NaClO),

1% de cloro ativo, durante vinte minutos, seguido de enxágüe com água destilada

autoclavada.

2.1.3 – Meio de cultura, procedimento e armazenamento

O meio de cultura utilizado foi o Murashige & Skoog (1962), chamado de MS,

suplementado com vitaminas de Morel e Wetmore (1951), sacarose a 3%, caseína e mio-

inositol a 0,01% e ágar a 0,6%. O pH foi ajustado em 5,8 antes da autoclavagem.

Todo o procedimento de inoculação foi executado em câmara de fluxo laminar

previamente desinfetada com álcool a 70% e luz UV por 15 minutos. Os explantes foram

inoculados em tubos de ensaio contendo 10 mL de meio de cultura e em seguida foram


transportados para a sala de crescimento e mantidos a temperatura de 26º±1º C e

fotoperíodo de 12 horas, com irradiância de 45µmol.m-2.s-1 com luz branca fria (Figura 6).

Figura 6 – Estantes com inóculos de Fevillea trilobata L. em meio Murashige & Skoog (1962). Foto: Karla

Cunha

2.1.4 – Tratamentos

Foram testados quatro concentrações do fitormônio benzilaminopurina (BAP) (1; 2;

4 e 6 mgL-1) mais o controle , sem BAP.

2.1.5 – Desenho experimental

O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualisados com cinco

tratamentos e dez repetições onde buscou-se observar as seguintes variáveis: a) presença de

calos; b) presença de folhas. Foram feitas 3 observações em intervalos de 7 dias. A

unidade experimental foi constituída de um explante por tubo de ensaio.


2.2 - ESTAQUIA

2.2.1 – Obtenção e seleção das estacas de Fevillea trilobata L.

As estacas foram obtidas de plantas cultivadas no mini-horto do Departamento de

Biologia/UFS. Após coleta de ramos de gindiroba, foram selecionadas estacas da região

mediana medindo 15 cm de comprimento contendo apenas um nó por estaca.

2.2.2 – Tipos de experimentos

Foram instalados dois experimentos, o primeiro com estacas retiradas de plantas em

fase juvenil e o segundo com ramos de plantas em fase reprodutiva.

2.2.3 – Experimento 1: Estacas obtidas de plantas em fase juvenil

Os tratamentos utilizados foram formados pela combinação tipo de estaca (caule e

caule+folha) tratadas com AIB (0, 1 e 2mgL-1), perfazendo um total de 6 tratamentos, com

20 repetições sendo a unidade experimental representada por 1 estaca. O delineamento

experimental utilizado foi o de blocos completamente casualizados. Detalhando os

tratamentos, encontramos:

T1- caule com folha + 0mg L-1 AIB T2- caule com folha + 1mg L-1 AIB T3- caule com folha + 2mg L-1 AIB T4- caule sem folha + 0mg L-1 AIB T5- caule sem folha + 1mg L-1 AIB T6- caule sem folha + 2mg L-1 AIB

As estacas foram obtidas de segmentos de caule com 15 cm de comprimento, cuja

base, cortada em bisel foi mergulhada em solução líquida de AIB por 10 minutos. Após o

tratamento, as estacas foram colocadas em sacos plásticas cujo substrato foi composto por

areia+solo argiloso (2:1). O experimento foi desenvolvido em condições semi-controladas,


na estufa do Departamento de Biologia/UFS. As estacas foram regadas uma vez ao dia

(Figura 7).

Figura 7 – Estacas sem folhas (a) e com folhas (b) de plantas em fase juvenil de Fevillea trilobata L.

Para coleta foi utilizado o método destrutivo, onde em intervalos de 15 (quinze)

dias, através de sorteio eram avaliadas quatro estacas por tratamento perfazendo um total

de cinco coletas.

2.2.4 – Experimento 2 – Estacas obtidas de plantas em fase reprodutiva

Os tratamentos utilizados foram formados pela combinação tipo de estaca (caule e

caule+folha) imersos em AIB (0, 1 e 2mgL-1), perfazendo um total de 6 tratamentos, com

20 repetições, sendo a unidade experimental representada por duas estacas (verificar

modelo do experimento 1). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos

completamente casualizados (figura 8).

a

b


Figura 8– Estacas de Fevillea trilobata L. com folhas (a e b) e sem folhas (c e d) de plantas em fase

reprodutiva.

A base das estacas foi cortada em bisel e tiveram 2,0cm da sua base mergulhadas

em solução líquida de AIB por um período de 10 minutos. Em seguida, as estacas foram

colocadas em copos descartáveis contendo como substrato areia+solo argiloso (2:1) em

condições semi-controladas, na estufa do Departamento de Biologia/UFS, as quais eram

regadas uma vez ao dia.

Assim como no experimento 1, para a coleta de dados foi utilizado o método

destrutivo. Em intervalos de 15 dias, através de sorteio eram analisadas 4 (quatro) estacas

por tratamento perfazendo um total de 5 (cinco) coletas.

a b

d c


2.2.5 – Variáveis

As variáveis analisadas para os dois experimentos foram a massa fresca das raízes,

massa seca das raízes, presença de folhas novas, massa fresca das folhas novas, massa seca

das folhas novas.

Para determinar a massa fresca das raízes e folhas novas foi utilizada uma balança

analítica And modelo HR200. Para a obtenção da massa seca das raízes e folhas novas

utilizou-se estufa de secagem onde as raízes permaneceram por um período de 12 horas a

temperatura de 50ºC e logo foi feito o aferimento do peso.

2.3 – ENTREVISTAS

Foram realizadas 32 entrevistas semi-estruturadas direcionadas aos vendedores que

comercializam sementes e/ou produtos naturais no Mercado Municipal Albano Franco e

da feira-livre da praia do Mosqueiro, ambos situados em Aracaju/SE. Ainda foram

escolhidos alguns proprietários do município de Carmópolis localizado no sertão do Estado

de Sergipe. A escolha deste município foi devido ao conhecimento da existência da planta

em seu entorno. As entrevistas foram realizadas no período de agosto a dezembro de 2008.

O conteúdo das entrevistas foi elaborado de modo a analisar a importância da gindiroba

quanto a sua ação na terapêutica de algumas enfermidades segundo a medicina popular,

bem como o conhecimento da população enquanto uma espécie produtora de biodiesel. As

entrevistas foram feitas individualmente e todas registradas por escrito.


2.4 – ANÁLISE ESTATÍSTICA

Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância, onde as interações

significativas foram analisadas através do teste de Tukey em nível de 5% de probabilidade.

Os dados foram analisados como auxilio do software GraphPad Prism, versão 4.

CAPÍTULO 3

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Capítulo 3 - Resultados e discussão 31

3.0 - RESULTADOS

3.1 – MICROPROPAGAÇÃO

As estacas de Fevillea trilobata L. não apresentaram sinais de oxidação após coleta.

A imersão do material vegetal em NaClO a 2% durante o processo de desinfestação

mostrou-se eficiente para o controle fitossanitário, além de não acelerar o processo de

oxidação por liberação de compostos fenólicos. Após inoculação dos segmentos, foram

feitas três avaliações quantitativas em intervalos de sete dias, buscando analisar a formação

de calos e folhas (Figura 9).

Figura 9 – Micro-estacas em meio MS apresentando calos após o 8º de inoculação (seta vermelha) e

crescimento de folhas 13 dias após a inoculação (seta azul).

3.1.1 – Surgimento de calos

Foi observado que nos tratamentos com BAP houve formação de calo a partir do

oitavo dia após inoculação e apenas o primeiro tratamento começou a responder ao

tratamento após o décimo quinto dia. As plantas dos tratamentos 2, 3, 4 e 5 começaram a

formar calos a partir do oitavo dia, mas apenas no tratamento com 1mg L-1 de BAP obteve-

se maior formação de calos, ou seja, nas dez repetições, houve a formação de calos em

nove.


Diante do exposto é possível avaliar que a planta (Fevillea trilobata L.) respondeu

mais, ao tratamento com 1mgL-1 de BAP (tabela 1).

Tabela 1 – Influência de BAP em diferentes concentrações na formação de calos em segmento de Fevillea

trilobata L.

Presença de calos

Dias após inoculação T1 T2 T3 T4 T5

0 a 7 0 0 0 0 0

8 a 14 0 9 4 4 2

15 a 21 1 0 0 0 0

Após esse período os explantes apresentaram rápida oxidação, provavelmente

devido à ação do etileno, levando a morte dos explantes.

3.1.2 – Surgimento de folhas

A figura 10 mostra a ação dos tratamentos no desenvolvimento de folhas, onde

planta com 1 mgL-1 de BAP no período de 21 dias respondeu mais ao tratamento. Segundo

Santos (2001) na indução de brotações em segmentos nodais de salix (Salyx humboldtiana

Willd.), em função da utilização do BAP, houve maior número de brotações ao utilizar

1mgL-1 de BAP.

7 14 210.0

0.5

1.0T1

T2

T3

T4

T5

Dias após inoculação

Pre

se

nç

a d

e f

olh

as

Figura 10 – Indução do BAP na formação de folhas em segmentos de Fevillea trilobata L.


3.2 – ESTAQUIA

Experimento 1 - Estacas medianas com e sem folhas de plantas em fase juvenil de Fevillea

trilobata L. submetidas a 0; 1 e 2mgL-1 de AIB.

A – Massa fresca e seca das raízes

15 30 45 60 750.0

0.5

1.0

1.5T1

T2

T3

T4

T5

T6

Dias após implantação

Mas

sa f

resc

a(g

)

15 30 45 60 750.0

0.1

0.2

0.3T1

T2

T3

T4

T5

T6


Ma

ssa

sec

a(g

)

Figura 11 – Influência do AIB , sobre a formação de raízes em estacas de plantas em fase juvenil de Fevillea

trilobata L.


Aos 15 e 60 dias após implantação do experimento, o T3 (caule com folha + 2mg

L-1 BAP) apresentou diferença significativa pelo teste Tukey ao nível de 5% em relação

aos outros tratamentos. Em T2 (caule com folha + 1mgL-1 BAP) houve diferença

significativa apenas no 30º dia, mas na comparação do desenvolvimento rizogênico entre

as estacas, verificou-se que o T1 apresentou diferença estatística ao 75º dia após a

implantação do experimento (Figura 11).

O efeito estimulante de folhas no início da formação de raízes tem, em geral, sido

atribuído à produção de carboidratos pela fotossíntese, auxina endógena e cofatores de

enraizamento sintetizados pelas folhas e a regulação do estado hídrico na estaca

(FACHINELLO et al., 2005). Estacas de gindiroba dos tratamentos 4, 5 e 6 apresentaram

desidratação, embora algumas ainda tenham formado raízes(Figura 12).

Figura 12 – Estacas de plantas em fase juvenil com 60 dias (Foto: Karla Cunha, 2008).

T1 T2

T3 T4 T5 T6


B – Presença de folhas novas, massa fresca e seca

15 30 45 60 750

10

20

30T1

T2

T3

T4

T5

T6

Dias após inoculação

Nº

de

folh

as n

ova

s

Figura 13 – Influência do AIB na formação de folhas novas em estacas de plantas em fase juvenil de

Fevillea trilobata L.

15 30 45 60 750

1

2

3

4

5

6

7

8T1

T2

T3

T4

T5

T6


Mas

sa f

resc

a (g

)


15 30 45 60 750

1

2

3T1

T2

T3

T4

T5

T6


Mas

sa s

eca

(g

)

Figura 14 – Influência do AIB na massa de folhas novas em estacas de plantas em fase juvenil de F.

trilobata L.

Ao verificar a formação de folhas novas e suas massas (fresca e seca) foi observado

que houve diferença estatística apenas para o tratamento 1(caule com folha + 0mg L-1

BAP), concordando com Ferreira (2000) quando fala que o uso de auxinas auxilia na

formação de raízes e conseqüentemente na formação de folhas, porém não é uma técnica

essencial (Figuras 13 e 14). As concentrações de fitorreguladores devem variar mediante

estudo aprofundado para a sensibilidade da espécie que se está trabalhando, tendo em vista

os vários níveis de absorção e necessidades da planta (Hartmann et al., 2002, apud Pio et

al., 2006). Pio et al. (2006) ainda ressaltam que os benefícios conseguidos com

fitorreguladores tornam-se inviáveis quando observada a concentração de auxina endógena

de reserva na estaca.

Ainda vale lembrar que segundo Hartmann et al. (2002), a auxina natural é

sintetizada principalmente em gemas apicais e em folhas jovens e, de maneira geral, move-

se através da planta, do ápice para a base, o que favoreceu um maior desenvolvimento em

estacas na fase juvenil e com presença de uma folha.


Experimento 2 - Estacas medianas com e sem folhas de plantas em fase

reprodutiva de Fevillea trilobata L. submetidas a 0; 1 e 2mg L-1de AIB.

A - Massa fresca e seca das raízes

15 30 45 60 750.00

0.25

0.50

0.75

1.00

1.25T1

T2

T3

T4

T5

T6


Mas

sa f

resc

a (g

)

15 30 45 60 75

0.0

0.1

0.2T1

T2

T3

T4

T5

T6


Mas

sa

se

ca (

g)

Figura 15 – Influência do AIB sobre a formação de raízes em estacas de plantas em fase reprodutiva de


Houve uma efetiva formação de raízes nos tratamentos 1, 2 e 3, em que as estacas

tinham um par de folhas. Entretanto os valores obtidos no tratamento 2 foram maiores e

estatisticamente diferentes dos demais durante o período estudado (Figura 15).

Nos tratamentos em que as estacas não tinham folhas (T4,T5 e T6), não houve

formação de raízes. Como pode ser verificado as folhas exerceram um papel fundamental

sobre a formação de raízes, independente da utilização do AIB. Essses resultados

concordam com Meletti & Nagai (1992) quando em estudo de estaquia em maracujazeiro

amarelo e doce, verificaram que as folhas são determinantes no enraizamento. Segundo

Taiz & Zeiger(2004), a biossíntese de auxina está associada aos tecidos onde ocorre uma

rápida divisão celular e crescimento, especialmente nas partes aéreas. A auxina tem ainda

papel fundamental na formação de raízes adventícias, que podem surgir em vários tipos de

tecidos a partir de células maduras que retomam sua atividade de divisão celular.


Para a variável massa seca de raízes, o tratamento 2 (Figura 15) apresentou valores

maiores e estatisticamente diferentes dos demais, desde os 30 dias após a implantação do

experimento, estes dados diferem dos de Nogueira (1995) que trabalhando com

enraizamento de estacas de figueira, obteve resultados na ausência de AIB, ocorrendo

queda potencial de enraizamento com a aplicações de sucessivas concentrações desse

fitorregulador.

Com o aumento da concentração de auxinas de 1 para 2mg L-1, verificou-se um

decréscimo na formação de raízes. Ainda verifica-se que a aplicação exógena de auxina

promove o enraizamento de estacas em muitas espécies (Inoue & Putton, 2007; Goulart et

al. 2008); no entanto, sabe-se que isso acontece até um valor máximo, ou seja, qualquer

valor acima poderá ter efeito inibitório ou fitotóxico.

B – Presença de folhas novas, massa fresca e seca

15 30 45 60 750.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5T1

T2

T3

T4

T5

T6


Nº

de

folh

as n

ova

s

Figura 16 – Influência do AIB sobre a formação de folhas em estacas de plantas em fase reprodutiva de


15 30 45 60 750.00

0.25

0.50

0.75

1.00

1.25T1

T2

T3

T4

T5

T6


Mas

sa f

resc

a (g

)


15 30 45 60 750.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.35T1

T2

T3

T4

T5

T6


Mas

sa s

eca

(gr)

Figura 17 – Influência do AIB na massa de folhas novas em estacas de plantas em fase reprodutiva de F.

trilobata L.

De acordo com os resultados obtidos, a utilização de AIB foi benéfico para a

formação de folhas (Figura 16). Aos 15 dias, apenas no tratamento 6 houve formação de

folhas. Aos 30 dias houve formação de folhas nos tratamentos 3 e 6 , o que sugere uma

ação da auxina exógena na formação de folhas. Decorridos 45 dias, foi observada a

formação de folhas nos tratamentos 2, 5 e 6, sem diferença estatatística. Aos 75 dias houve

formação de folhas nos tratamentos 2 e 6, embora os valores do tratamento 2 tenham sido

mais altos, diferindo estatisticamente do tratamento 6. Provavelmente a ausência de folhas

neste tratamento tenha concorrido para a redução na formação de novas folhas, em

decorrência da ausência de fotossíntese e da exaustão de reservas contidas na estaca.

Comparando-se os resultados obtidos na formação de raízes e de folhas, verifica-se

a existência de correlação entre o número de folhas novas e o peso seco de raízes,

especialmente aos 75 dias (Figuras 15 e 16). Isto demonstra a ação sinérgica da auxina na

formação da parte aérea e do sistema radicular (TAIZ & ZEIGER, 2004).

Apesar de ter havido brotação de folhas novas nos tratamentos com AIB ao longo

do período observado (Figura 16), quando os dados são comparados com a massa de folhas

em cada tratamento (Figura 17), observa-se o efeito positivo da auxina na concentração de

1mgL-1 nas estacas com folha, embora tenha havido formação de folha nos tratamentos

com 2mgL-1 . É provável que a falta de reservas na estaca para suprir as necessidades

nutricionais das folhas em expansão, que são drenos fortes, tenha sido decisivo para o

pouco crescimento das mesmas, aqui apresentado como matéria seca.


3.3 - ENTREVISTAS

As entrevistas foram aplicadas individualmente a 32 pessoas, com faixa etária entre

28 e 53 anos, divididos entre 25 pessoas do sexo masculino (78,13%) e 7 do sexo feminino

(21,87%). A maior parcela dos entrevistados, 37.5%, de moradores do Município de

Carmópolis, região que além de possuir resquícios de Mata Atlântica na qual se pode

encontrar a Fevillea trilobata L., possui também uma Farmácia Verde administrada pela

Prefeitura da região, a qual distribui produtos naturais à população (Tabela 2).

Tabela 2 – Distribuição do número de entrevistados por localidade.

Localidade Número de entrevistados %

Mercado Municipal Albano Franco 11 34.38

Feira – livre do Mosqueiro 09 28.12

Proprietários de Carmópolis 12 37.5

Total 32 100

Antes de iniciar a entrevista, uma breve explicação sobre a morfo-fisiologia da

gindiroba foi dada aos entrevistados por se tratar de uma espécie vegetal ainda não

domesticada.

A análise dos dados revelou que 71,8% dos entrevistados tinham conhecimento da

gindiroba e apenas 28,2% não ouvira falar. Quando questionado sobre a utilidade da

planta, foi possível constatar que todos os entrevistados que tinham o conhecimento da

gindiroba sabiam da sua utilização enquanto medicamento. Ao ser questionado sobre os

usos medicinais, verificou-se que de acordo com a medicina popular, existe uma vasta

utilização desta espécie (Figura 18).


Figura 18 – Usos da gindiroba segundo a medicina popular.

A figura 18 representa algumas patologias tratadas com a gindiroba segundo a

medicina popular. Ainda, de acordo com a entrevista foi possível saber que a parte da

planta utilizada como medicamento é a semente, a qual foi citada pelos mesmos 23

entrevistados que diziam saber da existência desta. Ainda foi questionado aos entrevistados

a forma de preparo do medicamento, onde 9 (39,13%) responderam que utilizam a semente

na forma pastosa (ungüento) e outros 14 (60,87%) na forma de chá (infusão).

Segundo Cunha (dados não publicados), resultados preliminares ainda mostram a

eficiência do óleo no combate às candidíases, ou seja, além dos usos referidos acima, a

gindiroba também possui ação antifúngica.

As 23 pessoas que afirmaram conhecer a espécie foram questionadas sobre como e

aonde se adquire as sementes de gindiroba, 100% delas responderam que são compradas de

outros vendedores e por isso não sabiam exatamente a origem destas. Quando questionado

sobre o método mais eficiente de propagação da espécie vegetal foram apresentada 4


opções de respostas às quais foram explicadas detalhadamente (os métodos de propagação,

a saber: propagação por semente e estaquia) para que não houvesse dúvidas nas respostas.

(Figura 19).

Figura 19 – Alternativas de propagação da Fevillea trilobata L.

Mesmo após a explicação detalhada quanto ao método de propagação, a maioria

(65%) acredita ser através de sementes a melhor forma de propagar a espécie. Vale ainda

lembrar, que dentro das explicações sobre o melhor método de propagação, foi mostrado

todos os pontos positivos e negativos de uma propagação por sementes. Muitos optaram

pela propagação por semente por se tratar de um método tradicional, que segundo os

entrevistados seria um desenvolvimento natural e não “forçado”.

Estes resultados demonstram que a gindiroba ainda é pouco conhecida pela

população, apesar de ter potencial para o uso como planta medicinal. Tal desconhecimento

decorre do fato de a espécie ser utilizada de forma extrativista, pois é uma espécie não

domesticada.


As recentes pesquisas que apontam para o potencial da gindiroba para a produção

de biodiesel deverão despertar o interesse de pesquisadores de várias áreas tais como

recursos genéticos e fenologia dentre outras.

CAPÍTULO 4

CONCLUSÕES

Capítulo 4 - Conclusões 45

4.0 – CONCLUSÕES

Micropropagação

1. Houve maior formação de calos e folhas em micro-estacas tratadas com 1mgL-1 de

BAP.

2. Quando analisado o brotamento de folhas, o tratamento 2 (1mgL-1 BAP) foi

significativamente diferente quando comparado com os outros tratamentos

utilizados.

Estaquia

1. Os materiais analisados apresentaram comportamentos diferenciais para o

enraizamento e brotamento de folhas, apresentando resultados mais promissores

para estacas de plantas em fase juvenil, com folha e sem imersão em AIB.

2. A presença de folhas em estacas estimulou a formação de raízes em F. trilobata.

3. A maior formação de raízes e folhas em estacas com folha e em fase juvenil deve-

se possivelmente a juvenilidade da planta que possui em reserva auxina endógena.

4. O AIB (1mgL-1) respondeu de forma positiva em estacas em fase reprodutiva e com

presença de uma folha.

Capítulo 4 - Conclusões 46

5. Estacas de plantas em fase juvenil apresentaram resultados mais significativos

quando comparados com estacas de plantas em fase reprodutiva.

6. Estacas de plantas em fase juvenil, com folha e sem imersão em fitorregulador foi

mais adequada para ser utilizada em estaquia.

Entrevistas

1. Mais de 70% dos entrevistados conhecem a gindiroba, e desses 100% relataram

sobre a utilização da semente na medicina popular.

2. Na medicina popular, as sementes são utilizadas no combate a inflamação das

articulações, dor de cabeça, hipertensão, ferimentos de pele e inflamação de fígado.

3. A origem das sementes adquiridas pelos entrevistados não foi relatada,

provavelmente por serem adquiridas por atravessadores.

4. 65% dos entrevistados acreditam ser através da semente a melhor maneira de

propagar a gindiroba.

5. Apesar de tratar-se de uma planta ainda não domesticada, a gindiroba despertou

interesse dos entrevistados quando mencionado sobre a possível produção de

biocombustível enquanto alternativa de renda familiar.

CAPÍTULO 5

SUGESTÕES

Capítulo 5 – Sugestões 48

5.0 - SUGESTÕES

As pesquisas de propagação “in vitro” de Fevillea trilobata L. encontram-se em

fase inicial necessitando de novos testes com outras concentrações de fitorreguladores e

diferentes tipos de explantes. Vale ainda lembrar que essa é uma técnica promissora que

visa a multiplicação e conservação da espécie.

A técnica de estaquia mostrou-se favorável para a multiplicação de F. trilobata

devido ao fácil domínio e resultados rápidos. Técnicas como essa poderão ser usadas em

projetos que necessitem dessa metodologia.

Dados sobre a gindiroba ainda são bastante escassos na literatura e pouco das

informações que se conseguem a respeito da planta ainda é obtido através da população.

Há então, a necessidade de se conhecer mais sobre a Fevillea trilobata L., a fim de

desvendar seu potencial biotecnológico.

Os agricultores poderiam utilizar a técnica de estaquia para o cultivo de gindiroba,

gerando mais uma alternativa de renda familiar.

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ANEXOS

58

Anexos

1- Conhece a gindiroba, nhandiroba ou fava de santo inácio?

Sim

Não

2 – Quais as utilidades da planta, para que serve?

Remédio

Alimentação

Não sabe

Outros

3- Quais os usos medicinais?

4- Qual a parte da planta utilizada como medicamento?

5- Como o medicamento é feito?

6- Como o Sr (a) adquire o vegetal?

Compra

Cultiva

Recebe de doação

Retira da mata

Outros

7- A planta é cultivada?

Sim

Não

Não sei

59

Anexos

8- Como a gindiroba é propagada?

Sementes

Estacas

Não sabe

Outros

9- Sabe da ocorrência da espécie no meio ambiente?

Sim

Não

10- Sabe que a gindiroba está sendo pesquisada para a produção de biocombustível?

Sim

Não

Documents

PROPAGAÇÃO ASSEXUADA DE GINDIROBA (F evillea trilobata L ... · culture medium used was Murashige & Skoog (MS), supplemented with vitamins of Morel and Wetmore, 3% sucrose, 0.01%