Cromatografia

Purificação de proteínas em escala laboratorialGuia de seleção de colunas e cartuchos

l(28

0 nm

), m

AU

Volume da coluna = 24 ml

0 0,08 0,16 0,24 0,32 0,40 0,48 0,56 0,64 0,72 0,80 0,88 0,96 1,04 1,12 1,20 1,28

A28

0

1,75

1,50

1,25

1,00

0,75

0,50

0,25

0

pH

Tempo, min

Fração

12,5

10,0

7,5

5,0

A280

pH

Volume, ml

l(28

0 nm

), m

AU

Exemplo de separação por troca de cátions de padrões de proteínas. A Coluna ENrich S fornece separação de alta resolução, carga máxima de proteínas de 120 mg, taxa de fluxo de 0,5-2 ml/min.

α-lactalbumina

Citocromo c

Lisozima

Ribonuclease A

4.000

3.600

3.200

2.800

2.400

2.000

1.600

1.200

800

400

0

Volume da coluna = 4,99 ml

Pico de fluxo Pico de eluição

l(28

0 nm

), m

AU

Exemplo de separação por afinidade marcada. A maioria das proteínas passa pela coluna (pico de fluxo) enquanto o pico de eluição representa aquelas com uma atração específica para o ligante da resina.

Vitamina B12

Mioglobina equina

Ovalbumina de galinha

Tireoglobulina, pico triplo

Exemplo de separação de exclusão de tamanho. A Coluna ENrich SEC 650 proporciona a mesma alta resolução para o intervalo de tamanho de peso molecular de execução e 5-650 kD em taxas de fluxo elevadas que induzem 1,5 e 2,0 ml/min.

g-globulina bovina

Modo mistoA cromatografia de modo misto é uma técnica que oferece propriedades únicas de separação devido ao uso de várias modalidades de separação. O uso da cromatografia de modo misto como etapa intermediária de purificação ou polimento pode oferecer seletividade e resolução inigualáveis para uma variedade de biomoléculas.

� As Resinas de Modo Misto Bio-Scale™ Mini CHT™ de Hidroxiapatita Cerâmica e Bio-Scale™ Mini CFT™ de Fluorapatita Cerâmica com a capacidade exclusiva de remover a proteína A, endotoxinas, ácidos nucleicos e agregados são consideradas os padrões ouro do setor para separação e purificação de anticorpos e são ideais para a segunda ou terceira etapa de um fluxo de trabalho de purificação de anticorpos.

� A Resina Foresight™ Nuvia™ cPrime™ oferece seletividade exclusiva de modo misto por meio de troca de cátions hidrofóbicos.

Fluxo Eluato mAb1

Tira de pH 7,5

Tira de 1 N NaOH

RESINAS E COLUNAS DE PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS

A Bio-Rad tem um portfólio abrangente de colunas e cartuchos de cromatografia para purificação de proteínas de alta qualidade. Estão disponíveis colunas e cartuchos para cromatografia de afinidade preparatória, de troca iônica, de exclusão de tamanho e de modo misto para as técnicas de escala laboratorial mais comuns e importantes. Adicionalmente, colunas de HPLC para análise de moléculas pequenas estão incluídas na coleção de colunas de escala laboratorial da Bio-Rad.AfinidadeA cromatografia de afinidade separa proteínas com base na atração de uma porção da proteína a um ligante ligado à matriz de cromatografia. Essa técnica é executada pela utilização da atração de porções de proteínas nativas em uma matriz de cromatografia ou pela inclusão de um marcador na proteína para interagir com um tipo específico de resina (meio). A separação é seletiva e reversível, e o mecanismo de ligação pode ser comparado à conexão de uma chave com a fechadura. A eluição pode ser executada alterando a força iônica ou pH da solução ou pela utilização de um agente caotrópico. A cromatografia de afinidade em geral é a primeira etapa em um protocolo de purificação, proporcionando uma proteína de interesse purificada e concentrada.

O isolamento de anticorpos monoclonais pela atração nativa usando a cromatografia de afinidade pode ser executado com as linhas de produtos Bio-Scale™ Mini UNOsphere™ e Resina Bio-Scale™ Mini Affi-Gel® da Bio-Rad.

� A Resina de Proteína A Bio-Scale™ Mini UNOsphere SUPrA™ tem elevada capacidade de ligação e fornece anticorpos monoclonais de pureza superior.

� A Resina de Proteína A Bio-Scale Mini Affi-Gel, o Gel Azul Bio-Scale Mini Affi-Gel, o Gel Azul CM Affi-Gel e as Matrizes e Cartuchos Azuis Bio-Scale Mini DEAE Affi-Gel proporcionam purificação em uma única etapa de anticorpos IgG a partir de soro.

A purificação de proteínas marcadas é facilitada com as famílias de produtos Nuvia™ e Profinity™, que incluem os Cartuchos Bio-Scale Mini Nuvia IMAC, Bio-Scale Mini Profinity GST e Bio-Scale™ Mini Profinity eXact™.

� A Resina Bio-Scale Mini Nuvia IMAC isola proteínas marcadas com histidina, a Resina Bio-Scale Mini Profinity GST purifica proteínas marcadas com glutationa S-transferase (GST) e a Resina Bio-Scale Mini Profinity eXact é uma matriz de autoclivagem que fornece purificação de proteínas sem marcação.

Troca iônicaO isolamento de cromatografia de troca iônica ocorre por meio de uma proteína de interesse carregada sendo atraída para uma matriz de cromatografia com carga oposta. A separação de proteínas é realizada pela alteração da força iônica ou pH da solução de maneira que altere diferencialmente as propriedades de ligação das proteínas que interagem com a matriz. Os protocolos de eluição incluem o uso de gradientes, etapas isocráticas ou uma combinação desses. A troca iônica pode ser utilizada para o isolamento da proteína, a purificação intermediária ou como técnica de polimento.

A Bio-Rad oferece uma variedade de colunas e cartuchos de cromatografia de troca iônica de alta qualidade, com uma variedade de tamanhos de partícula, grupos funcionais e químicas de coluna.

� As Resinas de Troca Iônica Bio-Scale Mini UNOsphere e Foresight™ Nuvia™, de alto desempenho e capacidade para partículas grandes, foram projetadas para as etapas de captura e intermediárias da purificação de proteínas em escala laboratorial e para triagem de bioprocessos. O tamanho dos seus grânulos as torna ideais para uso com amostras brutas.

� As Colunas de Troca Iônica ENrich™ e Bio-Scale Mini UNOsphere, de resolução excepcionalmente alta, são capazes de resolver as amostras de proteína mais complexas e difíceis e são ideais para as etapas de polimento do fluxo de trabalho de purificação de proteínas em escala laboratorial.

� Os produtos de Resina de Troca Iônica Bio-Scale™ Mini Macro-Prep® têm alta resolução e capacidade, fornecendo soluções para qualquer etapa da purificação de proteínas.

Exclusão de tamanhoA cromatografia de exclusão de tamanho (SEC), também conhecida como filtração em gel, é uma técnica não ligante que separa as proteínas com base nas suas diferenças de tamanho. A composição do tampão em geral não afeta a separação, de modo que todo o método é realizado sob condições isocráticas. Visto que são necessárias condições de carga de baixo volume (em média, <10%) para uma resolução ideal, essa técnica é utilizada mais frequentemente para polimento ou caracterização de proteínas.

A Bio-Rad oferece as Resinas e Colunas de Exclusão de Tamanho ENrich e Bio-Scale™ Mini Bio-Gel® P-6 para a separação de proteínas de alta resolução e eficiente dessalinização e troca de tampão das amostras de proteína.

� As Colunas de Exclusão de Tamanho ENrich SEC proporcionam separações rápidas e reprodutíveis de alta resolução e purificação de proteínas com base no tamanho. Essas colunas podem funcionar a taxas de fluxo elevadas, o que resulta em tempos de separação excepcionalmente curtos.

� As Resinas e Cartuchos Bio-Scale Mini Bio-Gel P-6 são o padrão ouro do setor para dessalinização rápida e eficiente e troca de tampão de amostras de proteína.

Exemplo de separação de modo misto. Resina Foresight Nuvia cPrime como a etapa de polimento final de uma purificação de anticorpos monoclonais.

ResinaA Bio-Rad tem um portfólio completo de resinas de cromatografia comprovadas para purificação de proteínas em grande escala e em laboratórios de alto desempenho. Juntamente com os formatos estabelecidos, como colunas, cartuchos e placas de 96 cavidades, a resina de cromatografia está disponível globalmente em quantidades de escala de biofabricação. As Resinas Profinity, Affi-Gel, UNOsphere, Macro-Prep e Nuvia são oferecidas em massa. As químicas de cromatografia escalável incluem de afinidade, troca iônica, exclusão de tamanho e modo misto. Não deixe de discutir suas necessidades de desenvolvimento e escalonamento com um especialista em cromatografia da Bio-Rad.

l (2

80 n

m),

mA

U

Volume, ml

Purificação com UNOsphere SUPrA

Fluxo de trabalho de purificação de mAb-S TCF, com carga de amostra de 5 ml.

l 3 (280 nm)%B

l (2

80 n

m),

mA

U

Volume da coluna = 0,98 ml

Purificação por troca de ânions com ENrich

l (280 nm)%B

Purificação com ENrich SEC

MonômeroDímero

Agregadosl (2

80 n

m),

mA

U

Volume da coluna = 23,56 ml

0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3

GUIA DE SELEÇÃO DE COLUNAS E CARTUCHOS

100% de homogeneidade

POLIMENTO

PURIFICAÇÃO INTERMEDIÁRIA

CAPTURA

Pur

eza

da

pro

teín

a

Flu

xo d

e tr

abal

ho

de

pu

rifi

caçã

o d

e an

tico

rpo

s

Analítico

Alta resolução

Boa resolução, fluxo rápido

Alta resolução

Boa resolução, fluxo rápido

Purificação marcada

Purificação de anticorpos

Nuvia IMAC, Profinity GST, Profinity eXact

UNOsphere SUPrA, Affi-Prep® Protein A, Affi-Gel, Affi-Gel Blue

ENrich SEC, Aminex®

ENrich Q e S, ENrich SEC, UNO® Q e S, CHT, CFT, Nuvia cPrime

ENrich SEC, Aminex, Macro-Prep

ENrich Q e S, UNO Q e S

Macro-Prep, UNOsphere, Nuvia Q e S

As Colunas Aminex proporcionam excelente separação de carboidratos, ácidos orgânicos e alcoóis.

Ganhe alta especificidade com a modalidade de modo misto das Resinas CHT, CFT e Nuvia cPrime.

Use as Resinas Macro-Prep, UNOsphere e Nuvia para captura ou purificação intermediária.

Use as Resinas Nuvia e Profinity para alta pureza de proteínas marcadas em uma etapa.

Grânulos de Macro-Prep 50 µm oferecem a flexibilidade de remover contaminantes em massa e traços de impurezas com altas taxas de fluxo.

Grânulos de ENrich 10 µm são ideais para resolução de espécies de proteínas semelhantes ou remoção de contaminantes em massa e traços de impurezas.

As Resinas UNOsphere SUPrA, Affi-Prep e Affi-Gel oferecem alta pureza de anticorpos e fragmentos de anticorpos em uma etapa.

2.400

2.000

1.600

1.200

800

400

0

l(19

0 nm

), m

AU

Volume, ml

Alta resolução de pico para os ácidos oxálico (1), cítrico (2), málico (3), succínico (4), fórmico (5) e acético (6).

Ácidos orgânicos purificados por uma coluna Aminex

NOSSA FAMÍLIA DE PRODUTOS TABELA DE SELEÇÃO DE COLUNA

Colunas ENrichColunas de troca iônica e exclusão de tamanho de alta resolução para purificações intermediárias e de polimento.

Cartuchos Bio-Scale MiniCartuchos de coluna versáteis de baixa pressão contendo meios de afinidade e troca iônica que podem ser usados com uma variedade de sistemas ou simplesmente com uma seringa.

Colunas de HPLC AminexAs colunas de HPLC Aminex são o padrão de pesquisa e do setor para a análise de carboidratos, ácidos orgânicos e alcoóis em aplicações de alimentos e bebidas, biocombustíveis e biotecnologia.

Colunas ForesightFormatos de coluna especialmente projetados para estudos de escalonamento e modelagem, embalados com uma variedade de meios de escala de processo.

Colunas e cartuchos pré-embalados Número de catálogo Formato Quantidade Tamanho da partícula, µm Capacidade do meio Aplicações de purificação

Filtração em gel/dessalinização

ENrich SEC 70 780-1070 Coluna 24 ml 10 250 µl Escala laboratorial, alta resolução, separação rápida

ENrich SEC 650 780-1650 Coluna 24 ml 10 250 µl Escala laboratorial, alta resolução, separação rápida

Bio-Scale Mini Bio-Gel P-6

732-4502732-4504732-5304732-5312732-5314

Cartucho

1 x 5 ml5 x 5 ml

5 x 10 ml1 x 50 ml5 x 50 ml

Monólito 10-22% CV Dessalinização

Modo misto

Bio-Scale Mini CHT Tipo I732-4322732-4324

Cartucho1 x 5 ml5 x 5 ml

40 25-60 mg IgG Escala laboratorial, alta seletividade, alta capacidade

Bio-Scale Mini CHT Tipo II732-4332732-4334

Cartucho1 x 5 ml5 x 5 ml

40 15-25 mg IgG Escala laboratorial, alta seletividade

Bio-Scale Mini CFT Tipo II732-4405732-4406

Cartucho1 x 5 ml5 x 5 ml

40 14-21,5 mg/g de lisozima Escala laboratorial, proteínas ácidas e básicas

Foresight Nuvia cPrime732-4705732-4722732-4742

Placas, coluna

2 x placas de 96 cavidades

1 x 1 ml1 x 5 ml

70 40 mg IgG Escala laboratorial, proteínas básicas em alto teor de sal

Análise de carboidratos, ácidos orgânicos e alcoóis

Aminex

125-0140125-0098125-0096125-0097

Coluna1 x 250 x 4,0 mm 1 x 300 x 7,8 mm 1 x 300 x 7,8 mm

9, 9, 25 1,7 meq/ml Análise de carboidratos, ácidos orgânicos e alcoóis

Troca iônica

ENrich Q 780-0001 Coluna1 ml 8 ml

10 130 mg BSA Escala laboratorial, alta resolução, polimento

ENrich S 780-0021 Coluna1 ml 8 ml

10 120 mg IgG Escala laboratorial, alta resolução, polimento

UNO Q720-0001720-0003720-0005

Coluna1 x 1 ml 1 x 6 ml

1 x 12 mlMonólito 20 mg BSA, IgG Escala laboratorial, alta resolução, polimento

UNO S720-0021720-0023720-0025

Coluna1 x 1 ml 1 x 6 ml

1 x 12 mlMonólito 20 mg BSA, IgG Escala laboratorial, alta resolução, polimento

Bio-Scale Mini Macro-Prep High Q732-4120732-4122732-4124

Cartucho5 x 1 ml 1 x 5 ml 5 x 5 ml

50 ≥37 mg BSA Escala laboratorial, captura, polimento

Bio-Scale Mini Macro-Prep High S732-4130732-4132732-4134

Cartucho5 x 1 ml 1 x 5 ml 5 x 5 ml

50 ≥49 mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento

Bio-Scale Mini Macro-Prep DEAE732-4140732-4142732-4144

Cartucho5 x 1 ml 1 x 5 ml 5 x 5 ml

50 40 mg BSA, IgG Escala laboratorial, captura, polimento

Bio-Scale Mini UNOsphere S732-4110732-4112732-4114

Coluna, cartucho5 x 1 ml 1 x 5 ml 5 x 5 ml

80 60 mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento

Foresight Nuvia Q732-4703732-4721732-4741

Placas,coluna

2 x placas de 96 cavidades 1 x 1 ml 1 x 5 ml

85 170 mg BSA Escala laboratorial, captura, polimento

Foresight Nuvia S732-4720732-4740

Coluna, cartucho1 x 1 ml 1 x 5 ml

85 110 mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento

Bio-Scale Mini UNOsphere Rapid S732-4400732-4401732-4402

Coluna, cartucho5 x 1 ml 1 x 5 ml

100 60 mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento

Bio-Scale Mini UNOsphere Q732-4100732-4102732-4104

Coluna, cartucho5 x 1 ml 1 x 5 ml 5 x 5 ml

120 120 mg IgG Escala laboratorial, captura, polimento

Afinidade marcada

Bio-Scale Mini Nuvia IMAC780-0811780-0812

Cartucho1 x 5 ml 5 x 5 ml

50≥40 mg de proteína marcada com histidina

Proteínas recombinantes marcadas com histidina

Bio-Scale Mini Profinity GST732-4620732-4622732-4624

Cartucho5 x 1 ml 1 x 5 ml 5 x 5 ml

70≥10 mg de proteína marcada com GST

Proteínas recombinantes marcadas com GST

Bio-Scale Mini Profinity eXact732-4646732-4647732-4648

Cartucho2 x 1 ml 4 x 1 ml 1 x 5 ml

60-1603 mg de proteína marcada com subtilisina

Proteínas marcadas com subtilisina

Afinidade de imunoglobulina

Bio-Scale Mini UNOsphere SUPrA Protein A732-4201732-4202

Cartucho, colunas5 x 1 ml 1 x 5 ml

53-61 30 mg IgG Anticorpo monoclonal, IgG

Bio-Scale™ Mini Affi-Prep® Protein A732-4600732-4602

Cartucho5 x 1 ml 1 x 5 ml

508-10 mg de lgG1 de camundongo, 16-23 mg de IgG humana

Anticorpo monoclonal, IgG

Bio-Scale Mini Affi-Gel Blue732-4642732-4644

Cartucho1 x 5 ml 5 x 5 ml

75-150 11 mg de albumina Remoção de albumina, enzima, IgG

Bio-Scale Mini DEAE Affi-Gel Blue732-4632732-4634

Cartucho1 x 5 ml 5 x 5 ml

150-300 0,2-1,0 ml de F3GA e DEAE no soro Purificação de IgG do soro, proteínas séricas

Bio-RadLaboratories, Inc.

Grupo de Ciências da Vida

Boletim 6498 Rev. C BR/PT 14-1525 0814 Sig 1213

Site www.bio-rad.com EUA 800 424 6723 Austrália 61 2 9914 2800 Áustria 01 877 89 01 Bélgica 09 385 55 11 Brasil 55 11 3065 7550Canadá 905 364 3435 China 86 21 6169 8500 República Tcheca 420 241 430 532 Dinamarca 44 52 10 00 Finlândia 09 804 22 00França 01 47 95 69 65 Alemanha 089 31 884 0 Grécia 30 210 9532 220 Hong Kong 852 2789 3300 Hungria 36 1 459 6100 Índia 91 124 4029300 Israel 03 963 6050 Itália 39 02 216091 Japão 81 3 6361 7000 Coreia 82 2 3473 4460 México 52 555 488 7670 Holanda 0318 540666 Nova Zelândia 64 9 415 2280 Noruega 23 38 41 30 Polônia 48 22 331 99 99 Portugal 351 21 472 7700 Rússia 7 495 721 14 04 Singapura 65 6415 3188 África do Sul 27 861 246 723 Espanha 34 91 590 5200 Suécia 08 555 12700 Suíça 026674 55 05 Taiwan 886 2 2578 7189 Tailândia 1800 88 22 88 Reino Unido 020 8328 2000

Os vetores, marcadores e resinas Profinity eXact são licenciados exclusivamente sob os direitos de patente da Potomac Affinity Proteins. Este produto destina-se apenas a fins de pesquisa.Para aplicações comerciais ou fabricação usando esses produtos, é possível obter licenças comerciais entrando em contato com o Gerente de Marketing para Cromatografia do Grupo de Ciências da Vida, Bio-Rad Laboratories, Inc., 6000 Alfred Nobel Drive, Hercules, CA 94547, Telefone 1-800-4BIORAD (1-800-424-6723).