6
Instituto Politécnico de Leiria Escola Superior de Tecnologia do Mar Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia Docente: Clélia Afonso Trabalho elaborado por: Dora Silva Márcia Santos Maria Santos Peniche, 17 de Junho de 2008

Relatório de Biotec Farmaceutica_bacillus

Embed Size (px)

DESCRIPTION

m

Citation preview

Page 1: Relatório de Biotec Farmaceutica_bacillus

Instituto Politécnico de Leiria Escola Superior de Tecnologia do Mar

Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia

Docente: Clélia Afonso Trabalho elaborado por: Dora Silva Márcia Santos Maria Santos

Peniche, 17 de Junho de 2008

Page 2: Relatório de Biotec Farmaceutica_bacillus

Instituto Politécnico de Leiria Escola Superior de Tecnologia do Mar

Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia

Objectivo

Este trabalho tem como objectivo, observar e discutir a evolução do perfil

de fermentação de um composto com actividade antimicrobiano produzido por

Bacillus, utilizando uma técnica de doseamento de antibióticos e fazer a

apreciação lógica da mesma.

Resultados e Discussão

No decorrer de 8h de crescimento, foram-se retirando amostras

(sobrenadante) e congeladas a ≈ -20ºC, estando o resultado das respectivas

absorvâncias representadas na seguinte tabela:

Tabela 1 - Densidade óptica, ao longo do tempo do tempo de crescimento dos Bacillus. Tempo em

horas (h)

Densidade óptica da

cultura ( λ=260nm)

Diferença entre a densidade óptica

da cultura ao longo do crescimento

e a densidade óptica base (nm)

0 0,071 -----------

2 0,090 0,019

3:30 0,194 0,123

5 0,243 0,172

6 0,393 0,278

7 0,679 0,608

8 0,719 0,768

24 Não se registou Não se registou

Page 3: Relatório de Biotec Farmaceutica_bacillus

Instituto Politécnico de Leiria Escola Superior de Tecnologia do Mar

Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia

Através destes dados foi possível traçar uma recta que representaria a

relação do crescimento ao longo do tempo (produção de antimicrobiano) e

respectiva absorvância.

Figura 1 - Gráfico representativo da variação da absorvância ao longo do tempo, tendo em conta a diferença registada entre a absorvância inicial e as seguintes. Como se pode verificar pelas rectas, o crescimento dos bacilos vai

aumentando ao longo do tempo de forma exponencial. Sendo assim, pode-se

extrapolar que à medida que o tempo vai passando, e com este

aumento/crescimento de células, que a produção de compostos

antimicrobianos também deveria aumentar na mesma proporção.

Figura 2 - Fase preparatória das placas de petri e colocação dos discos (à direita) embebidos com os diferentes sobrenadantes.

Page 4: Relatório de Biotec Farmaceutica_bacillus

Instituto Politécnico de Leiria Escola Superior de Tecnologia do Mar

Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia

As imagens seguintes demonstram os resultados obtidos, para os meios

com E.coli e com leveduras, respectivamente, sendo que cada uma foi

incubada durante 24 horas.

Legenda: C) situação de controlo com água desmineralizada; 1) 2:00h

depois; 2) 3:30h depois; 3) 5:00h depois; 4) 6:00h depois; 5) 7:00h depois; 6)

8:00h depois e finalmente, 7) 24:00h depois.

Figura 3 - Placas de Petri, em meio NA, com E.coli após 24 horas de crescimento a 37ºC.

Figura 4 - Placas de Petri, em meio NA, com levedura (Saccharomyces cerevisiae) após 24 horas de crescimento a 27ºC.

Pode-se observar que não ocorreu inibição tanto na E.coli, como na

levedura por parte dos bacilos, havendo crescimento de colónias de bacilos na

4 e no 7, sendo neste, com maior diâmetro (em E.coli) e na levedura, colónias

em 1, 2, 4 e 7. Isto pode ter acontecido por múltiplos factores:

� A estirpe de bacilos encomendada ter vindo contaminada por agentes

microbianos, impossibilitando assim, a expressão da sua característica

antimicrobiana;

Page 5: Relatório de Biotec Farmaceutica_bacillus

Instituto Politécnico de Leiria Escola Superior de Tecnologia do Mar

Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia

� Produção de compostos, mas estes não apresentarem propriedades

antimicrobianas;

� Ter produzido algum composto antimicrobiano, mas tanto a E.coli como

a levedura ser resistente ao mesmo;

� Ou então, os bacilos não terem produzido qualquer substância com

capacidade terapêutica.

Uma possível justificação para o aparecimento das colónias verificadas

tanto para E.coli como para as leveduras, pode ser por erro do próprio

operador. Isto porque após cada centrifugação, era retirado o sobrenadante,

rejeitando-se de seguida o pellet, podendo ter ocorrido arrastamento de

algumas células de bacilos do pellet, induzindo assim um crescimento de

colónias na placa.

Conclusão

Sendo assim, não se conseguiu alcançar com sucesso o objectivo desta

actividade experimental, não se verificando a efeito antimicrobiano produzido

por bacilos.

No entanto, pode-se mencionar o que na teoria poderia ter dado como

resultado práticos:

• À medida que o tempo passava, e como foi possível verificar no

gráfico, com o aumento do número de células, a produção de

compostos antimicrobianos iria aumentar;

• Nas placas de petri, independentemente da presença no meio de

E.coli ou levedura, verificar-se-ia halos de inibição de forma

crescente desde o 1 até ao 7, sendo que o controlo não iria

apresentar halo de inibição.

• Verificar-se-ia que esta estirpe de bacilos produzia compostos

antimicrobianos que poderiam ser utilizados na indústria

farmacológica.

Page 6: Relatório de Biotec Farmaceutica_bacillus

Instituto Politécnico de Leiria Escola Superior de Tecnologia do Mar

Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia

Bibliografia

• Afonso C., Apontamentos das aulas teóricas 2007/2008

• http://pt.wikipedia.org/wiki/Bacilo

• www.frilabo.pt