Relatório IV - Cultivo de Microrganismos

7/23/2019 Relatrio IV - Cultivo de Microrganismos

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CENTRO DE EDUCAO PROFISSIONAL IRMO MRIO CRISTVOCURSO TCNICO EM BIOTECNOLOGIA

DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA GERAL E DE ALIMENTOSPROF. ROBSON ALNOCH

PATRICK ALVES DOS SANTOS

GABRIEL BRUNO MEIRA

CATIELI CARVALHO

ISADORA RIPPEL

TECNICAS DE SEMEADURA

Relatrio apresentao ao C!rso e T"#ni#o e$Biote#nolo%ia o Pro%ra$a e Apreni&a%e$Mi#ro'iolo%ia Geral e e Ali$entos o Centro

Est!o Pro(issional Ir$)o M*rio Crist+)o ,

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TECPUC- #o$ re.!isito a o'ten/)o a nota ase%!na par#ial0

CURITIBA

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SUMRIO

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INTRODU56O00000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000007

OB8ETIVO000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000009

MATERIAL00000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000009

RESULTADO0000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000:

;UESTNCIAS00000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000000033

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INTRODUO

N)o " se%reo al%!$- .!e e$ too os l!%ares a $i#ror%anis$os0 Por"$ o .!e.!ase nin%!"$ per#e'e " .!e para #aa l!%ar e?iste !$ ser $ais aaptao0 Isso se e+eaos fatores necessrios para o crescimento- .!e in#l!e$ (atores (@si#os #o$o pH-te$perat!ra e press)o os$ti#a- #o$o ta$'"$ se e+e aos (atores .!@$i#os- #ar'ono-nitro%"nio- en?o(re- (s(oro- o?i%nio e ele$entos tra/os0

Teno e$ $ente estes pr",re.!isitos para a so're+i+n#ia e $i#ror%anis$os-.!e se #rio! as Tcnicas de Semeaduras, seno .!e s)o in$eras at!al$ente0 Elas n)oso$ente s)o #apa&es e re#riar o $eio a$'iente .!e os $i#ror%anis$os +i+e$ #o$o

ta$'"$ s)o !saas para o isola$ento e !$ eter$inao or%anis$o0Te$os .!e le+are$ #onta .!e ne$ toos $i#ror%anis$os s)o passi+eis e sere$ #!lti+aos e$la'oratrio0 U$ %nero .!e at" o $o$ento n)o (oi #!lti+ao in vidro " o

Mycobacterium isso in#l!i os ois prin#ipais pat%enos !$anos- Mycobacteriumtuberculosis e Mycobacterium leprae.

N)o e?iste relatos e .!ano se #o$e/o! a repi#a%e$ e $i#ror%anis$os invitro no $eio li.!io- por"$ o #ientista (ran#s Lo!is Paste!r $ais o!tro #ientista#a$ao Ro'ert Ko# #o$ se!s tra'alos (ora$ .!e$ $ais se !tili&ara$ estes $eios

para a #in#ia- #riano assi$ a era a Ba#teriolo%ia0 Essa era- n)o s (oi $!aa pelasino+a/Fes e Ro'ert Ko# e se!s $eios %elatinosos #o$o o *%ar- por"$ ta$'"$ pelos

est!os e Biolo%ia Mole#!lar .!e esta+a$ en%atinano0 E %ra/as a ele a$i#ro'iolo%ia e+ol!i! e?traorinaria$ente04

O $aterial n!triente preparao para o #res#i$ento e $i#ror%anis$os e$ !$la'oratrio " #a$ao e meio de culturaEste $eio e #!lt!ra e+e ser preparaose%!ino al%!$as o'ser+a/Fes re(erentes ao se! $i#ror%anis$o0 Assi$ n)o #o$eter* oerro e pro!&ir o $eio e #!lt!ra errao0 O'ser+a/Fes essas .!e s)o $en#ionaas nosfatores de crescimento

E?iste na #in#ia $i#ro'iol%i#a +*rias (or$as e $eios e #!lt!ra- al%!$aselas s)o

Meio !uimicamente Definido (Sabemos exatamente o que vai e suaquantidade); Meio "omple#o(O meio mais utilizado em laboratrio visando que a maioria

das bactrias so capazes de serem cultivas. o sabemos a quantidade

espec!"ica de al#umas subst$ncias); Meios Redutores(%liminam o oxi#&nio do meio de cultura); Meio Seleti$o('avorece os micror#anismos de interesse); Meio Diferencial(i"erencia as colnias de outras. *ode usar indicador de p+

como corantes); Meio de %nri&uecimento (Semel,ante ao meio seletivo porm usado para

aumentar a quantidade de micror#anismos at uma por-o detectvel).

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As t"#ni#as e$pre%aas para isola$ento e $i#ror%anis$os #onsiste$ e$pro#ei$entos si$ples e apli#a/)o rotineira e$ !$ la'oratrio e $i#ro'iolo%ia0 U$apor/)o representati+a e !$ $i#ror%anis$o- .!al #a$a$os e in#!lo " trans(eria

e !$a a$ostra para !$ $eio e #!lt!ra e (or$a ass"pti#a0 C"l!las $i#ro'ianas#ontias na a$ostra s)o s!(i#iente$ente separaas e i$o'ili&aas o %el e *%ar#onteno n!trientes e se $!ltipli#a$ (or$ano !$ a%re%ao e #"l!las inti#as-eno$inaa #olJnia0

O'(%TI)O

De$onstrar os $"toos $ais #o$!ns para o'ten/)o e #!lt!ras p!ras0 O'ter #olJnias isolaas- o .!e per$ite istin%!ir os i(erentes $i#ror%anis$os

e$ !$ $aterial o! #!lt!ra $i#ro'iana atra+"s a s!a $or(olo%ia #olonial

M*T%RI*+

Pla#as #o$ *%ar n!trienteT!'o #o$ #alo n!trienteT!'o #o$ *%ar n!triente in#linaoT!'os #o$ #!lt!ra e $i#ror%anis$osAl/a e platina

Al/a e Dri%alsil#ool0

MICRORGANISMOS3 ,%sc,eric,ia coli1 ,/acillus cereus;7 , Stap,ylococcus aureus;9 , Sacc,aromyces cerevisiae.

MEIOSPla#aA Sal Manitol

Pla#a B Ma#ConePla#a C %ar Le+e!raPla#a D Brain Heart In(!sion o! In(!s)o e #"re'ro e #ora/)o , BHI

MTODOS

Utili&a$os 7 $"toos e o'ten/)o e #!lt!ras p!ras- seno eles o es%ota$entosi$ples- es%ota$ento #o$posto e se$ea!ra e$ t!'os90 De+e$os pensar .!e .!anoesta$os isolano $i#ror%anis$os e se!s a$'ientes nat!rais- esta$os isolano !$a

pop!la/)o $ista10 A (i$ e .!e se possa separar as esp"#ies nela #ontia- " ne#ess*rio.!e se pro#ea a !$a p!ri(i#a/)o90 Est* p!ri(i#a/)o naa $ais " o .!e os $"toos .!e

a'orare$os- !sano t"#ni#as e se$ea!ras0

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SEMEADURA POR ESTRIAS SIMPLES EM PLACA9

30Colo#ar so're a 'an#aa a Pla#a e Petri #o$ o $eio preesta'ele#io0

10 Co$ a Al/a e Platina e$ $)os- (la$'ar a a%!la at" esterili&ar a $es$a0 Dei?anoa es(riar por al%!ns se%!nos ao lao o Bi#o e B!nsen070 Se o se! Meio #o$ a C!lt!ra (or l@.!io e+esse intro!&ir a a%!la no Meio- e a%itar!$ po!#o a al/a #o$ $o+i$entos #ir#!lares0 Caso se! $eio sea slio0 Es(re%!e aa%!la e $oo a (a&er $o+i$entos e &i%,&a%0 Assi$ poer* ter !$a .!antiae#onsier*+el e $i#ror%anis$os e$ s!a Al/a e Platina0 N)o es.!e#eno e se$pre(la$'ar a 'o#a o T!'o0

90 A%ora #o$ a Pla#a e Petri e a Al/a e Platina e$ $)os e a !$a istn#ia#onsier*+el o Bi#o e B!nsen- +a$os ino#!lar os $i#ror%anis$os0

40 Mo+i$ente e$ &i%,&ap a Al/a e Platina so're o Meio N!triente a Pla#a e Petries#olia e !$a ponta a o!tra0

Q0 In#!'ar a Pla#a in+ertia a 7 C por 19 oras

'i#ura 0

O's0 N)o " se$pre ne#ess*rio ir e !$a ponta ao!tra e (or$a linear- #o$o $ostra a =i%!ra 30Ta$'"$ " poss@+el i+iir e$ (ra/Fes a Pla#a e

Petri #o$ linas i$a%inarias e ino#!lar entroestas i+isFes0 Repare #o$o (i#a a =i%!ra 1

'i#ura 1

SEMEADURA POR ESTRIAS COMPOSTAS EM PLACA9

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30 Colo#ar so're a 'an#aa a Pla#a e Petri #o$ o $eio preesta'ele#io010 =ra#ionar a Pla#a e Petri es#olia0 Visano .!e ter* $ais e !$a ori%e$ e

pop!la/)o $ista0 Melor #o$preens)o +is!ali&e a =i%!ra 70

70 Co$ a Al/a e Platina e$ $)os- (la$'ar a a%!la at" esterili&ar a $es$a0 Dei?anoa es(riar por al%!ns se%!nos ao lao o Bi#o e B!nsen090 Se o se! Meio #o$ a C!lt!ra (or l@.!io e+esse intro!&ir a a%!la no Meio- e a%itar!$ po!#o a al/a #o$ $o+i$entos #ir#!lares0 Caso se! $eio sea slio0 Es(re%!e aa%!la e $oo a (a&er $o+i$entos e &i%,&a%0 Assi$ poer* ter !$a .!antiae#onsier*+el e $i#ror%anis$os e$ s!a Al/a e Platina0 N)o es.!e#eno e se$pre(la$'ar a 'o#a o T!'o040 A%ora #o$ a Pla#a e Petri e a Al/a e Platina e$ $)os e a !$a istn#ia#onsier*+el o Bi#o e B!nsen- +a$os ino#!lar os $i#ror%anis$os0Q0 Mo+i$ente e$ &i%,&ap a Al/a e Platina so're o Meio N!triente a Pla#a e Petri

es#olia- por"$ so$ente nas e$ar#a/Fes esta'ele#ias0 A #aa .!arante (eito so$oso'ri%aos a =la$'ar no+a$ente a Al/a e Platina- es(ria,la e pe%ar e$ o!tro T!'o o!Meio a no+a C!lt!ra Mista0 Gire a Pla#a 2 e to.!e a al/a no #anto a estria o

pri$eiro .!arante e esli&e +*rias +e&es- repetino o $o+i$ento e &i%,&a% at" o o!troe?tre$o o se%!no .!arante- e assi$ s!#essi+a$ente at" o !lti$o .!arante0

0 In#!'ar a Pla#a in+ertia a 7 C por 19 oras0

'i#ura 2

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O's0 Os (ra#iona$entos poe$ ser (eitos #o$ Canet)o para !$a $elor separa/)o asC!lt!ras0

O's1 Ne$ se$pre Gire a Pla#a 2 isso +ai epener e .!antos .!arantes +o# .!ero'ter na s!a pla#a0

SEMEADURA POR TUBOS COM CALDO NUTRIENTE EM PLACA DI=US6O

30 Colo.!e so're a 'an#aa os T!'os #o$ os Mi#ror%anis$os e o T!'o #o$ CaloN!triente010 Co$ a Al/a e Platina e$ $)os- (la$'ar a a%!la at" esterili&ar a $es$a0 Dei?anoa es(riar por al%!ns se%!nos ao lao o Bi#o e B!nsen070 Se o se! Meio #o$ a C!lt!ra (or l@.!io e+esse intro!&ir a a%!la no Meio- e a%itar!$ po!#o a al/a #o$ $o+i$entos #ir#!lares0 Caso se! $eio sea slio0 Es(re%!e a

a%!la e $oo a (a&er $o+i$entos e &i%,&a%0 Assi$ poer* ter !$a .!antiae#onsier*+el e $i#ror%anis$os e$ s!a Al/a e Platina0 N)o es.!e#eno e se$pre(la$'ar a 'o#a o T!'o090 A%ora #o$ os T!'os e a Al/a e Platina e$ $)os e a !$a istn#ia #onsier*+el oBi#o e B!nsen- +a$os ino#!lar os $i#ror%anis$os040 A'ra o T!'o Calo N!triente e passe a 'o#a o t!'o na #a$a para e+itar#onta$ina/Fes0Q0 Intro!&ino a Al/a e Platina no T!'o e (or$a a i$er%ir toa a a%!la no Calo

N!triente e $o+i$entar e (or$a #ir#!lar para .!e os $i#ror%anis$os se es%r!e aa%!la e (i.!e no Calo0 Para !$a $elor +is!ali&a/)o o'ser+e a =i%!ra 90

'i#ura 3

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R%SU+T*DOS

Aps !$ per@oo e 19 a 9: oras e?a$ina$os as pla#as e o'ti+e$os al%!ns res!ltaos0In(eli&$ente no Meio Sal Manitol al%o e errao a#onte#e! .!anto aos $i#ror%anis$os

%sc,eric,ia coli .!e n)o e+eria #res#er0 Entretanto $!ano o esperao a#a'o!so're+i+eno e$ !$ Meio alta$ente salino0 O o#orrio n)o (oi o'ser+ao e$ nen!$ao!tra pla#a0 Isso nos le+a a trs ipteses

3W , O Meio e Sal Manitol n)o (oi preparao #orreta$ente0 Di$in!ino assi$ a s!asaliniae e (a#ilitano a so're+i+n#ia os $i#ror%anis$os%sc,eric,ia colipor $aise 9: oras0

1W , A T"#ni#a e Se$ea!ra n)o (oi preparaa #orreta$ente0 A!?iliano assi$ !$a#onta$ina/)o n)o proposital no .!arante 30 Reparano na i$a%e$ a PLACA A

o'ser+asse !$a #olora/)o a$arelaa- #ara#ter@sti#a os $i#ror%anis$osStap,ylococcus aureus; Mas n)o so$ente no .!arante 7 one real$ente est)o osStap,ylococcus aureus $ais ta$'"$ no .!arante 3 one e+eria #onter so$ente

%sc,eric,ia coli.3

7W , ;!antiae $!ito %rane e%sc,eric,ia coli ino#!lao0 Assi$ e$orano $ais e9: oras para .!e toos os $i#ror%anis$os s!#!$'isse$0 Ao $es$o te$po .!e $!itos(orre$ e?ter$inaos- o!tros $ais aptos #onse%!iria$ per$ane#er $ais te$po %ra/as aesta le+e $!an/a e pH no $eio0 Por $ais .!e sea +*lia esta iptese- aina " a $aisi$pro+*+el0 Trans(eri$os as 'a#t"rias%sc,eric,ia coli e !$ T!'o e Ensaio e$ MeioLi.!io- o .!e i(i#!lta a ino#!la/)o e !$a %rane .!antiae e $i#ror%anis$os0

PLACA AS*+ M*NITO+

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MI"ROR-*NISMO

R%SU+T*DO

3 MUDOU DE COR1 CRESCEU7 MUDOU DE COR9 CRESCEU POUCO


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PLACA BM""ON.%/

PLACA C-*R +%)%DUR*

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MI"ROR-*NISMO

R%SU+T*DO

3 CRESCEU- COR ESCURA1 N6O CRESCEU7 N6O CRESCEU9 N6O CRESCEU


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PLACA DIN0USO D% "R%'O % "OR*O 1 '2I

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MI"ROR-*NISMO R%SU+T*DO3 CRESCEU1 CRESCEU MUITO7 CRESCEU9 CRESCEU


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DIS"USS3%S

'om n4o discutimos praticamente nada, porm ti$emos al5uns dilo5osespordicos 6ra mim 7 mel8or &ue nada "a9e a n:s mesmos se or5ani;armosde uma mel8or forma 6ara &ue o pr:#imo relat:rio n4o dei#emos este t:pico em

9ranco!U%ST3%S


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?Por .!e se e+e (la$'ar os t!'os antes e epois e #aa trans(ern#iaXResposta= De+e,se (la$'ar passar a 'o#a o t!'o na #a$a para e+itar#onta$ina/Fes e a(etar a se$ea!ra o! a a$ostra0

@;!al a (inaliae e se (a&er +*rias estrias- na se$ea!ra e$ pla#a- #onteno $eioslioXRespostas= A (inaliae " isola$ento e #olJnias 'a#terianas e #!lt!ras p!ras0

ASe +o# n)o o'te+e !$a #olJnia isolaa- s!%ira as poss@+eis ra&oes para essa (ala- eo .!e (aria para tentar #orri%i,la0Resposta= Poe$os ressaltar al%!ns (atores #o$o #onta$ina/)o- po!#a .!antiae e$i#ror%anis$os- o $eio n)o atenia as ne#essiaes para .!e o $i#ror%anis$o#res#esse- entre o!tros0 Para #orri%ir- re(a&er a se$ea!ra- atentano se aos poss@+eis

pro'le$as #itaos0

"ON"+USO

Poe$os o'ser+ar .!e prati#a$ente e$ nen!$ $eio o!+e o #res#i$ento e toos os$i#ror%anis$os isso se e+e aos fatores necessrios de crescimento e #aa $eio0Mas $es$o .!e n)o o'ti+e$os ?ito no #res#i$ento e toos os $i#ror%anis$os e$!$a s pla#a e petri- aina assi$ #onse%!i$os (a&er o es5otamento composto9

#orreta$ente0 Utili&ano t"#ni#as si$ples e se$ea!ra " poss@+el ter !$a #a$aenor$e e isola$ento e $i#ror%anis$os e?#l!si+a$ente o meio 5ar nutriente0 OMeio Sal Manitol32 so$ente a Ba#t"ria Streptococcus aureus se trans(or$o! e$#!lt!ra0 Isso o#orre! %ra/as as #ara#ter@sti#as o $eio seno ele !$ Meio Seleti+o eta$'"$ Di(eren#ial0 Di(eren#ial por $!an/a e #olora/)o epeneno o pH 330 8* oMac"onBeC" o $eio $ais anti%o e #!lti+o e $i#ror%anis$os est"ri#os:0 Y so$enteseleti+o para%sc,eric,ia coli neste n)o a $!an/a e #olora/)o seno assi$ n)o poeser i(eren#ialQ0 O Meio +e$edura31(i#a$os so$ente #o$ a Ba#t"ria/acillus cereus.!e poe ser pato%ni#a para os seres !$anos0 Este $eio te$ #apa#iae e esti$!lara espor!la/)o estas 'a#t"rias seno assi$ $!ito !tili&ao na an*lise e ali$entos e

pro!tos lati#@ni#os0 N)o poe$os a(ir$ar .!e " !$ $eio seleti+o +isano .!e o!tras'a#t"rias ta$'"$ poe$ ser espor!laas- seno assi$ #on#l!@$os .!e este Meio+e$edura" !$ Meio Enri.!e#i$ento0 Por (i$ te$os o Meio '2I a5ar(/rain +eart

4n"usion ou 4n"uso de crebro e cora-o) Y !$ $eio e !tili&a/)o %eral o! sea !$Meio Co$ple?o- ae.!ao para a #!lt!ra e !$a %rane +arieae e tipos eor%anis$os- in#l!ino 'a#t"rias- le+e!ras e (!n%os (ila$entosos pro+enientes ea$ostras #l@ni#as0 E para (e#ar$os #o$ #a+e e o!ro te$os !$a enor$e !n/)o e#on#eitos ese a assepsia- passano pelo preparo o $eio at" a (or$a e se$ea!ra.!e neste $o$ento (oi o Es%ota$ento Co$posto por estrias0

R%0%R%N"I*S

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3 , MADIGAN- Mi#ael T0 et al0 Mi#ro'iolo%ia e Bro#0 31W Ei/)o0 Porto Ale%re-Eitora Art$e- 12320

1 , TORTORA- Geral 8 =UNKE- Berell R CASE- Cristine L0 Mi#ro'iolo%ia 32ZEi/)o0 Porto Ale%re Eitora Art$e- 12310

7 , TRABULSI- L!i& Ra#i ALTERTHUM- =l*+io Mi#ro'iolo%ia- 4W Ei/)o0 S)oPa!lo0 Eitora Atene!- 122:0

9 , NEDER- Ra$e N0 Mi#ro'iolo%ia Man!al e La'oratrio0 S)o Pa!lo0 EitoraNo'el- 3710

4 , NOGUEIRA- 8oseli M0 R MIGUE- L!#ien e =aria S0 Con#eitos e M"toos para a=or$a/)o e Pro(issionais e$ La'oratrios e Sae Ba#t"riolo%ia0 Es#ola Poli#t"ni#ae Sae 8oa.!i$ Venn#io- Vol!$e 9- Rio e 8aneiro EPS8V IOC- 1220 Dispon@+el

e$ [ttp\\%oo0%l\37M%T] A#esso e$ 2Q e Maio- 12340

Q , PROBAC BRASIL- Pro!tos Ba#teriol%i#os Lta Meios Seleti+os para Isola$entoe Gra$ Positi+os e Gra$ Ne%ati+os0 Dispon@+el e$ [ttp\\%oo0%l\i4rA2] A#essoe$ 2Q e Maio- 12340

, A%n#ia Na#ional e Vi%iln#ia Sanit*ria Des#ri/)o os Meios e C!lt!raE$pre%aos nos E?a$es Mi#ro'iol%i#os0 Dispon@+el e$ [ttp\\%oo0%l\SpSpo]A#esso e$ 2Q e Maio- 12340

: , BIOS^STEMS- HIMEDIA %ar Meio Ma#Cone se$ Cristal Violeta0 Dispon@+el

e$ [ttp\\%oo0%l\lVDKE&] A#esso e$ 2Q e Maio- 12340 , BD Instr!/Fes e Utili&a/)o e Meios e$ Pla#as Prontas e !sar BD Brain HeartIn(!sion BHI A%ar0 Dispon@+el e$ [ttps\\%oo0%l\Qn9p:] A#esso e$ 2Q e Maio-12340

32 , BD Instr!/Fes e Utili&a/)o e Meios e$ Pla#as Prontas e !sar BD Mannitol SaltA%ar0 Dispon@+el e$ [ttps\\%oo0%l\2(D#&] A#esso e$ 2Q e Maio- 12340

33 , HIMEDIA %ar Sal Manitol0 Dispon@+el e$ [ttp\\%oo0%l\MQE3] A#esso e$2Q e Maio- 12340

31 , BIOS^STEMS- HIMEDIA Meio %ar Batata De?trose Isola$ento e En!$era/)oe Le+e!ras0 Dispon@+el e$ [ttp\\%oo0%l\MIKPM] A#esso e$ 2Q e Maio- 12340

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Relatório IV - Cultivo de Microrganismos