RESULTADOS

AULAS PRÁTICAS

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

CAMPUS DE PIRACICABA

Centro de Energia Nuclear na Agricultura

Laboratório de Biologia Celular e molecular

Disciplina CEN-0333 – Análise Diagnóstica de Organismos

Geneticamente Modificados (OGMs)Responsável: Dra. Siu Mui Tsai

Ap. Técnico: José Elias Gomes

Estagiária: Fabiana S. Cannavan

06/03/2012

Materiais usados na aula prática para detecção de OGMs

KIT TRAIT PARA DETECÇÃO DE PROTEINAS 

Proteína da Agrobacterium tumefasciens em Soja, Canola e Algodão: CP4 EPSPS (RR)

Para a credibilidade do teste, todas as fitas devem apresentar a marca, a linha

controle, proveniente da proteína (soja e milho), indicando que houve a correta

migração das proteínas do extrato pela fita e ligação com seus respectivos anticorpos;

Conforme esperado, os grãos geneticamente modificados com o gene CP4

EPSPS nos seus tecidos, indicaram resultado positivo na avaliação das marcas na fita-

teste. Nesses casos, as tiras de fluxo lateral fornecidas no Kit indicaram a formação de

duas marcas: a primeira referente á proteína, e a segunda, exclusiva dos transgênicos;

Grãos de Soja convencional

Grãos de Soja transgênica

O teste é qualitativo e capaz de detectar amostras com nível de

contaminação acima de 1% em apenas 5 minutos. O seu uso é de

extrema praticidade, sendo muito importante para rápida detecção de

alimentos geneticamente modificados em portos e aeroportos.

Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos

Grupo 1

1 – Grãos Soja Convencional

2 – Grãos Soja Convencional

3 – Grãos Soja Convencional

1A – Leite Soja

2A – Proteina Soja Texturizada

(Carne Soja )

1M – Folha Milho Convencional

2M – Folha Milho Transgênica

Grupo 2

4 – Grão Soja convencional

5 – Grãos Soja Convencional

6 – Grãos Soja Convencional

3A – Leite Soja

4A – Proteina Soja Texturizada

(Carne Soja )

3M – Folha Milho Convencional

4M – Folha Milho Transgênica

Grupo 3 Grupo 4

Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos

7 – Grãos Soja Convencional

8 – Grãos Soja Convencional

9 – Grãos Soja Convencional

5A – Leite Soja

6A – Proteina Soja Texturizada

(Carne Soja )

5M – Folha Milho Convencional

6M – Folha Milho Transgênica

10 – Grãos Soja Transgênica

11 – Grãos Soja Transgênica

12 – Grãos Soja Transgênica

7A – Leite Soja

8A – Proteina Soja Texturizada

(Carne Soja )

7M – Folha Milho Convencional

8M – Folha Milho Transgênica

Grupo 5 Grupo 6

Para o uso de técnicas moleculares de detecção de OGMs, a turma foi dividida em grupos

13 – Grãos Soja Transgênica

14 – Grãos Soja Transgênica

15 – Grãos Soja Transgênica

9A – Leite Soja

10A – Proteina Soja Texturizada

(Carne Soja )

9M – Folha Milho Convencional

10M – Folha Milho Transgênica

16 – Grãos Soja Transgênica

17 – Grãos Soja Transgênica

18 – Grãos Soja Transgênica

11A – Leite Soja

12A – Proteina Soja Texturizada

(Carne Soja )

11M – Folha Milho Convencional

12M – Folha Milho Transgênica

13/03/2012

extração do DNA genômico total de grãos de soja – protocolo CTAB de

Doyle&Doyle 1990, modificado;

20/03/2012

Extração de DNA utilizando Sistema de Purificação de DNA para Alimento

Wizard Magnetic Cat. FF3750

27/03/2012

Extração de DNA de tecidos foliares de milho – protocolo CTAB de

Doyle&Doyle 1990, modificado.

Quantificação e pureza das amostras de DNA

mensuradas em espectrofotômetro (Nanodrop 1100) 10/04/2012

Amostras - Grupo1 ng/µl 260/280

1 821.8 1.49

2 1372.2 1.4

3 2035.5 1.36

A1 347.5 1.5

A2 366.8 1.71

1M 618.1 1.96

2M 1451 1.94

Amostras - Grupo2 ng/µl 260/280

4 1462.5 1.23

5 3235.5 1.33

6 3817.5 1.34

3A 367.2 1.6

4A 365.6 1.89

3M 948.6 1.96

4M 523.4 1.96

Amostras - Grupo3 ng/µl 260/280

7 3847.6 1.33

8 3970.5 1.29

9 1977.5 1.36

5A 497 1.65

6A 756 1.73

5M 818.3 1.96

6M 526.8 1.91

Amostras - Grupo4 ng/µl 260/280

10 3761.8 1.33

11 -247.4 1.18

12 1048.6 1.41

7A 766.9 1.71

8A 1346.5 1.79

7M 1744.1 1.96

8M 1191.3 1.97

Quantificação e pureza das amostras de DNA

mensuradas em espectrofotômetro (Nanodrop 1100) 10/04/2012

Amostras - Grupo5 ng/µl 260/280

13 3289.3 1.29

14 4381.2 1.29

15 2308.4 1.29

9A 722.8 1.61

10A 532.6 1.76

9M 1360 1.96

10M 696.9 1.97

Amostras - Grupo6 ng/µl 260/280

16 3127.4 1.32

17 2765.5 1.3

18 2873.2 1.31

11A 525.4 1.58

12A 482.8 1.86

11M 1266.9 1.97

12M 642.9 1.95

12M 864.3 1.5

GRUPO 1

10/04/2012

Quantificação do DNA

1 2 3 1A 2A 1M 2M

GRUPO 2

4 5 6 3A 4A 3M 4M

GRUPO 3

10/04/2012

Quantificação do DNA

7 8 9 5A 6A 5M 6M

GRUPO 4

10 11 12 7A 8A 7M 8M

GRUPO 5

10/04/2012

Quantificação do DNA

13 14 15 9A 10A 9M 10M

GRUPO 6

16 17 18 11A 12A 11M 12M

Grupo 1

1 – Soja 0%

2 – Soja 5%

3 – Grãos de soja convencional

4 – Grãos de soja convencional

5 – Grãos de soja convencional

6 – Leite processado

7 – Carne processada

8 – Folha de milho convencional

9 – Folha de milho transgênico

10 – Controle Negativo

PCR - Primer LEC

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Grupo 2

1 – Soja 0%

2 – Soja 5%

3 – Grãos de soja convencional

4 – Grãos de soja convencional

5 – Grãos de soja convencional

6 – Leite processado

7 – Carne processada

8 – Folha de milho convencional

9 – Folha de milho transgênico

10 – Controle Negativo

PCR - Primer RR

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Grupo 3

1 – Soja 0%

2 – Soja 5%

3 – Grãos de soja convencional

4 – Grãos de soja convencional

5 – Grãos de soja convencional

6 – Leite processado

7 – Carne processada

8 – Folha de milho convencional

9 – Folha de milho transgênico

10 – Controle Negativo

PCR - Primer 35S

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Grupo 4

1 – Soja 0%

2 – Soja 5%

3 – Grãos de soja transgênica

4 – Grãos de soja transgênica

5 – Grãos de soja transgênica

6 – Leite processado

7 – Carne processada

8 – Folha de milho convencional

9 – Folha de milho transgênico

10 – Controle Negativo

PCR - Primer LEC

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Grupo 5

1 – Soja 0%

2 – Soja 5%

3 – Grãos de soja transgênica

4 – Grãos de soja transgênica

5 – Grãos de soja transgênica

6 – Leite processado

7 – Carne processada

8 – Folha de milho convencional

9 – Folha de milho transgênico

10 – Controle Negativo

PCR - Primer RR

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Grupo 6

1 – Soja 0%

2 – Soja 5%

3 – Grãos de soja transgênica

4 – Grãos de soja transgênica

5 – Grãos de soja transgênica

6 – Leite processado

7 – Carne processada

8 – Folha de milho convencional

9 – Folha de milho transgênico

10 – Controle Negativo

PCR - Primer 35S

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10