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Genética Bacteriana e Clonagem

Universidade de Santo AmaroUniversidade de Santo AmaroFaculdade de BiomedicinaFaculdade de Biomedicina

Microbiologia Básica e Clínica Microbiologia Básica e Clínica II

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É responsável pelo armazenamento e É responsável pelo armazenamento e transmissão da informação biológicatransmissão da informação biológica

DNA DNA Ácido Desoxirribonucleico

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GGCC

AATT

TT

TT

AA

AA

GGCC

5`5`

3`3` 5`5`

3`3`

DNADNAEstrutura Estrutura PrimáriaPrimária

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CROMOSSOMO

Dupla fita circular Tamanho varia de acordo com o tipo de bactéria Escherichia coli – 4,6 milhões de bases (850 x maior que a célula) Difuso na região nucleóide Genes para o metabolismo e ciclo vital Constituído por partes codificantes Ausência de Introns

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O cromossomo dos procariontes é circular

Localização do DNALocalização do DNA

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Eucariotos x ProcariotosEucariotos x Procariotos

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Meio com glicoseMeio com glicose

(lacL) gene repressor (lacP) gene promotor (lacO) gene operador(lacZ) β-galactosidase•(lacY)lactose-permease•(lacA) tiogalactosídeo-transacetilase

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Sem glicose e com lactoseSem glicose e com lactose

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A Bactéria como ferramentaA Bactéria como ferramenta

Clonagem MolecularClonagem Molecular

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Estrutura básica de um plasmídeo-vetor

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RTRT

AAAAAAAA AAAAAAAAAACT GGCA TCGT

AACT GGCA TCGT

Clonagem MolecularRNA

ds cDNA

ds cDNA

cDNA

TecidoTecido

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Am

pA

mprr

ORIORI

Am

pA

mprr

ORIORI

cDNAcDNA

PLASMÍDIO DNARECOMBINANTE

VETORESVETORES

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Seleção das bactérias transformadas

Bactérias que não receberam o DNA (inserto) Bactérias que não receberam o DNA (inserto) crescem formando colônias azuis (presença do crescem formando colônias azuis (presença do gene LacZ) enquanto aquelas que foram gene LacZ) enquanto aquelas que foram transformadas crescem incolores.transformadas crescem incolores.