São Paulo, 21 de Junho de 2011 Compartilhados... · from patients with mild-to-moderate cases. Panel C shows the aggregated Ct values of Orf1b on RT-PCR assay in 14 patients with

Instituto de Ensino e Pesquisa Av. Albert Einstein, 627 - 2ºS – Bloco A - Morumbi - São Paulo - SP - 05651-901

22.04.2020 – Atualização COVID-19 e Anticorpos e Carga Viral

CARGA VIRAL

1) Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva

samples and serum antibody responses during infection by SARS-

CoV-2: an observational cohort study. The Lancet 23MAR2020 Kai-Wang et al., China

https://www.thelancet.com/journals/laninf/article/PIIS1473-3099(20)30196-1/fulltext

- Níveis de IgG anti-SARS-CoV-2-NP ou anti-SARS-CoV-2-RBD correlacionados com o

título de neutralização do vírus.

- N = 23 (idade média 62 anos [37-75])

- A carga viral mediana na saliva da orofaringe posterior ou em outras amostras respiratórias

na apresentação foi de 5,2 log10 cópias por mL.

- In-house reverse transcriptase quantitative PCR (RT-qPCR) targeting the SARS-CoV-2

RNA-dependent-RNA-polymerase-helicase gene region. EIAs for SARS-CoV-2

nucleoprotein (NP) and spike protein receptor binding domain (RBD)

- Carga viral salivar: mais alta na primeira semana após o início dos sintomas e

posteriormente diminuiu com o tempo

- Em um paciente, o RNA viral foi detectado 25 dias após o início dos sintomas.

- A idade avançada teve correlação com maior carga viral (p=0.02).

- Para 16 pacientes com amostras de soro disponíveis 14 dias ou mais após o início dos

sintomas, as taxas de soropositividade foram de 94% para anti-NP IgG, 88% para anti-NP

IgM, 100% para anti-NP IgM, 100% para anti- RBD IgG e 94% para anti-RBD IgM.



Viral load in respiratory tract specimens Severe (n=10) Mild (n=13) P

Initial viral load, log10 copies per

mL (IQR) 6·17 (4·18–7·13) 5·11 (3·91–7·56) 0·56

Peak viral load, log10 copies per

mL (IQR) 6·91 (4·27–7·40) 5·29 (3·91–7·56) 0·52

Viral RNA detection

≥20 days in saliva* 4 (50%) 3 (23%) 0·35

Blood 3 (30%) 2 (15%) 0·62

Rectal swab† 3 (38%) 1 (14%) 0·57

Urine‡ 0 (0%) 0 (0%) >0,99

* For severe disease, the total number of patients was eight (two patients died <20 days after symptom onset). † For severe disease, samples were available for eight patients; for mild disease, samples were available for seven patients. ‡ For severe and mild disease, samples were available for nine patients in each group





Figure 2. Temporal profile of serial viral load from all patients (n=23)


2) Viral dynamics in mild and severe cases of COVID-19.

Liu Y et al.

Lancet Infect Dis. MAR 2019

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32199493

- 46 (61%) indivíduos foram classificados como casos leves e 30 (39%) foram

classificados como casos graves.

- 23 (77%) dos 30 casos graves receberam tratamento na unidade de terapia intensiva

(UTI), enquanto nenhum dos casos leves exigiu tratamento na UTI.

- Swabs nasofaríngeos

- A média da carga viral em casos graves foi cerca de 60 vezes maior do que em casos

leves, sugerindo que cargas virais mais altas podem estar associadas a resultados clínicos

graves. Quando os casos foram estratificados de acordo com o dia em que a doença

começou no momento da amostragem, observou-se que os valores d ΔCt dos casos

graves permaneceram significativamente mais baixos nos primeiros 12 dias após o início

do que os dos casos leves correspondentes

- Verificou-se que casos leves tiveram uma eliminação viral precoce, com 90% desses

pacientes testando repetidamente negativos na RT-PCR no dia 10 após o início. Por

outro lado, todos os casos graves ainda apresentaram resultado positivo no dia 10 ou

após o início do tratamento.

- No geral, os dados indicam que, semelhante à SARS em 2002–3, pacientes com

COVID-19 grave, tendem a ter uma carga viral alta e um longo período de eliminação

do vírus. Esse achado sugere que a carga viral do SARS-CoV-2 pode ser um marcador

útil para avaliar a gravidade e o prognóstico da doença.




Figure. Viral dynamics in patients with mild and severe COVID-19


3) SARS-CoV-2

Viral Load in Upper Respiratory Specimens of Infected Patients

Zou L et al. China.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=SARS-Cov-

2+viral+load+in+upper+respiratory+specimens+of+infected+patients

N Engl J Med. 2020 19 MAR

- Prévio: A transmissão de SARS-CoV ocorreu principalmente dias após a doença e foi

associada a cargas virais modestas no trato respiratório no início da doença, com cargas

virais atingindo seu pico aproximadamente 10 dias após o início dos sintomas.

- Monitorazação das cargas virais de SARS-CoV-2 nas vias aéreas respiratórias

superiores obtidas de 18 pacientes (9 homens e 9 mulheres), média de idade 59 anos [26

a 76] em Zhuhai, Guangdong, China.

- Foram analisados 72 swabs (amostras do ouvido e nasofaringe) e 72 swabs da

orofaringe, com 1 a 9 amostras seqüenciais obtidas de cada paciente. Cotonetes de

poliéster foram utilizados em todos os pacientes.

- Esses achados estão de acordo com os relatos de que a transmissão pode ocorrer no

início da infecção e sugerem que a detecção e o isolamento de casos podem exigir

estratégias diferentes daquelas necessárias para o controle da SARS-CoV.

- Como a carga viral SARS-CoV-2 se correlaciona com o vírus cultivável precisa ainda

ser determinado. A identificação de pacientes com pouco ou nenhum sintoma e com

níveis modestos de RNA viral detectável na orofaringe por pelo menos 5 dias sugere que

precisamos de mais dados para determinar a dinâmica de transmissão e informar nossas

práticas de rastreamento.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=SARS-Cov-2+viral+load+in+upper+respiratory+specimens+of+infected+patients

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=SARS-Cov-2+viral+load+in+upper+respiratory+specimens+of+infected+patients


Viral Load Detected in Nasal and Throat Swabs Obtained from Patients Infected with

SARS-CoV-2.

Panel A shows cycle threshold (Ct) values of Orf1b on reverse-transcriptase–polymerase-

chain-reaction (RT-PCR) assay that were detected in nasal swabs obtained from 14 patients

with imported cases and 3 patients with secondary cases, and Panel B shows the Ct values in

throat swabs. Patient Z did not have clinical symptoms and is not included in the figure.

Patients with imported cases who had severe illness (Patients E, I, and P) are labeled in red,

patients with imported cases who had mild-to-moderate illness are labeled in black, and

patients with secondary cases (Patients D, H, and L) are labeled in blue. A linear mixed-

effects model was used to test the Ct values from nasal and throat swabs among severe as

compared with mild-to-moderate imported cases, which allowed for within-patient

correlation and a time trend of Ct change. The mean Ct values in nasal and throat swabs

obtained from patients with severe cases were lower by 2.8 (95% confidence interval [CI],

−2.4 to 8.0) and 2.5 (95% CI, −0.8 to 5.7), respectively, than the values in swabs obtained

from patients with mild-to-moderate cases. Panel C shows the aggregated Ct values of Orf1b

on RT-PCR assay in 14 patients with imported cases and 3 patients with secondary cases,

according to day after symptom onset. Ct values are inversely related to viral RNA copy

number, with Ct values of 30.76, 27.67, 24.56, and 21.48 corresponding to 1.5×104, 1.5×105,

1.5×106, and 1.5×107 copies per milliliter. Negative samples are denoted with a Ct of 40,

which was the limit of detection.



4) SARS-CoV-2-

positive Sputum and Feces After Conversion of Pharyngeal Samples

in Patients With COVID-19

Chenc C, et al. China. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32227141

31MAR2020

- - Estudo retrospectivo, amostra de conveniência, n=133 pacientes.

- - Diagnóstico de COVID-19: pacientes com pelo menos 2 amostras positivas em swabs

faríngeos (RT-qPCR: para open reading frame 1ab [ORF1ab] e nucleopoteína [N]).

- Risco de transmissão pode persistir após melhora dos sintomas.

Results of nucleic acid testing in 22 patients with confirmed COVID-19 infection, by

timing of symptom onset.

Infection was confirmed by RT-qPCR assay of pharyngeal swabs, sputum samples, and

feces samples. Day 0 is the day of symptom onset for each patient. Patient P2 had RT-

qPCR–positive sputum samples after negative pharyngeal samples (although not paired

within 24 hours); he was discharged from the hospital on the basis of sequential negative

samples. N = negative; NA = not available; P = positive; RT-qPCR = real-time quantitative

fluorescence polymerase chain reaction.

Annals Int Med

- - n=22 pacientes (n=18 com 15-65 anos, 4 crianças; 14H; 4M) persistiram com positividade

no escarro e nas fezes após negativação do swab faríngeo.

- -2 casos críticos, 3 casos não complicados e 17 casos leves.

- - Todos pacientes vivos.




5) Distinct characteristics of COVID-19 patients with initial rRT-

PCR positive and negative results for SARS-CoV-2

Zhang JJ et al. China. https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/all.14316 Allergy 13ABR2020

N=290 pacientes suspeitos para COVID-19 analisados retrospectivamente:

-> 249 (85,9%) positivos e 41 (14,1%) negativos com 1 amostra avaliada

-> Entre os 41 pacientes com resultado negativo inicial, 21 (51,2%) apresentaram resultado

positivo no segundo teste RT-PCR e 13 (31,7%) se tornaram positivos no terceiro teste.

-> A razão positiva cumulativa do ensaio RT-PCR desses 41 pacientes da 2ª à 5ª vez do teste

aumentou gradualmente de 51,2% (21/41) para 82,9% (34/41), 92,7% (38/41) 97,6% (40/41)

(Figura 1A), e a proporção positiva para RT-PCR de todos os 290 pacientes no quinto teste

foi de 99,7% (289/290) (Figura 1B).

- Média de idade: 57 anos (22-88), 53,4% homens

- Sem diferenças demográficas ou clínicas nos 2 grupos, exceto pela história de cirurgia no

grupo que positivou inicialmente (32,9% vs 17,1 %, p=0,041).

- No grupo que positivou inicialmente, houve mais casos graves (44,6% vs 24,4%, p=0,015).

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/all.14316


ANTICORPO

6) Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients of

novel coronavirus disease 2019

Clin Infect Dis 28MAR2020

Zhao J et al. China.

https://academic.oup.com/cid/advance-article/doi/10.1093/cid/ciaa344/5812996

- A presença de anticorpos foi <40% entre os pacientes dentro de uma semana desde o início e

aumentou rapidamente para 100,0% (anticorpos), 94,3% (IgM) e 79,8% (IgG) a partir de 15

após o início dos sintomas.

- N=173 pacientes com COVID-19 (média de idade 48 anos, 31-61), 51,4% mulheres.

- ELISA, antígeno RBD da proteína S (spike) do SARS-CoV-2.

- Soroconversão para anticorpos: 93,1% (não havia amostras em 12/173 [6,9%] dos

pacientes). Média de tempo: 11 dias.

- Soroconversão para IgM: 82,7% (em 1 mês atingiu 100%). Média de tempo: 12 dias.

- Soroconversão para IgG: 64,7%. Média de tempo: 14 dias.

- Nas amostras de pacientes durante os dias 8-14 após o início, a sensibilidade para anticorpos

(89,6%), IgM (73,3%) e IgG (54,1%) foi mais alta do que o teste de RNA (54,0%).

- Entre as amostras de pacientes na fase posterior (dia 15 a 39 desde o início), as sensibilidades de Ab,

IgM e IgG foram de 100,0%, 94,3% e 79,8%, respectivamente.

- Em contraste, a detecção do RNA viral diminuiu de 66,7% (58/87) nas amostras coletadas antes do dia

7 para 45,5% (25/55) durante os dias 15-39.

- Em pacientes com RNA indetectável nas vias respiratórias, as amostras coletadas durante os dias 1-3,

dias 4-7, dias 8-14 e dias 15-39 desde o início, 28,6% (2/7), 53,6% (15/28), 98,2% (56/57) e 100%

(30/30) tinham anticorpos neutralizantes detectáveis, respectivamente.

- A combinação de detecções de RNA e anticorpos melhorou significativamente a sensibilidade para

o diagnóstico da COVID-19 (p<0,001), mesmo na fase inicial de 1 semana desde o início (p=0,007).

- Além disso, um título mais alto de anticorpo foi associado independentemente a uma pior classificação

clínica (p=0,006), além da idade e do gênero (sexo masculino).

https://academic.oup.com/cid/advance-article/doi/10.1093/cid/ciaa344/5812996


Figure 1. Cumulative incidence of seroconversion of antibodies against SARSCoV-2 among

COVID-19 patients during the acute phase since illness onset. (A) Cumulative incidence of

seroconversion of Ab, IgM and IgG among 173 patients of this study. P values were

determined by Log-Rank test to compare different markers. (B) Profiling of sensitivity

performances of RNA, Ab, IgM and IgG in time series since illness onset. A heat-map of

detection of SARS-CoV-2 infection according to the time (days) since onset by a single RNA

or antibody test.


Figure 2. Dynamic profiling of viral RNA and antibodies in representative COVID-19

patients since onset of disease. The changes of the levels of RNA in in upper respiratory

specimens (nasal and/or throat swabs) and antibodies (total Ab, IgM and IgG) in plasma of 9

patients were presented. Among these cases, 6 were in normal to moderate illness condition

(A) and 3 were in critical condition (B). The cutoff values for antibody tests were S/CO=1

(plotted to left-Y axis) and was CT=40 for RNA detection (plotted to right-Y axis). RNA

negative samples are denoted with a CT of 45. The blue area indicated the antibody

seronegative zone, whereas the purple area indicated undetectable RNA zone. Meanwhile, a

purple broken line was used to indicate the first time point with detectable RNA and a red

broken line was used to indicate the first antibody seroconversion (total Ab) time point.


Figure 3. The average levels of antibodies against SARS-CoV-2 among COVID19 patients

since illness onset. (A) Comparison of the average S/CO value of in between total Ab, IgG

and IgM. Comparison of the average S/CO value (B) and relative quantitative titer (C) of Ab

test between critical and non-critical patients. The medians of antibody detection value (S/CO

for tests of Ab, IgM and IgG, for panel A and B) and of total Ab titer (rOD, for panel C) of

samples at the same time point since onset was used to plot the graph. Patient’s samples

collected from day 1-3, 4-6, 7-9, Downloaded from https://academic.oup.com/cid/advance-

article-abstract/doi/10.1093/cid/ciaa344/5812996 by guest on 10 April 2020 19 10-12, 13-15,

16-18, 19-21, 22-39 since illness onset were pooled for analysis. Four parameter logistic

(4PL) fitting curves were used to show the rising trend of antibodies (total Ab, IgG, IgM).


7) Development and Clinical Application of A Rapid IgM-IgG

Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis

Li Z et al. China. https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/jmv.25727

J Med Virol 2 FEV 2020

- Especificidade: 90,63%.

Figure 1: Schematic illustration of rapid SARS-CoV-2 IgM-IgG combined antibody

test. A: Schematic diagram of the detection device; B: An illustration of different testing

results, C means control line, G means IgG line, M means IgM line

-N=397 pacientes com RT-PCR positivo e 128 pacientes com RT-PCR negativo.

-Imunoensaio rápido e simples para detecção de anticorpos IgM e IgG simultaneamente

contra o vírus SARS‐CoV‐2 no sangue humano em 15 minutos, que podem detectar

pacientes em diferentes estágios de infecção.

- Antígeno utilizado: domínio RBP da proteína S (spike) do SARS-CoV-2.

- Sensibilidade: 88.6%.

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/jmv.25727


Figure 2: Representative photo for different patient blood testing results. #13) Both IgM

and IgG positive, #14) IgM weak positive, #15) Both IgM and IgG negative, #16) IgG

weak positive, #17) IgG positive, #18) IgM positive

Table 1. The detection sensitivity and specificity of SARS-CoV-2 IgG-IgM combined

antibody reagent.



8) Virological assessment of hospitalized patients with COVID-2019

Wolfel R et al. Germany. https://www.nature.com/articles/s41586-020-2196-x#article-info

Nature 24MAR2020

- A detecção do SARS-CoV-2 na faringe foi muito alta durante a primeira semana de

sintomas (pico de 7,11 × 108 cópias de RNA por swab, dia 4).

- O vírus foi facilmente isolado de amostras derivadas da faringe e do pulmão, mas não de

amostras de fezes, apesar da alta concentração de RNA viral. Sangue e urina nunca

produziram vírus.

- Todos os pacientes mostraram anticorpos neutralizantes detectáveis, cujos títulos não

sugerem estreita correlação com os cursos clínicos. Vale ressaltar que um caso (#4), com o

menor título de neutralização de vírus no final da semana 2, apresentou detecção do vírus

nas fezes por tempo mais prolongado.

- - A replicação ativa do vírus no trato respiratório superior chama a atenção para

medidas de contenção da COVID-19.

- COVID-19 pode se apresentar como uma doença leve do trato respiratório superior.

- N=9 pacientes com sintomas leves da COVID-19.

- A replicação ativa na faringe foi confirmada por intermediários de RNA replicativo viral.

Populações de vírus com sequências distintas foram consistentemente detectadas em

amostras da faringe e pulmão do mesmo paciente, indicando replicação independente.

- A detecção do RNA viral no escarro durou mais tempo que o final dos sintomas.

- A soroconversão foi detectada por imunofluorescência para IgG e IgM usando células que

expressam a proteína spike de SARS-CoV-2 e um vírus ensaio de neutralização usando

SARS-CoV-2.

- A soroconversão ocorreu após 7 dias em 50% dos pacientes (14 dias no total), mas não

foi seguida por um rápido declínio na carga viral, ou seja, não há uma queda abrupta na

eliminação do vírus.

https://www.nature.com/articles/s41586-020-2196-x#article-info


Fig. 1 | Hallmarks of viral shedding in aggregated samples. A, samples and sample types per

day. B, viral RNA concentrations in upper respiratory tract samples. C, viral RNA

concentrations in sputum and stool samples. D, seroconversion and virus isolation success

dependent on day post onset of symptoms. Top panel shows fraction of seroconverted

patients, bottom shows aggregated results of virus isolation trials. E, virus isolation success

dependent on viral load. F and G, projected virus isolation success based on probit

distributions. The inner lines are probit curves (dose-response rule). The outer dotted lines

are 95% CI. For less than 5% isolation success, the estimated day was 9.78 (95% CI: 8.45-

21.78) days post-onset and the estimated RNA concentration for less than 5% isolation

success was estimate to be 6.51 Log10 RNA/ml (95% CI:-4,11-5.40). H, Subgenomic viral

RNA transcripts in relation to viral genomic RNA. Dots represent mean values of RT-PCR

data obtained from at least two independent experiments on samples from individual

patients. Plots show median values with interquartile ranges


Fig. 2 | Viral load kinetics, seroconversion and clinical observations in individual cases.

Panels A to I correspond to cases #1, #2, #3, #4, #7, #8, #10, #14, and #16 in Böhmer

et al.11 Dotted lines, limit of quantification. Experiments were performed in duplicate

and the data presented are means of results obtained by two laboratories independently.

Obs: Serum dilutions causing plaque reductions of 90% (PRNT90) and 50% (PRNT50)

were recorded as titers.



9) Profile of Specific Antibodies to SARS-CoV-2: The First Report

Xiao DAT et al. China

https://www.journalofinfection.com/article/S0163-4453(20)30138-9/fulltext

J Infect 21MAR2020

- Para o SARS-CoV, estudos revelaram que a IgM atinge o ponto mais alto em 4

semanas e não é detectável em 3 meses após o início dos sintomas. IgG foram

detectáveis persistentemente por até 24 meses (Mo HY et al. Respirology, 2006).

-N=34, idade 25-87 anos.

- Exceto por dois pacientes (2 dias e 3 dias após o início dos sintomas), todos os pacientes

incluídos tiveram testes de IgM e IgG após 2 semanas do início dos sintomas.

- Na semana 3 após o início dos sintomas, todos os pacientes foram positivos para IgM e

IgG, com os valores médios de 322,80 AU/ml e 112,40 AU/ml (VR: <10AU/ml),

respectivamente.

- Na semana 4, todos os resultados ainda eram positivos para IgM e IgG. A IgM diminuiu

enquanto a IgG continuou a subir, com o valor médio de 147,92AU / ml e 157,01AU / ml,

respectivamente.

-Na semana 5, no entanto, todos os pacientes foram positivos para IgG, enquanto 2

pacientes (16,7%) obtiveram resultados negativos para IgM. O nível de IgM continuou

caindo para 78,03 AU/ml e a IgG continuou subindo até 163,56 AU/ml.

-No final da observação (7 semanas), 2 pacientes (33,3%) obtiveram resultados negativos

para IgM e todos os pacientes estavam positivos para IgG

-> em 7 semanas: valor médio de IgM 21,83 AU/ml e de IgG 167,16 AU/ml..

- O perfil de anticorpos específicos para SARS-CoV-2 é semelhante ao SARS-CoV:

alto nível detectável e contínuo de IgM indica a fase aguda da infecção. Além disso, a IgM

dura mais de um mês, indicando a replicação prolongada do vírus em pacientes infectados

com SARS-CoV-2. A IgG aparece mais tarde que a IgM e persiste alta, indicando reação

imune humoral protetora contra o vírus SARS-CoV-2.

https://www.journalofinfection.com/article/S0163-4453(20)30138-9/fulltext


Figure 1

Timeline of IgM and IgG Antibodies level to SARS-CoV-2 from the Onset of Symptoms.


Table 1 Characteristics of demographic and specific antibodies in COVID-19 patients (N=34).

Table 1 Characteristics of demographic and specific antibodies in COVID-19 patients (N=34).

Patients Age Gender IgM

AU/ml

IgG

AU/ml

Test

days,

after

onset

Week

Mean

IgM

AU/ml

SEM

Mean

IgG

AU/ml

SEM

Patient1 82 Female 3.56 2.48 2 1 2.24 1.33 1.96 0.53

Patient2 87 Female 0.91 1.43 3

Patient3 59 Female 122.73 163.85 14

3 322.80 127.65 112.40 21.43

Patient4 72 Male 924 187.4 14

Patient5 32 Female 111.78 110.17 16

Patient6 63 Male 207.39 55.43 17

Patient7 69 Male 401.19 78.71 17

Patient8 64 Male 169.72 78.82 21

Patient9 65 Female 104.77 187.94 22

4 147.92 94.50 157.01 12.40

Patient10 39 Male 16.63 152.88 23

Patient11 52 Male 89.31 179.18 23

Patient12 49 Male 41.55 128.75 24

Patient13 35 Male 62.5 103.89 27

Patient14 31 Male 11.26 193.83 28

Patient15 58 Female 709.39 152.57 28

Patient16 44 Male 36.57 190.85 30

5 78.03 33.55 163.56 15.95

Patient17 26 Female 14.37 277.91 30

Patient18 57 Male 1.65 76.85 30

Patient19 45 Male 35.44 165.27 30

Patient20 62 Female 3.38 200.95 31

Patient21 65 Male 119.35 155.29 32

Patient22 83 Male 18.95 158.32 33

Patient23 43 Male 48.88 73.64 33

Patient24 53 Male 134.24 135.54 33

Patient25 33 Female 54.39 162.01 33

Patient26 64 Male 422.78 159.38 34

Patient27 60 Female 46.34 206.7 34

Patient28 73 Male 5.27 134.94 36 6-7 21.83 5.72 167.16 12.24

Patient29 25 Female 15.11 179.23 36


Patient30 71 Male 36.11 184.56 37

Patient31 56 Female 34.07 121.08 37

Patient32 54 Male 42.28 216.96 38

Patient33 47 Male 11.2 176.73 38

Patient34 54 Male 8.75 156.59 49

Abbreviations: SEM, standard error of mean. *Reference of IgG and IgM are

10AU/ml.

10) Detection of antibodies against SARS-CoV-

2 in patients with COVID-19

Du X et al. China. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32243608

J Med Virol 03ABR2020

- N=60 pacientes convalescentes (início dos sintomas há 6-7 semanas).

-> 100% positivos para IgG e 13/60 (22%) positivos para IgM.

-> todos pacientes com TC mostrando melhora e 2 testes negativos para RNA viral.

-> IgM: 2.49 a 307.14 AU/ml

-> IgG: 31.60 a 962.01 AU/ml

- Em 10 pacientes, foram dosados os títulos de IgG duas vezes (1 semana de diferença)

-> IgG: 112.56 a 1077.09 AU/ml -> 47.21 a 210.33 AU/ml

- Detecção de IgG é um indicador do estágio da COVID-19.

- Níveis de IgG não são mantidos em altos títulos, de modo que a persistência,

atenuação e duração da proteção contra o SARS-CoV-2 devem ser investigados.



Figure 1. IgM and IgG antibodies level to SARS‐CoV‐2 from the onset of symptoms. IgG,

immunoglobulin G; IgM, immunoglobulin M


Table 1. Serological data from 60 convalescent patients in the Wuhan Tongji

Hospital

Patients Onset Tested on IgM titer, AU/mL IgG titer, AU/mL

1 13/1/2020 9/3/2020 29.26 (+) 231.67 (+)

2 22/1/2020 3/3/2020 33.71 (+) 198.77 (+)

3 15/1/2020 9/3/2020 17.17 (+) 464.69 (+)

4 24/1/2020 9/3/2020 63.54 (+) 178.23 (+)

5 22/1/2020 9/3/2020 15.36 (+) 369.07 (+)

6 12/1/2020 8/3/2020 50.01 (+) 203.07 (+)

7 30/1/2020 9/3/2020 58.26 (+) 203.00 (+)

8 17/1/2020 9/3/2020 41.21 (+) 405.85 (+)

9 5/2/2020 9/3/2020 12.41 (+) 175.03 (+)

10 4/2/2020 10/3/2020 13.47 (+) 31.60 (+)

11 15/1/2020 12/3/2020 20.90 (+) 162.72 (+)

12 10/2/2020 12/3/2020 18.32 (+) 192.90 (+)

13 18/1/2020 9/3/2020 99.85 (+) 220.03 (+)

14 27/1/2020 10/3/2020 21.88 (+) 139.36 (+)

15 17/1/2020 9/3/2020 76.84 (+) 177.61 (+)

16 1/2/2020 9/3/2020 123.06 (+) 161.16 (+)

17 26/1/2020 8/3/2020 16.45 (+) 194.57 (+)

18 27/1/2020 8/3/2020 115.23 (+) 194.80 (+)

19 20/1/2020 9/3/2020 36.49 (+) 96.75 (+)

20 23/1/2020 9/3/2020 27.08 (+) 136.96 (+)

21 18/1/2020 9/3/2020 176.27 (+) 369.4 (+)

22 28/1/2020 9/3/2020 82.71 (+) 177.69 (+)

23 3/2/2020 9/3/2020 65.15 (+) 241.57 (+)

24 24/1/2020 9/3/2020 47.84 (+) 200.31 (+)

25 26/1/2020 8/3/2020 63.52 (+) 165.49 (+)



26 21/1/2020 8/3/2020 164.18 (+) 346.98 (+)

27 20/1/2020 9/3/2020 168.04 (+) 171.85 (+)

28 22/1/2020 8/3/2020 99.28 (+) 137.58 (+)

29 26/1/2020 8/3/2020 66.79 (+) 188.75 (+)

30 3/2/2020 8/3/2020 27.13 (+) 208.82 (+)

31 2/2/2020 6/3/2020 55.03 (+) 186.47 (+)

32 3/2/2020 5/3/2020 164.96 (+) 180.42 (+)

33 27/1/2020 6/3/2020 84.12 (+) 162.14 (+)

34 26/1/2020 9/3/2020 287.54 (+) 299.75 (+)

35 22/1/2020 9/3/2020 346.62 (+) 962.01 (+)

36 28/1/2020 9/3/2020 163.58 (+) 733.95 (+)

37 20/1/2020 8/3/2020 150.93 (+) 158.48 (+)

38 20/1/2020 8/3/2020 114.81 (+) 338.99 (+)

39 27/1/2020 9/3/2020 176.29 (+) 206.03 (+)

40 23/1/2020 9/3/2020 147.93 (+) 965.24 (+)

41 16/1/2020 6/3/2020 45.35 (+) 134.35 (+)

42 20/1/2020 8/3/2020 78.34 (+) 112.56 (+)

43 24/1/2020 6/3/2020 307.14 (+) 420.72 (+)

44 27/1/2020 8/3/2020 181.75 (+) 1077.09 (+)

45 26/1/2020 6/3/2020 41.68 (+) 233.06 (+)

46 26/1/2020 8/3/2020 20.1 (+) 162.79 (+)

47 25/1/2020 6/3/2020 155.64 (+) 279.45 (+)

48 24/1/2020 3/2/2020 8.82 (‐) 170.22 (+)

49 1/2/2020 14/3/2020 8.91 (‐) 73.35 (+)

50 30/1/2020 8/3/2020 7.33 (‐) 185.74 (+)

51 27/1/2020 9/3/2020 2.59 (‐) 133.14 (+)

52 30/1/2020 8/3/2020 5.65 (‐) 121.43 (+)

53 30/1/2020 9/3/2020 5.53 (‐) 20.2 (+)



54 23/1/2020 14/3/2020 9.15 (‐) 191.61 (+)

55 12/1/2020 12/3/2020 3.65 (‐) 15.16 (+)

56 26/1/2020 10/3/2020 4.12 (‐) 25.61 (+)

57 24/1/2020 7/3/2020 3.4 (‐) 213.32 (+)

58 20/1/2020 11/3/2020 3.16 (‐) 183.32 (+)

59 23/1/2020 4/3/2020 5.01 (‐) 208.08 (+)

60 20/1/2020 8/3/2020 6.75 (‐) 150.80 (+)

Table 2. Serological data from 10 convalescent patients who were tested twice

(1 week apart)

Patients Onset 1st Test 2nd Test IgM titer

(1st test),

AU/mL

IgM titer

(2nd test),

AU/mL

IgG titer

(1st test),

AU/mL

IgG titer

(2nd test),

AU/mL

38 20/1/2020 8/3/2020 15/3/2020 114.81 (+) 36.14 (+) 338.99 (+) 210.33 (+)

39 27/1/2020 9/3/2020 16/3/2020 176.29 (+) 50.21 (+) 206.03 (+) 88.74 (+)

40 23/1/2020 9/3/2020 16/3/2020 147.93 (+) 40.35 (+) 965.24 (+) 201.34 (+)

41 16/1/2020 6/3/2020 13/3/2020 45.35 (+) 13.54 (+) 134.35 (+) 50.33 (+)

42 20/1/2020 8/3/2020 15/3/2020 78.34 (+) 21.36 (+) 112.56 (+) 47.21 (+)

43 24/1/2020 6/3/2020 14/3/2020 307.14 (+) 80.79 (+) 420.72 (+) 97.06 (+)

44 27/1/2020 8/3/2020 15/3/2020 181.75 (+) 47.03 (+) 1077.09 (+) 242.25 (+)

45 26/1/2020 6/3/2020 15/3/2020 41.68 (+) 12.36 (+) 233.06 (+) 95.15 (+)

46 26/1/2020 8/3/2020 15/3/2020 20.1 (+) 9.28 (‐) 162.79 (+) 88.68 (+)

47 25/1/2020 6/3/2020 12/3/2020 155.64 (+) 48.49 (+) 279.45 (+) 200.58 (+)


11) Diagnostic value and dynamic variance of

serum antibody in coronavirus disease 2019

Jin Y et al. China


Int J Infect Dis. ABR3 2020

- N= 43 pacientes com COVID-19 confirmada e N = 33 pacientes com COVID-19 descartada.

- Média de idade 47 anos [IQR 34-59], variação 7-74 anos, 39,5% homens.

- RT-PCR da orofaringe ou escarro (2x a cada 24 horas).

- Determinação de IgG e IgM por imunoensaio por quimioluminescencia (CLIA).

- Critérios de alta: afebril há 3 dias, TC com melhora e 2 amostras negativas para RT-PCR.

- A duração desde os primeiros sintomas até a internação, confirmação laboratorial e o primeiro teste

sorológico no grupo COVID-19 foram 3 dias (IQR 2-7), 3 dias (IQR 2-7) e 18 dias (IQR 11-23),

respectivamente.

- Comparado à detecção molecular, a sensibilidade dos anticorpos IgM e IgG séricos para

diagnosticar COVID-19 foi de 48,1% e 88,9%, e a especificidade foi de 100% e 90,9%,

respectivamente.

- No grupo COVID-19, a taxa de positividade para IgM aumentou primeiro e depois diminuiu ao

longo do tempo, no entanto, a taxa de positividade para IgG aumentou até 100% e foi maior que a de

IgM o tempo todo.

- A taxa de positividade para IgM e o título não foram significativamente diferentes antes e depois da

negativação viral (RT-PCR).

- A taxa de positividade da IgG foi de até 90% e não foi significativamente diferente antes e depois

da negativação viral (RT-PCR).

- - No entanto, a mediana do título de IgG após a negativação viral foi duas vezes maior do que

o anterior, com diferença significativa: 78.6 (56,5-107,9) versus 161,2 (102,5-184,3)

- O teste sorológico viral é um meio diagnóstico eficaz para a infecção por SARS-CoV-2. A taxa de

positividade e a variação de título da IgG são maiores que a da IgM na COVID-19.

- As taxas de positividade para IgM e IgG foram 0 (0/33) e 9,1% (3/33) no grupo controle,

respectivamente.




Figure1. Serological test positive rate and SARS-CoV-2 viral load in different intervals.


Table2. The comparison of SARS-CoV-2 antibodies before and after negative


12) Optimize Clinical Laboratory Diagnosis of COVID-19 from Suspect

Cases by Likelihood Ratio of SARS-CoV-2 IgM and IgG antibody

Yangchun F. https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.04.07.20053660v1?rss=1%27. BMJ.

- Ao reinterpretar os dados no artigo “Diagnostic value and dynamic variance of

serum antibody in coronavirus disease 2019”, a razão de probabilidade para positividade dos

anticorpos IgM e IgG no diagnóstico da COVID-19 (pacientes com RT-PCR positivo) foi

calculada e a razão de probabilidade posterior da positividade dos anticorpos IgM e IgG e sua

detecção em tandem para diagnosticar a COVID-19 foram calculadas.

- Probabilidade posterior do teste de diagnóstico tandem simples de IgG, IgM e IgM / IgG:

A fórmula de probabilidade posterior do índice único:

Razão anterior = probabilidade anterior / (1 - probabilidade anterior)

Relação posterior = relação anterior × LR +

Probabilidade posterior = razão posterior / (1+ razão posterior)

A fórmula de probabilidade posterior do teste de diagnóstico em tandem de vários índices:

Razão anterior = probabilidade anterior / (1 - probabilidade anterior)

Razão posterior = razão anterior × LR + 1 × LR + 2 × ··· × LR + n

Probabilidade posterior = razão posterior / (1+ razão posterior)

- A sensibilidade, especificidade, valor preditivo negativo e valor preditivo positivo para

detecção de anticorpos SARS-CoV-2 IgG para diagnosticar COVID-19 foram 96,10%, 92,40%,

90,10% e 96,09%, respectivamente (Tabela 1). A razão de probabilidade negativa foi 0,04 e a

razão de probabilidade positiva foi 12,65. A acurácia foi 95,07%.

- A sensibilidade, especificidade, valor preditivo negativo e valor preditivo positivo para

detecção de anticorpos valor negativo para detecção de anticorpos SARS-CoV-2 IgM para

diagnosticar COVID-19 foram 70,24%, 96,20%, 56,72% e 97,76%, respectivamente (Tabela 2).

A razão de probabilidade negativa foi 0,31 e a razão de probabilidade positiva foi 18,50. A

acurácia foi 77,46%.

- Em resumo, as razões de probabilidade para positividade única dos anticorpos IgM e IgG

foram 18,50 e 12,65, respectivamente, e as probabilidades posteriores foram 90,18% e 86,26%,

respectivamente.

- No entanto, a probabilidade posterior da detecção dos dois anticorpos simultaneamente

foi de 99,15%, o que pode dar aos clínicos confiança quantitativa para o diagnóstico dos

casos suspeitos de COVID-19.

https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.04.07.20053660v1?rss=1%27


- Para casos suspeitos, os testes de anticorpos IgM e IgG devem ser feitos primeiramente ao

mesmo tempo. Se todos os testes de anticorpos forem positivos, o diagnóstico de COVID-19

pode ser confirmado. Caso contrário, a detecção por RT-PCR (uma ou mais vezes) deve ser

realizada e, em casos extremos, é realizada a sequenciação do genoma viral de alto rendimento.


Figure 1：Clinical Pathway for Clinicians to Diagnose COVID-19 .


13) Duration of serum neutralizing antibodies for SARS-CoV-2:

Lessons from SARS-CoV infection (não SARS-COV-2)

Lin Q et al.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32249185. J Microbiol Immunol Infect. 2020 Mar 25

- Um estudo de coorte de pacientes convalescentes com SARS-CoV (56 casos, Beijing, China)

revelou que os Abs (anticorpos) e NAbs (anticorpos neutralizantes) específicos de IgG estavam

altamente correlacionados, atingindo o pico no mês 4 após o início da doença e diminuindo

gradualmente a partir de então.

- Como os títulos diminuíram acentuadamente após o mês 16, os abs e NAbs de IgG permaneceram

detectáveis em todos os pacientes ao longo de 2 anos de acompanhamento, exceto na última consulta

(no mês 24) em que 11,8% das amostras ficaram negativas.

- Quando o tempo de acompanhamento aumentou para 3 anos, abs e IgG de IgG foram detectáveis

em 74,2% e 83,9%, respectivamente, no mês 36. Outro estudo (176 casos, Shanxi, China) mostrou

um resultado semelhante, até 11,8% das amostras de soro foram positivas para IgG Abs no dia 7

após o início do sintoma da SARS-CoV. A taxa positividade aumentou gradualmente, atingindo

100% no dia 90 e permanecendo inalterada até o dia 200.

- Cerca de 93,9% e 89,6% desses pacientes, respectivamente, foram positivos para IgG após 1 e 2

anos. Notavelmente, três anos depois, 50% dos pacientes convalescentes ainda apresentavam Abs

IgG específico para SARS-CoV. O estudo de acompanhamento mais longo (23 casos, Pequim,

China) mostrou que apenas 8,7% dos pacientes recuperados mantinham baixos níveis de Ab IgG

específico para SARS-CoV.

- Esses achados sugeriam que as respostas imunes de Abs específicos eram mantidas em mais de

90% dos pacientes com SARS-CoV recuperados por 2 anos.

Fig. 1. The percentage of patients who expressed specific IgG Abs/NAbs against SARS-CoV in recovered

patients




14) PCR Assays Turned Positive in 25 Discharged COVID-19 Patients

Yuan J et al. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/32266381. Clin Infect Dis 2020 ABR8

- 14,5% (n= 25) de um grupo de 147 pacientes com COVID-19 tiveram teste positivo de RT-PCR

novamente após a alta

- Critérios de alta (i) afebril há 3 dias, (ii) melhora significativa dos sintomas respiratórios, como

desaparecimento da tosse e da expectoração, níveis normais de PCR e IL-6, índice de oxigenação ≥ 350; (iii)

melhora substancial na TC de tórax, (iv) pelos menos 2 T-PCR negativos no intervalo de 24 horas.

Tratamento com Kaletra e IFN-α por 13,3 ± 3,9 dias. Internação por 15,4 ±3,8 dias.

- Obs: cycle threshold (Ct) value ≤40 foi definido como teste positivo.

- Media de idade: 28 anos (IQR 16,2 – 42), 68% mulheres (incluindo 6 crianças < 12 anos).

- No geral, a duração média do resultado final negativo da RT-PCR para a alta hospitalar foi de 2,71 ± 1,88

dias, enquanto o período médio para positivar a RT-PCR após a alta foi 5,23 ± 4,13 dias. Assim, aqueles 25

pacientes tiveram uma média de 7,32 ± 3,86 dias desde o último resultado negativo da RT-PCR para se

tornarem positivos novamente.

- Na primeira internação, esses pacientes apresentavam sintomas comuns de febre (68%) e tosse (60%) e

24/25 deles tiveram quadro que não foram grave.

- No momento da readmissão hospitalar, apenas 8 pacientes (32%) apresentaram tosse leve. Além disso, os

resultados da tomografia computadorizada indicaram que 12 deles foram caracterizados pela melhora das

lesões originais comparadas às imagens antes de deixar o hospital, enquanto outros 8 pacientes não

apresentaram piora em relação aos resultados anteriores.

- Dentro de uma média de 2,73 dias de internação hospitalar, todos os resultados de RT-PCR da detecção do

mRNA do vírus foram negativos nas amostras de swab nasofaríngeo e swab fecal. Todos estes pacientes

ficaram por um período prolongado observação.

- Quando os resultados clínicos e laboratoriais anteriores foram comparados entre esses 25 pacientes (com

conversão do RT-PCR de negativo para positivo após receber alta do hospitalar) e o outro grupo de 147

pacientes que permaneceram negativos para o vírus após a alta), não houve diferenças significativas nos

parâmetros laboratoriais antes de deixar o hospital.

- No entanto, foram descritas correlações entre parâmetros laboratoriais, como D-dímero (r = -0,637; p =

0,002) e número de linfócitos (r = 0,52; p = 0,008) em relação ao tempo de reaparecimento do vírus.



Figure. Correlation analysis for serum D-Dimer level and duration of treatment, as well as

lymphocyte count and time interval for virus reappearing. Correlation analysis on serum D-

Dimer level and the duration of treatment (r=-0.637, p=0.002) (A), as well as correlation

between lymphocyte concentration and the time interval for virus reappearing (r=0.52,

p=0.008) (B). The D-Dimer values and lymphocyte counts were collected from the last

measurements before their first hospital discharge. The duration of treatment was derived

from their previous records. The time interval for virus reappearing was calculated from last

negative before previously leaving the hospital to turning positive again of RT-PCR testing

on COVID-19.


15) SARS-CoV-2 specific antibody responses in COVID-19 patients

Okba NMA et al.

https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.03.18.20038059v1. BMJ. França.

- Ensaios sorológicos para a detecção de anticorpos específicos neutralizadores (spike e nucleocapsídeo do

SARS-CoV-2).

- Usando amostras de soro de pacientes com infecções por SARS-CoV-2, outros coronavírus ou outras

infecções patogênicas respiratórias confirmadas por PCR, validamos e testamos vários antígenos usando kits

diferentes de ELISA internos e comerciais.

- Demonstramos que a maioria dos indivíduos infectados com SARS-CoV-2 confirmados por RT-PCR é

soroconvertida, conforme revelado por ELISA internos sensíveis e específicos.

- Descobrimos que os testes ELISA S1 IgG ou IgA comerciais eram de menor especificidade, enquanto a

sensibilidade variava entre os dois, com IgA mostrando maior sensibilidade.

- No geral, os ensaios validados descritos aqui podem ser instrumentos para a detecção de anticorpos

específicos para o SARS-CoV-2, para estudos de diagnóstico e epidemiológicos, além de avaliação de

vacinas.

https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.03.18.20038059v1


Table 3. Correlations between ODs/OD ratios vs PRNT results of the PCR-confirmed

COVID-19 patients tested in Rotterdam (A, n=10 serum samples collected 6-27 days post

diagnosis from 3 French COVID-19 patients) and Berlin (B, n=31 serum samples collected

3-23 days post disease onset from 9 German COVID-19 patients).


Figure 1: Kinetics of antibody responses against SARS-CoV-2 following infection. We

tested one severe (red) and two mild (green and black) SARS-CoV-2 patients for antibody

responses against the (A) Spike (S), (B) spike S1 subunit, (C) spike N-terminal (S1A )

domain, (D) receptor binding domain, (E) nucleocapsid proteins using ELISAs. (F) Virus

neutralizing antibodies were tested using the plaque reduction neutralization assay (PRNT).

Reactivities of sera form the three patients at different time points against whole spikes (G)

and S1 (H) of SARS-CoV-2, SARS-CoV and MERS-CoV were tested by ELISA. SARS-

CoV, severe acute respiratory syndrome coronavirus; MERS-CoV, Middle East respiratory

syndrome coronavirus;


Figure 2: Validation of the use of S1 (A,B), receptor binding domain (RBD; C) and

nucleocapsid (N; D)- based ELISAs for detection of SARS-CoV-2 Infections


16) A comparison study of SARS-CoV-2 IgG antibody between male and

female COVID-19 patients: a possible reason underlying different

outcome between gender.

Zeng F et al.


BMJ. March 27 2020.

- N= 331 (n = 127 homens – 38,4% e n = 204 mulheres 61,6%)

- Médias de idades: 45,2 anos (homens) e 42,2 anos (mulheres)

- Método: imunoensaio por quimioluminescência, cut-off: 10

Table 1. Basic information of patients enrolled.



Figure 1. The level of COVID-19 IgG antibody in mild, general, severe and recovering

COVID-19 patients.

(A) dynamic change of IgG levels in four status of disease of male and female patients.

(B-E) comparison of SARS-CoV-2 IgG antibody between male and female patients in

mild (B), general (C), severe (D) and recovering status patients (E). All data are

expressed as mean ± SEM.


Figure 2. IgG antibody showed an accumulation in high levels in severe status and a

strong production in early phase in female patients.

(A) proportion of different IgG antibody concentration rage in male (left) and female

(right) patients of severe status. (B-C) comparison and statistical analysis of IgG

antibody divided into two groups, 1-100AU/mL(B) and 100-200AU/mL(C), in male and

female patients of severe status. (D) the level of IgG antibody in indicate time points

after disease onset. Patients were divided into four groups according to the weeks after

disease onset. And the IgG level were analyzed in male and female patients. n (2-3W, 3-

4W, 4-5W, 5-6W) =8, 10, 49, 42 for male and 11, 15, 48, 76 for female. All data are

expressed as mean ± SEM.


17) Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2-Specific

Antibody Responses in Coronavirus Disease 2019 Patients.

Okba NMA et al.

Emerg Infect Dis. 2020 Apr 8;26(7). doi: 10.3201/eid2607.200841

- N = 10 amostras do sangue de pacientes com COVID-19 confirmada com 3 RT-PCRs (França)

+ 31 amostras de pacientes de Berlin (R Wolfel).

- Validação do anti-SARS-CoV-2 S1 IgG e IgA por ELISA usando as β versões dos kit comerciais

(EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG, https://www.euroimmun.com). Controles: soro de

pessoas que tiveram HCoV-229E, NL63, or OC43), SARS-CoV, MERS-CoV ou outro vírus respiratório,

além de 45 indivíduos saudáveis.

Table 3. Correlations between ODs/OD ratios and PRNT results of 10 serum samples obtained

from 3 PCR-confirmed COVID-19 patients from France and tested in Rotterdam, the

Netherlands, 6–27 d after diagnosis

Test,

virus Correlations

In-house ELISAs

Euroimmun

ELISAs

S1 N RBD S S1A IgA IgG

PRNT50,

SARS-

CoV-2

Spearman ρ

value

0.87 0.94 0.92 0.94 0.93 0.98 0.92

2-tailed p

value

0.0021 0.0002 0.0005 0.0002 0.0003 <0.0001 0.0005

p value

summary

<0.01

<0.001

<0.001

<0.001

<0.001

<0.0001

<0.001

PRNT90,

SARS-

CoV-2

Spearman ρ

value

0.88 0.88 0.88 0.88 0.88 0.93 0.88

2-tailed p

value

0.0024 0.0024 0.0024 0.0024 0.0024 0.0008 0.002

p value

summary

<0.01 <0.01 <0.01 <0.01 <0.01 <0.001 <0.01


https://www.euroimmun.com/


Table 4

Correlations between ODs/OD ratios and PRNT results of 31 serum

samples from 9 PCR-confirmed COVID-19 patients tested from Germany

and tested in in Berlin, Germany, 3–23 d after disease onset

Test, virus Correlation

Euroimmun ELISAs

IgA IgG

PRNT50, SARS-CoV-2

Spearman ρ value 0.63 0.5077

2-tailed p value 0.056 0.1368

p value summary

NS

NS

PRNT90, SARS-CoV-2 Spearman ρ value 0.7922 0.8525

2-tailed p value 0.0004 <0.0001

p value summary <0.001 <0.0001


Figure 1. Kinetics of antibody responses against SARS-CoV-2 after infection. We tested 1 patient who

had severe coronavirus disease 2019 (red) and 2 patients who had mild coronavirus disease 2019

(green and black) for antibody responses against A) S protein, B) S protein S1 subunit, C) S N-terminal

(S1A) domain, D) RDB, and E) N protein by using ELISAs. F) Virus-neutralizing antibodies were tested by

using a PRNT50. G, H) Reactivities of serum samples from the 3 patients at different time points against

whole S (G) and S1 (H) of SARS-CoV-2, SARS-CoV, and MERS-CoV were tested by ELISAs. Dotted

horizontal lines indicate ELISA cutoff values. MERS-CoV, Middle East respiratory syndrome

coronavirus; N, nucleocapsid; OD, optical density; PRNT50, 50% plaque reduction neutralization test;

RBD, receptor-binding domain; S, spike; SARS-CoV, severe acute respiratory syndrome coronavirus;

SARS-CoV-2, severe acute respiratory syndrome coronavirus 2.

-


Figure 2. Correlations between ODs of ELISAs and PRNT results for PCR-confirmed COVID-19 patients.

A) S; B) S1; C) S1A; D) RBD; E) N. Ten serum samples were collected 6–27 days after diagnosis from 3

COVID-19 patients in France. Dots indicate patients. Dotted horizontal lines indicate ELISA cutoff

values. COVID-19, coronavirus disease 2019; N, nucleocapsid; OD, optical density; PRNT50, 50% plaque

reduction neutralization test; RBD, receptor-binding domain; S, spike; SARS-CoV-2, severe acute

respiratory syndrome coronavirus 2.


Figure 3. Validation of use of S1 (A, B), RBD (C), and N protein (D) ELISAs for detection of SARS-CoV-2–

specific antibodies infections. Gray dots indicate specificity cohorts A–C, including healthy blood

donors (n = 45), non-CoV respiratory infections (n = 76), and HCoV infections (n = 75); blue dots

indicate non-SARS-CoV-2 zoonotic coronavirus infections (i.e., MERS-CoV [n = 7] and SARS-CoV [n = 2]);

red dots indicate patients with severe COVID-19; and green and black dots indicate patients with mild

COVID-19. Dotted horizontal lines indicate ELISA cutoff values. CoV, coronavirus; COVID-19,

coronavirus disease 2019; HCoV, human coronavirus; MERS-CoV, Middle East respiratory syndrome

coronavirus; N, nucleocapsid; OD, optical density; RBD, receptor-binding domain; RFU, relative

fluorescence unit; S, spike; SARS-CoV, severe acute respiratory syndrome coronavirus; SARS-CoV-2;

severe acute respiratory syndrome coronavirus 2.


Figure 4. Validation of 2 commercial ELISAs for detection of SARS-CoV-2–specific IgG (A, C, E, G) and IgA

(B, D, F, H). A, B) Validation of the specificity of the 2 ELISA platforms; C, D) kinetics of antibody

responses in 3 COVID-19 patients; E, F) cross-reactivity of HCoV-OC43 serum samples in commercial

platforms; G, H) correlation between antibody responses detected by the ELISAs and the plaque

reduction neutralization assay. Gray dots indicate specificity cohorts A–C, including healthy blood

donors (n = 45), non-CoV respiratory infections (n = 76), and HCoV infections (n = 75); blue dots

indicate non-SARS-CoV-2 zoonotic coronavirus infections (i.e., MERS-CoV [n = 7] and SARS-CoV [n = 2]);

red dots indicate patients with severe COVID-19; and green and black dots indicate patients with mild

COVID-19. Dotted horizontal lines indicate ELISA cutoff values. CoV, coronavirus; COVID-19,

coronavirus disease 2019; HCoV, human coronavirus; MERS-CoV, Middle East respiratory syndrome

coronavirus; N, nucleocapsid; OD, optical density; PRNT50, plaque reduction neutralization assay; RBD,

receptor-binding domain; RFU, relative fluorescence unit; S, spike; SARS-CoV-2; severe acute

respiratory syndrome coronavirus 2.


Figure 5. Sensitivity of 2 commercial ELISAs for detection of SARS-CoV-2 specific IgG (A, C, E) and IgA (B,

D, F). A, B) Kinetics of antibody responses in 9 COVID-19 patients from Germany; C, D) correlation

between antibody responses detected by the ELISAs and the plaque reduction neutralization assay; E,

F) kits were tested for specificity by using 18 serum samples from patients infected with HCoV (4 from

patients infected with HCoV-229E, 3 from patients infected with HCoV-HKU1, 4 from patients infected

with HCoV-NL63, and 7 from patients infected with HCoV-OC43), MERS-CoV (n = 3), and SARS-CoV (n =

3). Dotted horizontal lines indicate ELISA cutoff values. COVID-19, coronavirus disease 2019; HCoV,

human coronavirus; MERS-CoV, Middle East respiratory syndrome coronavirus; N, nucleocapsid; OD,

optical density; PRNT50, plaque reduction neutralization assay; RBD, receptor-binding domain; RFU,

relative fluorescence unit; S, spike; SARS-CoV, severe acute respiratory syndrome coronavirus; SARS-

CoV-2; severe acute respiratory syndrome coronavirus 2.


18) Virologic and clinical characteristics for prognosis of severe

COVID-19: a retrospective observational study in Wuhan, China

Fu S et al.

https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.04.03.20051763v1.full.pdf

- N=50 pacientes com COVID-19 grave divididos em grupos de recuperação boa ou ruim

- Média de idade: 54 anos (IQR 37-87 anos), 54 homens

- Mais de 50% tinham comobidades: HAS (10, 20%), DM (12, 24%), doença coronarian (11,22%) e

doença pulmonar obstrutiva crônica (3,6%)

- Sintomas: fadiga (39, 78%), febre (28, 56%), tosse (24, 48%), dispneia (100%).

- Um total de 58% dos pacientes teve recuperação ruim e eram mais propensos a ter um intervalo

mais prolongado de eliminação.

- A média de duração da eliminação foi 31 dias (IQR, 27-34 dias) após o início dos sintomas e o

maior tempo de eliminação viral foi 57 dias após o início dos sintomas.

- O intervalo entre o primeiro e o último resultado positivo do teste de RT- PCR (4 a 22 dias) foi

mais prolongado em pacientes com má recuperação.

- Além disso, os testes sorológicos para SARS-Cov-2 também diferiram bastante entre os dois

grupos. A presença de IgM SARS-CoV-2 prolongada esteve intimamente associada à má

recuperação de pacientes com COVID-19 (p = 0,03). Um total de 11 dos 12 (91,66%) pacientes com

boa recuperação apresentam IgG positiva, mas IgM negativa após a internação por um mês. Por

outro lado, 15 (51,7%, 15/29) pacientes com má recuperação tiveram resultados positivos nos testes

para IgM e IgG. A duração mais longa da IgM foi 55 dias após o início da doença, indicando que

pacientes graves com má recuperação eram mais propensos a ter uma fase aguda prolongada.

- Achados na TC à admissão: envolvimento bilateral (98%), imagem em vidro fosco (98%) e

consolidação (42%)

- Fatores de risco associados a pior recuperação: Idade avançada, hiperlipemia, hipoproteinemia,

corticoterapia, consolidação na tomografia computadorizada de tórax (TC) e duração da IgM SARS-

CoV-2 mais prolongada.

- Além disso, as chances de não recuperação das alterações tomográficas foram: pacientes com

hipoproteinemia, hiperlipemia, e níveis elevados de IL-4 e ferritina.

- Desta forma, a eliminação viral e as respostas pró-inflamatórias foram intimamente correlacionadas

com a evolução das lesões pulmonares na TC do tórax.

https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.04.03.20051763v1.full.pdf


Figure1: Heat-map shows the virologic characteristics of SARS-CoV-2. In the y axis,

A(A1-A29) and B(B1-B21) represents the poor recovery group and good recovery group,

respectively. In the x axis, numbers represent the days at symptoms onset. (A) Dynamic

viral shedding pattern in the course of disease of patients with severe COVID-19. Red

rectangle represents the positive viral nucleic-acid PCR test, while gray rectangle represents

the negative viral nucleic-acid PCR test. (B) Serologic tests for SARS-Cov-2 in patients

with severe COVID-19 during the disease course. Circle represents IgM test for SARS-

CoV-2. In particular, black circle represents negative IgM and pink circle represents weak

positive IgM, red represents positive IgM. Red rectangle represents positive IgG test for

SARS-CoV-2.


Figure 2: The viral shedding, inflammatory-response and lung lesions resolution prolife in a

COVID-19 patient with the longest viral shedding. 55-year-old man, with unknown history

of corticosteroid therapy throughout the disease course. Serum cytokine (IL-2, IL-4, IL-6,

IL-10, TNF-α and IFN-γ) levels were measured by ELISA assay. Below were the dynamic

viral shedding pattern and serological tests for SARS-CoV-2. Black circle represents the

negative detection of viral nucleic-acid PCR test, red circle represents the positive result of

viral nucleicacid PCR assay. In the serological tests for SARS-CoV-2, + represents positive

for IgM or IgG. Both SARS-CoV-2-IgM and SARS-CoV-2-IgG of serological tests

remained positive within day 48-55 after symptoms onset. Serial chest CT images shows the

dynamic lung lesions resolution. Day 35 at illness onset: peripheral predominant ground-

glass opacity (diffuse pattern) in the left lobe, and partial consolidation in the right lower

lobe. Day 41-48 at illness onset: lung lesions steadily resolved. Day 56 at illness onset:

significant improvement on chest CT.


19) Antibodies to coronaviruses are higher in older compared with

younger adults and binding antibodies are more sensitive than

neutralizing antibodies in identifying coronavirus‐associated

illnesses

Gorse GJ et al. J Med Virol 2020 May;92 (5):512-517

doi: 10.1002/jmv.25715. Epub 2020 Mar 3

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/jmv.25715

-Estudo prospectivo, observacional, realizado de 2009 a 2013 em voluntários com mais de

60 anos (Grupo 1 = 99 pacientes) e pacientes de 21 a 40 anos (Grupo 2 = 101).

-Foi detectada infecção por coronavirus humano (HCoV) em 43 pacientes, 35% ocorreu em

pacientes estavam no grupo 1 acima de 60 anos e 65% no grupo 2 com idade entre 21 e 40

anos.

-Anticorpos de ligação e neutralização foram detectados em 46,7% dos pacientes do grupo 1

e 33,3% dos pacientes do grupo 2.

- Somente em 35,7% das doenças respiratórias tiveram aumento no número de anticorpos

neutralizantes para HCoV. Isso poderia explicar, em parte, a susceptibilidade a reinfecções

com HCoV.

- O artigo comenta que para o COVID-19 não tem muitas informações sobre isso.

Figura 1. Os títulos médios geométricos (GMT) dos anticorpos por dois métodos para o coronavírus humano (HCoV) 229E, ‐NL63,

‐OC43 e ‐HKU1 são mostrados por faixa etária (15 pares séricos de indivíduos do grupo 1 com 60 a 85 anos de idade) e 28 pares de soro de indivíduos do grupo 2 com idade entre 21 e 40 anos) e no momento da coleta de soro (aguda, coletada dentro de cinco dias após o início

da doença respiratória aguda e convalescente, coletada 3‐4 semanas depois). "Todas as visitas" se referem ao GMT dos soros agudos e

convalescentes juntos pelo grupo de pacientes. As marcas de escala nas extremidades das linhas verticais mostram os níveis correspondentes de anticorpo percentil 25 e 75 acima e abaixo do GMT para indicar uma medida da variabilidade inter-paciente, O

anticorpo GMT de ligação à IgG medido pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) é mostrado no painel A e o anticorpo neutralizante GMT é

mostrado no painel B, categorizado por reatividade às respectivas cepas de HCoV. IgG, imunoglobulina G

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/jmv.25715


Tabela 1. Proporções de pares séricos agudos e convalescentes com pelo menos um aumento de quatro

vezes no título de anticorpos neutralizantes em comparação com os anticorpos de ligação a ELISA em

associação com doenças respiratórias agudas

≥4x aumento no

título de anticorpos

neutralizantes pela

cepa HCoV

> 3x Aumento no título de anticorpos ELISA pela cepa HCoV a [No. (% de 43)]

229E NL63 OC43 HKU1

Sim Não Sim Não Sim Não Sim Não

N = 9 N = 34 N = 17 N = 26 N = 18 N = 25 N = 18 N = 25

229E Sim (N = 11) 1 (2,3) 10 (23,3) 4 (9,3) 7 (16,3) 4 (9,3) 7 (16,3) 6 (14,0) 5 (11,6)

Não (N = 32) 8 (18,6) 24 (55,8) 13 (30,2) 19 (44,2) 14

(32,6)

18

(41,9)

12

(27,9)

20

(46,5)

NL63 Sim (N = 6) 1 (2,3) 5 (11,6) 3 (7,0) 3 (7,0) 1 (2,3) 5 (11,6) 4 (9,3) 2 (4,7)

Não (N = 37) 8 (18,6) 29 (67,5) 14 (32,6) 23 (53,5) 17 (39,5)

20 (46,5)

14 (32,6)

23 (53,5)

OC43 Sim (N = 4) 0 (0) 4 (9,3) 0 (0) 4 (9,3) 2 (4,7) 2 (4,7) 2 (4,7) 2 (4,7)

Não (N = 39) 9 (20,9) 30 (69,8) 17 (39,5) 22 (51,2) 16 (37,2)

23 (53,5)

16 (37,2)

23 (53,5)

Nota : ELISA é um ensaio imunossorvente ligado a enzima, o HCoV é um coronavírus humano.

a Oito pares de soro apresentaram um aumento concomitante mais de três vezes no título de anticorpo

ELISA para duas cepas de HCoV. Seis pares de soro apresentaram um aumento concomitante de mais de

três vezes no título de anticorpo ELISA para três cepas de HCoV. Uma das 43 doenças incluídas nesta

tabela não teve um aumento de mais de três vezes no título de anticorpo ELISA, mas teve o HCoV-

OC43 detectado nas secreções respiratórias e um aumento de quatro vezes no anticorpo neutralizante

para -OC43.

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/jmv.25715#jmv25715-tbl1-note-0002_22


20) Evaluation of Nucleocapsid and Spike Protein-based ELISAs

for detecting antibodies against SARS-CoV-2.

Liu W et al. J Clin Microbiol. 2020 Mar 30. pii: JCM.00461-20. doi: 10.1128/JCM.00461-20

https://jcm.asm.org/content/early/2020/03/27/JCM.00461-20.long

- N=214 pacientes com COVID-19: 68,2% (146) tiveram o resultado positivo no ELISA

para IgM e 70,1% (150) positivos para IgG da proteína do nucleocapsídeo (N). Para a

proteína S (Spike), foi detectada positividade de 77,1% (165) e 74,3% (159) para IgM e IgG,

respectivamente.

- As taxas positivas do ELISA baseadas no rN e rS para detecção de anticorpos (IgM e/ou

IgG) foram de 80,4% e 82,2%, respectivamente.

- Importante ressaltar que o estudo aponta o método como potencial diagnóstico suplementar

para a COVID-19 em condições de 10 dias pós infecção, e em até 35 dias de convalescência.

- Antes ou após este período as taxas de IgM e IgG são detectáveis, mas podem incluir falsos

negativos nesses casos, pois são bem baixas, principalmente IgM, que possui resultados

melhores de sensibilidade.

- Este artigo estabelece-nos um padrão de detecção de IgM e IgG no soro de pacientes

positivos para COVID-19, sendo o período de 11-15 dias de doença o maior pico de ambos

os anticorpos (principalmente IgM para a proteína Spike) portanto o melhor momento para o

diagnóstico, porém isso impede que este seja o método ouro utilizado, como na detecção do

material genético do vírus quando não se sabe de a pessoa está doente ou não, que é o caso

da PCR em tempo real.


https://jcm.asm.org/content/early/2020/03/27/JCM.00461-20.long


rN –based ELISA

rS-based ELISA


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São Paulo, 21 de Junho de 2011 Compartilhados... · from patients with mild-to-moderate cases. Panel C shows the aggregated Ct values of Orf1b on RT-PCR assay in 14 patients with