Tecnica histologica

5/10/2018 Tecnica histologica - slidepdf.com

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TÉCNICA PARA OBTENÇÃO DE LÂMINAS(preparados histológicos permanentes)

1.Colheita do material - é a obtenção da peça, por biópsia ou necropsia.

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2. Fixação – impede a destruição das células porsuas próprias enzimas (autólise), ou bactérias.

Fixadores simples. Ex.: formol Fixadores compostos: Ex.: líquido de Bouin(mistura de formol, ácido pícrico e ácido acético).

3. Desidratação - banhos sucessivos em álcoois deteor crescente (Álcool a 70%, 80%, 90% e 100%).

4. Diafanização - impregnação da peça com umsolvente de parafina (Ex.: xilol)

5. Impregnação pela parafina fundida (estufa a60ºC)

6. Inclusão (formação do bloco deparafina)

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7. Microtomia - cortes com espessura entre 5 a 10 µm (micrômetros).(1 µm = 0,001 mm)

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8. Extensão - os cortes provenientes da microtomia são “enrugados”.Para desfazer estas rugas, são esticados num banho de água e gelatinaa 58°C, e “pescados” com uma lâmina. Leva-se então, à estufa a 37°C,por 2 horas, para que se dê a colagem do corte à lâmina, pelacoagulação da gelatina contida na água quente.

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9. Coloração - tem a finalidade de dar contraste aos componentes

dos tecidos, tornando-os visíveis e destacados uns dos outros.Para realizá-la, são realizados 3 passos:

a) Eliminação da parafina - por meio de banhos sucessivos emsolventes de parafina (xilol, benzol ou toluol),

b) Hidratação - é executada quando o corante utilizado é solúvelem água. Deve ser gradativa, com álcoois de teor decrescente,para evitar o rompimento dos tecidos.

c) ColoraçãoCorantes: compostos químicos com radicais ácidos ou básicosque possuem cor, combinam-se com estruturas básicas ouácidas dos tecidos.

Técnica de H.E.:

Hematoxilina – corante básico (cor roxa)Eosina – corante ácido (cor vermelha)

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Coloração M. G.T .RHE I N GA NT Z ( 2 0

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Técnica de H.E.:

Hematoxilina – corante básico (cor roxa)

Eosina – corante ácido (cor vermelha)

Cora estruturas ácidas:NÚCLEO

Cora estruturas básicas:

CITOPLASMA

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10.Desidratação - visa retirar a água, quando oscorantes utilizados forem soluções aquosas, a fim de

permitir perfeita visualização dos tecidos, pois a água

possui índice de refração diferente do vidro, e ainda

prevenir a difusão dos corantes. Para isto usam-se

banhos em álcoois de teor crescente.

11.Diafanização - a diafanização é feita com xilol, a

fim de tornar os cortes perfeitamente transparentes.

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12. Montagem - é a etapa final da técnica histológica, e consistena colagem da lamínula sobre o corte, com bálsamo do Canadá,que é solúvel em xilol e insolúvel em água. A lamínula impedeque haja hidratação do corte pela umidade do ar ambiente,permitindo então que estas lâminas se mantenham estáveis portempo indefinido. Após a montagem, levam-se as lâminas àestufa, para secagem do bálsamo do Canadá.

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