Técnicas de Identificação de Microrganismos

UNIVERSIDADE REGIONAL DO CARIRI - URCA

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE - CCBSDEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS – DCB

CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICASTÉCNICAS E IDENTIFICAÇÃO DE MICRORGANISMOS

PROFª: MARIA FLAVIANA MORAES BRAGA

MICROSCOPIA DE MICRORGANISMOS

Fernanda Gomes LeiteHerivelto Faustino de Oliveira

Crato – CE05/2012

MICROSCOPIA DE MICRORGANISMOSFernanda Gomes Leite

Herivelto Faustino de Oliveira



Procariotos(bactérias e arqueas): variam entre 300nm e 1µmEucariotos(fungos, algas e protozoários): variam de 10µm a 100µm Virus:(variam de 27nm(bacteriófago ɸX 174) até 300 nm (por virus) de diâmetro

Os microrganismos constituem um grupo de seres vivos de dimensões reduzidas e bastante variáveis de acordo com o grupo a que pertence.



Microscópio Óptico ou de Luz

Microscópio Eletrônico



Microscópio Óptico ou de LuzA resolução é a capacidade que um sistema

óptico tem de distinguir objetos separados por pequenas distâncias.

Limite de Resolução

Limite de Resolução

MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE

Foi desenvolvida a partir da observação de que o material biológico era capaz de alterar a luz incidente sobre ele provocando difração.



DIFRAÇÃO E MATERIAL BIOLÓGICO

Alguns materiais que retardam a onda de luz incidente em meio comprimento de onda podem ser observados no microscópio óptico.

Excelente contraste no meio que os envolve.



DISCOS DE CONTRASTE Para produzir o contraste é preciso dois discos de contraste. 1° colocado anterior ao condensador > anulus 2° plano focal posterior a objetiva > disco de fase



UTILIZAÇÃO

Lentes da objetiva > N° Ph1, Ph2 e Ph3 Anel tem de estar com n° correspondente a n° da objetiva



CONTRASTE INTERFERENCIAL DIRECIONAL (CID)

Difração material biológico + polarização da luz. Gera imagem aparentemente tridimensional com excelente

contraste.



OBTENÇÃO DE IMAGEM EM DIC

Plano de vibração de luz > Polarizador (colocado antes do condensador).

Prisma usado para regular contraste.



VANTAGENS EM RELAÇÃO AO CONTRASTE DE FASE

Pode ser usado em material espesso Melhor análise das extremidades Observação em diferentes planos de foco



MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA

Visualização de microrganismos Baseia-se na utilização de corantes fluorescentes.



Os corantes são capazes de absorver luz de um determinado comprimento de onda, emitindo luz em comprimento maior.



BASEIA-SE NO EFEITO TYNDAL

Explica como vemos partículas de poeira ao sol. O que vemos é o reflexo da poeira

O sist. Fluorescência é adaptado a um microscópio óptico de contraste de fase



IMUNOFLUORESCÊNCIA Marcação da molécula é feita com uso de anticorpos e

fluorocromos.

MICROSCOPIA CONFOCAL Vantagens : elimina a fluorescência das regiões fora de

foco Pode-se aplicar a amostras vivas ou fixadas, e marcadas

com mais de um corante



MICROSCOPIA ELETRÔNICA microscópio eletrônico apareceu em 1932 e vem sendo

rapidamente aperfeiçoado. As máquinas mais atuais permitem aumentos de 5 mil a 500 mil vezes, sem muita dificuldade



A grande diferença desse microscópio para o óptico é q esse utiliza feixes de elétrons em vez de luz.

MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO (MET) Os elétrons, assim como a luz no microscópio óptico,

necessitam atravessar a amostra para gerar uma imagem visível



CONSIDERAÇÕES Não analisa material vivo A imagem é formada pela interação dos elétrons com

as diferentes regiões da amostra A passagem dos elétrons pela amostra gera alterações

devido ao aquecimento



PARA ANALISAR A AMOSTRA

Amostra tem que ser fixada, desidratada e incluída em resina plástica

MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA (MEV)

A imagem é formada pela interação dos elétrons com a superfície da amostra > gerando imagem tridimensional.



AMOSTRA

Amostra deve ser fixada e desidratada, e recebe uma camada de ouro (20nm de espessura)

Os elétrons excitam um cintilador que gera fótons, os quais são então conduzidos por fibra óptica até a tela da TV.

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