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UNIVERSIDADE ESTADUAL DA PARAIacuteBA-UEPB
CENTRO DE CIEcircNCIAS BIOLOacuteGICAS E DA SAUacuteDE ndash CCBS
DEPARTAMENTO DE ODONTOLOGIA
TRABALHO DE CONCLUSAtildeO DE CURSO
ANNE VIRGYNNIA OLIVEIRA ROLIM DE CARVALHO
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA IN VITRO DE PLANTAS DO SEMIAacuteRIDO
PARAIBANO SOBRE ESPEacuteCIES DE STREPTOCOCCUS E CANDIDA
CAMPINA GRANDE
2012
ANNE VIRGYNNIA OLIVEIRA ROLIM DE CARVALHO
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA IN VITRO DE PLANTAS DO SEMIAacuteRIDO
PARAIBANO SOBRE ESPEacuteCIES DE STREPTOCOCCUS E CANDIDA
Trabalho Acadecircmico Orientado apresentado ao Curso
de Odontologia do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas e da
Sauacutede da Universidade Estadual da Paraiacuteba ndash UEPB
como requisito para conclusatildeo do curso
Orientadora Edja Maria Melo de Brito Costa
CAMPINA GRANDE
2012
FICHA CATALOGRAacuteFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL ndash UEPB
C331a Carvalho Anne Virgynnia Oliveira Rolim de
Atividade antimicrobiana in vitro de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre espeacutecies de stretococcus e candida [manuscrito]
Anne Virgynnia Oliveira Rolim de Carvalho ndash 2012
53 f il color
Trabalho de Conclusatildeo de Curso (Graduaccedilatildeo em
Odontologia) ndash Universidade Estadual da Paraiacuteba Centro de
Ciecircncias Bioloacutegicas e da Sauacutede 2012
ldquoOrientaccedilatildeo Profa Dra Edja Maria Melo de Brito Cosa
Departamento de Odontologiardquo
ldquoCo-orientaccedilatildeo Profa Dra Ana Claacuteudia Dantas Medeiros
Departamento de Farmaacuteciardquo
ldquoCo-orientaccedilatildeo Profa Dra Denise Noacutebrega Diniz
Departamento de Odontologiardquo
1 Microbiologia oral 2 Odontologia I Tiacutetulo
21 ed CDD 61701
ANNE VIRGYNNIA OLIVEIRA ROLIM DE CARVALHO
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA IN VITRO DE PLANTAS DO SEMIAacuteRIDO
PARAIBANO SOBRE ESPEacuteCIES DE STREPTOCOCCUS E CANDIDA
TRABALHO DE CONCLUSAtildeO DE CURSO - TCC
Aprovado em 28 de Novembro de 2012
Dedico esta bem como todas as minhas
demais conquistas a Deus aos meus
amados pais (Walker e Rejane) e minhas
irmatildes (Rebecca e Laura) Meus melhores e
maiores presentes
AGRADECIMENTOS
Aos meus pais Walker e Rejane pois deles recebi o dom mais precioso do universo a
vida Jaacute por isso seria infinitamente grata Poreacutem eles natildeo se contentaram em presentear- me
apenas com ela Revestiram-me de amor carinho e dedicaccedilatildeo que me transformaram na
pessoa que sou hoje abriram as portas do meu futuro com o estudo Muito obrigado a vocecircs
por viver com dignidade e respeito e acima de tudo me ensinaram o que eacute famiacutelia Vocecircs que
nos momentos de minha ausecircncia dedicados ao estudo superior sempre fizeram entender que
o futuro eacute feito a partir da constante dedicaccedilatildeo no presente Se pudesse fazecirc-los eternos
eternos os faria Minha imensa gratidatildeo vai aleacutem de um muito obrigado amo
incomensuravelmente Essa vitoacuteria eacute principalmente de vocecircs
A minhas irmatildes Laura( Belecircro) pela descontraccedilatildeo e meiguice quando me encontrava e
principalmente a minha irmatilde Rebecca (Bebela Zubeco) que por seu esforccedilo e dedicaccedilatildeo para
passar em medicina me inspira a estudar cada vez mais mostrando-me que ldquoOs fracos natildeo
tentamos covardes desistem somente os fortes conquistamrdquo
A meu avocirc Severino por toda sua humildade e generosidade com que trata seus pacientes
servindo-me de exemplo As minhas avoacutes Luiza e Edna que sempre me e acompanharam
nessa caminhada com suas preces e oraccedilotildees Eu amo vocecircs
A minha tia-madrinha Walkleide por sempre vibrar com minhas conquistas Uma pessoa
altamente competente amiga e que acima de todos me estimula a fazer o que mais quero na
vida o concurso da Poliacutecia Federal
Natildeo poderia deixar de agradecer a uma Nevuh e Poi laacute de Souza Eles nada mais eram que a
minha nova famiacutelia em Campina Grande A Sarah pela cumplicidade e baderna no dia-a-dia
na Universidade por ser minha dupla na cliacutenica minha parceira de apecirc parceira do EMI e
pela convivecircncia nesses 5 anos que seratildeo infindaacuteveis A Arnaldo pelas saacutebias palavras pelas
constantes vergonhas que me fazia passar nos cantos vocecirc seraacute sempre para mim um siacutembolo
de perseveranccedila e muita inteligecircncia
As minhas primas Maria Luiza Sophia Suellen e aos meus amigos(as) Raeacutelyton Nilla
Andrean Gabi Ceicinha Rayanne Bel Suzana Baacuterbara pela constante presenccedila em
minha vida me apoiando e me descontraindo nos finais de semana feriados Vocecircs satildeo mais
do que especiais para mim
A minha amada orientadora Edja a ldquochefinhardquo por ter acreditado num sonho que agora eacute
de todos por ter mostrado o caminho das obras cientiacuteficas e ao que com dedicaccedilatildeo
paciecircncia doccedilura incentivo acessibilidade e competecircncia conduz sua profissatildeo (obrigado
pela amizade e confianccedila titia Edja)
A minha querida Ana Claacuteudia por fazer parte desta caminhada me ldquoadotandordquo trazendo
contribuiccedilotildees para o enriquecimento deste estudo A palavra ldquodoutorardquo nunca faraacute justiccedila a
essa professora dedicada pois ela consegue ser muito mais que isso
A professora Denise uma pessoa muito receptiva que tem incorporado em si o espiacuterito da
humanizaccedilatildeo na Odontologia Com ela aprendi a valorizar os miacutenimos detalhes que
venham a existir em uma radiografia Obrigada por confiar em mim tambeacutem as
suas pesquisas
A professora Dilma que nos ajudou na coleta das plantas com todos os seus
conhecimentos
A Universidade e a coordenaccedilatildeo de Odontologia o muito obrigado eacute pouco por tamanha
competecircncia Guardarei com carinho essa ldquoescolardquo que me ensinou mais do que a
Odontologia
Aos funcionaacuterios da Universidade pela generosidade auxiacutelio confianccedila e dedicaccedilatildeo
A turma pela amizade e pelo GRANDE conviacutevio nesses anos e por me receberem de
braccedilos abertos Em especial a 6 pessoinhas que marcaram de uma forma inexplicaacutevel a minha
vida Obrigada Sarah Miguel Camila Joana Marayza e Monalisa vocecircs satildeo realmente
incriacuteveis
A todos os meus companheiros do LABDEM minha segunda famiacutelia que de alguma forma
ajudou na concretizaccedilatildeo desse sonho e tambeacutem a todos que natildeo participaram diretamente
mas que aconselharam quando eu natildeo sabia o que fazer Agradecer em especial a Cleildo
Deysiane Felipe Layanne e um agradecimento mais do que especial a Jonny Diego uma
amigo da terra natal que me apresentou a ldquovida de pesquisadorardquo sou eternamente grata a
vocecirc
A MELHOR DUPLA de iniciaccedilatildeo cientiacutefica que algueacutem pode ter Dedico uma parte mais do
que especial do meu TCC a pessoa que fez juntamente comigo na praacutetica do laboratoacuterio esse
trabalho vir a existir Eveline minha querida ldquoBoyrdquo ldquoDuas atrevidasrdquo como jaacute dizia ela que
souberam aceitar o desafia proposto pela chefinha Edja e assim tornando-se pioneira na
teacutecnica da Microdiluiccedilatildeo na UEPB Obrigada por tudo Sucesso nessa nova etapa de sua vida
ldquoMestrinhardquo Tambeacutem as mais novas companheiras de PIBIC Suzana Eacuterica Suzyclay e a
aluna do mestrado Renally com vocecircs tambeacutem aprendi muito
Por final a aquele que me permitiu tudo isso ao longo de toda a minha vida e natildeo somente
nestes anos como universitaacuteria a vocecirc meu DEUS obrigado reconheccedilo cada vez mais em
todos os meus momentos que vocecirc eacute o maior mestre Agradeccedilo a ti por nunca nos ter deixado
nos momentos difiacuteceis por nos ter permitido de chegar ateacute aqui
LISTA DE SIGLAS ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS
ATCC American Type Culture Collection
C Candida
CBM concentraccedilatildeo bactericida miacutenima
Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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ANNE VIRGYNNIA OLIVEIRA ROLIM DE CARVALHO
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA IN VITRO DE PLANTAS DO SEMIAacuteRIDO
PARAIBANO SOBRE ESPEacuteCIES DE STREPTOCOCCUS E CANDIDA
Trabalho Acadecircmico Orientado apresentado ao Curso
de Odontologia do Centro de Ciecircncias Bioloacutegicas e da
Sauacutede da Universidade Estadual da Paraiacuteba ndash UEPB
como requisito para conclusatildeo do curso
Orientadora Edja Maria Melo de Brito Costa
CAMPINA GRANDE
2012
FICHA CATALOGRAacuteFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL ndash UEPB
C331a Carvalho Anne Virgynnia Oliveira Rolim de
Atividade antimicrobiana in vitro de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre espeacutecies de stretococcus e candida [manuscrito]
Anne Virgynnia Oliveira Rolim de Carvalho ndash 2012
53 f il color
Trabalho de Conclusatildeo de Curso (Graduaccedilatildeo em
Odontologia) ndash Universidade Estadual da Paraiacuteba Centro de
Ciecircncias Bioloacutegicas e da Sauacutede 2012
ldquoOrientaccedilatildeo Profa Dra Edja Maria Melo de Brito Cosa
Departamento de Odontologiardquo
ldquoCo-orientaccedilatildeo Profa Dra Ana Claacuteudia Dantas Medeiros
Departamento de Farmaacuteciardquo
ldquoCo-orientaccedilatildeo Profa Dra Denise Noacutebrega Diniz
Departamento de Odontologiardquo
1 Microbiologia oral 2 Odontologia I Tiacutetulo
21 ed CDD 61701
ANNE VIRGYNNIA OLIVEIRA ROLIM DE CARVALHO
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA IN VITRO DE PLANTAS DO SEMIAacuteRIDO
PARAIBANO SOBRE ESPEacuteCIES DE STREPTOCOCCUS E CANDIDA
TRABALHO DE CONCLUSAtildeO DE CURSO - TCC
Aprovado em 28 de Novembro de 2012
Dedico esta bem como todas as minhas
demais conquistas a Deus aos meus
amados pais (Walker e Rejane) e minhas
irmatildes (Rebecca e Laura) Meus melhores e
maiores presentes
AGRADECIMENTOS
Aos meus pais Walker e Rejane pois deles recebi o dom mais precioso do universo a
vida Jaacute por isso seria infinitamente grata Poreacutem eles natildeo se contentaram em presentear- me
apenas com ela Revestiram-me de amor carinho e dedicaccedilatildeo que me transformaram na
pessoa que sou hoje abriram as portas do meu futuro com o estudo Muito obrigado a vocecircs
por viver com dignidade e respeito e acima de tudo me ensinaram o que eacute famiacutelia Vocecircs que
nos momentos de minha ausecircncia dedicados ao estudo superior sempre fizeram entender que
o futuro eacute feito a partir da constante dedicaccedilatildeo no presente Se pudesse fazecirc-los eternos
eternos os faria Minha imensa gratidatildeo vai aleacutem de um muito obrigado amo
incomensuravelmente Essa vitoacuteria eacute principalmente de vocecircs
A minhas irmatildes Laura( Belecircro) pela descontraccedilatildeo e meiguice quando me encontrava e
principalmente a minha irmatilde Rebecca (Bebela Zubeco) que por seu esforccedilo e dedicaccedilatildeo para
passar em medicina me inspira a estudar cada vez mais mostrando-me que ldquoOs fracos natildeo
tentamos covardes desistem somente os fortes conquistamrdquo
A meu avocirc Severino por toda sua humildade e generosidade com que trata seus pacientes
servindo-me de exemplo As minhas avoacutes Luiza e Edna que sempre me e acompanharam
nessa caminhada com suas preces e oraccedilotildees Eu amo vocecircs
A minha tia-madrinha Walkleide por sempre vibrar com minhas conquistas Uma pessoa
altamente competente amiga e que acima de todos me estimula a fazer o que mais quero na
vida o concurso da Poliacutecia Federal
Natildeo poderia deixar de agradecer a uma Nevuh e Poi laacute de Souza Eles nada mais eram que a
minha nova famiacutelia em Campina Grande A Sarah pela cumplicidade e baderna no dia-a-dia
na Universidade por ser minha dupla na cliacutenica minha parceira de apecirc parceira do EMI e
pela convivecircncia nesses 5 anos que seratildeo infindaacuteveis A Arnaldo pelas saacutebias palavras pelas
constantes vergonhas que me fazia passar nos cantos vocecirc seraacute sempre para mim um siacutembolo
de perseveranccedila e muita inteligecircncia
As minhas primas Maria Luiza Sophia Suellen e aos meus amigos(as) Raeacutelyton Nilla
Andrean Gabi Ceicinha Rayanne Bel Suzana Baacuterbara pela constante presenccedila em
minha vida me apoiando e me descontraindo nos finais de semana feriados Vocecircs satildeo mais
do que especiais para mim
A minha amada orientadora Edja a ldquochefinhardquo por ter acreditado num sonho que agora eacute
de todos por ter mostrado o caminho das obras cientiacuteficas e ao que com dedicaccedilatildeo
paciecircncia doccedilura incentivo acessibilidade e competecircncia conduz sua profissatildeo (obrigado
pela amizade e confianccedila titia Edja)
A minha querida Ana Claacuteudia por fazer parte desta caminhada me ldquoadotandordquo trazendo
contribuiccedilotildees para o enriquecimento deste estudo A palavra ldquodoutorardquo nunca faraacute justiccedila a
essa professora dedicada pois ela consegue ser muito mais que isso
A professora Denise uma pessoa muito receptiva que tem incorporado em si o espiacuterito da
humanizaccedilatildeo na Odontologia Com ela aprendi a valorizar os miacutenimos detalhes que
venham a existir em uma radiografia Obrigada por confiar em mim tambeacutem as
suas pesquisas
A professora Dilma que nos ajudou na coleta das plantas com todos os seus
conhecimentos
A Universidade e a coordenaccedilatildeo de Odontologia o muito obrigado eacute pouco por tamanha
competecircncia Guardarei com carinho essa ldquoescolardquo que me ensinou mais do que a
Odontologia
Aos funcionaacuterios da Universidade pela generosidade auxiacutelio confianccedila e dedicaccedilatildeo
A turma pela amizade e pelo GRANDE conviacutevio nesses anos e por me receberem de
braccedilos abertos Em especial a 6 pessoinhas que marcaram de uma forma inexplicaacutevel a minha
vida Obrigada Sarah Miguel Camila Joana Marayza e Monalisa vocecircs satildeo realmente
incriacuteveis
A todos os meus companheiros do LABDEM minha segunda famiacutelia que de alguma forma
ajudou na concretizaccedilatildeo desse sonho e tambeacutem a todos que natildeo participaram diretamente
mas que aconselharam quando eu natildeo sabia o que fazer Agradecer em especial a Cleildo
Deysiane Felipe Layanne e um agradecimento mais do que especial a Jonny Diego uma
amigo da terra natal que me apresentou a ldquovida de pesquisadorardquo sou eternamente grata a
vocecirc
A MELHOR DUPLA de iniciaccedilatildeo cientiacutefica que algueacutem pode ter Dedico uma parte mais do
que especial do meu TCC a pessoa que fez juntamente comigo na praacutetica do laboratoacuterio esse
trabalho vir a existir Eveline minha querida ldquoBoyrdquo ldquoDuas atrevidasrdquo como jaacute dizia ela que
souberam aceitar o desafia proposto pela chefinha Edja e assim tornando-se pioneira na
teacutecnica da Microdiluiccedilatildeo na UEPB Obrigada por tudo Sucesso nessa nova etapa de sua vida
ldquoMestrinhardquo Tambeacutem as mais novas companheiras de PIBIC Suzana Eacuterica Suzyclay e a
aluna do mestrado Renally com vocecircs tambeacutem aprendi muito
Por final a aquele que me permitiu tudo isso ao longo de toda a minha vida e natildeo somente
nestes anos como universitaacuteria a vocecirc meu DEUS obrigado reconheccedilo cada vez mais em
todos os meus momentos que vocecirc eacute o maior mestre Agradeccedilo a ti por nunca nos ter deixado
nos momentos difiacuteceis por nos ter permitido de chegar ateacute aqui
LISTA DE SIGLAS ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS
ATCC American Type Culture Collection
C Candida
CBM concentraccedilatildeo bactericida miacutenima
Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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C331a Carvalho Anne Virgynnia Oliveira Rolim de
Atividade antimicrobiana in vitro de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre espeacutecies de stretococcus e candida [manuscrito]
Anne Virgynnia Oliveira Rolim de Carvalho ndash 2012
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Trabalho de Conclusatildeo de Curso (Graduaccedilatildeo em
Odontologia) ndash Universidade Estadual da Paraiacuteba Centro de
Ciecircncias Bioloacutegicas e da Sauacutede 2012
ldquoOrientaccedilatildeo Profa Dra Edja Maria Melo de Brito Cosa
Departamento de Odontologiardquo
ldquoCo-orientaccedilatildeo Profa Dra Ana Claacuteudia Dantas Medeiros
Departamento de Farmaacuteciardquo
ldquoCo-orientaccedilatildeo Profa Dra Denise Noacutebrega Diniz
Departamento de Odontologiardquo
1 Microbiologia oral 2 Odontologia I Tiacutetulo
21 ed CDD 61701
ANNE VIRGYNNIA OLIVEIRA ROLIM DE CARVALHO
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA IN VITRO DE PLANTAS DO SEMIAacuteRIDO
PARAIBANO SOBRE ESPEacuteCIES DE STREPTOCOCCUS E CANDIDA
TRABALHO DE CONCLUSAtildeO DE CURSO - TCC
Aprovado em 28 de Novembro de 2012
Dedico esta bem como todas as minhas
demais conquistas a Deus aos meus
amados pais (Walker e Rejane) e minhas
irmatildes (Rebecca e Laura) Meus melhores e
maiores presentes
AGRADECIMENTOS
Aos meus pais Walker e Rejane pois deles recebi o dom mais precioso do universo a
vida Jaacute por isso seria infinitamente grata Poreacutem eles natildeo se contentaram em presentear- me
apenas com ela Revestiram-me de amor carinho e dedicaccedilatildeo que me transformaram na
pessoa que sou hoje abriram as portas do meu futuro com o estudo Muito obrigado a vocecircs
por viver com dignidade e respeito e acima de tudo me ensinaram o que eacute famiacutelia Vocecircs que
nos momentos de minha ausecircncia dedicados ao estudo superior sempre fizeram entender que
o futuro eacute feito a partir da constante dedicaccedilatildeo no presente Se pudesse fazecirc-los eternos
eternos os faria Minha imensa gratidatildeo vai aleacutem de um muito obrigado amo
incomensuravelmente Essa vitoacuteria eacute principalmente de vocecircs
A minhas irmatildes Laura( Belecircro) pela descontraccedilatildeo e meiguice quando me encontrava e
principalmente a minha irmatilde Rebecca (Bebela Zubeco) que por seu esforccedilo e dedicaccedilatildeo para
passar em medicina me inspira a estudar cada vez mais mostrando-me que ldquoOs fracos natildeo
tentamos covardes desistem somente os fortes conquistamrdquo
A meu avocirc Severino por toda sua humildade e generosidade com que trata seus pacientes
servindo-me de exemplo As minhas avoacutes Luiza e Edna que sempre me e acompanharam
nessa caminhada com suas preces e oraccedilotildees Eu amo vocecircs
A minha tia-madrinha Walkleide por sempre vibrar com minhas conquistas Uma pessoa
altamente competente amiga e que acima de todos me estimula a fazer o que mais quero na
vida o concurso da Poliacutecia Federal
Natildeo poderia deixar de agradecer a uma Nevuh e Poi laacute de Souza Eles nada mais eram que a
minha nova famiacutelia em Campina Grande A Sarah pela cumplicidade e baderna no dia-a-dia
na Universidade por ser minha dupla na cliacutenica minha parceira de apecirc parceira do EMI e
pela convivecircncia nesses 5 anos que seratildeo infindaacuteveis A Arnaldo pelas saacutebias palavras pelas
constantes vergonhas que me fazia passar nos cantos vocecirc seraacute sempre para mim um siacutembolo
de perseveranccedila e muita inteligecircncia
As minhas primas Maria Luiza Sophia Suellen e aos meus amigos(as) Raeacutelyton Nilla
Andrean Gabi Ceicinha Rayanne Bel Suzana Baacuterbara pela constante presenccedila em
minha vida me apoiando e me descontraindo nos finais de semana feriados Vocecircs satildeo mais
do que especiais para mim
A minha amada orientadora Edja a ldquochefinhardquo por ter acreditado num sonho que agora eacute
de todos por ter mostrado o caminho das obras cientiacuteficas e ao que com dedicaccedilatildeo
paciecircncia doccedilura incentivo acessibilidade e competecircncia conduz sua profissatildeo (obrigado
pela amizade e confianccedila titia Edja)
A minha querida Ana Claacuteudia por fazer parte desta caminhada me ldquoadotandordquo trazendo
contribuiccedilotildees para o enriquecimento deste estudo A palavra ldquodoutorardquo nunca faraacute justiccedila a
essa professora dedicada pois ela consegue ser muito mais que isso
A professora Denise uma pessoa muito receptiva que tem incorporado em si o espiacuterito da
humanizaccedilatildeo na Odontologia Com ela aprendi a valorizar os miacutenimos detalhes que
venham a existir em uma radiografia Obrigada por confiar em mim tambeacutem as
suas pesquisas
A professora Dilma que nos ajudou na coleta das plantas com todos os seus
conhecimentos
A Universidade e a coordenaccedilatildeo de Odontologia o muito obrigado eacute pouco por tamanha
competecircncia Guardarei com carinho essa ldquoescolardquo que me ensinou mais do que a
Odontologia
Aos funcionaacuterios da Universidade pela generosidade auxiacutelio confianccedila e dedicaccedilatildeo
A turma pela amizade e pelo GRANDE conviacutevio nesses anos e por me receberem de
braccedilos abertos Em especial a 6 pessoinhas que marcaram de uma forma inexplicaacutevel a minha
vida Obrigada Sarah Miguel Camila Joana Marayza e Monalisa vocecircs satildeo realmente
incriacuteveis
A todos os meus companheiros do LABDEM minha segunda famiacutelia que de alguma forma
ajudou na concretizaccedilatildeo desse sonho e tambeacutem a todos que natildeo participaram diretamente
mas que aconselharam quando eu natildeo sabia o que fazer Agradecer em especial a Cleildo
Deysiane Felipe Layanne e um agradecimento mais do que especial a Jonny Diego uma
amigo da terra natal que me apresentou a ldquovida de pesquisadorardquo sou eternamente grata a
vocecirc
A MELHOR DUPLA de iniciaccedilatildeo cientiacutefica que algueacutem pode ter Dedico uma parte mais do
que especial do meu TCC a pessoa que fez juntamente comigo na praacutetica do laboratoacuterio esse
trabalho vir a existir Eveline minha querida ldquoBoyrdquo ldquoDuas atrevidasrdquo como jaacute dizia ela que
souberam aceitar o desafia proposto pela chefinha Edja e assim tornando-se pioneira na
teacutecnica da Microdiluiccedilatildeo na UEPB Obrigada por tudo Sucesso nessa nova etapa de sua vida
ldquoMestrinhardquo Tambeacutem as mais novas companheiras de PIBIC Suzana Eacuterica Suzyclay e a
aluna do mestrado Renally com vocecircs tambeacutem aprendi muito
Por final a aquele que me permitiu tudo isso ao longo de toda a minha vida e natildeo somente
nestes anos como universitaacuteria a vocecirc meu DEUS obrigado reconheccedilo cada vez mais em
todos os meus momentos que vocecirc eacute o maior mestre Agradeccedilo a ti por nunca nos ter deixado
nos momentos difiacuteceis por nos ter permitido de chegar ateacute aqui
LISTA DE SIGLAS ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS
ATCC American Type Culture Collection
C Candida
CBM concentraccedilatildeo bactericida miacutenima
Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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ATIVIDADE ANTIMICROBIANA IN VITRO DE PLANTAS DO SEMIAacuteRIDO
PARAIBANO SOBRE ESPEacuteCIES DE STREPTOCOCCUS E CANDIDA
TRABALHO DE CONCLUSAtildeO DE CURSO - TCC
Aprovado em 28 de Novembro de 2012
Dedico esta bem como todas as minhas
demais conquistas a Deus aos meus
amados pais (Walker e Rejane) e minhas
irmatildes (Rebecca e Laura) Meus melhores e
maiores presentes
AGRADECIMENTOS
Aos meus pais Walker e Rejane pois deles recebi o dom mais precioso do universo a
vida Jaacute por isso seria infinitamente grata Poreacutem eles natildeo se contentaram em presentear- me
apenas com ela Revestiram-me de amor carinho e dedicaccedilatildeo que me transformaram na
pessoa que sou hoje abriram as portas do meu futuro com o estudo Muito obrigado a vocecircs
por viver com dignidade e respeito e acima de tudo me ensinaram o que eacute famiacutelia Vocecircs que
nos momentos de minha ausecircncia dedicados ao estudo superior sempre fizeram entender que
o futuro eacute feito a partir da constante dedicaccedilatildeo no presente Se pudesse fazecirc-los eternos
eternos os faria Minha imensa gratidatildeo vai aleacutem de um muito obrigado amo
incomensuravelmente Essa vitoacuteria eacute principalmente de vocecircs
A minhas irmatildes Laura( Belecircro) pela descontraccedilatildeo e meiguice quando me encontrava e
principalmente a minha irmatilde Rebecca (Bebela Zubeco) que por seu esforccedilo e dedicaccedilatildeo para
passar em medicina me inspira a estudar cada vez mais mostrando-me que ldquoOs fracos natildeo
tentamos covardes desistem somente os fortes conquistamrdquo
A meu avocirc Severino por toda sua humildade e generosidade com que trata seus pacientes
servindo-me de exemplo As minhas avoacutes Luiza e Edna que sempre me e acompanharam
nessa caminhada com suas preces e oraccedilotildees Eu amo vocecircs
A minha tia-madrinha Walkleide por sempre vibrar com minhas conquistas Uma pessoa
altamente competente amiga e que acima de todos me estimula a fazer o que mais quero na
vida o concurso da Poliacutecia Federal
Natildeo poderia deixar de agradecer a uma Nevuh e Poi laacute de Souza Eles nada mais eram que a
minha nova famiacutelia em Campina Grande A Sarah pela cumplicidade e baderna no dia-a-dia
na Universidade por ser minha dupla na cliacutenica minha parceira de apecirc parceira do EMI e
pela convivecircncia nesses 5 anos que seratildeo infindaacuteveis A Arnaldo pelas saacutebias palavras pelas
constantes vergonhas que me fazia passar nos cantos vocecirc seraacute sempre para mim um siacutembolo
de perseveranccedila e muita inteligecircncia
As minhas primas Maria Luiza Sophia Suellen e aos meus amigos(as) Raeacutelyton Nilla
Andrean Gabi Ceicinha Rayanne Bel Suzana Baacuterbara pela constante presenccedila em
minha vida me apoiando e me descontraindo nos finais de semana feriados Vocecircs satildeo mais
do que especiais para mim
A minha amada orientadora Edja a ldquochefinhardquo por ter acreditado num sonho que agora eacute
de todos por ter mostrado o caminho das obras cientiacuteficas e ao que com dedicaccedilatildeo
paciecircncia doccedilura incentivo acessibilidade e competecircncia conduz sua profissatildeo (obrigado
pela amizade e confianccedila titia Edja)
A minha querida Ana Claacuteudia por fazer parte desta caminhada me ldquoadotandordquo trazendo
contribuiccedilotildees para o enriquecimento deste estudo A palavra ldquodoutorardquo nunca faraacute justiccedila a
essa professora dedicada pois ela consegue ser muito mais que isso
A professora Denise uma pessoa muito receptiva que tem incorporado em si o espiacuterito da
humanizaccedilatildeo na Odontologia Com ela aprendi a valorizar os miacutenimos detalhes que
venham a existir em uma radiografia Obrigada por confiar em mim tambeacutem as
suas pesquisas
A professora Dilma que nos ajudou na coleta das plantas com todos os seus
conhecimentos
A Universidade e a coordenaccedilatildeo de Odontologia o muito obrigado eacute pouco por tamanha
competecircncia Guardarei com carinho essa ldquoescolardquo que me ensinou mais do que a
Odontologia
Aos funcionaacuterios da Universidade pela generosidade auxiacutelio confianccedila e dedicaccedilatildeo
A turma pela amizade e pelo GRANDE conviacutevio nesses anos e por me receberem de
braccedilos abertos Em especial a 6 pessoinhas que marcaram de uma forma inexplicaacutevel a minha
vida Obrigada Sarah Miguel Camila Joana Marayza e Monalisa vocecircs satildeo realmente
incriacuteveis
A todos os meus companheiros do LABDEM minha segunda famiacutelia que de alguma forma
ajudou na concretizaccedilatildeo desse sonho e tambeacutem a todos que natildeo participaram diretamente
mas que aconselharam quando eu natildeo sabia o que fazer Agradecer em especial a Cleildo
Deysiane Felipe Layanne e um agradecimento mais do que especial a Jonny Diego uma
amigo da terra natal que me apresentou a ldquovida de pesquisadorardquo sou eternamente grata a
vocecirc
A MELHOR DUPLA de iniciaccedilatildeo cientiacutefica que algueacutem pode ter Dedico uma parte mais do
que especial do meu TCC a pessoa que fez juntamente comigo na praacutetica do laboratoacuterio esse
trabalho vir a existir Eveline minha querida ldquoBoyrdquo ldquoDuas atrevidasrdquo como jaacute dizia ela que
souberam aceitar o desafia proposto pela chefinha Edja e assim tornando-se pioneira na
teacutecnica da Microdiluiccedilatildeo na UEPB Obrigada por tudo Sucesso nessa nova etapa de sua vida
ldquoMestrinhardquo Tambeacutem as mais novas companheiras de PIBIC Suzana Eacuterica Suzyclay e a
aluna do mestrado Renally com vocecircs tambeacutem aprendi muito
Por final a aquele que me permitiu tudo isso ao longo de toda a minha vida e natildeo somente
nestes anos como universitaacuteria a vocecirc meu DEUS obrigado reconheccedilo cada vez mais em
todos os meus momentos que vocecirc eacute o maior mestre Agradeccedilo a ti por nunca nos ter deixado
nos momentos difiacuteceis por nos ter permitido de chegar ateacute aqui
LISTA DE SIGLAS ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS
ATCC American Type Culture Collection
C Candida
CBM concentraccedilatildeo bactericida miacutenima
Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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Dedico esta bem como todas as minhas
demais conquistas a Deus aos meus
amados pais (Walker e Rejane) e minhas
irmatildes (Rebecca e Laura) Meus melhores e
maiores presentes
AGRADECIMENTOS
Aos meus pais Walker e Rejane pois deles recebi o dom mais precioso do universo a
vida Jaacute por isso seria infinitamente grata Poreacutem eles natildeo se contentaram em presentear- me
apenas com ela Revestiram-me de amor carinho e dedicaccedilatildeo que me transformaram na
pessoa que sou hoje abriram as portas do meu futuro com o estudo Muito obrigado a vocecircs
por viver com dignidade e respeito e acima de tudo me ensinaram o que eacute famiacutelia Vocecircs que
nos momentos de minha ausecircncia dedicados ao estudo superior sempre fizeram entender que
o futuro eacute feito a partir da constante dedicaccedilatildeo no presente Se pudesse fazecirc-los eternos
eternos os faria Minha imensa gratidatildeo vai aleacutem de um muito obrigado amo
incomensuravelmente Essa vitoacuteria eacute principalmente de vocecircs
A minhas irmatildes Laura( Belecircro) pela descontraccedilatildeo e meiguice quando me encontrava e
principalmente a minha irmatilde Rebecca (Bebela Zubeco) que por seu esforccedilo e dedicaccedilatildeo para
passar em medicina me inspira a estudar cada vez mais mostrando-me que ldquoOs fracos natildeo
tentamos covardes desistem somente os fortes conquistamrdquo
A meu avocirc Severino por toda sua humildade e generosidade com que trata seus pacientes
servindo-me de exemplo As minhas avoacutes Luiza e Edna que sempre me e acompanharam
nessa caminhada com suas preces e oraccedilotildees Eu amo vocecircs
A minha tia-madrinha Walkleide por sempre vibrar com minhas conquistas Uma pessoa
altamente competente amiga e que acima de todos me estimula a fazer o que mais quero na
vida o concurso da Poliacutecia Federal
Natildeo poderia deixar de agradecer a uma Nevuh e Poi laacute de Souza Eles nada mais eram que a
minha nova famiacutelia em Campina Grande A Sarah pela cumplicidade e baderna no dia-a-dia
na Universidade por ser minha dupla na cliacutenica minha parceira de apecirc parceira do EMI e
pela convivecircncia nesses 5 anos que seratildeo infindaacuteveis A Arnaldo pelas saacutebias palavras pelas
constantes vergonhas que me fazia passar nos cantos vocecirc seraacute sempre para mim um siacutembolo
de perseveranccedila e muita inteligecircncia
As minhas primas Maria Luiza Sophia Suellen e aos meus amigos(as) Raeacutelyton Nilla
Andrean Gabi Ceicinha Rayanne Bel Suzana Baacuterbara pela constante presenccedila em
minha vida me apoiando e me descontraindo nos finais de semana feriados Vocecircs satildeo mais
do que especiais para mim
A minha amada orientadora Edja a ldquochefinhardquo por ter acreditado num sonho que agora eacute
de todos por ter mostrado o caminho das obras cientiacuteficas e ao que com dedicaccedilatildeo
paciecircncia doccedilura incentivo acessibilidade e competecircncia conduz sua profissatildeo (obrigado
pela amizade e confianccedila titia Edja)
A minha querida Ana Claacuteudia por fazer parte desta caminhada me ldquoadotandordquo trazendo
contribuiccedilotildees para o enriquecimento deste estudo A palavra ldquodoutorardquo nunca faraacute justiccedila a
essa professora dedicada pois ela consegue ser muito mais que isso
A professora Denise uma pessoa muito receptiva que tem incorporado em si o espiacuterito da
humanizaccedilatildeo na Odontologia Com ela aprendi a valorizar os miacutenimos detalhes que
venham a existir em uma radiografia Obrigada por confiar em mim tambeacutem as
suas pesquisas
A professora Dilma que nos ajudou na coleta das plantas com todos os seus
conhecimentos
A Universidade e a coordenaccedilatildeo de Odontologia o muito obrigado eacute pouco por tamanha
competecircncia Guardarei com carinho essa ldquoescolardquo que me ensinou mais do que a
Odontologia
Aos funcionaacuterios da Universidade pela generosidade auxiacutelio confianccedila e dedicaccedilatildeo
A turma pela amizade e pelo GRANDE conviacutevio nesses anos e por me receberem de
braccedilos abertos Em especial a 6 pessoinhas que marcaram de uma forma inexplicaacutevel a minha
vida Obrigada Sarah Miguel Camila Joana Marayza e Monalisa vocecircs satildeo realmente
incriacuteveis
A todos os meus companheiros do LABDEM minha segunda famiacutelia que de alguma forma
ajudou na concretizaccedilatildeo desse sonho e tambeacutem a todos que natildeo participaram diretamente
mas que aconselharam quando eu natildeo sabia o que fazer Agradecer em especial a Cleildo
Deysiane Felipe Layanne e um agradecimento mais do que especial a Jonny Diego uma
amigo da terra natal que me apresentou a ldquovida de pesquisadorardquo sou eternamente grata a
vocecirc
A MELHOR DUPLA de iniciaccedilatildeo cientiacutefica que algueacutem pode ter Dedico uma parte mais do
que especial do meu TCC a pessoa que fez juntamente comigo na praacutetica do laboratoacuterio esse
trabalho vir a existir Eveline minha querida ldquoBoyrdquo ldquoDuas atrevidasrdquo como jaacute dizia ela que
souberam aceitar o desafia proposto pela chefinha Edja e assim tornando-se pioneira na
teacutecnica da Microdiluiccedilatildeo na UEPB Obrigada por tudo Sucesso nessa nova etapa de sua vida
ldquoMestrinhardquo Tambeacutem as mais novas companheiras de PIBIC Suzana Eacuterica Suzyclay e a
aluna do mestrado Renally com vocecircs tambeacutem aprendi muito
Por final a aquele que me permitiu tudo isso ao longo de toda a minha vida e natildeo somente
nestes anos como universitaacuteria a vocecirc meu DEUS obrigado reconheccedilo cada vez mais em
todos os meus momentos que vocecirc eacute o maior mestre Agradeccedilo a ti por nunca nos ter deixado
nos momentos difiacuteceis por nos ter permitido de chegar ateacute aqui
LISTA DE SIGLAS ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS
ATCC American Type Culture Collection
C Candida
CBM concentraccedilatildeo bactericida miacutenima
Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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ZARDO V MEZZARI A Os antifuacutengicos nas infecccedilotildees por Candida sp Newslab Satildeo
Paulo n 63 p 136-146 2004
AGRADECIMENTOS
Aos meus pais Walker e Rejane pois deles recebi o dom mais precioso do universo a
vida Jaacute por isso seria infinitamente grata Poreacutem eles natildeo se contentaram em presentear- me
apenas com ela Revestiram-me de amor carinho e dedicaccedilatildeo que me transformaram na
pessoa que sou hoje abriram as portas do meu futuro com o estudo Muito obrigado a vocecircs
por viver com dignidade e respeito e acima de tudo me ensinaram o que eacute famiacutelia Vocecircs que
nos momentos de minha ausecircncia dedicados ao estudo superior sempre fizeram entender que
o futuro eacute feito a partir da constante dedicaccedilatildeo no presente Se pudesse fazecirc-los eternos
eternos os faria Minha imensa gratidatildeo vai aleacutem de um muito obrigado amo
incomensuravelmente Essa vitoacuteria eacute principalmente de vocecircs
A minhas irmatildes Laura( Belecircro) pela descontraccedilatildeo e meiguice quando me encontrava e
principalmente a minha irmatilde Rebecca (Bebela Zubeco) que por seu esforccedilo e dedicaccedilatildeo para
passar em medicina me inspira a estudar cada vez mais mostrando-me que ldquoOs fracos natildeo
tentamos covardes desistem somente os fortes conquistamrdquo
A meu avocirc Severino por toda sua humildade e generosidade com que trata seus pacientes
servindo-me de exemplo As minhas avoacutes Luiza e Edna que sempre me e acompanharam
nessa caminhada com suas preces e oraccedilotildees Eu amo vocecircs
A minha tia-madrinha Walkleide por sempre vibrar com minhas conquistas Uma pessoa
altamente competente amiga e que acima de todos me estimula a fazer o que mais quero na
vida o concurso da Poliacutecia Federal
Natildeo poderia deixar de agradecer a uma Nevuh e Poi laacute de Souza Eles nada mais eram que a
minha nova famiacutelia em Campina Grande A Sarah pela cumplicidade e baderna no dia-a-dia
na Universidade por ser minha dupla na cliacutenica minha parceira de apecirc parceira do EMI e
pela convivecircncia nesses 5 anos que seratildeo infindaacuteveis A Arnaldo pelas saacutebias palavras pelas
constantes vergonhas que me fazia passar nos cantos vocecirc seraacute sempre para mim um siacutembolo
de perseveranccedila e muita inteligecircncia
As minhas primas Maria Luiza Sophia Suellen e aos meus amigos(as) Raeacutelyton Nilla
Andrean Gabi Ceicinha Rayanne Bel Suzana Baacuterbara pela constante presenccedila em
minha vida me apoiando e me descontraindo nos finais de semana feriados Vocecircs satildeo mais
do que especiais para mim
A minha amada orientadora Edja a ldquochefinhardquo por ter acreditado num sonho que agora eacute
de todos por ter mostrado o caminho das obras cientiacuteficas e ao que com dedicaccedilatildeo
paciecircncia doccedilura incentivo acessibilidade e competecircncia conduz sua profissatildeo (obrigado
pela amizade e confianccedila titia Edja)
A minha querida Ana Claacuteudia por fazer parte desta caminhada me ldquoadotandordquo trazendo
contribuiccedilotildees para o enriquecimento deste estudo A palavra ldquodoutorardquo nunca faraacute justiccedila a
essa professora dedicada pois ela consegue ser muito mais que isso
A professora Denise uma pessoa muito receptiva que tem incorporado em si o espiacuterito da
humanizaccedilatildeo na Odontologia Com ela aprendi a valorizar os miacutenimos detalhes que
venham a existir em uma radiografia Obrigada por confiar em mim tambeacutem as
suas pesquisas
A professora Dilma que nos ajudou na coleta das plantas com todos os seus
conhecimentos
A Universidade e a coordenaccedilatildeo de Odontologia o muito obrigado eacute pouco por tamanha
competecircncia Guardarei com carinho essa ldquoescolardquo que me ensinou mais do que a
Odontologia
Aos funcionaacuterios da Universidade pela generosidade auxiacutelio confianccedila e dedicaccedilatildeo
A turma pela amizade e pelo GRANDE conviacutevio nesses anos e por me receberem de
braccedilos abertos Em especial a 6 pessoinhas que marcaram de uma forma inexplicaacutevel a minha
vida Obrigada Sarah Miguel Camila Joana Marayza e Monalisa vocecircs satildeo realmente
incriacuteveis
A todos os meus companheiros do LABDEM minha segunda famiacutelia que de alguma forma
ajudou na concretizaccedilatildeo desse sonho e tambeacutem a todos que natildeo participaram diretamente
mas que aconselharam quando eu natildeo sabia o que fazer Agradecer em especial a Cleildo
Deysiane Felipe Layanne e um agradecimento mais do que especial a Jonny Diego uma
amigo da terra natal que me apresentou a ldquovida de pesquisadorardquo sou eternamente grata a
vocecirc
A MELHOR DUPLA de iniciaccedilatildeo cientiacutefica que algueacutem pode ter Dedico uma parte mais do
que especial do meu TCC a pessoa que fez juntamente comigo na praacutetica do laboratoacuterio esse
trabalho vir a existir Eveline minha querida ldquoBoyrdquo ldquoDuas atrevidasrdquo como jaacute dizia ela que
souberam aceitar o desafia proposto pela chefinha Edja e assim tornando-se pioneira na
teacutecnica da Microdiluiccedilatildeo na UEPB Obrigada por tudo Sucesso nessa nova etapa de sua vida
ldquoMestrinhardquo Tambeacutem as mais novas companheiras de PIBIC Suzana Eacuterica Suzyclay e a
aluna do mestrado Renally com vocecircs tambeacutem aprendi muito
Por final a aquele que me permitiu tudo isso ao longo de toda a minha vida e natildeo somente
nestes anos como universitaacuteria a vocecirc meu DEUS obrigado reconheccedilo cada vez mais em
todos os meus momentos que vocecirc eacute o maior mestre Agradeccedilo a ti por nunca nos ter deixado
nos momentos difiacuteceis por nos ter permitido de chegar ateacute aqui
LISTA DE SIGLAS ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS
ATCC American Type Culture Collection
C Candida
CBM concentraccedilatildeo bactericida miacutenima
Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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ZANARDI D NUNES D H PACHECO A S TUBONE M Q SOUZA FILHO J J
Avaliaccedilatildeo dos meacutetodos diagnoacutesticos para onicomicose An Bras Dermatolv83(2) 119-24
2008
ZARDO V MEZZARI A Os antifuacutengicos nas infecccedilotildees por Candida sp Newslab Satildeo
Paulo n 63 p 136-146 2004
minha vida me apoiando e me descontraindo nos finais de semana feriados Vocecircs satildeo mais
do que especiais para mim
A minha amada orientadora Edja a ldquochefinhardquo por ter acreditado num sonho que agora eacute
de todos por ter mostrado o caminho das obras cientiacuteficas e ao que com dedicaccedilatildeo
paciecircncia doccedilura incentivo acessibilidade e competecircncia conduz sua profissatildeo (obrigado
pela amizade e confianccedila titia Edja)
A minha querida Ana Claacuteudia por fazer parte desta caminhada me ldquoadotandordquo trazendo
contribuiccedilotildees para o enriquecimento deste estudo A palavra ldquodoutorardquo nunca faraacute justiccedila a
essa professora dedicada pois ela consegue ser muito mais que isso
A professora Denise uma pessoa muito receptiva que tem incorporado em si o espiacuterito da
humanizaccedilatildeo na Odontologia Com ela aprendi a valorizar os miacutenimos detalhes que
venham a existir em uma radiografia Obrigada por confiar em mim tambeacutem as
suas pesquisas
A professora Dilma que nos ajudou na coleta das plantas com todos os seus
conhecimentos
A Universidade e a coordenaccedilatildeo de Odontologia o muito obrigado eacute pouco por tamanha
competecircncia Guardarei com carinho essa ldquoescolardquo que me ensinou mais do que a
Odontologia
Aos funcionaacuterios da Universidade pela generosidade auxiacutelio confianccedila e dedicaccedilatildeo
A turma pela amizade e pelo GRANDE conviacutevio nesses anos e por me receberem de
braccedilos abertos Em especial a 6 pessoinhas que marcaram de uma forma inexplicaacutevel a minha
vida Obrigada Sarah Miguel Camila Joana Marayza e Monalisa vocecircs satildeo realmente
incriacuteveis
A todos os meus companheiros do LABDEM minha segunda famiacutelia que de alguma forma
ajudou na concretizaccedilatildeo desse sonho e tambeacutem a todos que natildeo participaram diretamente
mas que aconselharam quando eu natildeo sabia o que fazer Agradecer em especial a Cleildo
Deysiane Felipe Layanne e um agradecimento mais do que especial a Jonny Diego uma
amigo da terra natal que me apresentou a ldquovida de pesquisadorardquo sou eternamente grata a
vocecirc
A MELHOR DUPLA de iniciaccedilatildeo cientiacutefica que algueacutem pode ter Dedico uma parte mais do
que especial do meu TCC a pessoa que fez juntamente comigo na praacutetica do laboratoacuterio esse
trabalho vir a existir Eveline minha querida ldquoBoyrdquo ldquoDuas atrevidasrdquo como jaacute dizia ela que
souberam aceitar o desafia proposto pela chefinha Edja e assim tornando-se pioneira na
teacutecnica da Microdiluiccedilatildeo na UEPB Obrigada por tudo Sucesso nessa nova etapa de sua vida
ldquoMestrinhardquo Tambeacutem as mais novas companheiras de PIBIC Suzana Eacuterica Suzyclay e a
aluna do mestrado Renally com vocecircs tambeacutem aprendi muito
Por final a aquele que me permitiu tudo isso ao longo de toda a minha vida e natildeo somente
nestes anos como universitaacuteria a vocecirc meu DEUS obrigado reconheccedilo cada vez mais em
todos os meus momentos que vocecirc eacute o maior mestre Agradeccedilo a ti por nunca nos ter deixado
nos momentos difiacuteceis por nos ter permitido de chegar ateacute aqui
LISTA DE SIGLAS ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS
ATCC American Type Culture Collection
C Candida
CBM concentraccedilatildeo bactericida miacutenima
Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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A MELHOR DUPLA de iniciaccedilatildeo cientiacutefica que algueacutem pode ter Dedico uma parte mais do
que especial do meu TCC a pessoa que fez juntamente comigo na praacutetica do laboratoacuterio esse
trabalho vir a existir Eveline minha querida ldquoBoyrdquo ldquoDuas atrevidasrdquo como jaacute dizia ela que
souberam aceitar o desafia proposto pela chefinha Edja e assim tornando-se pioneira na
teacutecnica da Microdiluiccedilatildeo na UEPB Obrigada por tudo Sucesso nessa nova etapa de sua vida
ldquoMestrinhardquo Tambeacutem as mais novas companheiras de PIBIC Suzana Eacuterica Suzyclay e a
aluna do mestrado Renally com vocecircs tambeacutem aprendi muito
Por final a aquele que me permitiu tudo isso ao longo de toda a minha vida e natildeo somente
nestes anos como universitaacuteria a vocecirc meu DEUS obrigado reconheccedilo cada vez mais em
todos os meus momentos que vocecirc eacute o maior mestre Agradeccedilo a ti por nunca nos ter deixado
nos momentos difiacuteceis por nos ter permitido de chegar ateacute aqui
LISTA DE SIGLAS ABREVIATURAS E SIacuteMBOLOS
ATCC American Type Culture Collection
C Candida
CBM concentraccedilatildeo bactericida miacutenima
Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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Ceacutels ceacutelulas
CFM concentraccedilatildeo fungicida miacutenima
CIM concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima
et al outros
FIOCRUZ Fundaccedilatildeo Oswaldo Cruz
g gramas
LABDEM Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos
Mm miliacutemetros
S Streptococcus
S sul
SUS Sistema Uacutenico de Sauacutede
W Oeste
degC graus Celsius
porcento
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 Coleta do material vegetal24
FIGURA 2 Schinus terebintifolius Raddi25
FIGURA 3 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult25
FIGURA 4 Bauhiacutenia forficata Linn25
FIGURA 5 Anadenanthera colubrina Brenan25
FIGURA 6 Spondias tuberosa Arruda25
FIGURA 7 Maytenus riacutegida Mart25
FIGURA 8 Tabebuia pentaphylla Vell26
FIGURA 9 Guapira opposita Vell26
FIGURA 10 Extraccedilatildeo do material vegetal 28
FIGURA11Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em
caldo29
FIGURA 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo
a 37ordmC30
FIGURA 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosa e bacteacuterias mortas coloridas de
azul31
FIGURA 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
31
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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LISTA DE TABELAS
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus33
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as cepas de
Streptococcus34
TABELA 3 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida35
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de candida36
RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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RESUMO
Com o aumento dos microrganismos resistentes agraves substacircncias antimicrobianas jaacute conhecidas
vaacuterios extratos de plantas medicinais tecircm sido testados com a finalidade de se encontrar novos
compostos com atividade antimicrobiana reconhecida Este estudo teve como objetivo avaliar
a accedilatildeo antimicrobiana de alguns extratos vegetais presentes no semiaacuterido brasileiro Para
avaliaccedilatildeo da atividade antimicrobiana foram testados os extratos hidroalcoacuteolicos da Schinus
terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult
(quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera colubrina Brenan (angico)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) Maytenus rigida Mart (bom-nome) Tabebuia
pentaphylla (ipecirc rosa) e Guapira opposita (joatildeo-mole) frente as bacteacuterias Streptococcus
mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis e Streptococcus parasanguis e as
cepas de Candida albicans Candida parapsilosis Candida guilliermondii e Candida krusei
Determinou-se a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
em caldo a Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima
(CFM) atraveacutes do subcultivo em placas de Petri Todos os extratos vegetais analisados
apresentaram atividade antimicrobiana para a maioria das cepas de Streptococcus e Candida
sendo todas sensiacuteveis a pelo menos um tipo de extrato Os extratos que apresentaram os
menores valores de CIM e CBM foram os da Schinus terebintifolius Raddi Syderoxylum
obtusifolium Roem et Schult Este estudo aponta algumas plantas com potencial
antimicrobianos sendo necessaacuteria a realizaccedilatildeo de estudos que identifiquem as fraccedilotildees ativas
assim como os seus mecanismos de accedilatildeo com perspectivas de produccedilatildeo de um novo
antimicrobiano para uso na odontologia
Palavras-Chave Microbiologia Extratos Vegetais Streptococcus Candida
ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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ABSTRACT
With the increase of microorganisms resistant to antimicrobial substances already known
various herbal extracts have been tested in order to find new compounds with antimicrobial
activity recognized This study aimed to evaluate the antimicrobial activity of some plant
extracts present in the Brazilian semiarid To evaluate the antimicrobial activity were tested
hydroalcoholic extracts of Schinus terebintifolius Raddi (Schinus-the-beach) Roem et Schult
Syderoxylum obtusifolium (Quixabeira) Bauhinia forficata linn (mororoacute) Anadenanthera
colubrina Brenan (mimosa) Spondias tuberosa Arruda (tuberosa) Maytenus rigida Mart
(good name) Tabebuia pentaphylla (ipe pink) and Guapira opposita (john-mole) compared
the bacteria Streptococcus mutans Streptococcus salivarius Streptococcus oralis and
Streptococcus parasanguis and the strains of Candida albicans Candida parapsilosis
Candida guilliermondii and Candida krusei It was determined the Minimum Inhibitory
Concentration (MIC) by broth microdilution technique the Minimal Bactericidal
Concentration (MBC) and minimum fungicidal concentration (MFC) by subculturing in Petri
dishes All plant extracts analyzed showed antimicrobial activity against most strains of
Streptococcus and Candida which are all sensitive to at least one type of extract The extracts
that showed the lowest MIC and MBC were those of Schinus terebintifolius Raddi Roem et
Schult Syderoxylum obtusifolium This study suggests some plants with potential
antimicrobial being necessary to carry out studies to identify the active fractions as well as
their mechanisms of action which may produce a new antimicrobial for use in dentistry
Keywords Microbiology Plant Extracts Streptococcus Candida
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO15
2 OBJETIVOS 16
21 Objeivos Gerais16
22Objetivos Especiacuteficos16
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA17
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos17
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira da praia)18
33Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira)19
34 Bauhiacutenia forficata linn (mororoacute)20
35 Anadenanthera colubrina Brenan (angico)20
36Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro)21
37Maytenus rigida Mart (bom-nome)21
38Tabebuiapentaphylla (ipecirc-rosa) 22
39Guapira Opposita(joatildeo-mole) 22
310Streptococcus Mutans S Salivarius S Oralis Sparasanguis23
311Candida albicans C parapsilosis C guilliermondii e C krusei23
4 METODOLOGIA 24
41 Material 24
411 Material Vegetal24
4 12 Meios de cultura26
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegarhelliphelliphelliphelliphelliphellip26
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldohelliphelliphelliphelliphellip26
412 Substacircncia padratildeo 26
413 Cepas 27
42 Meacutetodo27
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais 27
422 Inoacuteculo28
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo29
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) 29
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)31
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)32
5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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5 RESULTADOS33
6 DISCUSSAtildeO37
7 CONCLUSAtildeO41
REFEREcircNCIAS42
15
1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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1 INTRODUCcedilAtildeO
Durante muitos seacuteculos preparaccedilotildees a base de plantas constituiacuteram os principais
tratamentos contra as inuacutemeras doenccedilas que acometiam a humanidade destacando-se o uso no
tratamento de doenccedilas veneacutereas inflamaccedilotildees infecccedilotildees feridas e gastrenterites Com o
avanccedilo cientiacutefico muitos produtos naturais foram identificados e isolados possibilitando
tratamentos mais eficazes O reino vegetal forneceu aproximadamente 25 dos faacutermacos de
origem natural utilizados atualmente e continua sendo uma fonte rica em compostos ativos
devido a sua vasta diversidade quiacutemica (GURIB-FAKIN 2006 RAMIREZ DIAZ 2007)
A pesquisa de extratos vegetais com accedilatildeo antimicrobiana se apresenta como uma saiacuteda
para o combate aos microrganismos patogecircnicos em razatildeo do aumento de sua resistecircncia a
muacuteltiplas drogas resultante na maioria das vezes do uso indiscriminado de antimicrobianos
levando assim agrave procura dessas novas alternativas terapecircuticas A diversidade de moleacuteculas
encontradas em plantas faz das mesmas promissoras fontes de novos agentes antimicrobianos
(COUTINHO et al 2008 SILVA et al 2007 LEITAtildeO et al 2006)
Com base nesta premissa tecircm sido desenvolvidos estudos de compostos de produtos
naturais visando agrave obtenccedilatildeo de agentes antimicrobianos que possibilitem a prevenccedilatildeo e o
tratamento de doenccedilas bucais especialmente as relacionadas ao biofilme dentaacuterio e as
candidoses com o maacuteximo de efetividade e o miacutenimo de agressatildeo ao organismo (BOTELHO
et al 2007)
A clorexidina destaca-se entre as substacircncias utilizadas para controlar o biofilme
dentaacuterio (LAWRENCE et al 2008 DINIZ et al 2010) Entretanto alguns microorganismos
jaacute apresentam resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007) A maioria dos antifuacutengicos
clinicamente utilizados tem vaacuterios inconvenientes em termos de toxicidade eficaacutecia e custo e
sua utilizaccedilatildeo frequumlentemente leva ao aparecimento de espeacutecies resistentes Assim existe uma
grande demanda por novos antimicrobianos de diferentes classes estruturais agindo
seletivamente e com menos efeitos colaterais (ABAD ANSUATEGUI BERMEJO 2007
MENEZES et al2009)
16
2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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2 OBJETIVOS
21 Objetivo geral
Avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do semiaacuterido
paraibano sobre bacteacuterias do gecircnero Streptococcus e leveduras do gecircnero Candida
22 Objetivos especiacuteficos
- Avaliar a atividade antibacteriana e antifuacutengica dos extratos vegetais
- Determinar a Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) Concentraccedilatildeo Bactericida
Miacutenima (CBM) e Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos testados
17
3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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3 FUNDAMENTACcedilAtildeO TEOacuteRICA
31Resistecircncia dos microorganismos aos faacutermacos
O biofilme eacute a primeira etapa para a formaccedilatildeo das lesotildees de caacuterie Sua formaccedilatildeo eacute
dependente de interaccedilotildees dos microrganismos com o dente e dos microrganismos entre si e
pode ser caracterizada por vaacuterios estaacutegios arbitraacuterios formaccedilatildeo da peliacutecula adquirida adesatildeo
agraves ceacutelulas bacterianas simples crescimento de bacteacuterias aderidas formando micro colocircnias
distintas sucessatildeo e co-agregacatildeo microbiana e comunidade cliacutemax que eacute o biofilme maduro
(FEJERSKOV 2005)
Dentre os agentes quiacutemicos disponiacuteveis no mercado para prevenccedilatildeo das doenccedilas
bucais relacionadas com o biofilme dental pode-se citar a clorexidina o triclosan o
laurilsulfato de soacutedio e o fluoreto de soacutedio (MOREIRA et al2009 PINTO FILHO et al
2009 JOVITO et al 2009) A clorexidina destaca-se entre estes por possuir uma boa eficaacutecia
na remoccedilatildeo do biofilme cariogecircnico (LAWRENCE et al2008) e ser uma substacircncia
considerada como um antisseacutepticos de amplo espectro aleacutem de atuar sobre fungos e bacteacuterias
gram-positivas e gram-negativas (DINIZ et al 2010) Entretanto esta substacircncia apresenta
algumas limitaccedilotildees como alteraccedilatildeo do paladar manchas nos dentes e desequiliacutebrio da
microbiota bucal Embora seja eficaz frente a diversos microorganismos alguns jaacute apresentam
resistecircncia a este faacutermaco (MARINHO et al 2007)
A Candidose bucal tem sido definida como uma infecccedilatildeo causada por fungos presentes
na microbiota da cavidade bucal sendo as espeacutecies de Candida as mais relacionadas agrave doenccedila
(TEIN 2006) Candida albicans eacute a mais frequentemente isolada da cavidade bucal e
representa o agente etioloacutegico mais comum da candidose Existem outras espeacutecies inseridas
no gecircnero Candida como C guilliermondii C krusei C parapsilosis e C tropicallis que
tambeacutem podem estar envolvidas na etiologia desta infecccedilatildeo (LIMA et al 2006)
Em relaccedilatildeo ao tratamento da candidose vaacuterios faacutermacos obtidos por meio da siacutentese
orgacircnica tecircm sido utilizados no tratamento de infecccedilotildees micoacuteticas como os antisseacutepticos agrave
base de tintura de iodo violeta de genciana aacutecido saliciacutelico e benzoico derivados
sulfamiacutedicos corantes quinonas e antifuacutengicos poliecircnicos (nistatina anfotericina) Aleacutem
desses utilizam-se tambeacutem antifuacutengicos como os azoacuteis (cetoconazol econazol sulconazol
miconazol clotrimazol e fluconazol) e anfotericina B Poreacutem algumas infecccedilotildees fuacutengicas satildeo
de difiacutecil tratamento fato relacionado agrave elevada resistecircncia da Candida frente agrave accedilatildeo de
alguns antifuacutengicos convencionais (ARAUacuteJO 2004 ZANARDI et al 2008)
18
A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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A resistecircncia ao faacutermaco depende da interaccedilatildeo entre o hospedeiro o faacutermaco e o
microorganismo poreacutem os fatores do paciente satildeo os mais importantes para o surgimento da
resistecircncia (ZARDO 2004) O uso indiscriminado de antibioacuteticos aumenta a pressatildeo seletiva
e tambeacutem a oportunidade da bacteacuteria ser exposta aos mesmos (SANTOS2004)
A resistecircncia aos antifuacutengicos ocorre quando as alteraccedilotildees na rota da biossiacutentese dos
esteroacuteis e da expressatildeo do gene ERG 11 (Ets Related gene -11) envolvido na siacutentese da
enzima 14 DM (Dinacircmica Molecular) reduz o acuacutemulo intracelular da droga e a inativaccedilatildeo da
mesma (MORSCHHAumlUSER 2002)
A resistecircncia de patoacutegenos humanos a muacuteltiplas drogas mostra a necessidade em se
buscar novas moleacuteculas antimicrobianas a partir de fontes naturais (LEITAtildeO et al 2006)
Dessa maneira a crescente demanda por novos antimicrobianos tem levado a investigaccedilotildees
fitoquiacutemicas e farmacoloacutegicas de plantas guiadas por informaccedilotildees sobre o uso
tradicionaletnobotacircnica (FILOCHE et al 2005)
32 Schinus terebintifolius Raddi (Aroeira-da-praia)
Schinus terebenthifolius Raddi eacute um exemplar da famiacutelia Anacardiaceae que apresenta
as seguintes sinoniacutemias botacircnicas Schinus aroeira Vell Sarcotheca bahiensis TurczSchinus
antiarthritica Mart Schinus mucromulata Mart Schinus chichita SpegSchinus lentiscifolia
e Schinus rhoifolus Mart (LORENZI 2002)
Esta aacutervore eacute popularmente conhecida comoaroeira aroeira pimenteira aroeira
precoce aroeira do campo aroeira da praia aroeira negra aroeira branca aroeira vermelha
aroeira mansa aroeira do brejo aroeira do sertatildeo fruto de raposa fruto de sabi coraccedilatildeo de
bugre cambuiacute baacutelsamo aroeira do campo aroeira de sabiaacute aroeira do Paranaacute aguaraiba e
careiba (LIMA et al 2004 RIBAS et al 2006)
A Schinus terebenthifolius Raddi eacute uma aacutervore de pequeno a meacutedio porte e apresenta
propriedades farmacoloacutegicas como adstringente antiseacuteptica cicatrizante antimicrobiana e
antiinflamatoacuteria (AGRA et al 2007 BIAVATTI et al 2007 LIMA 2006)as quais estatildeo
relacionadas com componentes quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como
taninos terpenos flavonoacuteides e saponinas Destes componentes as propriedades potenciais e
antioxidantes foram atribuiacutedas aos flavonoacuteides (CARVALHO et al 2003LIMA2006)
Lima et al (2004) avaliaram a accedilatildeo antimicrobiana de diferentes concentraccedilotildees do
extrato aquoso de S terebenthifolius obtido de caules e folhas e verificaram atividade frente
agraves linhagens referecircncia de Staphylococcus aureaus Staphylococcus epidermidis Bacillus
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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53
ZANARDI D NUNES D H PACHECO A S TUBONE M Q SOUZA FILHO J J
Avaliaccedilatildeo dos meacutetodos diagnoacutesticos para onicomicose An Bras Dermatolv83(2) 119-24
2008
ZARDO V MEZZARI A Os antifuacutengicos nas infecccedilotildees por Candida sp Newslab Satildeo
Paulo n 63 p 136-146 2004
19
cereus Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Trycophytonrubrum Microsporum
canis e Epidermophyton floccosum utilizando o teste de difusatildeo em aacutegar
Posteriormente Alves et al(2009) verificaram atividades bacteriostaacutetica e bactericida
in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis
Streptococcus sobrinus Streptococcus sanguis e Lactobacillus casei tambeacutem pelo meacutetodo de
difusatildeo em meio soacutelido No mesmo estudo S terebenthifolius exerceu accedilatildeo antifuacutengica para a
Candida albicans com concentraccedilatildeo inibitoacuteria miacutenima (CIM) de 18 e para C tropicalis e C
krusei com CIM de 116
No estudo de Freires et al (2011) a atividade do extrato da casca da S
terebinthifolius frente a C albicans foi tambeacutem confirmada tendo meacutedia dos diacircmetros dos
halos de inibiccedilatildeo de 2532 mm
33 Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult (Quixabeira)
Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult eacute uma planta da flora brasileira Eacute um
espeacutecie da famiacutelia Sapotaceae caracterizada pela diversidade de substacircncias resultantes do
seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de
alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos carboidratos e aacutecidos graxos
(MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2005)
A quixabeira eacute usada como antiinflamatoacuterio do sistema geniturinaacuterio feminino
(AGRA 2007) expectorante analgeacutesico hipoglicemiante (AGRA et al 2007 AGRA et al
2008) e em infecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Costa et al (2010) a
quixabeira apresentou atividade antimicrobiana contra Enterococus faecalis com halos de
inibiccedilatildeo de ateacute 12 61 mm
34 Bauhiacutenia forficata Linn (Mororoacute)
Bauhinia forficata Linn eacute uma espeacutecie da famiacutelia Leguminoseae nativa da Ameacuterica
do Sul a qual possui distribuiccedilatildeo na Argentina Paraguai Uruguai Boliacutevia e Brasil (VAZ
TOZZI 2005) Constitui uma das 71 plantas selecionadas pelo Ministeacuterio da Sauacutede como de
interesse ao SUS (Ministeacuterio da Sauacutede 2009)
A Bauhinia forficata Linn apresenta na sua estrutura fitoquiacutemica glicosiacutedios aacutecidos
orgacircnicos sais minerais taninos pigmentos e mucilagens (LUSA BONA 2009)
Comercialmente eacute utilizada para fins medicinais e artesenal As raspas do caule satildeo utilizadas
20
em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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em xaropes para o tratamento de tosses e resfriados diarreacuteia problemas renais diabetes e no
controle de glicemia em diabeacuteticos aleacutem de possuir propriedades anticoagulantes e
antifibrinogenoliacuteticas (LORENZI MATOS 2008 ARAUacuteJO SOUSA 2011) Eacute tambeacutem
indicada contra moleacutestias da pele hipertensatildeo uacutelceras aacutecido uacuterico problemas da coluna
cistites hipocolesterecircmicas parasitoses intestinais afecccedilotildees vesicais dores nas costas prisatildeo
de ventre elefantiacutease e anemia Possui propriedades mucilaginosas e adstringentes sendo
usada como resolutiva (SILVA et al 2006 AGRA et al 2007 LORENZI MATOS 2008)
35Anadenanthera colubrina Brenan (Angico)
Anadenanthera colubri Brenan (angico-vermelho) eacute uma espeacutecie leguminosa arboacuterea
de crescimento raacutepido medindo de treze a vinte metros de altura ocorrendo desde o sul da
Boliacutevia ateacute o norte da Argentina no Brasil soacute natildeo aparece na regiatildeo Sul Floresce entre
setembro e novembro com a planta quase sem folhas Sua casca varia de uma forma quase lisa
e clara ateacute rugosa ou muito fissurada e preta (SILVA et al2010)
Quimicamente eacute constituiacutedo por alcaloacuteides indoacutelico (oacutexidode N N-
dimetiltriptamina) esteroacuteides (palmitato de δ-sitosterol e δ-sitosterol) flavonoacuteides
(33478-pentahidroflavona) triterpenoacuteides (lupenona e lupeol) derivados fenoacutelicos(345-
dimethoxidalbergiona dalbergiona e kuhlmannia) (PALMEIRA et al 2010)
A Anadenanthera colubri Brenan eacute bastante representativa nas caatingas e
economicamente importante com utilizaccedilatildeo diversificada incluindo extraccedilatildeo de tanino uso
na medicina popular fabricaccedilatildeo de moacuteveis forragens das folhas fenadas ornamentaccedilatildeo
carvatildeo e reflorestamentos de aacutereas degradadas (SILVA et al 2011 SUGAI et al 2011)
Na medicina popular o angico vem sendo utilizado de diversas formas dentre elas o
decocto da casca (na preparaccedilatildeo de xaropes) usado no tratamento das tosses coqueluches e
bronquites a maceraccedilatildeo da casca utilizada no tratamento de inflamaccedilotildees leucorreacuteias
gonorreacuteia e quando a preparaccedilatildeo eacute com aacutelcool ou cachaccedila pode ser utilizada em ferimentos
externos agindo como hemostaacutetico e cicatrizante (PALMEIRA et al 2010LORENZI amp
MATOS 2008) No estudo de Palmeira (2010) o extrato hidroalcoacuteolico da Anadenanthera
colubri Brenan apresentou atividade antimicrobiana com CIM de 312 (132) e halos de
inibiccedilatildeo variando de 19 a 25 mm para todas as cepas de S aureus testadas
21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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21
36 Spondias tuberosa Arruda (Umbuzeiro)
Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) eacute uma planta pertencente agrave famiacutelia
Anacardiaceae endecircmica do semiaacuterido brasileiro que tem contribuiacutedo substancialmente
como fonte alternativa de renda para os pequenos agricultores Sua frutificaccedilatildeo eacute abundante e
tem iniacutecio em torno de 45 dias apoacutes a floraccedilatildeo Os frutos satildeo dupras glabras ou levemente
pilosas e arredondadas pesando em torno de 10 a 20 g Spondias tuberosa Arruda tem sido
empregada como medicaccedilatildeo oftaacutelmica (AGRA et al 2007) no entanto pouco estudada para
fins medicinais
37 Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole)
A Guapira opposita Vell (Joatildeo-mole) pertence agrave famiacutelia Nyctaginaceae a qual possui
distribuiccedilatildeo pantropical incluindo cerca de 30 gecircneros e 400 espeacutecies As espeacutecies arboacutereas
de Nyctaginaceae recebem o nome vulgar de maria mole ou joatildeo mole referecircncia agrave baixa
qualidade de sua madeira (SOUZA et al 2005)
Extratos vegetais de espeacutecies da famiacutelia Nyctaginaceae possuem dados
etnofarmacoloacutegicos sobre seu uso para tratamento de diversas patologias tais como atividade
antituberculose antiinflamatoacuteria cicatrizante (COELHO et al 2005 PAVAN et al 2009) e
amarelatildeo (SOUZA et al2010) Tem sido demonstrada a sua atividade antimicrobiana contra
bacteacuterias gram-negativas como a Escherichia coli (PESCARINI et al 2011)
38 Maytenus riacutegida Mart (Bom-nome)
Maytenus rigida Mart conhecida popularmente por bom-homem bom-nome cabelo-
de-negro casca-grossa e pau-de-colher eacute uma arvore de pequeno porte com aspectos
terapecircuticos cujas indicaccedilotildees incluem o tratamento de dores em geral infecccedilotildees (AGRA et
al 2007 2008) O gecircnero Maytenus com cerca de 80 espeacutecies distribuiacutedas no Brasil
apresenta metaboacutelitos bioativos da classe de triterpenos (NIERO et al 2006 REYES et al
2006 GUTIEERREZ et al 2007) flavonoides (ESTEVAM 2006 XIE et al 2007
TIBERTI et al 2007) quinonas (ALMEIDA et al 2005) e alcaloacuteides (DELLE et al 1984)
Estudos farmacoloacutegicos com extratos da Maytenus rigida Mart relataram atividade
antiinflamatoacuteria (REYES et al 2006 SANOGO et al 2006 SANTOS et al 2007 SOSA et
al 2007) antinociceptiva (NIERO et al 2006 SANOGO et al2006 DIAS et al 2007)
22
estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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estimulante do sistema nervoso central (OMENA 2007) antioxidante (BRUNNI et al 2006
ESTEVAM 2006 VELLOSA et al 2006) antidiarreacuteica antiulcerogecircnica antiespasmoacutedica
(AGRA et al 2007 SANTOS et al 2007) antimalaacuteria (MUREGI et al 2007
MUTHAURA et al 2007) antitumoral (BUFFA et al 2004) e anticonvulsivante
(QUINTANS-JUacuteNIOR et al 2008)
39 Tabebuia pentaphylla Vell (Ipecirc-rosa)
A espeacutecie Tabebuia pentaphylla Vell conhecida popularmente como ipecirc-rosa eacute
originaacuteria de El Salvador sendo semideciacutedua podendo chegar a vinte metros de altura
(Lorenzi et al 2003) Quanto suas propriedades medicinais Tabebuia pentaphylla tem sido
pouco estudada no entanto as plantas do mesmo gecircnero tecircm sido utilizadas na medicina
popular (SOUZA et al2010) Da entrecasca faz-se um chaacute que eacute usado no tratamento de
gripes e depurativo do sangue As folhas satildeo utilizadas contra uacutelceras sifiliacuteticas e
blenorraacutegicas aleacutem de atividade anticanceriacutegenas antireumaacuteticas e antianecircmicas
(CARVALHO 2003)
310 Streptococcus sp
Os estreptococos satildeo bacteacuterias Gram-positivas e constituem a principal populaccedilatildeo de
microrganismos da cavidade oral Neste gecircnero os Streptococcus do grupo mutans satildeo os
principais microrganismos da cavidade oral especialmente o S mutans por desempenhar
papel preponderante na formaccedilatildeo de biofilme dentaacuterio tornando-se o agente etioloacutegico
primaacuterio da caacuterie dentaacuteria (SAMARAtildeO et al 2010) Possuem a capacidade de aderir
colonizar crescer sintetizar polissacariacutedeos extracelulares e produzir aacutecidos na superfiacutecie dos
dentes (LANDUCCI et al 2003)
S oralis S sanguis e S salivarius satildeo estreptococcus do grupo viridans comumente
encontrados no biofilme (KONEMAN 2001) poreacutem por natildeo serem acidogecircnicos nem
aciduacutericos estatildeo presentes em seu estaacutegio inicial de formaccedilatildeo natildeo atuando diretamente na
desmineralizaccedilatildeo do esmalte dentaacuterio apenas tornando o meio mais adequado para
colonizaccedilatildeo dos S mutans (PALOMER 2006)
23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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23
311 Candida spp
Os microrganismos do gecircnero Candida estatildeo presentes na cavidade bucal da maioria
da populaccedilatildeo humana sendo a Candida albicans a espeacutecie mais comumente encontrada e
associada agraves infecccedilotildees (MATTOS et al 2009) seguida pela C tropicalis e outras espeacutecies
menos patogecircnicas como a Candida krusei e Candida parapsilosis (YANG 2003)
Essas espeacutecies de Candida podem estar relacionadas com alguns fatores locais e
sistecircmicos que predispotildeem a ocorrecircncia da candidose bucal como imunocomprometimento
xerostomia alteraccedilotildees hormonais uso de aparelhos ortodocircnticos e de proacuteteses dentaacuterias com
higiene precaacuteria e pacientes sob terapia antibioacutetica prolongada (NONAKA et al 2007
RODRIGUES 2007 PATEL et al 2008 SILVA et al 2008)
A C albicans possui a capacidade de aderir agraves superfiacutecies e formar biofilmes (SILVA
et al 2008) Fatores de virulecircncia tecircm sido identificados como a presenccedila de adesinas na
parede celular comutaccedilatildeo fenotiacutepica formaccedilatildeo de hifas e thigmotropismo e secreccedilatildeo de
enzimas hidroliacuteticas como as fosfolipases e enzimas proteoliacuteticas (BRAGA-SILVA et al
2009) Devido a sua importacircncia medica eacute importante analisar o processo dinacircmico de
formaccedilatildeo e desenvolvimento de biofilme com o intuito de estabelecer estrateacutegias de
tratamento que inibam a sua formaccedilatildeo (SILVA et al 2008)
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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Avaliaccedilatildeo dos meacutetodos diagnoacutesticos para onicomicose An Bras Dermatolv83(2) 119-24
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ZARDO V MEZZARI A Os antifuacutengicos nas infecccedilotildees por Candida sp Newslab Satildeo
Paulo n 63 p 136-146 2004
24
4 METODOLOGIA
41 Material
411 Material Vegetal
As plantas foram coletadas na regiatildeo do semiaacuterido paraibano na Serra de Bodocongoacute
no municiacutepio de Queimadas na meso regiatildeo da Borborema e micro regiatildeo do Cariri Oriental
(Figura 1) Apoacutes coleta e limpeza o material foi acondicionado em sacos de papel secado em
estufa de circulaccedilatildeo de ar a 40ordmC e posteriormente moiacutedo para preparaccedilatildeo dos extratos
Figura 1 Coleta do material vegetal
As plantas selecionadas para este estudo foram as seguintes
middot Schinus terebintifolius Raddi ( aroeira-da-praia) ndash casca e folha
middot Syderoxylum obtusifolium Roem et Schult(quixabeira) ndash casca e folha
middot Bauhiacutenia forficata Linn (mororoacute) - casca
middot Anadenanthera colubrina Brenan (angico) - casca
middot Spondias tuberosa Arruda (umbuzeiro) - casca
middot Maytenus riacutegida Mart(bom-nome) - casca
middot Tabebuia pentaphylla Vell(ipecirc-rosa) ndash casca folha
middot Guapira opposita Vell (joatildeo mole) ndash casca e folha
25
Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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Figura 2 Schinus terentifolius Figura 3Syderoxylum otsusifolium
Figura 4 Bauhiacutenia fortificata Linn Figura 5 Anadenanthera colubrina
Figura 6 Spodias tuberosa Figura 7 Maytenus rigida
26
Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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Figura 8 Tabebuia pentaphylla Figura 9 Guapira opposita
4 12 Meios de cultura
4121 Brain Heart infusion Aacutegar (BHI agar) e Sabouraud Dextrose Aacutegar
O meio de cultura BHI aacutegar foi utilizado para determinar a concentraccedilatildeo bactericida
miacutenima (CBM) e o meio de cultura Sabouraud para determinar a concentraccedilatildeo fungicida
miacutenima (CFM) O meio de cultura foi preparado de acordo com as recomendaccedilotildees do
fabricante esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos Quando o preparado esteacuteril
atingiu a temperatura de 56degC distribuiu-se 20 ml do meio com o auxilio de provetas em cada
placa de Petri 90x15 lisa Apoacutes o processo de geleificaccedilatildeo do meio as placas foram
identificadas datadas e armazenadas na geladeira
4122 Brain Heart infusion caldo (BHI caldo) e Sabouraud Dextrose caldo
O meio de cultura BHI caldo foi utilizado para os ensaios antimicrobianos em
microdiluiccedilatildeo para as bacteacuterias e o meio Sabouraud Dextrose caldo para as candidas Foi
preparado o meio duplamente concentradoconforme a metodologia de Castro e Lima (2010)
e dissolvido e esterilizado em autoclave a 121degC por 15 minutos
413 Substacircncias padratildeo
27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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27
Clorexidina 012 (controle positivo para as bacteacuterias)
Nistatina (controle positivo para a candida)
414 Cepas
Os microorganismos foram selecionados levando-se em conta a composiccedilatildeo
microbiana dos biofilmes orais e dos principais microrganismos relacionados agrave caacuterie
gengivite e candidose As cepas foram fornecidas pela FIOCRUZ de forma liofilizada sendo
estudadas as seguintes espeacutecies
Streptococcus mutans (ATCC 25175)
S salivarius (ATCC 7073)
S oralis (ATCC 10557)
S parasanguis (ATCC 903)
Candida albicans (ATCC 18804)
Candida krusei (ATCC 34135)
Candida guilliermondii (ATCC 6260)
Candida parapsilosis (ATCC 22019)
42 Meacutetodo
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratoacuterio de Desenvolvimento e Ensaios de
Medicamentos (LABDEM) da UEPB Os meacutetodos relacionados ao preparo do material
vegetal e da atividade antimicrobiana estatildeo de acordo com a metodologia descrita por Castro
e Lima (2010) Os ensaios para determinar a atividade antimicrobiana foram realizados em
duplicata
4 21 Preparaccedilatildeo dos extratos vegetais
Para obtenccedilatildeo dos extratos foi utilizado o processo de maceraccedilatildeo O material moiacutedo
foi colocado em recipientes e cobertos com aacutelcool a 70 na proporccedilatildeo (plantasolvente) por
5 dias sendo apoacutes este periacuteodo filtrado (Figura 10) para obtenccedilatildeo do extrato vegetal bruto o
qual foi utilizado nas anaacutelises da atividade antimicrobiana respeitando as recomendaccedilotildees da
Farmacopeacuteia Brasileira
28
Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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Figura 10 Extraccedilatildeo do material vegetal
422 Preparaccedilatildeo do inoacuteculo
-Bacteacuterias
As bacteacuterias foram semeadas em aacutegar Brain Heart infusion(ABHI) e incubadas em
estufa de cultura a 37ordmC por 24 horas Decorridas as 24 horas de crescimento bacteriano foi
iniciado o preparo das suspensotildees bacterianas Foi transferida uma colocircnia de cada espeacutecie
bacteriana da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com tampa e adicionadas em soluccedilatildeo
salina (085) esterilizada (5mL)Cada suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto
ajustando sua absorbacircncia entre 008 a 010 a 625 nmcom o auxilio de um espectrocircmetro
originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x 108ceacutelsmL O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo)
- Candida
Todas as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo aacutegar Sabouraud
Dextrose(ASD) e incubadas em estufa microbioloacutegica a 25 ordmC por 48 horas Foi transferida
uma colocircnia de cada espeacutecie de fungos da placa de Petri para tubos de ensaio esteacutereis com
tampa e adicionadas soluccedilatildeo salina esterilizada (085) O inoacuteculo microbiano foi
padronizado antes do uso conforme descrito na Farmacopeacuteia Brasileira IV ediccedilatildeo Cada
suspensatildeo foi homogenizada no voacutertex por 1 minuto e ajustando sua absorbacircncia entre 008 a
010 a 530 nm no espectrocircmetro originando uma concentraccedilatildeo equivalente a 15 x
108ceacutelsmL
29
423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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423 Ensaios antimicrobianos em microdiluiccedilatildeo em caldo
4231 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM)
A determinaccedilatildeo da CIM dos extratos vegetais foi realizada atraveacutes da teacutecnica da
microdiluiccedilatildeo Inicialmente foram distribuiacutedos 100 μL do meio de cultura duplamente
concentrado nos orifiacutecios das placas de microdiluiccedilatildeo contendo 96 cavidades com fundo em
forma de ldquoUrdquo com tampa (ALAMARreg Diadema Satildeo Paulo Brasil) A coluna 1 recebeu
apenas o meio de cultura Como controle negativo foi verificada viabilidade das cepas
ensaiadas com a inoculaccedilatildeo da suspensatildeo microbiana no meio de cultura na coluna 2 A
coluna 3 recebeu o inoacuteculo o meio de cultura e a substacircncia padratildeo (controle positivo) A
partir da coluna 4 foram distribuiacutedos 100 μL do extrato bruto no primeiro orifiacutecio da placa e
depois realizadas diluiccedilotildees seriadas a partir da retirada de uma aliacutequota de 100 μL da
cavidade mais concentrada para a cavidade sucessora sendo os 100 L finais desprezados
Nos orifiacutecios de cada coluna foram dispensadas aliacutequotas de 10 μL do inoacuteculo correspondente
a cada cepa (Figura 11) As microplacas das bacteacuterias foram incubadas a 37ordmC durante 24
horas e as microplacas das candidas foram incubadas a 25ordmC durante 48horas
Figura 11 Ilustraccedilatildeo do ensaio antimicrobiano por meio da microdiluiccedilatildeo em caldo
Leitura dos resultados da CIM
30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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30
A leitura para determinaccedilatildeo da CIM de cada extrato foi inicialmente feita a partir do
meacutetodo visual onde foi considerada a formaccedilatildeo ou natildeo de aglomerados de ceacutelulas (ldquobotatildeordquo)
no fundo da cavidade da placa (Figura 12) Considerou-se como CIM a menor concentraccedilatildeo
do produto em teste capaz de produzir inibiccedilatildeo visiacutevel sobre o crescimento das cepas
utilizadas nos ensaios microbioloacutegicos
Figura 12 Teste de sensibilidade da cultura de bacteacuterias decorridas 24 horas de incubaccedilatildeo a
37ordmC
Para confirmaccedilatildeo da presenccedila de microrganismos viaacuteveis nas concentraccedilotildees natildeo
inibitoacuterias foi dispensada uma aliacutequota de 10 μL do corante Rezasurina em todas as
cavidades da placa (inclusive nos controles) 24 horas apoacutes a incubaccedilatildeo Isto tornou-se
possiacutevel distinguir as amostras vivas coloridas de vermelho daquelas mortas onde foi
mantida a cor azul do corante (Figura 13) Apoacutes a introduccedilatildeo do corante as placas foram
levadas novamente para a estufa por mais 24 horas
31
Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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Figura 13 Placa de microdiluiccedilatildeo em caldo com corante rezasurina exibindo poccedilos com
amostras de bacteacuterias vivas coloridas de rosae bacteacuterias mortas coloridas de azul
4232 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima (CBM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de aacutegar Brain Heart infusion (BHI) desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes
24 horas de incubaccedilatildeo a 37 degC as leituras das CBMs foram realizadas com base no
crescimento dos controles sendo considerada CBM a menor concentraccedilatildeo do extrato que
impediu o crescimento visiacutevel do cultivo (Figura 6)
Figura 14 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima apoacutes 24 horas de incubaccedilatildeo a 37degC
4233 Determinaccedilatildeo da Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM)
Apoacutes determinaccedilatildeo da CIM a concentraccedilatildeo correspondente agrave inibitoacuteria e as duas
concentraccedilotildees imediatamente mais concentradas e os controles positivos foram subcultivados
em placas de Aacutegar Sabouraud Dextrose desprovido de qualquer antimicrobiano Apoacutes 48
horas de incubaccedilatildeo a 25 degC as leituras das CFMs foram realizadas com base no crescimento
dos controles sendo considerada CFM a menor concentraccedilatildeo do extrato que impediu o
crescimento visiacutevel do cultivo(Figura 7)
C = 14
1141
4
D =18
111111
4
11414
32
Figura 15 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima apoacutes 48 horas de incubaccedilatildeo a 25 degC
D= 18 E= 116
33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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33
5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
42
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5 RESULTADOS
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e da Concentraccedilatildeo
Bactericida Miacutenima (CBM) dos extratos hidroalcoacuteolicos das cascas eou folhas das oito
plantas analisadas neste estudo encontram-se nas tabelas 1 e 2 respectivamente
TABELA 1 Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 25
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 125
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 50
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 25 R 125
Bauhiacutenia forficata Linn 50 50 50 125
Spondias tuberosa Arruda 100 312 50 25
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 50 125
Tabebuia pentaphylla Vell 100 125 100 125
Guapira opposita Vell 100 R 100 25
Guapira opposita Vell R 100 100 100
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
34
TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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TABELA 2 Concentraccedilatildeo Bactericida Miacutenima dos extratos vegetais contra as
espeacutecies de Streptococcus
Extrato Vegetal
S
mutans
microl microl
S
oralis
microl microl
S
salivarius
microl microl
S
parasanguis
microl microl
Schinus terebintifolius Raddi 50 50 125 R
Schinus terebintifolius Raddi 25 25 125 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
625 25 50 R
Syderoxylum obtusifolium Roem
et Schult
50 50 50 R
Anadenanthera colubrina
Brenan
50 100 R R
Bauhiacutenia forficata Linn 50 R 50 R
Spondias tuberosa Arruda 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 50 100
Tabebuia pentaphylla Vell 100 R 100 R
Guapira opposita Vell
100 R 100 R
Guapira opposita Vell
R R 100 R
Clorexidina 012 039 039 039 039
Extrato da casca
Extrato da folha
R resistente
35
Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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Os resultados da Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) e Fungicida Miacutenima (CFM)
dos extratos analisados encontram-se nas tabelas 3 e 4 respectivamente
TABELA 3Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) dos extratos hidroalcoolicos contra cepas
de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 25 125 25
S terebintifolius Raddi 125 25 125 125
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 125 312
S obtusifolium Roem et Schult 125 25 25 625
B forficta Linn 125 100 25 625
A colubrina Brenan 125 100 625 625
S tuberosa Arruda 125 100 25 100
M riacutegida Mart 125 100 25 100
T pentaphylla Vell 125 25 125 625
T pentaphylla Vell 125 25 125 312
G opposita Vell 50 50 50 125
G opposite Vell 25 50 125 125
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
36
TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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TABELA 4 Concentraccedilatildeo Fungicida Miacutenima (CFM) dos extratos hidroalcoolicos contra
cepas de Candida
ExtratoVegetal
C albicans
(microl microl)
Ckrusei
(microl microl)
Cguillermond
(microl microl)
Cparapsilosis
(microl microl)
S terebintifolius Raddi 625 50 25 50
S terebintifolius Raddi 125 50 25 50
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 25 25
S obtusifolium Roem et Schult 25 50 50 50
B forficta Linn 25 50 25 25
A colubrina Brenan 25 50 50 50
S tuberosa Arruda 25 100 25 50
M riacutegida Mart 25 100 25 100
T pentaphylla Vell 50 50 R 50
T pentaphylla Vell 50 R 25 50
G opposita Vell 50 R 25 25
G oppositaVell 50 R 50 50
Nistatina 312 312 625 625
casca
folha
R resistente
37
6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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6 DISCUSSAtildeO
Diante da necessidade de se obter novas substacircncias com poder antimicrobiano
pesquisas utilizando plantas medicinais tecircm sido realizadas O uso de plantas representa um
recurso promissor para a descoberta de novos agentes antifuacutengicos e antibacterianos com
menores efeitos colaterais e de menor custo As plantas vecircm sendo usadas na medicina
popular para tratamento destas infecccedilotildees e tecircm servido de base para diversas aplicaccedilotildees
terapecircuticas (MENEZES 2009 ALVES et al2009 COSTA et al 2009 DINIZ 2009)
A observaccedilatildeo dos resultados obtidos neste estudo possibilita afirmar que os extratos
hidroalcoacuteolicos testados apresentam efeitos fungiostaacuteticos fungicidas bacteriostaacuteticos e
bactericidas in vitro sobre pelo menos uma espeacutecie de Candida e de Streptococcus Apesar
dos resultados positivos de todos os extratos vegetais estudados destaca-se o potencial da
Schinus terebintifolius Raddi (aroeira-da-praia) e da Syderoxylum obtusifolium Roem e
Schult (quixabeira)
A atividade da Schinus terebintifolius Raddi estaacute relacionada com componentes
quiacutemicos presentes em diferentes partes da planta como taninos terpenos flavonoacuteides e
saponinas (CARVALHO et al 2003) Syderoxylum obtusifolium eacute caracterizada pela
diversidade de substacircncias resultantes do seu metabolismo secundaacuterio como triterpenos
esteroacuteides taninos polifenoacuteis aleacutem de alcaloacuteides carotenos compostos cianogecircnicos
carboidratos e aacutecidos graxos (MONTENEGRO et al 2006 BARBOSA-FILHO et al 2008)
Apesar dos expressivos resultados da S terebintifolius e S obtusifolium contra todos
os estreptococos estudados esses extratos natildeo apresentaram atividade antimicrobiana para S
parasanguis Este achado torna-se relevante uma vez que esta espeacutecie apresenta importante
papel na prevenccedilatildeo do biofilme dental por atuar como antagonista das bacteacuterias responsaacuteveis
por este processo (RODRIacuteGUEZ et al2008) A S parasanguis apresentou resistecircncia a
maioria dos extratos analisados com sensibilidade apenas para os extratos do Spondias
tuberosa da casca de Tabebuia pentaphylla
Schinus terebintifolius tem sido relatada como uma das plantas de uso odontoloacutegico
mais utilizada para tratamento de afecccedilotildees bucais (SANTOS et al 2009) No estudo de Alves
et al (2009) foi avaliada a accedilatildeo antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcooacutelico da aroeira
sobre Streptococcus mutans Streptococcus mitis Streptococcus sobrinus Streptococcus
sanguise Lactobacillus casei verificando atividade bacteriostaacutetica e bactericida do produto
sobre os microrganismos testados pela teacutecnica da microdiluiccedilatildeo
38
O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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O S mutans principal patoacutegeno da caacuterie dentaacuteria tambeacutem apresentou uma
consideraacutevel sensibilidade a Schinus terebintifolius (FREIRES et al 2010 PEREIRA et al
2009) Foi demonstrada tambeacutem que eacute sensiacutevel a outros extratos vegetais como a
Anacardium occidentale Linn (cajueiro) (ARAUacuteJO 2009) Mimosa tenuiflora (Willd) Poir
(jurema preta) (MACEcircDO COSTA et al 2009a) Myrciaria cauliflora (Mart) O Berg
(jabuticabeira) (MACEcircDO COSTA et al2009b) Rosmarinus officinalis Linn (SILVA et al
2008) Rheedia gardneriana Plach amp Triana (bacupari) (SAMARAtildeO 2010)
Natildeo foram identificados relatos na literatura de ensaios antimicrobianos da
Syderoxylum obtusifolium frente ao gecircnero Streptococcus spp No entanto o estudo de Costa
et al (2010) evidenciaram o potencial antimicrobiano desta planta em diferentes
concentraccedilotildees (100 50 25 125 e 625) frente o Enterococcus faecalis pelo teste
de difusatildeo em aacutegar pelo meacutetodo do poccedilo elucidando a necessidade de novos ensaios
microbioloacutegicos com o extrato desta planta
A sensibilidade do S oralis frente aos extratos vegetais tem sido pouco relatada Jaacute foi
demonstrado que a M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009a ) apresentou atividade
antimicrobiana contra esse microorganismo
O Streptococcus salivarius mostrou-se sensiacutevel a todos os extratos exceto ao extrato
da casca do Anadenanthera colubrina Esta bacteacuteria tem apresentado sensibilidade a outras
plantas medicinais como M cauliflora (MACEcircDO COSTA et al 2009b) Stryphnodendron
adstringens (SOARES et al 2008) e Pfaffia glomerata (ginseng-brasileiro) (MOURA et al
2011) atraveacutes do meacutetodo de diluiccedilatildeo em caldo A divergecircncia de resultado mostrado com
relaccedilatildeo a casca da Anadenanthera colubrina Brenan pode ser atribuiacuteda a uma diversidade de
fatores que podem modificar a substacircncia ativa da planta interferindo diretamente nas suas
propriedades Em estudo pioneiro Franz (1982) mostrou que o conteuacutedo das substacircncias
ativas de plantas medicinais cultivadas pode ser afetado por vaacuterios fatores tais como
variaccedilatildeo geneacutetica e transmissatildeo hereditaacuteria das substacircncias secundaacuterias (geralmente o
princiacutepio ativo) variabilidade morfo e ontogeneacutetica por exemplo diferenccedilas no conteuacutedo de
substacircncias ativas em vaacuterias partes da planta e durante seu desenvolvimento influecircncias
ambientais (localizaccedilatildeo fertilizaccedilatildeo clima altitude) entre outras
A C albicans espeacutecie do gecircnero Candida mais patogecircnica em humanos (MENEZES
2009 ORTALANet al 2009) mostrou-se mais sensiacutevel ao extrato da S terebintifolius
Raddi Jaacute C parapsilosis que eacute a espeacutecie mais comum e resistente depois da C albicans com
alto potencial de virulecircncia (TAMURA et al 2007 ORTALAN et al 2009) mostrou-se mais
sensiacutevel ao extrato da quixabeira
39
Achados positivos tambeacutem foram encontrados por Alves et al (2009) quando
avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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avaliaram a atividade antifuacutengica in vitro do extrato hidroalcooacutelico Schinus terebintifolius
Raddi contra a C albicans (CIM 18) Candida tropicalis e Candida krusei (CIM 116)
Silveira et al (2009) descreveram uma variedade de meacutetodos para avaliar a atividade
in vitro de microrganismos contra os agentes antimicrobianos Esses meacutetodos influenciam
diretamente os resultados natildeo soacute pela teacutecnica escolhida mas tambeacutem pelos microrganismos
utilizados para realizar o teste e pelo grau de solubilidade de cada teste o que foi observado
neste estudo Quando utilizou-se a teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo Maytenus rigida
apresentou atividade antimicrobiana contra Candida albicans C parapsilosis C
guilliermondii e C krusei Por outro lado pela teacutecnica de Kirby-Bauer modificado (difusatildeo
em aacutegar) a M rigida natildeo apresentou atividade frente a C albicans e C krusei Considerando
que foram utilizados os mesmos extratos esses diferentes resultados podem ser atribuiacutedos agraves
diferenccedilas de sensibilidades das teacutecnicas utilizadas (ALVES et al 2008)
Ainda satildeo escassos os trabalhos na literatura que demonstram a atividade antifuacutengica
das espeacutecies vegetais analisadas neste estudo atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em caldo
Todavia foram publicados outros estudos com diferentes espeacutecies vegetais utilizando esta
teacutecnica No estudo de Guedes (2009) foi demonstrado atraveacutes da teacutecnica da microdiluiccedilatildeo em
caldo que o extrato etanoacutelico 70 da Petiveria alliacea tem atividade antifuacutengica nas
concentraccedilotildees entre 250-760 microgmL para C parapsilosis C albicans Foi verificado que os
extratos de R offcinalis Linn (alecrim) e S cumini Linn (jambolatildeo) apresentam efeitos
fungiostaacuteticos e fungicidas sobre as cepas cliacutenicas de C albicans C glabrata e C tropicalis
isoladas da cavidade bucal de pacientes que fizeram uso prolongado de antibioacuteticos (COSTA
et al 2009)
Lubian et al (2010) avaliaram o potencial antifuacutengico in vitro do extrato aquoso de
Arctium lappa L sobre espeacutecies do gecircnero Candida pela microdiluiccedilatildeo O extrato apresentou
Concentraccedilatildeo Inibitoacuteria Miacutenima (CIM) de 25mgmL sobre a linhagem 23600 de C tropicalis
e de 125 mgmL sobre C albicans C tropicalis C glabrata C stellatoidea C dublinensis
e C Krusei
Quanto agraves concentraccedilotildees inibitoacuterias miacutenimas e concentraccedilotildees bactericidas miacutenimas
encontradas no estudo observou-se discordacircncia de valores das anaacutelises Isto pode ser
justificado pelo fato de que a determinaccedilatildeo da CIM eacute atraveacutes do meacutetodo visual que considera
a visualizaccedilatildeo de ldquobotatildeordquo no fundo da cavidade enquanto que a CBMCFM eacute determinada
atraveacutes de subcultivo em meio aacutegar com identificaccedilatildeo exata da presenccedila ou ausecircncia do
40
crescimento bacterianofuacutengico O que tambeacutem pode contribuir para a divergecircncia nas leituras
das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
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Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
mesmo modo os estudos sobre a comprovaccedilatildeo cientiacutefica da eficaacutecia de plantas medicinais
para problemas bucais ainda satildeo escassos
41
7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
viabilidade de seu uso na Odontologia
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das concentraccedilotildees eacute o fato de que alguns extratos apresentam cores mais fortes aleacutem de maior
precipitaccedilatildeo no fundo da cavidade o que dificulta a leitura visual da CIM
Considerando a biodiversidade e o potencial das plantas no desenvolvimento de
produtos terapecircuticos muitos estudos ainda se fazem necessaacuterios Agra et al (2008)
observaram que 483 espeacutecies de plantas com propriedades ativas satildeo utilizadas na regiatildeo
Nordeste Apesar do nuacutemero expressivo de plantas medicinais em uso para a maioria delas
ainda natildeo foram desenvolvidos estudos cientiacuteficos sobre os seus constituintes ativos Do
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7CONCLUSAtildeO
Todos os extratos analisados apresentaram atividade antimicrobiana contra pelo menos
um tipo de espeacutecie com destaque para a Schinus terebintifolius Raddi (aroeira da praia) e
Syderoxylum obtusifolium Roem e Schult (quixabeira) A Stuberosa tambeacutem teve grande
resultado neste estudo com o menor valor de CIM contra S oralis Os resultados encontrados
neste estudo reforccedilam a importacircncia de pesquisas com plantas medicinais com indicaccedilotildees
terapecircuticas na cliacutenica odontoloacutegica Considerando as limitaccedilotildees dos estudos in vitro eacute
importante ressaltar que estes resultados podem natildeo corresponder aos reais comportamentos
dos extratos in vivo uma vez que natildeo estatildeo expostas agraves mesmas condiccedilotildees da cavidade bucal
Sugere-se a realizaccedilatildeo de outros testes microbioloacutegicos e ensaios cliacutenicos para verificar a
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