““DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV
EM PACIENTES ENCAMINHADAS
À URS – SAGRADA FAMÍLIA - PBH” Vanessa Carla de Moraes Gonçalves Cirino
Orientadora: Profa. Annamaria Ravara Vago
PAD – Departamento de Morfologia - ICB – UFMGLaboratório de Biologia das Interações Celulares
INCIDÊNCIA DO CÂNCER DO COLO DO ÚTERO
15% DE TODAS AS CATEGORIAS DE CÂNCER FEMININO
2O TIPO DE NEOPLASIA MAIS COMUM ENTRE AS MULHERES
MAIOR INCIDÊNCIA ENTRE MULHERES DE 40 A 60 ANOS
40.000 NOVOS CASOS SÃO DIAGNOSTICADOS A CADA ANO
Estimativas para o ano 2005 das taxas brutas de incidência por 100.000 e de número de casos novos por câncer, em mulheres, segundo localização primária.
Localização PrimáriaLocalização PrimáriaNeoplasia malignaNeoplasia maligna
Estimativa dos Casos NovosEstimativa dos Casos Novos
Minas GeraisMinas Gerais Belo HorizonteBelo Horizonte
CasosCasos Taxa Taxa BrutaBruta CasosCasos Taxa Taxa
BrutaBruta
Pele não Melanoma Pele não Melanoma 5.440 5.440 55,96 55,96 840 840 66,43 66,43
Mama Feminina Mama Feminina 4.220 4.220 43,46 43,46 850 850 66,99 66,99
Traquéia, Brônquio e Pulmão Traquéia, Brônquio e Pulmão 770 770 7,95 7,95 130 130 10,41 10,41
Estômago Estômago 800 800 8,24 8,24 160 160 12,93 12,93
Colo do Útero Colo do Útero 1.580 1.580 16,27 16,27 300 300 23,28 23,28
Cólon e Reto Cólon e Reto 1.110 1.110 11,45 11,45 270 270 21,25 21,25
Esôfago Esôfago 350 350 3,61 3,61 40 40 3,47 3,47
Leucemias Leucemias 410 410 4,19 4,19 80 80 6,09 6,09
Cavidade Oral Cavidade Oral 330 330 3,38 3,38 60 60 4,86 4,86
Pele Melanoma Pele Melanoma 210 210 2,21 2,21 60 60 4,67 4,67
Outras Localizações Outras Localizações 7.010 7.010 72,12 72,12 1.490 1.490 117,32 117,32
TotalTotal 22.23022.230 228,75228,75 4.2804.280 337,39337,39
HISTOLOGIA
ConnectiveConnective TissueTissueStratified SquamousStratified Squamous
EpitheliumEpithelium
INCIDÊNCIA DAS NEOPLASIAS
NEOPLASIAS INTRAEPITELIAIS CERVICAIS
COILOCITOSE
Nova Classificação Bethesda System.
NIC I » lesão escamosa intra-epitelial de baixo grau (LSIL)
NIC II, III e carcinoma in situ » lesão escamosa intra-epitelial de alto grau (HSIL)
Células escamosas atípicas de significado indeterminado » ASCUS
Células glandulares atípicas de significado indeterminado » AGUS
FATORES DE RISCO
Infecção por HPVParidade elevada
Início precoce da vida sexual ativa
Multiplicidade de parceiros sexuais
Tabagismo
Uso de contraceptivo oral
Casos de imunossupressão
Baixo nível socioeconômico
VIAS DE TRANSMISSÃO
Sexual
Neonatal
Através de pinças, luvas, roupas, equipamentos, etc.
VÍRUS DO PAPILOMA HUMANO
(HPV)
baixo risco : : 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 53- 55, 57, 59, 66 e 68; 53- 55, 57, 59, 66 e 68; médio e alto risco: : 5, 8, 16, 18, 31, 5, 8, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59;33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59;
Câncer de peleCâncer de pele
Câncer de mucosasCâncer de mucosas
1, 2, 5 e 8
16, 18, 31 e 45
O GENOMA DO HPV
Dupla Hélice de DNA circular,8000 pb, 3 segmentos:
“Early-region” (E) – E1, E2, E4, E5, E6, E7
“Late-region” (L) – L1 e L2
“Long control region” (LCR)
MÉTODOS DE DETECÇÃOCLÍNICO - LABORATORIAIS
Citopatológico
Colposcópico
Histopatológico
MÉTODOS DE DETECÇÃO MOLECULARES
Captura Híbrida
Hibridização com sondas
PCR – Reação em Cadeia da Polimerase
OBJETIVO
Realizar a extração do DNA e detecção de um fragmento do genoma viral amplificado por PCR das amostras cervicais coletadas de pacientes na URS – Sagrada Família.
METODOLOGIAMETODOLOGIA
POPULAÇÃO POPULAÇÃO ESTUDADAESTUDADA
DESENHO EXPERIMENTALDESENHO EXPERIMENTAL
PACIENTES ENCAMINHADAS
n = 150
COLETA DE AMOSTRASECTO E ENDOCERVICAIS
EXTRAÇÃO DE DNA
COLORAÇÃOAg+
PCR
ELETROFORESEGEL DE POLIACRILAMIDA
Proteinase KFenol: Clorofórmio: IAA
MECANISMO DO PCR
PCR – fragmento de 150 pb do genoma viral ( Região de L1)
Primers : GP5 e GP6 (Grce et al, 2003)
Programa de 40 ciclosPrograma de 40 ciclos
PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTODE 150 pb DO GENOMA DO HPV
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 141 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 110 pb DO GENE DE β–GLOBINA HUMANO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
RESULTADOS
Amostras coletadas 150
Extração de DNA 110
PCR – β-Globina 110
PCR – HPV 34
RESULTADOSNo das Amostras No do Prontuário PCR β- globina PCR HPV Lesão
02 2004019029 + + NIC II – HPV
04 2003004879-1 + - NIC I
06 9901919-7 + + Pni
07 2004019487-1 + - NIC I – HPV
11 2001034329-1 + - NIC I – HPV
12 2003023087-5 + - NIC I – HPV
13 2004019778-1 + - NIC I – HPV
14 2004020052-9 + - ALT
16 2004020132-0 + + NIC I – HPV
18 2004011911-0 + - CI
19 990069203 + - Pni
20 2004020482-6 + - NIC I – PI
31 2004019922-9 + - Carcinoma in situ
32 200103364-8 + + Pni
33 2004023003-7 + - NIC I – HPV
36 2003028239-5 + + NIC I – HPV
37 2004023678-7 + - Citologia p/ HPV
RESULTADOS 39 2004020168-1 + - NIC I – HPV
43 2004018681-0 + - NIC I – HPV
80 M.M.M.R. + - NIC I – HPV
86 2004024689-8 + + NIC I – HPV
172 2003011768-8 + - NIC I – HPV
178 980089350 + - Carcinoma in situ
182 2004017407-2 + - NIC II – HPV
183 2000012065-6 + - NIC I – HPV
184 2005009275-3 + - Carcinoma in situ
185 2005091625 + + Pni
186 2004025760-1 + - Pni
188 2003022379-8 + - Carcinoma in situ
194 980237561 + - NIC I – HPV
197 2005010841-2 + - Citologia negativa
198 2003036975-0 + - NIC II – HPV
202 2004012022-3 + - NIC II
RESULTADOS
Lesão PCR + HPV
NIC I n=16
3
NIC II n=04
1
NIC III/Carcinoma in situ
n=04
0
OBJETIVOS FUTUROS
Realizar a comparação entre os achadosclínico-colposcópicos, citológicos, histopatológicos e moleculares obtidos nas amostras analisadas.
Realizar a detecção dos subtipos de HPV.
AGRADECIMENTOSProfessora Annamaria Ravara Vago
Pacientes participantes deste Projeto de Pesquisa
Professora Cleida A. Oliveira
Lucas, Didi , Sandra Moraes (Mãe) e Altair Cirino (Pai)
Amigos do Laboratório (Alan,Soraya,Dani,Eduardo e Jane)
Equipe do Serviço de Patologia da URS – Sagrada Família(Médicos, Enfermeiros e Auxiliares de Enfermagem).