Separação de Biomoléculas Eletroforese em Gel de Acrilamida
Eletroforese em Gel de Acrilamida
• Metodologia de separação de biomoléculas
• Baseada no peso molecular (KDa) e/ou na carga das moléculas
• Pode ser realizada uma dimensão ou duas dimensões (2D)
• Pode ser em gel desnaturante ou não desnaturante
Eletroforese em Gel de Acrilamida
Arranjo básico de um sistema de Eletroforese
Eletroforese em Gel de Acrilamida
Diagramas de aparatos de corrida de gel (A) tubo; (B) eletroforese vertical; (C) Eletroforese horizontal; (D) horizontal de camada fina
Eletroforese em Gel de Acrilamida
Gel de Agarose e de Acrilamida (A) Géis de agarose são formados por pontes de hidrogênio e interações hidrofóbicas entre os polímeros
(B) Géis de Acrilamida possuem ligações covalentes cruzadas entre camadas de polímeros
Eletroforese em Gel de Acrilamida
Principais soluções utilizadas para confecção de géis
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Soluções finais de Gel – De corrida e Stack
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Diagrama de aparato de eletroforese vertical - montagem
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Montagem do aparato
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Montagem do Aparato
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Efeito de menisco na forma do gel. Adicionar água ou n-butanol acima do gel permite uma superfície reta para melhor formato das bandas
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Montagem do Aparato
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Montagem do Aparato
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Gel final corado
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(A) Gel de acrilamida para separação de DNA; (B) Gráfico tamanho (par de bases – bp) X distância percorrida; (C) Gráfico do log do tamanho (bp) X distância percorrida
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Exemplo de tabela de cálculo para encontrar o peso molecular
Eletroforese em Gel de Acrilamida
Exemplo de tabela de cálculo para encontrar o peso molecular
Eletroforese em Gel de Acrilamida
Sistemas de blotting eletroforético (A) Sistema de transferência úmida (tank buffer)