Pesquisa e Identificação de Anticorpos
Regina [email protected]
Pós Graduação em Hemoterapia SENAC - 2012
Detecção de anticorpos
Séricos:
� Pesquisa de anticorpos
Ligados à membrana eritrocitária
Teste de anticorpos irregulares
� Prova cruzada
� Tipagem reversa
� Teste de antiglobulina direto
� Auto-controle
� Controle de Rh
Revisão dos Anticorpos!!!
� Imunes ou Naturais
� Completos/aglutinantes ou Incompletos/Completos/aglutinantes ou Incompletos/
não aglutinantes
� Regulares ou Irregulares
Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) ou Teste Indireto da Antiglobulina
�� SoroSoro dodo paciente/paciente/ doadordoador
�� HemáciasHemácias comerciaiscomerciais (kits(kits comcom
duasduas ouou trêstrês hemácias)hemácias)
�� SemSem adicionaradicionar PotencializadoresPotencializadores�� SemSem adicionaradicionar PotencializadoresPotencializadores
(Meio(Meio dede ForçaForça IônicaIônica Normal)Normal)
�� ComCom adiçãoadição dede PotencializadoresPotencializadores
(PEG,(PEG, LISS,LISS, PolibrenoPolibreno ee outros)outros)
TempoTempo dede incubaçãoincubação variavaria conformeconforme oo
potencializadorpotencializador utilizadoutilizado
DetecçãoDetecção dede AnticorposAnticorpos livreslivres nono sorosoro
Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) em gel teste
Pesquisa de Autoanticorpos
�� SoroSoro dodo pacientepaciente
�� HemáciasHemácias dodo pacientepaciente
�� MesmaMesma técnicatécnica escolhidaescolhida parapara PAIPAI
VerificarVerificar sese oo pacientepaciente temtem
anticorposanticorpos contracontra asas própriaspróprias
hemáciashemácias..
Prova Cruzada ou Provas de Compatibilidade
�� SoroSoro dodo pacientepaciente
�� HemáciasHemácias dodo doadordoador (segmento(segmento dada
unidadeunidade dede glóbulos)glóbulos)
�� MesmaMesma técnicatécnica escolhidaescolhida parapara PAIPAI
VerificarVerificar aa compatibilidadecompatibilidade entreentre oo
sorosoro dodo receptorreceptor ee asas hemáciashemácias dodo
doadordoador
Jka
D
S
Fya
K DK
Fya
Pacientes com PAI positiva, além da Prova de Compatibilidade, é necessário fenotipar a unidade para o antígeno correspondente ao anticorpo.
Anti-Jka
Créditos: Dr. Claudio Brandão, HEMOBA
Tipagem Reversa Detecta anticorpos naturais
�� SoroSoro dodo paciente/paciente/ doadordoador
�� HemáciasHemácias comerciaiscomerciais AA ee BB
VerificarVerificar aa presençapresença dede anticorposanticorpos
naturaisnaturais antianti--AA ee AntiAnti--BBTipagem Direta
Tipagem Reversa
Tipagem Reversa (Detecta anticorpos naturais)
Utilização do soro do paciente e/ou doador x
hemácias A e B
Pesquisa de Anticorpos Irregulares (Detecta anticorpos irregulares)
Utilização do soro do paciente e/ou doador x
hemácias O
Teste Direto da Antiglobulina
�� HemáciasHemácias dodo pacientepaciente
�� AntiglobulinaAntiglobulina humanahumana (AGH)(AGH)
NãoNão necessitanecessita incubaçãoincubaçãoNãoNão necessitanecessita incubaçãoincubação
DetecçãoDetecção dede AnticorposAnticorpos
ligadosligados nasnas hemáciashemácias
Perguntas!!!!!
�� QualQual aa importânciaimportância dada utilizaçãoutilização dodo ControleControle
RhRh nasnas tipagenstipagens dodo antígenoantígeno D?D?
�� OO queque significasignifica quandoquando oo ControleControle�� OO queque significasignifica quandoquando oo ControleControle
RhRh apresentaapresenta reatividade?reatividade?
�� QualQual éé aa relaçãorelação dede reatividadereatividade nono ControleControle
RhRh ee presençapresença dede TADTAD e/oue/ou autocontroleautocontrole
positivos?positivos?
Identificação de Anticorpos Irregulares ou Painel de Hemácias
�� SoroSoro dodo paciente/paciente/ doadordoador
�� HemáciasHemácias comerciaiscomerciais (kits(kits comcom
onzeonze ouou maismais hemácias)hemácias)
�� SemSem adicionaradicionar PotencializadoresPotencializadores�� SemSem adicionaradicionar PotencializadoresPotencializadores
(Meio(Meio dede ForçaForça IônicaIônica Normal)Normal)
�� ComCom adiçãoadição dede PotencilaizadoresPotencilaizadores
(PEG,(PEG, LISS,LISS, PolibrenoPolibreno ee outros)outros)
TempoTempo dede incubaçãoincubação variavaria conformeconforme oo
potencializadorpotencializador utilizadoutilizado
IdentificaçãoIdentificação dede AnticorposAnticorpos livreslivres nono sorosoro
Identificação de Anticorpos Irregulares
Mais Perguntas!!!!!
�� PorPor queque sãosão formadosformados osos anticorposanticorpos
irregulares?irregulares?
�� QualQual aa importânciaimportância emem detectádetectá--los?los?
�� OO queque aconteceacontece sese nãonão foremforem
detectados?detectados?
� A identificação de anticorpos no soro de pacientes/ doadores
depende do painel de células que está sendo utilizado.
� A especificidade do anticorpo deve ser determinada:
� Duas hemácias reagentes que tenham o antígeno.
� Não reativo com pelo menos duas hemácias sem o
Identificação de Anticorpos Irregulares
� Não reativo com pelo menos duas hemácias sem o
antígeno.
� Após definir a especificidade do anticorpo deve ser afastada
a presença de anticorpos adicionais:
� Selecionar células antígeno negativo para a especificidade
já identificada e antígeno positiva para os outros
antígenos cuja presença dos anticorpos ainda não foi
afastada.
P
Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb
P1 M N S s LISS PAP
I R1R1 + + o o + o + + + o + o o + + + o + + 2+ 2+
II R2R2 + o + + o o o + + + + + + o + + + + + 0 0
P
Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lua Lub
P1 M N S s LISS PAP
1 RzR1 + + o + + o o + + o + + o + + + + o + 0 0
2 R1wR1 + + o o + + o + o + + + o + + + o o + 0 0
3 R2R2 + o + + o o o + o + o + + o + + + o + 0 0
4 Ror + o + o + o o + o o + o + o + + + + o 0 0
Rh-Hr Kell
MNS
Kidd Lutheran MNS
Rh-Hr Kell Duffy Kidd
PAI
Resultados
Duffy
Lewis
GEL
Exemplo 1: Identificação de Acs no Soro
5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 0 0
6 r"r o o + + + o o + + o o + o o o + o + + 0 0
7 rr o o + o + o + + o + + o o + + + o + + 2+ 2+
8 rr o o + o + o o + + o + o o + o o + + + 0 0
9 R1R1 + + o o + o + + o + + + o + + + + o + 2+ 2+
10 R2R2 + o + + o o o + + o o + o + + + o o + 0 0
11 R2r + o + + + o o + + o o + o + + o + o + 0 0
12 r'r' o + o o + o o + o o + + o o + + + o o 0 0
13 rr o o + o + o o + o o + o + o + + + o + 0 0
14 r''r o o + + + o o + + + + + + o + + + o + 0 0
15 rr o o + o + o o + o o + o o o + + o o + 0 0
16 rr o o + o + o o + o + + + o o + + + o + 0 0
Auto 0 0
Resultado Painel: Anti-K
� No painel anterior, a especificidade do anticorpo foi
determinada com três células positivas (K+) e várias
negativas.
� Como no painel há várias células não reativas (K-), é
possível afastar a presença da maioria dos outros
Identificação de Anticorpos Irregulares
possível afastar a presença da maioria dos outros
anticorpos.
� O próximo passo é a confirmação do aloanticorpo,
utilizando a fenotipagem do paciente. Como ele
desenvolveu anti-K, é esperado que as hemácias dele
não apresentem o antígeno K (KEL1). Provável fenótipo
K-.
� Incidência do antígeno
� Seleção ao acaso para antígenos
isolados
Cuidados na seleção de glóbulos para pacientes com Anticorpos Irregulares
� Ex. Paciente com anti-K com solicitação
de 3 unidades de glóbulos.
� Incidência do antígeno K1 (9%).
4 unidades ao acaso ABO compatível 4 unidades ao acaso ABO compatível
forneceria as 3 unidades necessáriasforneceria as 3 unidades necessárias
P
Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb
P1 M N S s LISS PAP
I R1R1 + + o o + o + + + o + o o + + + o + + 2+ 2+
II R2R2 + o + + o o o + + + + + + o + + + + + 2+ 2+
P
Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lua Lub
P1 M N S s LISS PAP
1 RzR1 + + o + + o o + + o + + o + + + + o + 2+ 2+
2 R1wR1 + + o o + + o + o + + + o + + + o o + 2+ 2+
3 R2R2 + o + + o o o + o + o + + o + + + o + 0 0
4 Ror + o + o + o o + o o + o + o + + + + o 2+ 2+
5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+
PAI
Resultados
Duffy
Lewis
GEL
Rh-Hr Kell
MNS
Kidd Lutheran MNS
Rh-Hr Kell Duffy Kidd
Exemplo 2: Identificação de Acs no Soro
5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+
6 r"r o o + + + o o + + o o + o o o + o + + 0 0
7 rr o o + o + o + + o + + o o + + + o + + 2+ 2+
8 rr o o + o + o o + + o + o o + o o + + + 2+ 2+
9 R1R1 + + o o + o + + o + + + o + + + + o + 2+ 2+
10 R2R2 + o + + o o o + + o o + o + + + o o + 0 0
11 R2r + o + + + o o + + o o + o + + o + o + 0 0
12 r'r' o + o o + o o + o o + + o o + + + o o 2+ 2+
13 rr o o + o + o o + o o + o + o + + + o + 2+ 2+
14 r''r o o + + + o o + + + + + + o + + + o + 2+ 2+
15 rr o o + o + o o + o o + o o o + + o o + 2+ 2+
16 rr o o + o + o o + o + + + o o + + + o + 2+ 2+
Auto 0 0
Resultado Painel: Anti-Jka
� Incidência do antígeno
� Seleção ao acaso para antígenos isolados
� Ex. Paciente com anti-Jka com solicitação de 3
Cuidados na seleção de glóbulos para pacientes com Anticorpos Irregulares
� Ex. Paciente com anti-Jk com solicitação de 3
unidades de glóbulos.
� Incidência do antígeno Jka (77%).
10 unidades ao acaso ABO compatível forneceria 10 unidades ao acaso ABO compatível forneceria
as 3 unidades necessáriasas 3 unidades necessárias
Paciente com
anti-
Incidência
Antígeno
Doadores
Compatíveis
K 0,09 (ou 9%) 1-0,09= 0,91 (91%)
Jka 0,77 (ou 77%) 1-0,77= 0,23 (23%)
Anticorpos Múltiplos (frequência combinada para realizar o cálculo)
Jk 0,77 (ou 77%) 1-0,77= 0,23 (23%)
Fya 0,66 (ou 66%) 1-0,66= 0,34 (34%)
Considerando ABO do paciente (A Rh+)
0,4 x 0,85 x 0,91 x 0,23 x 0,34 = 0,024 (ou 2%) =
1 em aproximadamente 50 doadores
P
Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb
P1 M N S s LISS PAP
I R1R1 + + o o + o + + + o + o o + + + o + + 2+ 2+
II R2R2 + o + + o o o + + + + + + o + + + + + 2+ 2+
P
Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lua Lub
P1 M N S s LISS PAP
1 RzR1 + + o + + o o + + o + + o + + + + o + 2+ 2+
2 R1wR1 + + o o + + o + o + + + o + + + o o + 2+ 2+
3 R2R2 + o + + o o o + o + o + + + + + + o + 2+ 2+
4 Ror + o + o + o o + o o + o o + + + + + o 2+ 2+
5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+
Rh-Hr Kell
MNS
Kidd Lutheran MNS
Rh-Hr Kell Duffy Kidd
PAI
Resultados
Duffy
Lewis
GEL
Exemplo 3: Identificação de Acs no Soro
5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+
6 r"r o o + + + o o + + o o + o + o + o + + 2+ 2+
7 rr o o + o + o + + o + + o o + + + o + + 2+ 2+
8 rr o o + o + o o + + o + o o + o o + + + 2+ 2+
9 R1R1 + + o o + o + + o + + + o + + + + o + 2+ 2+
10 R2R2 + o + + o o o + + o o + o + + + o o + 2+ 2+
11 R2r + o + + + o o + + o o + o + + o + o + 2+ 2+
12 r'r' o + o o + o o + o o + + o + + + + o o 2+ 2+
13 rr o o + o + o o + o o + o o + + + + o + 2+ 2+
14 r''r o o + + + o o + + + + + o + + + + o + 2+ 2+
15 rr o o + o + o o + o o + o o + + + o o + 2+ 2+
16 rr o o + o + o o + o + + + o + + + + o + 2+ 2+
Auto 2+ 2+
Provável autoanticorpo
P
Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb
P1 M N S s LISS PAP
I R1R1 + + o o + o + + + o + o o + + + o + + 2+ 2+
II R2R2 + o + + o o o + + + + + + o + + + + + 2+ 2+
P
Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lua Lub
P1 M N S s LISS PAP
1 RzR1 + + o + + o o + + o + + o + + + + o + 2+ 2+
2 R1wR1 + + o o + + o + o + + + o + + + o o + 2+ 2+
3 R2R2 + o + + o o o + o + o + + + + + + o + 2+ 2+
4 Ror + o + o + o o + o o + o o + + + + + o 2+ 2+
5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+
PAI
Resultados
Duffy
Lewis
GEL
Rh-Hr Kell
MNS
Kidd Lutheran MNS
Rh-Hr Kell Duffy Kidd
Exemplo 3: Identificação de Acs no Soro
5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+
6 r"r o o + + + o o + + o o + o + o + o + + 2+ 2+
7 rr o o + o + o + + o + + o o + + + o + + 2+ 2+
8 rr o o + o + o o + + o + o o + o o + + + 2+ 2+
9 R1R1 + + o o + o + + o + + + o + + + + o + 2+ 2+
10 R2R2 + o + + o o o + + o o + o + + + o o + 2+ 2+
11 R2r + o + + + o o + + o o + o + + o + o + 2+ 2+
12 r'r' o + o o + o o + o o + + o + + + + o o 2+ 2+
13 rr o o + o + o o + o o + o o + + + + o + 2+ 2+
14 r''r o o + + + o o + + + + + o + + + + o + 2+ 2+
15 rr o o + o + o o + o o + o o + + + o o + 2+ 2+
16 rr o o + o + o o + o + + + o + + + + o + 2+ 2+
Auto 0 0
Provável anticorpo dirigido contra antígeno alta frequência
� Um antígeno presente na superfície de células,usualmente em mais de 99% da populaçãohumana.
Anticorpos dirigidos contra antígenos eritrocitários Anticorpos dirigidos contra antígenos eritrocitários de alta frequência populacional (público)de alta frequência populacional (público)
� Reações uniformes com todas as células do painel, uma vez que os antígenos estão presentes na maioria das células
� Autocontrole negativo
AABB: Raro: < 1/5.000. Incomum: < 1/1.000
� Auxílio de centros de referência ou registro de
doadores raros.
Laboratórios de referência
Anticorpos de Alta frequência
Laboratórios de referência
� Soros raros - anticorpos contra Ag alta frequência
� Hemácias raras – ausência dos Ag alta frequência
Importante: Membros familiares são Importante: Membros familiares são
importantes fontes de doadores rarosimportantes fontes de doadores raros
Doença hemolítica do recém nascido ou outros Doença hemolítica do recém nascido ou outros
problemas relacionado a aloanticorpos em crianças: problemas relacionado a aloanticorpos em crianças:
Mãe se ABO compatível é a melhor doadora
Pacientes com dificuldade de encontrar doadores Pacientes com dificuldade de encontrar doadores
compatíveis:compatíveis:compatíveis:compatíveis:
Doação autóloga deve ser considerada
Technical Manual ABBB 2005
Unidades raras (<1 em 5000) Unidades raras (<1 em 5000) Unidades incomuns (<1 em 1000)Unidades incomuns (<1 em 1000)
Programa de Doadores Raros (E.U.A) SCARF
Vamos pensar!!!!!
�� OpçõesOpções parapara atendimentoatendimento dede pacientespacientes comcom
anticorposanticorpos irregularesirregulares nono soro,soro, dede acordoacordo
comcom oo queque jájá estudamosestudamos nono cursocurso dedecomcom oo queque jájá estudamosestudamos nono cursocurso dede
HemoterapiaHemoterapia..