Embed Size (px)
Citation preview
PRESENTADO POR:
SANABRIA QUISPE SAMUEL
RECURSOS FITOGENETICOS
PRE - MEJORAMIENTO
La frecuencia del germoplasma que se utiliza en el mejoramiento genético esmuy bajo, debido a las siguientes razones: El germoplasma no ha sido evaluado (existe la semilla pero no la información de su valor
agronómico).
Los caracteres que gobiernan la adaptación son muy complejos, difíciles de evaluar y seleccionar.
En general, los métodos de mejoramiento son muy rígidos, requieren mucho tiempo y no permitenla incorporación de germoplasma una vez que la población básica que producen las variedadesmejoradas ha sido formada.
Los genes que se quieren transferir a las variedades o poblaciones adaptadas, están ligados(variedades nativas o especies relacionadas), a otros genes que desmejoran la variedad amejorar, cuya eliminación es difícil y toma muchas generaciones.
La semilla no esta disponible por la falta de procedimientos de acceso o por restricciones legales.
Los métodos que se utilizan para solucionar esas limitaciones constituyen elPre - mejoramiento.
El germoplasma seria mas utilizado en el mejoramiento si fuese previamenteevaluado. Por las características de valor agronómico.
Para aquellas que gobiernan la adaptación a las condiciones limitantes de clima y suelo y laresistencia a las principales plagas y enfermedades.
POBLACIÓN
SE
LE
CC
ION
SE
LE
CC
ION
SELECCIÓNPoblación Segregante
Hibrido
VariedadMejorada
LíneaPura
Clon MezclaLíneas
LíneaPura
HibridoSegrega
HibridoEstable
VigorHibrido
ESTRATEGIA PARA FORMAR Y SELECCIONAR POBLACIONESHOMOGENEAS Y HETEROGENEAS
Heterogénea Homogénea
SELECCION
NO RECURRENTE RECURRENTE HIBRIDACION MUTACION
METODOS
Perse
HibridaciónSelección
PRODUCTOSDE
SELECCIÓN
EL LIMITE ENTRE EL PRE – MEJORAMIENTO Y EL MEJORAMIENTO
CONVENCIONAL.
Cuando la Población es Homogénea:
Hay dos posibilidades: la hibridación y la mutación.
Los productos intermedios de la hibridación, la población segregante y los productos
finales:
Híbridos, líneas puras o mezclas de líneas, dependen de la calidad genética de los
progenitores.
Los progenitores pueden ser de la misma especie o de diferente especie.
Cuando la Población es Heterogénea.
El éxito depende de la variabilidad genética de la población base:
La población base no solo debe ser variable.
La frecuencia de genes favorables para la característica que se quiere mejorar debe
ser suficientemente alta para que los genotipos superiores se recombinen.
Si los productos de la selección son híbridos, en lugar de una sola población debe
haber por lo menos dos poblaciones con buen nivel heterotico, para que los genotipos
extraídos de una población tenga alta probabilidad de cruzar bien con los genotipos
extraídos de la otra.
EL LIMITE ENTRE EL PRE – MEJORAMIENTO Y EL MEJORAMIENTO
CONVENCIONAL.
CUANDO LA POBLACIÓN ES HETEROGÉNEA.
La selección de los progenitores y la obtención de progenies, desarrollo de progenies
segregantes, son actividades muy costosas en tiempo y recursos, este proceso se
denomina Pre - Mejoramiento.
Si la población base va a servir para generar variedades adaptadas a condiciones
limitantes de suelo y clima, lo mas probable que la frecuencia de genes para estas
características seas baja.
La selección intrapoblacional para elevar la frecuencia de genes favorables para esas
características y la definición de l a metodología y técnicas para aplicar el estrés y
hacer la evaluación, son actividades del Pre – Mejoramiento.
En general los mejoradores trabajan con poblaciones básicas que casi no se
modifican.
De ellos se extrae los genotipos que se seleccionan.
El énfasis se pone en los factores que afectan la ganancia de selección: intensidad de
selección, varianza fenotípica y heredabilidad.
EL LIMITE ENTRE EL PRE – MEJORAMIENTO Y EL MEJORAMIENTO
CONVENCIONAL.
VARIABILIDAD GENETICA
Existen muchos mecanismos que tienen las plantas para conservar la
variabilidad genética especialmente en el caso de las alogamas.
Se requiere métodos especiales basados en el conocimiento de los sistemas y
formas de reproducción para liberar esa variabilidad.
La modificación de los mecanismos normales de reproducción, ejemplo (uso
de la heterosis al cruzar individuos genéticamente diferentes).
El estudio y la evaluación de la diversidad genética tanto entre especies como
dentro de especies, hace mas laboriosa los trabajos del mejorador (caso de la
zona andina donde en pequeñas extensiones es necesario cultivar
eficientemente varias especies).
EVALUACION SISTEMATICA
La evaluación sistemática facilita el proceso, como por ejemplo:
El proyecto LAMP, que evaluó el germoplasma de maíz de 12 países americanos.
En los centro internacionales del CGIAR (Grupo Consultivo De Investigación Agrícola
Internacional). se puso mas énfasis en la evaluación de plagas y enfermedades.
Formación de la población base ejemplos de los centros de CGIAR.
Integración de todo el germoplasma disponible en un numero manejable de
poblaciones básicas, denominadas “pooles” , formadas con criterios de adaptación,
usos y ciclo vegetativo CIMMYT.
Utilización de especies relacionadas para formar la población base, caso de la papa
en CIP.
Formación de poblaciones básicas en generaciones segregantes de cruces
intervarietales, en el caso del garbanzo en ICRISAT e ICARDA
El uso de la mayor cantidad de diversidad disponible para el mejoramiento genético,
en el caso de la formación de poblaciones de trigo en CIMMYT, yuca y frijol en CIAT.
La formación de la población básica de habas para la zona andina. Es un caso de la
necesaria complementación entre el centro internacional y los programas nacionales
para facilitar la adaptación de las poblaciones en ecorregiones especificas, como la
zona andina.
EVALUACION SISTEMATICA
En programas con menos capacidades y menos disponibilidad de germoplasmaforáneo se puede usar los compuestos raciales en el caso de las alogamas y lasmezclas varietales en el caso de las autogamas..
Cruces Interespecificos; son cuatro casos: La poliploidización en papa.
La manipulación de la ploidía en banano.
Uso de especies silvestres en tomate y frijol.
Pre – Mejoramiento, Vía Domesticación de Plantas Silvestres. La mayoría de especies que se utilizaran en el futuro están todavía por domesticarse. Ejemplo la
domesticación de dos especies arbóreas, por el Centro Internacional De Investigación de Agroforesteria(ICRAF)..
Métodos Modernos Para Obviar la Producción de Semillas Sexuales enCruzamientos Interespecificos. Son tres técnicas que pertenecen al campo de labiotecnología. Cultivo de células.
Fusión de células.
Transgénesis o ADN recombinante.
La selección asistida por marcadores, usada ahora frecuentemente en mejoramiento genético se analizapara explorar la posibilidad de usarla en pre mejoramiento.
EVALUACION DEL GERMOPLASMA DE MAIZ DE LATINOAMERICA
Para utilizar eficientemente las grandes aéreas agrícolas (contra los varios
factores que la marginan).
La orientación de la evaluación del germoplasma de maíz en
Latinoamérica, estuvo enfatizada para adaptarla al medio ambiente.
CARACTERES EVALUADOS EN LAMP.
Por su Importancia Económica: La prolificidad, precocidad, altura de planta y mazorca, susceptibilidad al acame y al quebramiento
del tallo, y el grado de macollamiento.
Por la Diversidad de Usos y Preferencias: Aspecto y sanidad de la mazorca, tipo de grano.
Todos esos caracteres se evaluaron en todas las accesiones y en todas las
localidades.
Con el material selecto se evaluó, en etapas avanzadas, la habilidad
combinatoria, requisito indispensable para usar la heterosis.
SITUACIONES QUE DIFICULTAN LA EVALUACION SISTEMATICA DEL
GERMOPLASMA
Numero generalmente muy alto de accesiones.
Falta de metodologías apropiadas para evaluar caracteres que gobiernan la
adaptación (tolerancia a factores adversos de clima y suelo, resistencia a
plagas y enfermedades).
Los caracteres que condicionan la adaptación a ciertos ambientes, como la
resistencia a plagas y enfermedades, y la tolerancia a factores de clima y suelo
deben ser evaluados en las localidades donde se presentan los factores
limitantes (generalmente lugares alejados y aislados).
Errores en el muestreo, errores humanos en el registro de los datos, errores
experimentales, efectos ambientales y de la interacción entre el genotipo y el
ambiente hacen que los valores registrados sean distintos a los valores reales
del germoplasma.
METODOLOGIA APLICADA POR EL LAMP PARA LAS EVALUACIONES DE
LOS GERMOPLASMAS
Metodología
En la Primera Etapa.
Las pruebas se hicieron con dos repeticiones en cada localidad, agrupando
las colecciones por: Precocidad, morfología de la planta, o raza, para evitar competencia interparcelaria.
Las parcelas fueron de 10 m2, donde se evaluó algunas características
como: Floración y altura de la planta, (se hizo sobre plantas competitivas).
En la Segunda Etapa. se sembró el 20% superior seleccionado en la primera etapa, en 2 localidades para controlar
parcialmente la interacción genotipo ambiente.
En algunos casos se probaron las accesiones superiores en 2 ambientes distintos dentro de
una localidad.
Los testigos fueron convenientemente dispuestos dentro de cada grupo o
repetición y se usaron los diseños experimentales mas apropiados para
controlar el error.
LOCALIDADES DONDE SE EVALUÓ EL GERMOPLASMA
Ecológicamente muy variables desde:
Sitios muy tropicales, como Turipaná en la costa Atlántica de Colombia.
Sitios muy altos, como Jauja en el Perú, a 3300 msnm.
Sitios desde los 41 grados de Latitud Norte en Ames, Iowa, hasta los 34 grados de
Latitud Sur, en Santiago de Chile.
Ejecucion del LAMP
Primera Etapa:
Se ejecuto en 32 regiones (1 localidad / región). Y las accesiones evaluadas en total
fueron: 14847.
Después de completar la primera etapa, el numero de accesiones se redujo a 2311.
Segunda Etapa: Se ejecuto en 64 localidades, es decir, dos localidades dentro de cada región.
Después de completar la segunda etapa el numero se redujo a 270 accesiones (accesiones
superiores).
EJECUCION DEL LAMP
• Tercera Etapa:
Evaluación simultanea de las accesiones superiores, entre todos los países por
ejemplo. El germoplasma tropical superior de México fue evaluado en Bolivia, y
viceversa.
Énfasis en las Áreas Homologas 1 (Trópico bajo) y 5 (Templado),
La heterosis es muy importante (por el uso de los híbridos muy generalizado).
Cada una de las regiones de ambas áreas homologas escogió un probador y lo cruzo
con las accesiones superiores del área homologa correspondiente.
Experimentos para probar la habilidad combinatoria se realizaron en por lo menos 2
localidades dentro de cada región.
Cuarta Etapa:
Después de la cuarta etapa o etapa de prueba de la habilidad combinatoria en las
áreas homologas 1 y 5, y de la adaptación en las áreas homologas 2, 3 y 4 (de 1200
a 1900 msnm, de 2000 a 2600, y mas de 2600 msnm respectivamente), en todas las
regiones se selecciono el mejor germoplasma que se integro a sus programas de
mejoramiento.
PAISACCESIONES
EVALUADAS
ACCESIONES
SELECCIONADAS
ACCESIONES
SUPERIORES
ARGENTINA 350 24 24
BOLIVIA 500 100 9
BRASIL 1640 243 22
COLOMBIA 2015 360 52
CHILE 850 147 16
GUATEMALA 469 99 13
MEXICO 4425 416 50
PARAGUAY 460 92 4
PERÚ 2366 474 31
URUGUAY 500 100 25
USA 972 196 19
VENEZUELA 300 60 5
TOTALES 14847 2311 270
NUMERO DE ACCESIONES EVALUADAS Y SELECCIONADAS EN LOS PAISES QUE
EJECUTARON LAMP
PAIS DE PRUEBA REGION PROBADOR
AR
GE
NT
INA
BO
LIV
IA
BR
AS
IL
CO
LOM
BIA
GU
AT
EM
ALA
ME
XIC
O
PA
RA
GU
AY
PE
RÚ
US
A
VE
NE
ZU
ELA
TO
TA
L
BOLIVIA Santa Cruz SUWAN 4 5 17 22 7 15 7 7 5 89
BRASIL Siete Lagoas BR - 105 5 17 7 15 2 14 7 5 72
BRASIL Janauba BR - 106 5 17 7 15 2 14 7 5 72
COLOMBIA Monteria ICA V 156 5 21 21 15 7 7 76
COLOMBIA Palmira ICA V 258 2 2 27 9 7 11 2 6 4 70
GUATEMALA Cuyuta HB - 83 (h) 4 7 17 22 25 15 4 13 8 5 120
MÉXICO Cotaxtla H - 422 4 5 17 20 7 30 14 7 5 109
MÉXICO Cotaxtla V - 424 4 5 17 19 7 30 9 7 5 103
MÉXICO Cotaxtla H - 511 4 5 17 20 7 30 4 13 12 5 117
PARAGUAY Itapúa GUARANI V 312 4 5 17 22 7 15 4 7 81
PERÚ Piura PM - 102 (m) 4 3 20 15 8 12 5 2 69
PERÚ La Molina PM - 212 (m) 3 5 12 22 7 12 8 4 73
PERÚ Huánuco PM - 701 (m) 4 5 16 22 7 12 8 4 78
USA Puerto Rico HC128XHC219 4 5 17 22 7 15 2 14 7 5 98
VENEZUELA Maracay CENIAP PB - 8 (h) 4 5 17 22 7 13 14 7 5 94
NUMERO DE ACCESIONES DEL PAIS INDICANDO CRUZADAS POR EL PORTADOR EN EL AREA HOMOLOGA (1)
PAIS DE PRUEBA REGION PROBADOR
AR
GE
NT
INA
BR
AS
IL
CH
ILE
PA
RA
GU
AY
UR
UG
UA
Y
US
A
TO
TA
L
ARGENTINA Pampeana SR - 76 18 5 16 25 10 74
CHILE Santiago B73 x B14A 18 16 25 10 69
URUGUAY Paysandu DEL PLATA 101 18 16 25 10 69
USA Iowa B14 x B73 18 16 2 25 10 71
USA Georgia 0H43 x M017 18 5 16 2 25 10 76
NUMERO DE ACCESIONES DEL PAIS INDICANDO, CRUZADAS POR EL PORTADOR EN EL AREA HOMOLOGA (5)
ACCESIONES ARGENTINA CHILE URUGUAY USA
ARZM - 16026 5850 12253 4309 5794
ARZM - 16035 6113 11059 4496 6073
ARZM - 16021 5298 11677 3943 6772
ARZM - 10001 5131 12445 5421 6415
ARZM - 11002 5532 12672 5164 5394
ARZM - 13085 5618 12158 2900 6662
ARZM - 11003 4811 12237 4356 5841
FS8 - B7 5954 12819 3414 6257
TESTIGOS
SR76 (Argentina) 4723
INIA 160 (Chile) 17578
DP 101 (Uruguay) 5153
B73 x M017 (USA) 7246
RENDIMIENTO PROMEDIO DE OCHO ACCESIONES SUPERIORES DE LAMP CRUZADAS POR DOS
PROBADORES: B73 x B14a y Oh x M017
LOGROS DE LAMP
Cada país selecciono las mejores accesiones adaptadas a cada una de susregiones.
Publicación de un catalogo con información de 12113 accesiones evaluadas enla etapa 1, y de 2794 accesiones selectas evaluadas en la segunda etapa.
En cada región se han identificado las accesiones que cruzan mejor con losprobadores que se utilizan en la formación de híbridos. Se han detectadonuevos patrones heteroticos, y se ha definido las áreas de adaptación delgermoplasma de altura de Latinoamérica.
Se ha precisado el concepto de raza con 2 factores discriminantes: el patrónheterotico, y la adaptación.
Se regenero el germoplasma superior, cerca de 3000 accesiones, y se tienesuficiente semilla fresca de las 268 accesiones superiores..
Se ha definido los criterios para que cada país escoja las accesiones para haceruna colección núcleo. Asimismo se potencio a cada país para que maneje supropia colección activa.
En las AHs 2, 3, 4 se experimento con las dificultades de evaluación portolerancia a factores adversos de clima y suelo, y resistencia a plagas yenfermedades.
Sin embargo se hicieron notables avances en la selección para la tolerancia alfrio, resistencia a plagas (Heliothis zea), enfermedades (Fusarium moniliforme) yvirosis.
Los resultados de LAMP incentivaron e uso de germoplasma foráneo, caso USApor ejemplo.
EVALUACION DEL FRIJOL EN CIAT PARA RESISTENCIA A PLAGAS Y
ENFERMEDADES
En la década del 80 se caracterizo al frijol, donde se evaluó 27 características
morfológicas y agronómicas.
El color del grano recibió mayor importancia por estar muy ligada a la preferencia de
los consumidores.
Se ha caracterizado el 100 % de las accesiones para color de grano.
La mayoría son blancos, rojos, negros o cremas.
Las colecciones no son homogéneas con relación al color:
El 35 % presenta mas de un color,.
Mas del 50 % de las colecciones tienen granos con varios combinaciones de colores.
Otro descriptor evaluado en casi el 100 % del germoplasma es el habito de
crecimiento
Por su importancia en la adaptación a las tecnologías de producción.
Hay casi 10000 accesiones evaluadas para esas características.
Actualmente, el CIAT mantiene la mayor colección mundial de frijol, cuenta con
mas de 40000 entradas provenientes de 50 países.
Siendo casi el 90 % de esas entradas de Phaseolus vulgaris.
EVALUACION DEL GERMOPLASMA DE FRIJOL PARA ENFERMEDADES Y
PLAGAS (CIAT, 1982)
Evaluación del Germoplasma para Resistencia a Enfermedades:
CIAT, da énfasis a la resistencia horizontal. En el caso de la roya se ha encontrado mucha inestabilidad de la resistencia, así como una
considerable interacción con localidades.
Por lo tanto se están evaluando además de la reacción de la planta, los componentes de la
resistencia horizontal como tamaño de la pústula, periodo de latencia, etc.
Metodología: En campo con infestación natural, caso del virus del mosaico común (BCMV).
En campo con inoculación artificial, para evaluar la roya y la antracnosis
En invernadero con inoculación artificial, para la Bacteriosis común.
Para el caso de la roya, y para el virus del mosaico dorado, CIAT ha organizado la evaluación a
nivel internacional en pruebas especiales denominadas IBRN e IBGMV respectivamente, que se
conduce donde la enfermedad es endémica.
EVALUACIÓN DEL GERMOPLASMA PARA RESISTENCIA A ENFERMEDADES:
Logros: La roya y antracnosis, requiere inoculación artificial en campo, por eso es menor el numero de
colecciones evaluadas para esas enfermedades.
El virus del Mosaico común, no requiere inoculación artificial, por eso, todas las colecciones se
han evaluado, donde muchas colecciones han demostrado resistencia aun en condiciones de
ataques muy severo..
El germoplasma evaluado para resistencia sirve principalmente como
progenitores para los programas de hibridación: caso del germoplasma
evaluado para el virus del mosaico dorado: En los primeros años de trabajo de evaluación en el CIAT, toda la evaluación para la resistencia a
este virus se hacia en las accesiones del banco; las resistes se usaron como progenitores.
Actualmente menos del 10 % del material evaluado es germoplasma del banco; el resto es
segregante y otros materiales de mejoramiento.
Se dio difusión de los germoplasmas evaluados para integrarlos a los
programas de mejoramiento que están produciendo materiales mejorados para
los países productores de frijol.
ENFERMEDADCONDICIONES DE LA
EVALUACION
VIVEROS
INTERNACIONALES
CRUZAMIENTOS
INTERESPECIFICOSEN EL CATALOGO
RoyaCampo - Inoculación
artificialIBRN Si
AntracnosisCampo - Inoculación
artificialSi
Ascochita Campo - Natural x P. coccineus No
Bacteriosis Invernadero - Artificial Si
BCMV Campo - Natural Si
BGMV IBGMV No
EVALUACION DE LA RESISTENCIA A ENFERMEDADES DEL GERMOPLASMA DE FRIJOL DEL CIAT
DIAS %
G 12866 1 42 2 2 5
G 10019 1,8 36,1 3,6 1,3 5
G 12949 2 62,5 4 2 7
G 12952 5,6 61,5 11,2 1,6 6
G 12953 8,6 63 17,2 1,6 6
G 12891 15,8 52,1 31,6 1,8 8
G 12942 17,8 40,4 35,6 2,4 17
Diacol Calima 29,2 36,6 58,4 2,6 50
EMERGENCIANº ADULTOS POR
REPETICIONENTRADA
PESO SECO POR
ADULTO (mg)
PESO 100 Semillas
(gramos)
NIVELES DE RESISTENCIA AL GORGOJO (Adiuristus obtectus)
VALORES PROMEDIO DE 5 REPETICIONES
EVALUACION DEL GERMOPLASMA DE ARROZ EN EL INSTITUTO DE
INVESTIGACION EN ARROZ (IRRI)
La diseminación de las variedades de arroz de tallo corto logro dio lugar a la
revolución verde.
Un solo gen recesivo proveniente de la variedad china Dee-geo-woo-gen, introducido
a la variedad “Peta” de indonesia, dio lugar a la variedad IRB8, responsable del
extraordinario incremento de rendimiento en muchos países Asiáticos y
Latinoamericanos.
Todas las variedades del IRRI tienen la variedad “Peta” como progenitor común:
por ejemplo, las variedades creadas con un amplio rango de adaptación como IR 28 se han
formando combinando fuentes de resistencia basadas en un solo gene.
Para evitar el peligro que significa uniformizar el germoplasma mejorado a
nivel mundial, IRRI ha organizado su programa de mejoramiento para hacer el
uso de todo el germoplasma de arroz disponible.
Énfasis del IRRI:
Evaluación de muchas características en diferentes etapas del mejoramiento.
Quince características morfológicas evaluadas rutinariamente así como cinco enfermedades,
cinco plagas y varios problemas del suelo.
EVALUACION SISTEMATICA DEL IRRI
El IRRI evalúa sistemáticamente el germoplasmas del banco donde
conserva mas de 80000 accesiones de materiales genéticos muy diversos,
que pueden ser:
Especies silvestres, malezas, variedades primitivas, cultivares comerciales,
cultivares modernos mejorados, variedades menores, materiales de mejoramiento,
tipos esenciales, tipos obsoletos y mutantes.
PROGRAMAS DE EVALUACIÓN EXTENSIVOS QUE USA EL IRRI
Para Seleccionar Variedades Resistentes a la Pudrición Bacteriana
(Xanthomonas oryzae).
Gran porcentaje de accesiones del banco se ha evaluado para esta enfermedad.
Las mejores accesiones sirven como progenitores que se cruzan entre ellos y con
los mejores materiales del IRRI.
Las evaluaciones comienza en la poblaciones segregantes en muchos
cruzamientos múltiples.
A partir de la F2 se distribuyen los mejores materiales a los programas nacionales
de arroz para que puedan seleccionar los segregantes resistentes.
Para Seleccionar Variedades Resistentes a la Pudrición Bacteriana (Xanthomonas
oryzae).
El desarrollo de variedades con resistencia estable es un problema muy difícil
que se esta resolviendo con cooperación internacional, para lo cual se ha
implementado el vivero internacional de Pyricularia (IRBN), de manera de
determinar la estabilidad de la resistencia contra muchas razas de Pyricularia
en todo el mundo.
EVALUACION DEL MANÍ EN ICRISAT (Instituto Internacional de
Investigación en Cultivos para los Trópicos Semiáridos)
El ICRISAT 2000, esta buscando fuentes de resistencia para dos de las principalesenfermedades.
El virus de la roseta del Maní (GRV).
La mancha foliar temprana (Cercospora arachidícola).
Evaluacion para resistencia a essas dos enfermedades en dos campos de Malawi(Sudeste de Africa):
Mas de 4000 accesiones de Arachis hypogaea y 80 accesiones de otras especiesde Arachis.
Se evaluo la incidencia y severidad en el estado de llenado de vaina y en lamadurez.
Se identificaron 35 fuentes de resistencia para Cercospora arachidicola, 30desudamerica, principalmente de Perú y Bolivia.
Once accesiones de Arachis silvestres fueron muy resistentes.
La incidencia del virus GRV fue casi 100 % en la mayoria de los genotiposprobados.
Sin embargo hay especies silvestres que mostraron alta resistencia.
Cruzamientos entre plantas resistentes y suceptibles a GRV mostraron que laresistencia esta gobernada por dos grandes genes recesivos complementarios.
FORMACION DE LA POBLACION BASE
RECOMBINACION Y SELECCIÓN
