View
130
Download
10
Category
Preview:
Citation preview
Antigénio versus AnticorpoO diagnóstico Imunológico
Visão geral do SI
Laboratório de Imunologia• A imunologia estuda os
mecanismos de resposta do organismo a substâncias estranhas - Antigénios
• A resposta pode ser Humoral ( mediada por anticorpos) ou Celular ( mediada por células, fundamentalmente linfócitos).
A resposta humoral ou celular pode ser medida no
laboratório
Anticorpos - a chave para um diagnóstico
• Uma variedade de técnicas permite a medida qualitativa e quantitativa do Ag ou Ab. Anticorpos são usados na investigação celular e molecular pois permitem a localização e caracterização dos antigénios
Efeitos da combinação Ag-Ab
• Aglutinação: particula antigénica+Ab específico resulta na agregação de partículas
• Precipitação: Ag solúvel + Ab resulta em precipitação• Activação do Complemento(C): Ag em solução ou em
partícula+Ab específico resulta na activação de complemento• Citolise: Celula+anti-celula Ab+C, resulta na lise da célula• Opsonização:Ag+Ab+C aumenta fagocitose por monócitos,
macrófagos ou PMNs• Neutralização: Toxinas, viroses, enzimas,…+Ab específico
resulta na sua inactivação
Anticorpos - a chave para um diagnóstico
• Todas as reacções de diagnóstico que usam Ag-Ab, têm por base a capacidade de um Ab reconhecer um dado epítope- parte estrutural reactiva de um antigénio.
• Anticorpos:• Monoclonais- reagem
apenas com um epítope específico de um Ag
• Policlonais- ligam-se a vários epítopes de um antigénio
Anticorpos - a chave para um diagnóstico
• Afinidade : capacidade ou intensidade de um Ab (paratope) se ligar a um Ag particular (epítope) – “lock and key”.
• Produção de Abs:• Injecta-se um animal (ex:ratinho) com o material antigénico, e
espera-se pelo desenvolvimento da resposta imune; depois retiram-se os Abs circulantes presentes no sangue do animal, sendo estes representantes de uma população de Abs específicos = Policlonais
• Os Abs monoclonais são mais difíceis de produzir: quando a resposta imune se desenvolve no ratinho imunizado o seu baço é removido; as células desenvolvem-se em células B maturas que são feitas replicar e depois fundidas com células de hibridoma. No final é feito um “screenning” de identificação das células que produzem o anticorpo de interesse, que são isoladas e clonadas
Abs/Ags+ligando+enzima- a chave para um diagnóstico
• Um grupo de técnicas destinadas a medir níveis/concentrações de Ag ou Ab em que um dos reagentes é conjugado com uma enzima, que quando junta com o seu substrato gera um produto com côr- ELISA
• Têm por base a capacidade de um Ab reconhecer um dado epítope
Abs/Ags+ligando+enzima=ELISA (Enzyme-linked Immunoadsorbent
Assay)
• Detecção ou quantificação de um antigénio ou anticorpo usando um ligando (Anti-Ag ou Anti-Ab) conjugado com uma enzima cuja reacção se traduz na alteração de côr do substrato:
• Ligando - qualquer molécula ligada a um composto• Enzima - proteína capaz de desencadear reacções
como hidrólises, oxidações ou reduções, e não é consumida no processo
• Substrato-composto que é degradado ( no caso da reacção de ELISA é cromogéneo)
• Epítope - parte estrutural do Ag que reage com o Ab
Abs/Ags+ligando+enzima=ELISA (Enzyme-linked Immunoadsorbent
Assay)
Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune
• Níveis
• Primeiro
• Segundo
• Terceiro
• Tipo de estudo• Quantificação de imunoglobulinas• Capacidade hemolítica total do C• Provas cutâneas de hipersensibilidade• Estudo da função fagocítica
• Quantificação de linfócitos T e B• Quantificação fraccionária de C• Capacidade funcional de T e B
• Actividade citotóxica de T e NK• Quantificação de citoquinas• Capacidade de síntese de Igs
Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune
Estudo de imunoglobulinas e complemento
• 1) métodos não-imunológicos (ex.análises bioquímicas)
• 2) métodos imunológicos– Imunoelectroforese– Difusão radial– Nefelometria– RIA
Quantificação de proteínas de complemento
– Hemólise– Imunodifusão– Nefelometria
Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune
• Estudo de células imunocompetentes• 1- Análise fenotípica
– Citometria de fluxo *– Imunofluorescência (simples, dupla ou
tripla)
• 2- Análise Funcional(capacidade de resposta linfoproliferativa
a diferentes estímulos)_ Lectinas,mitogéneos,Abs monoclonais
Citometria de Fluxo
*Resultados de Citometria de Fluxo
Granulócitos
Monócitos
Linfócitos
Laboratório de ImunologiaExploração da resposta imune
• 2.1- Análise Funcional- Medida do grau de
activação celular-activação-proliferação-produção de citoquinas-actividade citotóxica dos linfócitos T-actividade citotóxica das células NK-fluxo de cálcio, fosforilação proteica-provas de aderência-ensaios de mobilidade celular-fagocitose-actividade bactericida
Recommended