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Genética Bacteriana e

Clonagem

Universidade de Santo Amaro

Faculdade de Biomedicina

Microbiologia Básica e Clínica I

É responsável pelo armazenamento e

transmissão da informação biológica

DNA Ácido Desoxirribonucleico

GC

AT

T

T

A

A

GC

5`

3`5`

3`

DNA

Estrutura

Primária

CROMOSSOMO

◼ Dupla fita circular

◼ Tamanho varia de acordo com o tipo de bactéria

➢ Escherichia coli – 4,6 milhões de bases (850 x maior que a

célula)

◼ Difuso na região nucleóide

◼ Genes para o metabolismo e ciclo vital

◼ Constituído por partes codificantes

➢ Ausência de Introns

PLASMÍDEO

◼ Segmento de DNA circular, pequeno, contendo genes

acessórios para o metabolismo.

◼ Pode conter genes para produção de fímbrias, toxinas e

enzimas de resistência a antimicrobianos.

◼ Pode ser transferido de bactéria para bactéria pelo processo

de conjugação.

O cromossomo dos procariontes é circular

Eucariotos x Procariotos

Meio com glicose

(lacL) gene repressor

(lacP) gene promotor

(lacO) gene operador

(lacZ) β-galactosidase

•(lacY)lactose-permease

•(lacA) tiogalactosídeo-transacetilase

Sem glicose e com lactose

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A Bactéria como ferramenta

Clonagem Molecular

Estrutura básica de um plasmídeo-

vetor

RT

AAAAAAAA

AACT GGCA TCGT

AACT GGCA TCGT

Clonagem Molecular

RNA

ds cDNA

ds cDNA

cDNA

Tecido

Am

pr

ORI

Am

pr

ORI

cDNA

PLASMÍDIODNA

RECOMBINANTE

VETORES

Seleção das bactérias transformadas

Bactérias que não receberam o DNA (inserto)

crescem formando colônias azuis (presença do

gene LacZ) enquanto aquelas que foram

transformadas crescem incolores.

Produção de medicamentos

◼ Produção de insulina humana

recombinante

◼ Produção de GH

Produção de medicamentos

◼ Produção de Filgrastim – G-CSF

Desenvolvimento de vacinas

◼ Vacina recombinante contendo

antígeno HBs para Hepatite B

Pesquisa e desenvolvimento

◼ Produção de etanol

◼ Produção de peptídeos utilizados

para pesquisas.

Produtividade aumentada de etanol a partir de

hidrolisados de lignocelulose por Escherichia colicom utilização regulada de glicose

Síntese de peptídeos