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Macapá,v.7,n.1,p.38-44,2017Disponívelemhttp://periodicos.unifap.br/index.php/biota
Submetidoem14deJulhode2016/Aceitoem16deFevereirode2017
ARTIGO
BiotaAmazôniaISSN2179-5746
Ousodeextratosvegetaistemsidoamplamenteestudadocomocontrolebiológicoalternativodedoençasdeplantas,especialmenteaquelascausadasporfungospatogênicos.Nessesentido,oobjetivodopresenteestudofoiavaliaraatividadeantifúngicainvitrodoextratobrutoetanólicoobtidodefolhasdealgodão(GossypiumarboreumL.,Malvaceae)emdiferentesconcentraçõessobodesenvolvimentomicelialdofungofitopatogênicoLasiodiplodiatheobromae.OensaiofoiconduzidonosLaboratóriosdeMicrobiologia/Fitopatologia/GenéticaedeCultivo/IsolamentodaUniversidadedoEstadodoAmapá/UEAP,emMacapá,Amapá.EmumDelineamentoInteiramenteCasualizado(DIC),seistratamentoseseisrepetiçõesforamorganizados:T1(controlenegativo)–
-1 -1BDA(Batata-Dextrose-Ágar)+0mg.mL (extratofoliar);T2-BDA+5mg.mL (extratofoliar);T3-BDA+10-1 -1mg.mL (extratofoliar);T4-BDA+20mg.mL (extratofoliar);T5-BDA+2,5mLdeetanoleT6(controle
positivo)-BDA+2,5mLdefungicidacomercial(Derosal®).Asvariáveisinibiçãodocrescimentomicelial(ICM),índicedevelocidadedecrescimentomicelial(IVCM)eáreaabaixodacurvadecoberturadecrescimentomicelial(AACCM)foramcalculadasaofinaldoexperimento.OsresultadosmostraramqueoextratobrutoetanólicodasfolhasdeG.arboreumnãoapresentouatividadeantifúngicainvitrofrenteaofungoL.theobromaenasconcentraçõestestadas.Oextratoinduziuocrescimentomicelialdofungo,especialmentenaconcentração
-110mg.mL ,aqualapresentoucondiçãoidealparaodesenvolvimentodasestruturasdofungo.
Palavras-chave:Malvaceae,extratovegetal,controlebiológico,fitopatógeno.
Theuseofplantextractshavebeenwidelystudiedasanalternativebiologicalcontrolofplantdiseases,especiallythosecausedbyphytopathogenicfungi.Theaimofthisstudywastoevaluateinvitrotheantifungalactivityofcrudeethanolicextractobtainedfromtreecottonleaves(GossypiumarboreumL.,Malvaceae)indifferent concentrationsonmycelialdevelopmentof thepathogenic fungiLasiodiplodia theobromae. Theexperiment was conducted in the Microbiology/Plant pathology/Genetics and Cultivation/Isolationlaboratories,theStateUniversityofAmapá/UEAP,inMacapá,Amapá.InaCompletelyRandomizedDesign(CRD),sixtreatmentsandsixrepetitionswereorganized:T1(negativecontrol)-PDA(Potato-Dextrose-Agar)
-1 -1 -1+0mg.mL (leafextract);T2-PDA+5mg.mL (leafextract);T3-PDA+10mg.mL (leafextract);T4-PDA+20-1mg.mL (leafextract);T5-PDA+2.5mLofethanolandT6(positivecontrol)-PDA+2.5mlofacommercial
fungicide(Derosal®).Thevariablesmycelialgrowthinhibition(MGI),mycelialgrowthvelocityindex(MGVI)andareaundermycelialgrowthcurve(AUMGC)werecalculatedattheendoftheexperiment.TheresultsshowedtthecrudeethanolicextractofG.arboreumleavesnotpresentedantifungalactivityinvitroagainstthefungusL.theobromaeattheconcentrationstested.Theextractinducedthemycelialgrowth,especiallyina
-1concentrationof10mg.mL ,whichexhibitedidealconditionforthedevelopmentoffungalstructures.
Keywords:Malvaceae;plantextract;biologicalcontrol;phytopathogen.
Effect of Gossypium arboreum L. (tree cotton) leaf extract against mycelialgrowthofLasiodiplodiatheobromae(Pat.)Griffon&Maubl.
EfeitodoextratofoliardeGossypiumarboreumL.(algodão)sobocrescimentomicelialdeLasiodiplodiatheobromae(Pat.)Griffon&Maubl.
1* 1 2CarolinedaCruzVasconcelos ,JaynnaGonarLôboIsacksson ,CamilaBrandãodaSilva ,NoelleLoyannaLima
3 4 5AlmeidaCabral ,SheyllaSusanMoreiradaSilvadeAlmeida ,RosângeladaConceiçãoMarquesPena
1.EngenheiraFlorestal(UniversidadedoEstadodoAmapá).MestrandaemBotânica(InstitutoNacionaldePesquisasdaAmazônia,Brasil).2.EngenheiraFlorestal(UniversidadedoEstadodoAmapá).MestrandaemBiodiversidadeTropical(UniversidadeFederaldoAmapá,Brasil).3.GraduandaemEngenhariaFlorestal(UniversidadedoEstadodoAmapá,Brasil).4.Farmacêutica(UniversidadeFederaldoPará).DoutoraemQuímica(UniversidadeFederaldeSãoCarlos).ProfessoradaUniversidadeFederaldoAmapá,Brasil.5.EngenheiraAgrônoma(UniversidadeFederalRuraldaAmazônia).MestreemAgronomia(UniversidadeFederaldeLavras,Brasil).ProfessoradaUniversidadedoEstadodoPará,Brasil.*Autorparacorrespondência:engflocarolinevasconcelos@gmail.com
EstaobraestalicenciadasobumaLicençaCreative Commons Attribution 4.0 Internacional
DOI:http://dx.doi.org/10.18561/2179-5746/biotaamazonia.v7n1p38-44
RESUMO
ABSTRACT
IntroduçãoGossypium arboreum L. pertence a famılia Malvaceae
sensu APG IV (BYNDet al., 2016).NoBrasil e umaplantaexoticaconhecidapopularmentecomoalgodao,bemcomoamaioria das especies de Gossypium que formam o maisimportante grupo de plantas de fibras nomundo (JOHN;THOMAS, 2012). Este genero compreende 50 especiesdescritas, distribuıdas principalmente na A� frica, Australia,Arabia, Peru,Mexico e Brasil (FRYXELL, 1992). Dentre asespecies de algodao cultivadas e domesticadas de formaindependente no mundo, quatro se destacam: Gossypiumarboreum eGossypiumherbaceum representadasnoVelhoMundoeGossypiumbarbadense eGossypiumhirsustumnoNovoMundo(BRUBAKERetal.,1999).
No Brasil, o cultivo de G. arboreum para uso interno,principalmenteparafinsmedicinaisebastanterelatadoemcomunidades tradicionais (BENTES-GAMA et al., 1999;COELHO-FERREIRA;JARDIM,2005;LINHARESetal.,2015;SCOLES, 2006; SCUDELLER et al., 2009; SILVA, 2002).Diferentespartesdaplantasaoutilizadasparaotratamentodediversasdoenças e enfermidades:usodas folhas comoantimalarico(ADEBAYO;KRETTLI,2011;AJAIYEOBAetal.,2006), anti-hipertensivo, antirreumatico, antidiabetico(DHUNDIetal.,2012;KAZEEMetal.,2013),antitussıgeno,tonsilite,diuretico,paraqueimaduras,hemorragias,gastrite,micoseseproblemasrespiratorioscomoasma;asfloressaoutilizadas como antitussıgeno, para combater anemia,disenteria,hemorragia(SILVA,2002),alemdehipocondriae
inflamaçõesbrônquicas(DHUNDIetal.,2012);folhas,floresecascasemconjuntosãoutilizadoscomodiuréticoecontraasma; sementes como antitussígeno (SILVA, 2002),antipirético e o óleode semente é utilizado externamenteparalimparmanchasesardasdapele(DHUNDIetal.,2012);ofrutoéusadonocombateàsmicoses(SILVA,2002),eainda,relatadopararetençãodeplacenta(WONDIMUetal.,2007).
A maioria dos estudos que buscaram investigar apresença de compostos químicos nas diferentes partes daplanta de G. arboreum obtiveram resultados satisfatórios,principalmente porque a maioria dos compostosencontradosestãobiologicamente relacionados comousopopularmedicinaldessaplanta(ANNAN;HOUGHTON,2008;HEDIN et al., 1992;MIRA-NETO; ALMEIDA, 2015; SAIDU;ABDULLAHI,2011;WAAGE;HEDIN,1984;WONDIMUetal.,2007). Vale ressaltar ainda que, as plantas de Gossypiumcontêm o gossipol, um aldeído triterpenoide que tempropriedades antitumorais (COYLE et al., 1994), além deinseticidaseantimicrobianas(WAAGE;HEDIN,1984),oqueconfere resistência da planta frente a estes organismos(BRINK;ACHIGAN-DAKO,2012).Inclusive,háregistrodequeoextratodafolha,bemcomodeoutraspartesdaplantadeG.arboreum, apresentam atividade antibacteriana (ANNAN;HOUGHTON, 2008; SAIDU; ABDULLAHI, 2011). Contudo,estudosacercadousodoextratofoliardeG.arboreumparaocontroledefungosfitopatogênicosaindasãoincipientes.
Naturalmente,muitasplantaspodemoferecerresistênciafrente aos diferentes patógenos associados (LEMOS et al.,1990). Essa resistência pode estar relacionada com apresençadesubstânciasinibitórias(compostossecundários)queagemdiretaouindiretamenteativandoosmecanismosdedefesadasplantas(STANGARLINetal.,2011).Alémdisso,apresençadessassubstânciaspodecontribuirparaousonocontrolededoençasfitopatogênicas,inclusiveemdiferentesplantas,umavezqueestassãoresponsáveisporcausarasmaioresperdasdeculturasnoBrasil,especialmenteàquelasdeimportânciaeconômica(RIBEIRO;BEDENDO,1999).
Parareduzirosdanoscausados,métodosfísicos,químicosebiológicosvêmsendoamplamenteempregados(ECKERT;OGAWA, 1985; SITTON; PATTERSON, 1992; WILSON;WISNIEWSKI,1994).Ousodeagroquímicos,porexemplo,contribui para o aumento da produtividade agrícola,entretantotemsidoresponsávelporcausarefeitosadversosao meio ambiente e à saúde humana (BASTOS;ALBUQUERQUE, 2004; STANGARLIN et al., 2011). Nessesentido,ousodeextratosvegetaisvisandoaexploraçãodepropriedades tóxicas aos diferentes patógenos vem semostrandoumaalternativadecontrole(ARAÚJOetal.,2013).Essemétodopodeserumaalternativaviável,sejadopontodevista econômico, seja do ponto de vista ambiental(RODRIGUESetal.,2006).
Éimportanteressaltarqueademandaporessesprodutosalternativosécrescenteediversosestudostêmregistradoaeficiência de extratos vegetais empromover a inibição dodesenvolvimentodeváriosfitopatógenosdenaturezafúngica(BARRERA-NECHA et al., 2009; BERNARDO et al., 2015;KURITAetal.,1981;PEREZ-SÁNCHESetal.,2007;RIBEIRO;BEDENDO, 1999; RODRIGUES et al., 2006; SCHWAN-ESTRADAetal.,2000;WILSONetal.,1997).Adeterminaçãodabioatividadedosextratosvegetaispodecontribuirparaaaquisição de maiores conhecimentos que reforcem sua
possívelutilizaçãocomoummétodoalternativodecontrolededoençadeplantas(SCHWAN-ESTRADAetal.,2000).
Lasiodiplodiatheobromae(Pat.)Griffon&Maubl.pertenceà Botryosphaeriaceae, sendo um fungo amplamentedistribuídoemregiõestropicaisetemperadas(CRUZ-AVILÉSet al., 2001). Botryosphaeriaceae possui distribuiçãocosmopolita,sendoumafamíliaricaemespéciesqueincluipatógenos de uma grande variedade de plantas deangiospermasegimnospermas(BARR,1987;BHADRAetal.,2014; CHEN et al., 2011). Os membros dessa família sãogeralmentetratadoscomopatógenosoportunistasdevidoasdoenças que eles causam, as quais são quase sempreassociadascomalgumtipodeestresseouferimento(CIESLAetal.,1996,SLIPPERS;WINGFIELD,2007).
Lasiodiplodia theobromae está associado a diferentesdoenças como podridão-seca; cancro em ramos, caules eraízes; lesões em estacas, folhas, frutos e sementes;resultandoinclusivenamortedaplanta(CIESLAetal.,1996;OLD; DAVISON, 2000; ROUX et al., 2001; SHEARER et al.,1987; SMITH et al., 1994). Além disso, este fungo podecolonizartecidossaudáveisdeplantassemexibirsintomas(MOHALI et al., 2005). L. theobromae pode ocorrerprincipalmenteemárvoresdeEucalyptusspp.,Pinusspp.eSyzigium spp. (PAVLIC et al., 2007; SLIPPERS et al., 2009;SMITHetal.,1996).Contudo,muitosBotryosphaeriaceaequeocorrem em Eucalyptus também já foram registrados emoutroshospedeiros.
No Brasil, por exemplo, em diversas culturas deimportância econômica L. theobromae já foi relatado, taiscomo:abacate(Perseaamericana,Lauraceae),banana(Musaspp.,Musaceae),acerola(Malpighiaglabra,Malpighiaceae),cajueiro (Anacardium occidentale, Anacardiaceae), citrus(Citrusspp.,Rutaceae),coqueiro(Cocosnucifera,Arecaceae),pinha (Annona squamosa, Annonaceae), vinha (Vitis sp.,Vitaceae), goiaba (Psidium guajava, Myrtaceae), manga(Mangifera indica, Anacardiaceae), melão (Cucumis melo,Cucurbitaceae),maracujá(Passifloraedulis,Passifloraceae),graviola (A. muricata, Annonaceae), melancia (Citrulluslanatus, Cucurbitaceae) (FREIRE et al., 2003; TAVARES,2002;)eatémesmoemespéciesflorestaisnativas,comooparicá(Schizolobiumparahybavar.amazonicum,Fabaceae)(TREMACOLDI et al., 2009). No caso dos eucaliptos(Eucalyptus spp., Myrtaceae), este fitopatógeno éconsiderado uma ameaça significativa para a produção esustentabilidade das plantações (MOHALI et al., 2009;RODASetal.,2009).
Diantedisso,oobjetivodopresenteestudofoiavaliaropotencialfungitóxico,invitro,doextratobrutoetanólicodeGossypium arboreum L. (algodão) em diferentesconcentraçõessobodesenvolvimentomicelialdopatógenoL.theobromae.
MaterialeMétodos
ObtençãodoextratoedofitopatógenoO estudo foi realizado em setembro de 2013 nos
Laboratórios de Microbiologia/Fitopatologia/Genética e deCultivo/IsolamentodocampusIdaUniversidadedoEstadodoAmapá/UEAP,localizadaemMacapá,Amapá.
Para a conduçãodo experimento foi utilizado o extratobrutoetanólicodeG.arboreum,oqualfoiobtidoapartirde
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EfeitodoextratofoliardeGossypiumarboreumL.(algodão)sobocrescimentomicelialdeLasiodiplodiatheobromae(Pat.)Griffon&Maubl.
folhascoletadasdaplantanoentornodaÁreadeProteçãoAmbientaldoRioCuriaú,a8kmdeMacapá.Umaamostracoletada da planta foi herborizada, sendo devidamenteidentificada e depositada na coleção do Herbário daUniversidade Federal do Amapá/HUFAP, sob número deregistro 427. O extrato foi produzido e analisadofitoquimicamente no Laboratório de Farmacognosia eFitoquímicadaUniversidadeFederaldoAmapá/UNIFAP.
Amostras do material coletado foram colocadas emestufa a uma temperaturamédia de 45 ºC e, em seguida,moídas por rasuraçãomanual com auxílio de almofariz epistilo.Oextratofoiobtidoporextraçãoaquentesobrefluxocomousodeálcooletílico96%(EtOH)comosolvente.Emseguida, o extrato foi filtrado e concentrado em rotoevaporadorsobtemperaturade50ºCepressãoreduzida.
Para a triagem fitoquímica foram realizadas reaçõesanalítico-qualitativas para identificação de flavonoides,alcaloides, fenois e taninos, esteroides e triterpenoides,depsídeosedepsidonas,ácidosorgânicos,polissacarídeos,açúcaresredutores,saponinasespumídicas,antraquinonaseresinas(BARBOSAetal.,2004).
Para realizaçãodo ensaiomicrobiológico, utilizou-se opatógenoL.theobromaeobtidonacoleçãofitopatológicadaUEAP. Este fungo foi oriundodo caule deEucalyptus spp.(amostrascedidaspelaempresaAmapáFlorestaleCeluloseS/A–AMCEL).
DelineamentoexperimentalParaadeterminaçãoinvitrodaatividadeantifúngicado
extratofoliardeG.arboreum,preparou-seinicialmentetrês-1concentrações:5,10e20mg.mL .Asconcentraçõesforam
adicionadas em meio de cultura BDA (Batata-Dextrose-Ágar) sintético, suplementado com cinco gotas doantibióticocloranfenicolevertidoemplacasdePetride9cmdediâmetro.Apósasolidificaçãodomeiodecultura,discosdemicélio(cercade4mmdediâmetro)deL.theobromaecultivado em BDA foram transferidos para o centro dasplacasdecadatratamento,asquaisforamorganizadasemDelineamento Inteiramente Casualizado (DIC), com seistratamentoseseisrepetições:T1(controlenegativo)-BDA+
-1 -10mg.mL (extrato foliar); T2 - BDA + 5mg.mL (extrato-1foliar);T3-BDA+10mg.mL (extratofoliar);T4-BDA+20
-1mg.mL (extratofoliar);T5-BDA+2,5mLdeetanoleT6(controlepositivo)-BDA+2,5mLdefungicidacomercial
(Derosal®).Posteriormente,asplacasforamvedadascomfilme plástico e colocadas em incubadora do tipo B.O.D.(DemandaBioquímicadeOxigênio)sobtemperaturade25±2°Cemfotoperíodode12horas.
AvaliaçãodoexperimentoApós24horasda inoculação, iniciou-seaavaliaçãodo
crescimento micelial do patógeno L. theobromaediariamenteacada24horas,durantesetedias.Parareduçãodo efeito natural de deformação das colônias foramregistradasasmédiasdosdiâmetrosdascolôniasatravésdequatro medidas, em sentidos perpendiculares entre si. Apartir dos dados obtidos durante a avaliação diária, asseguintes variáveis foram calculadas: inibição docrescimentomicelialICM(%)=(D-d).100/D,emqueDéodiâmetro de crescimento do controle e d o diâmetro dasplacas com tratamento (BASTOS, 1997); índice develocidadedecrescimentomicelial IVCM=∑(D-D )/n,ema
queDéodiâmetroatualdacolônia,D édiâmetrodacolôniaa
do dia anterior e n a duração do período de avaliação(OLIVEIRA,1991);eáreaabaixodacurvadecrescimentomicelialAACCM=[∑(y+y )/2.d ]/n,emquey ey sãoosi i+1 ti i i+1
valores de crescimento da colônia observados em duasavaliaçõesconsecutivas,d ointervaloentreasavaliaçõesenti
aduraçãodoperíododeavaliação(CAMPBELL;MADDEN,1990).
AnálisedosdadosOsdadosforamsubmetidosaotestenão-paramétricode
Kruskal-Wallis(OneWayAnalysisofVarianceonRanks)aoníveldesignificânciaα>0,05,seguidopelotestedeDunncomcomparaçõesmúltiplasparadeterminarasignificânciadas diferenças entre os tratamentos. Para a análiseestatística, o programa Assistat 7.7 versão beta (ASSIS;SILVA,2014)foiutilizado.
ResultadosOs resultados obtidos quanto ao efeito fungitóxico do
extrato bruto etanólico de G. arboreum frente aofitopatógenoL.theobromaeestãorepresentadosnaTabela1.De acordo com as avaliações realizadas aos 7 dias deincubação,nenhumadasconcentraçõesdoextratotestadasforam eficientes na redução do crescimento micelial do
-1fungo,principalmenteaconcentraçãode10mg.mL (T3).
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CarolinedaCruzVasconcelos,JaynnaGonarLôboIsacksson,CamilaBrandãodaSilva,NoelleLoyannaLimaAlmeidaCabral,SheyllaSusanMoreiradaSilvadeAlmeida,RosângeladaConceiçãoMarquesPena
Tabela1.ResultadosobtidosparaoextratodeG.arboreumsobocrescimentomicelialdeL.theobromae.OsvaloresqueestaorepresentadospelasmesmasletrasnaodiferemestatisticamenteentresipelascomparaçoesmultiplasdotestedeKruskal-Wallis(α>0,05)./Table1.ResultsobtainedfortheextractofG.arboreumagainstmycelialgrowthofL.theobromae.ThevaluesrepresentedbythesamelettersnotdifferstatisticallyfromeachotherbymultiplecomparisonsoftheKruskal-Wallistest(α>0.05).
TratamentosD iametrofinal
(cm)*ICM(%) IVCM(cm.dia-1) AACCM
T1-0mg.mL-1(controlenegativo) 4,25 ab 0,00 ab 0,38 ab 3,41 ab
T2-5mg.mL-1(extrato) 4,30 ab -1,14 ab 0,43 abc 3,42 ab
T3-10mg.mL-1(extrato) 4,50 b -5,84 b 0,47 c 3,58 b
T4-20mg.mL-1(extrato) 4,30 ab -1,27 ab 0,44 bc 3,45 b
T5-2,5mLetanol(controlepositivo) 3,56 ab 16,49 ab 0,41 bc 2,82 ab
T6-2,5mLfungicida(controlepositivo) 0,00 a 100,0 a 0,00 a 0,00 a
*Diametrodacolonianosetimodiadeavaliaçao./Colonydiameterontheseventhdayofevaluation.
ParaasvariaveisdiametrofinaleICMnaohouvediferençaestatıstica significativa entre os tratamentos T2, T4 e T5quandocomparadosaocontrolenegativo(T1).Otratamento
T3apresentouamaiormediadecrescimentoemdiametroe,consequentemente, uma inibiçao de crescimento micelialnegativaparaL.theobromae.
Diâmetro�inal(cm)*
Considerando a variável IVCM, o tratamento T3apresentou a maior média em velocidade de crescimento
-1micelial(0,47cm.dia ),seguidodostratamentosT5eT4,osquaisnãodiferiramestatisticamenteentresi.ÉinteressanteobservarquenotratamentoT1(controlenegativo),avariávelIVCMapresentouumvalormaisbaixoemcomparaçãocomostratamentosT2,T3eT4(concentraçõesdoextrato).
Com base na variável AACCM, os tratamentos T3 e T4apresentaram as maiores médias e não diferiramestatisticamente entre si. Para os tratamentos T1, T2 e T5também não houve diferença estatística significativa. Alémdisso,comoumresultadoesperado,paratodasasvariáveis,otratamento com fungicida (T6) foi 100% satisfatório naredução do crescimento micelial, demonstrando a altasensibilidadedeL.theobromaeaestequímico.
Vale ressaltar que, após os sete dias de avaliação foi-1possívelobservarqueasconcentraçõesde10mg.mL (T3)e
-1de 5 mg.mL (T2) do extrato foliar de G. arboreum semostraramideaisparaodesenvolvimentodeL.theobromae,isto porque as placas dos respectivos tratamentosapresentaram um desenvolvimento mais acelerado emrelaçãoasestruturasreprodutivasdofungo(Figura1A-B).
-1Naconcentraçãode20mg.mL (T4)épossívelobservarqueodesenvolvimentodasestruturasdeL.theobromae foisimilarà concentraçãodeetanol (T5) (Figura1A),oqueécorroboradotambémnaTabela1paraamaioriadasvariáveisem que não há diferença estatística entre estes doistratamentos.
DiscussãoO extrato foliar deG. arboreum teve um efeito inverso,
induzindoocrescimentomicelialdeL.theobromae(Tabela1eFigura1A).Naturalmente,areduçãodocrescimentomicelialéconsequentedaaçãofungitóxicadassubstânciaspresentesnacomposição das plantas bioativas. No entanto, Carvalho(2010)explicaque,casooextratovegetalnãomanifesteefeitofungitóxicooufungiestático,asuacomposiçãoemtermosde
substâncias importantes no metabolismo do fungoenriquecerá a composição nutritiva do meio de culturaproduzindo o efeito inverso. Possivelmente, isto explica oefeitoobservadocomoextratodeG.arboreumparaastrêsconcentraçõestestadasnesteestudo.
-1Embora as concentrações de 5 mg.mL (T2) e de 10-1mg.mL (T3)tenhamproporcionadoocrescimentomicelial
de L. theobromae e o desenvolvimento de suas estruturasreprodutivas (Figura 1B), a tendência deveria ser que na
-1concentração de 20 mg.mL (T4) o mesmo padrão semantivesse,conformeoaumentodadosedoextratofoliardeG.arboreum.Noentanto,apesardocrescimentomicelialdeL.theobromaeterocorridonoT4,estefungonãosedesenvolveuemumcurtoperíodosuaestruturavegetativa,bemcomonãoocorreu esporulação, assim como observado para ostratamentosT2eT3(Figura1A).Istosugerequetalvezemconcentraçõesmaioresdoextrato,oefeitofungitóxicopossasersatisfatóriofrenteaoL.theobromaeouatémesmoaoutrosfungosfitopatogênicos.
A exemplodisso, umestudo realizadoporOkafor et al.(2001) com o extrato bruto das folhas de quatro espéciesincluindo G. arboreum mostrou que esta espécie inibiu ocrescimentomicelialdetrêsespéciesfúngicas:Trichophytonrubrum, Basidiobolus haptosporus e Ephidermophyton
-1floccosumnasconcentraçõesentre25e100mg.mL ,concen-trações mais altas quando comparadas às concentraçõestestadasnestetrabalho.
Domesmomodo, Menegassi et al. (2008) trabalharamcom uréases (metaloenzimas) extraídas das sementes deGossypium hirsutum e verificaram que as mesmas podemdesempenharefeitotantoantifúngicoquantofungistático,ouatémesmomatarosesporosfúngicos,inibindoagerminaçãodosfungosfitopatogênicos:Colletotrichummusae,CurvularialunetaePenicilliumherguei.
Recentemente, Mira-Neto e Almeida (2015) testaram oefeito do extrato bruto das folhas deG. arboreum emdoisensaios:primeiro,frenteàsbactériasStaphylococcusaureus,EscherichiacolieKlebsiellapneumoniaenasconcentraçõesde25mg/mL, 50mg/mL e 100mg/mLdo extrato; segundo,frente às larvas de Artemia salina nas concentrações 50µg/mL,100µg/mL,250µg/mL,500µg/mL,750µg/mLe1000µg/mL.OsresultadosforamsatisfatóriosapenasparaoensaiodetoxicidadedeA.salina,emqueaconcentraçãoletalfoideCL50=238µg/mL,comtoxicidadeagudaparamaisde50%dapopulação.
Por outro lado, Aladesanmi et al. (2007) testaram aspropriedades de extratosmetanólicos de 10 espécies comusosetnomedicinaisnaNigéria,dentreelesodacascadeG.arboreum, contudo, estes autores não encontrarampropriedadesantibacterianase/ouantifúngicas, tal comooresultado encontradoneste estudopara como extratodasfolhasdestaespécie.
DiversosestudosbuscaramalternativasparaocontroledeL.theobromae,umproblemanotoriamentelimitanteparaafruticultura tropical, emespecialparaoNordestedoBrasil(OLIVEIRAetal.,2012)eumagentecausadordedoençasemplantios de Eucalyptus spp., inclusive já registrado para oestado do Amapá (PINTO, 2013). Lima et al. (2010), porexemplo,testaraminvitrooefeitofungitóxicodeseisextratosde plantas nativas da Caatinga frente ao L. theobromae econcluíram que o extrato de alecrim-do-campo (Lippia
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EfeitodoextratofoliardeGossypiumarboreumL.(algodão)sobocrescimentomicelialdeLasiodiplodiatheobromae(Pat.)Griffon&Maubl.
Controlenegativo
-15mg.mL(extrato)
-110mg.mL(extrato)
-120mg.mL(extrato)
2,5mLdeetanol
2,5mLdefungicida
A
B
12µm
FRENTE
VERSO
FRENTE
VERSO
Figura1.A-DesenvolvimentomicelialdeL.theobromaeemmeiodeculturaBDAassociadoaoextratobrutoetanolicodasfolhasdeG.arboreum,apossetediasdeinoculaçao.B-EsporosdeL.thebromae,isoladodeEucalyptusspp.ecultivadoemmeiodeculturaBDA./Figure1.A-MycelialdevelopmentofL.theobromaeinPDAculturemediaassociatedwiththecrudeethanolicextractofG.arboreumleaves,after seven days of inoculation. B - Spores of L. theobromae, isolated fromEucalyptusspp.andcultivatedinPDAculturemedia.
microphylla,Verbenaceae)apresentouomaiorpercentualdeinibiçãodocrescimentomicelialdestefungo,oqueconsisteemumaalternativaviávelparaocontroledeL.theobromae.
Adeniyi e Joseph (2015) também avaliaram a açãofungitóxica in vitro de quatro extratos vegetais (Acalyphahispida, Euphorbiaceae; Chromolaena odorata, Compositae;Tetrapleura tetraptera, Fabaceae; e Azadirachta indica,Meliaceae) frente ao L. theobromae e também obtiveramresultados satisfatórios, uma vez que todos os extratosapresentaram efeito positivo em inibir o crescimento dofungo.
NoestudorealizadoporMotaetal.(2002),oextratofoliardeL.sidoides(Verbenaceae)eosóleosessenciaisdeL.sidoidesePiperaduncum(Piperaceae)foramosquecontrolarammaiseficientementeocrescimentomicelialdeL.theobromae.Comapenas12mLdoextrato foliardeL.sidoides,a inibição foisuperiora90%.Feitosa(2000)tambémobteveocontroledeL.theobromaeutilizandoextratosdeplantasmedicinais,comoarnica(Arnicamontana,Compositae),juá(Ziziphusjoazeiro,Rhamnaceae), manjericão-branco (Ocimum basilicum,Lamiaceae)ealfavaca(O.gratissimum,Lamiaceae),obtendoinibição de 60%, 62%, 91% e 100%, respectivamente, nocrescimentomicelialdessepatógeno.
Emcontrapartida,Bhadraetal.(2014)estudaramoefeitoantagônico de espécies de Trichoderma – agentes debiocontrole conhecidamentemuitoeficazescontradiversospatógenos–frenteaoL.theobromaeeverificaramqueT.virideapresentou inibição máxima, com melhor desempenhoinclusiveemcomparaçãoaosfungicidascomerciaistambémtestadosnoestudo.
Vale ressaltar que embora propriedades antitumorais,inseticidaseantimicrobianastenhamsidorelatadas(ANNAN;HOUGHTON, 2008; HEDIN et al., 1992; MIRA-NETO;ALMEIDA,2015;SAIDU;ABDULLAHI,2011;WAAGE;HEDIN,1984;WONDIMUetal.,2007),devidoaosdiversoscompostosquímicos presentes nas partes da planta deG. arboreum –justificados pelo uso na medicina popular – o seu efeitoantifúngicofrenteaoL.theobromaefoiineficaz.
Mira-NetoeAlmeida(2015),apósatriagemfitoquímicadoextrato foliar de G. arboreum, detectaram a presença dosseguintes compostos químicos: alcaloides, fenois e taninos,saponinas espumídicas, depsídeos e depsidonas, além deesteroides e triterpenoides. No entanto, com base nosresultadosobtidosnesseestudonãoépossívelinferirsobrequal substância presente no extrato foliar de G. arboreumpossa ter enriquecido o meio de cultura e favorecido odesenvolvimentodeL.theobromae.
ConclusãoOextratobrutoetanólicodasfolhasdeG.arboreumnão
apresentouatividadeantifúngica in vitro frenteao fungoL.theobromae nas concentrações testadas. Os resultadosmostraramque o extrato pode ter induzido o crescimento
-1micelialdofungo,especialmentenaconcentração10mg.mL ,a qual apresentou aparentemente condição ideal para odesenvolvimentodofungo.Emconcentraçõesmaiores,talvezoextratodeG.arboreumpossaterefeitopositivonareduçãodocrescimentomicelialdeL.theobromaeouatémesmodeoutrospatógenos.Paraisto,maisestudossãonecessários.
AgradecimentosOs autores agradecem à Universidade do Estado do
Amapá/UEAPe àUniversidadeFederal doAmapá/UNIFAPpelasinfraestruturascedidasparaaexecuçãodestetrabalho,alémdaempresaAmapáFlorestaleCeluloseS/A-AMCELporcederamostrasdofitopatógeno.
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